專利名稱：甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及生物檢測領(lǐng)域，特別涉及一種甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙。
背景技術(shù)：
當(dāng)前國內(nèi)外應(yīng)用較為廣泛的血清學(xué)診斷方法有酶標(biāo)法(EIA)、放免法(RIA)和化學(xué)發(fā)光法等。市場上甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑多為酶標(biāo)法(EIA)和化學(xué)發(fā)光法；RIA法，標(biāo)記物有效期短和有放射性污染物；化學(xué)發(fā)光法(CLIA)，它是在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的基礎(chǔ)上與免疫反應(yīng)相結(jié)合建立的新技術(shù)，它不僅具有免疫反應(yīng)的特異性，而且具有化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高靈敏性。采用化學(xué)發(fā)光測量儀，具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、快速、準(zhǔn)確和簡便等優(yōu) 點，無放射性污染，但所用試劑和自動化分析儀均為國外產(chǎn)品，價格昂貴尚難全面普及；EIA法，須經(jīng)孵育、洗滌、顯色、判讀等步驟，過程較為繁瑣，檢測時間長。免疫膠體金技術(shù)(Immunogold labelling techique)是上世紀(jì)80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標(biāo)記技術(shù)后發(fā)展起來的固相標(biāo)記免疫測定技術(shù)。該技術(shù)主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。該技術(shù)主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金結(jié)合墊為吸附或涂抹有膠體金標(biāo)記試劑在玻璃纖維膜，當(dāng)待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動到膠體金結(jié)合墊上并溶解膠體金結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體區(qū)域時，待測物金標(biāo)試劑復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，膠體金標(biāo)記聚集在檢測帶上，可通過目測得到直觀的顯色結(jié)果；而游離的標(biāo)記物則越過檢測帶，從而達(dá)到與檢測物自動分離的目的。膠體金顆粒本身為紅色，不需要加入發(fā)色試劑，省卻了酶標(biāo)的致癌性底物及終止液的步驟，對人體無毒害，金標(biāo)記物比酶標(biāo)記物更穩(wěn)定，試驗結(jié)果可以長期保存而不腿色。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型根據(jù)上述領(lǐng)域的空白，提供一種甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙。本發(fā)明所提供的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層，所述反應(yīng)層一端到另一端依次為點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、回收區(qū)，其特征在于所述檢測區(qū)設(shè)置有檢測線，所述檢測線上包被有抗人-IgG抗體，所述膠體金結(jié)合區(qū)包被有膠體金標(biāo)記的甲型肝炎病毒抗原。所述檢測區(qū)還設(shè)置有對照線，所述對照線上包被有抗兔IgG多克隆抗體。所述膠體金結(jié)合區(qū)還包被有膠體金標(biāo)記的兔IgG。所述點樣區(qū)的覆蓋材料的末端壓著所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料的始端，所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料的末端壓著所述檢測區(qū)的覆蓋材料的始端，所述回收區(qū)的覆蓋材料的始端壓著所述檢測區(qū)的覆蓋材料的末端。所述檢測區(qū)的覆蓋材料為硝酸纖維素膜，所述點樣區(qū)的覆蓋材料為玻璃纖維，所述回收區(qū)的覆蓋材料為濾油紙。所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料為膠體金結(jié)合墊，所述膠體金結(jié)合墊為固定有膠體金標(biāo)記試劑的一層玻璃纖維。所述片狀載體材料為雙面膠。所述雙面膠的另一面粘附在硬質(zhì)防水載體板上。利用免疫層析法原理，采用膠體金標(biāo)記技術(shù)，研制出甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙。它具有快速、簡便、靈敏、特異的特點，以符號顯示結(jié)果，擺脫了對設(shè)備、儀器、人員及貯存和運輸環(huán)境的特殊要求，對于輔助甲型肝炎的治療有重要意義，市場發(fā)展?jié)摿艽蟆?br>
圖I為甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙結(jié)構(gòu)示意圖的俯視圖。圖2為甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙結(jié)構(gòu)示意圖的剖視圖。其中1_點樣區(qū)，2-膠體金結(jié)合區(qū)，3-檢測區(qū)，4-回收區(qū)，5-片狀載體材料，6-檢測線，7-對照線，Ia-玻璃纖維，2a-膠體金結(jié)合墊，3a-硝酸纖維素膜，4a_濾油紙。
具體實施方式
實施例I、甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙抗兔IgG多克隆抗體(ARTRON BIORESEARCH INC，產(chǎn)品目錄號為ad21 )，抗人-IgG抗體(購自 ARTRON BIORESEARCH INC，產(chǎn)品目錄號為 Aal )，兔 IgG(購自 ARTRON BI0RESEARCHINC，產(chǎn)品目錄號為Aa3)、甲型肝炎病毒(HAV)抗原(購自ARTRON BIORESEARCH INC，產(chǎn)品目錄號為Aol4)。I、甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙的結(jié)構(gòu)如圖I和圖2所示，本實用新型所提供的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層，所述反應(yīng)層一端到另一端依次為點樣區(qū)I、膠體金結(jié)合區(qū)2、檢測區(qū)3、回收區(qū)4，所述點樣區(qū)的覆蓋材料的末端壓著所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料的始端，所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料的末端壓著所述檢測區(qū)的覆蓋材料的始端，所述回收區(qū)的覆蓋材料的始端壓著所述檢測區(qū)的覆蓋材料的末端。所述檢測區(qū)設(shè)置有檢測線6，所述檢測線6上包被有抗人-IgG抗體,所述膠體金結(jié)合區(qū)2包被有膠體金標(biāo)記的HAV抗原。本實用新型應(yīng)用免疫層析式捕獲法原理，當(dāng)樣本中含有抗HAV IgG時，抗HAV IgG能與膠體金標(biāo)記HAV抗原結(jié)合形成復(fù)合物，該復(fù)合物在層析過程中又與檢測線6上的抗人-IgG抗體結(jié)合形成紅色沉淀條帶,試驗結(jié)果為陽性。當(dāng)樣本中不含抗HAV IgG時,膠體金標(biāo)記的HAV抗原無法與檢測線6上的抗人-IgG抗體結(jié)合，于是在檢測線6處不出現(xiàn)紅色線條，試驗結(jié)果為陰性。本實用新型優(yōu)選在所述檢測區(qū)3還設(shè)置有對照線7，所述對照線7上包被有抗兔IgG多克隆抗體；所述膠體金結(jié)合區(qū)2還包被有膠體金標(biāo)記的兔IgG。無論樣本中是否含有抗HAVIgG，對照線7的抗兔IgG多克隆抗體都會與膠體金標(biāo)記的兔IgG結(jié)合形成一條紅色對照線。對照線的顯色是判定是否有足夠樣本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為該試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。本實用新型的點樣區(qū)I、膠體金結(jié)合區(qū)2、檢測區(qū)3及回收區(qū)4所用材料可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的與這些區(qū)域的功能符合的材料，本實用新型優(yōu)選采用玻璃纖維Ia作為點樣區(qū)I的覆蓋材料，硝酸纖維素膜3a作為檢測區(qū)3的覆蓋材料，濾油紙4a作為回收區(qū)的覆蓋材料，膠體金結(jié)合區(qū)覆蓋有膠體金結(jié)合墊2a，所述膠體金結(jié)合墊為固定有膠體金標(biāo)記試劑的一層無紡布。所述片狀載體材料為雙面膠；所述雙面膠的另一面粘附在硬質(zhì)防水載體板上。2、甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙的制備方法2. I基因重組抗原-膠體金標(biāo)記物的制備2. I. I膠體金的制備用檸檬酸三鈉還原法制備。即將氯金酸水溶液加熱煮沸，加入檸檬酸三鈉，混勻后煮沸，待膠體金溶液顏色至紫紅色，繼續(xù)煮沸15-20分鐘，冷卻即可。2. I. 2金標(biāo)記抗原的制備·用碳酸鉀溶液調(diào)整膠體金溶液PH值至8-9后，加入基因重組HAV抗原，2-5分鐘后加入聚乙二醇，離心制得金標(biāo)抗原濃縮液后保存，使用前稀釋至工作濃度。2. I. 3膠體金墊的制備取已稀釋好的金標(biāo)記抗原溶液浸濕結(jié)合墊，干燥，檢測，備用。2. 2硝酸纖維反應(yīng)膜的制備即檢測線和對照線的制備。用適宜工作濃度的抗人-IgG抗體溶液在硝酸纖維膜上包被檢測線；用適宜工作濃度的抗兔IgG多克隆抗體溶液在硝酸纖維膜上包被對照線。2. 3 組裝將雙面膠的一面粘附在塑料板上，在雙面膠的另一面順次貼上包被有檢測線和對照線的硝酸纖維反應(yīng)膜、吸附有膠體金標(biāo)記的HAV抗原的膠體金結(jié)合墊、玻璃纖維和濾油紙，且所述玻璃纖維的末端壓著所述膠體金結(jié)合墊的始端，所述膠體金結(jié)合墊的末端壓著所述硝酸纖維反應(yīng)膜的始端，所述濾油紙的始端壓著所述硝酸纖維反應(yīng)膜的末端。將各組裝材料組裝成反應(yīng)體后切成適宜條寬的測試條，卡型產(chǎn)品是將檢測條組裝在檢測卡中。3、甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙的使用方法檢驗前請將試劑和樣本恢復(fù)至室溫。3. I、從鋁箔袋中取出甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙；3. 2、放在水平工作臺面上平置并做好樣本標(biāo)記；3. 3、用微量移液器取10 μ L血清、血漿或全血樣本，加入到盛放稀釋液的試劑瓶中；3. 4、將加入樣本的試劑瓶旋緊，搖勻；3. 5、在甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙的加樣端滴加稀釋樣本2滴；3. 6、20_30分鐘內(nèi)判讀結(jié)果，30分鐘后檢驗結(jié)果無效。4、檢驗結(jié)果的解釋4. I、陰性只在質(zhì)控線(C)位置出現(xiàn)一條紅色條帶。4. 2、陽性質(zhì)控線(C)和檢測線(T)位置出現(xiàn)兩條紅色條帶。4. 3、無效質(zhì)控線(C)位置沒有出現(xiàn)紅色條帶。
權(quán)利要求1.甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層，所述反應(yīng)層一端到另一端依次為點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、回收區(qū)，其特征在于所述檢測區(qū)設(shè)置有檢測線，所述檢測線上包被有抗人-IgG抗體，所述膠體金結(jié)合區(qū)包被有膠體金標(biāo)記的甲型肝炎病毒抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述檢測區(qū)還設(shè)置有對照線，所述對照線上包被有抗兔IgG多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述膠體金結(jié)合區(qū)還包被有膠體金標(biāo)記的兔IgG。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述點樣區(qū)的覆蓋材料的末端壓著所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料的始端，所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料的末端壓著所述檢測區(qū)的覆蓋材料的始端，所述回收區(qū)的覆蓋材料的始端壓著所述檢測區(qū)的覆蓋材料的末端。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述檢測區(qū)的覆蓋材料為硝酸纖維素膜，所述點樣區(qū)的覆蓋材料為玻璃纖維，所述回收區(qū)的覆蓋材料為濾油紙。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述膠體金結(jié)合區(qū)的覆蓋材料為膠體金結(jié)合墊，所述膠體金結(jié)合墊為固定有膠體金標(biāo)記試劑的一層玻璃纖維。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述片狀載體材料為雙面膠。
8.根據(jù)權(quán)利要求8所述的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，其特征在于所述雙面膠的另一面粘附在硬質(zhì)防水載體板上。
專利摘要本實用新型公開了甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙。本實用新型所提供的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙，包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層，所述反應(yīng)層一端到另一端依次為點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、回收區(qū)，其特征在于所述檢測區(qū)設(shè)置有檢測線，所述檢測線上包被有抗人-IgG抗體，所述膠體金結(jié)合區(qū)包被有膠體金標(biāo)記的甲型肝炎病毒抗原。本實用新型所提供的甲型肝炎病毒IgG抗體檢測試紙具有快速、簡便、靈敏、特異的特點，以符號顯示結(jié)果，擺脫了對設(shè)備、儀器、人員及貯存和運輸環(huán)境的特殊要求，對于輔助甲型肝炎的治療有重要意義，市場發(fā)展?jié)摿艽蟆?br> 文檔編號G01N33/576GK202676701SQ20122023801
公開日2013年1月16日 申請日期2012年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月24日
發(fā)明者程鴻宇, 張瑩, 孫茜 申請人:藍(lán)十字生物藥業(yè)(北京)有限公司