一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用，所述提取物由以下方法制備：灰氈毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚滲濾，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械娜軇瑢堅(jiān)靡掖蓟亓魈崛?，提取液濃縮，然后用乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物。經(jīng)過(guò)體外試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物可抑制EGFR激酶活性，效果明顯，即可抗皮膚腫瘤、白血病、結(jié)腸癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等多種腫瘤。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取物，具體涉及一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]灰租毛忍冬是忍冬科植物灰租毛忍冬Lonicera macranthoidesHand.-Mazz的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花，2010年版中國(guó)藥典將其與紅腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、華南忍冬Lonicera Confusa DC.、黃褐毛忍冬Lonicera fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花一同列入山銀花項(xiàng)下。
[0003]灰氈毛忍冬具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱之功效，主要分布于我國(guó)貴州、四川、湖南、廣西、福建等地?；瘜W(xué)成分主要有酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、皂苷類(lèi)等。酚酸類(lèi)化合物主要為咖啡酸(caffeic acid),綠原酸(chlorogenic acid)等；黃酮類(lèi)化合物主要為木犀草素(Iuteolin)和槲皮素(quercetin)及其苷類(lèi)；皂苷類(lèi)主要為灰氈毛忍冬次皂苷乙(macranthoside B)和川續(xù)斷阜苷乙(dipsacoside B)。具有抗菌、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用。
[0004]關(guān)于灰氈毛忍冬的提取物方面，有如下報(bào)道:
[0005]CN200610046198.2公開(kāi)了一種含忍冬藤提取物的藥物的制備方法，具體為:取1000g忍冬藤藥材，第一次加10 - 12倍量水煎煮I 一 2小時(shí)，第二次加6-8倍量水煎煮I小時(shí)，合并濾液，過(guò)濾，濃縮至每1ml相當(dāng)于原生藥量0.5-1.0g的提取液備用。2.純化:取上述制備好的忍冬藤提取液用離心機(jī)高速離心，取離心液用聚酰胺柱吸附，先用水洗至流出液無(wú)色，再用3-6倍柱體積量50-80%乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，加注射用水稀釋至每1ml相當(dāng)于原生藥0.5-1.0g，用截留分子量I萬(wàn)-3萬(wàn)的超濾膜超濾，超濾液減壓濃縮并干燥，得到忍冬藤純化提取物。
[0006]CN200810235536.6公開(kāi)了一種山銀花提取物，該提取物的主要成分為灰氈毛忍冬次皂苷乙、灰氈毛忍冬次皂苷甲、3-0-a -L-吡喃鼠李糖基(l-2)-a -L-吡喃阿拉伯糖基一常春藤皂苷元和3-0- β -D-吡喃葡萄糖基(1-4) - β -D-吡喃葡萄糖基(1-3) - a -L-吡喃鼠李糖基(1-2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基一齊墩果酸。以及該類(lèi)化合物的制備方法，和其在癌癥方面的應(yīng)用。該產(chǎn)品的制備方法是所述癌癥為肝癌、肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、直腸癌、結(jié)腸癌、腹水癌、前列腺癌、骨癌或白血病等。
[0007]尚未見(jiàn)到灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其應(yīng)用的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
[0009]本發(fā)明提供的一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物，由以下方法制備:灰氈毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚滲濾，回收殘?jiān)瑩]干殘?jiān)械娜軇?，用乙醇回流提取，提取液濃縮，然后用乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物。[0010]優(yōu)選地，所述灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:取灰氈毛忍冬粉碎，用灰氈毛忍冬重量3-8倍體積的石油醚浸泡12_36h，用石油醚滲濾，得到灰氈毛忍冬重量3-7倍體積的滲濾液，回收殘?jiān)瑩]干殘?jiān)械氖兔?，然后將殘?jiān)没覛置潭亓?-7倍量體積的濃度為60-90%的乙醇提取2次，每次1-2小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮至無(wú)醇味，得乙醇濃縮液，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得乙酸乙酯提取物。
[0011]進(jìn)一步優(yōu)選，所述灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:取灰氈毛忍冬粉碎，用灰氈毛忍冬重量3-5倍體積的石油醚浸泡18_30h，用石油醚滲濾，得到灰氈毛忍冬重量5-7倍體積的滲濾液，回收殘?jiān)瑩]干殘?jiān)械氖兔?，然后將殘?jiān)没覛置潭亓?-5倍量體積的濃度為70-85%的乙醇提取2次，每次1-2小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮至無(wú)醇味，得乙醇濃縮液，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得乙酸乙酯提取物。
[0012]更進(jìn)一步優(yōu)選，所述灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:取灰氈毛忍冬粉碎，用灰氈毛忍冬重量3倍體積的石油醚浸泡24h，用石油醚滲濾，得到灰氈毛忍冬重量5倍體積的滲濾液，回收殘?jiān)瑩]干殘?jiān)械氖兔?，然后將殘?jiān)没覛置潭亓?倍量體積的濃度為80%的乙醇提取2次，每次2小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮至無(wú)醇味，得乙醇濃縮液，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得乙酸乙酯提取物。
[0013]本發(fā)明還提供了一種制備上述灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物的方法，該方法包括以下步驟:灰氈毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚滲濾，回收殘?jiān)瑩]干殘?jiān)械娜軇?，將殘?jiān)靡掖蓟亓魈崛?，提取液濃縮，然后用乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
[0014]本發(fā)明還提供了含上述灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物的制劑，由所述提取物單獨(dú)制成或由該提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
[0015]所述制劑為散劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液。
[0016]所述藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、潤(rùn)濕劑、溶劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種。
[0017]所述填充劑選自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等;
[0018]所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、淀粉、水、糊精、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等;
[0019]所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；
[0020]所述潤(rùn)滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉硅膠、滑石粉或硬脂酸鎂；
[0021]所述助懸劑選自微粉硅膠、蜂蠟、纖維素、固態(tài)聚乙二醇；
[0022]所述潤(rùn)濕劑選自甘油、吐溫-80、乙氧基氫化蓖麻油或卵磷脂；
[0023]所述溶劑選自乙醇、液態(tài)聚乙二醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油等；
[0024]所述表面 活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、月旨肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐溫)等；
[0025]所述矯味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、檸檬酸或糖精鈉。
[0026]本發(fā)明還提供了灰氈毛忍冬的乙酸乙酯的檢測(cè)方法，是用超高效液相色譜-四極桿聯(lián)合飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜分析方法(UPLC/Q-T0F-MS分析方法)以獲得提取物的指紋圖譜。其色譜分析條件為:WatersACQUITY UPLCtmBEH C18Column (50mmX 2.lmm.1 cL，L 7 μ m)色譜柱；二元梯度洗脫，A相為0.4%甲酸水溶液，B相為乙腈，流速0.4mL/min ;進(jìn)樣量3 μ L。質(zhì)譜條件為電噴霧離子源，正離子模式檢測(cè)。
[0027]優(yōu)選地，所述色譜條件:WatersACQUITY UPLCtmBEH C18Column(50mmX2.lmm.1 d.，1.7 μ m)柱；二元梯度洗脫見(jiàn)下表，其中A相為0.4%甲酸水溶液，B相為乙腈，流速0.4mL/min ;進(jìn)樣量 3 μ I,
【權(quán)利要求】
1.一種灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述提取物由以下方法制備:灰氈毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚滲濾，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械娜軇?，將殘?jiān)靡掖蓟亓魈崛?，提取液濃縮，然后用乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，提取物由以下方法制備:取灰氈毛忍冬粉碎，用灰氈毛忍冬重量3-8倍體積的石油醚浸泡12-36h，用石油醚滲濾，得到灰氈毛忍冬重量3-7倍體積的滲濾液，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械氖兔?，然后將殘?jiān)没覛置潭亓?-7倍量體積的濃度為60-90%的乙醇提取2次，每次1-2小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮至無(wú)醇味，得乙醇濃縮液，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得乙酸乙酯提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述提取物由以下方法制備:取灰氈毛忍冬粉碎，用灰氈毛忍冬重量3-5倍體積的石油醚浸泡18-30h，用石油醚滲濾，得到灰氈毛忍冬重量5-7倍體積的滲濾液，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械氖兔?，然后將殘?jiān)没覛置潭亓?-5倍量體積的濃度為70-85%的乙醇提取2次，每次1-2小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮至無(wú)醇味，得乙醇濃縮液，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得乙酸乙酯提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:取灰氈毛忍冬粉碎，用灰氈毛忍冬重量3倍體積的石油醚浸泡24h，用石油醚滲濾，得到灰氈毛忍冬重量5倍體積的滲濾液，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械氖兔?，然后將殘?jiān)没覛置潭亓?倍量體積的濃度為80%的乙醇提取2次，每次2小時(shí)，合并兩次提取液，濃縮至無(wú)醇味，得乙醇濃縮液 ，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得乙酸乙酯提取物。
5.一種制備權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的提取物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:灰氈毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚滲濾，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械娜軇瑢堅(jiān)靡掖蓟亓魈崛?，提取液濃縮，然后用乙酸乙酯萃取，收集上層清液，即得灰氈毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
6.含權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的提取物的制劑，其特征在于，該制劑由所述提取物單獨(dú)制成或由所述提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
7.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的提取物的檢測(cè)方法，其特征在于，該方法是用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜分析以獲得提取物的指紋圖譜。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，該方法的色譜分析條件為=WatersACQUITY UPLCtmBEH C18 Column (50mmX 2.lmm.1d.，1.7μπι)色譜柱；二元梯度洗脫，A 相為.0.4%甲酸水溶液，B相為乙腈，流速0.4mL/min ;進(jìn)樣量3 μ L ;質(zhì)譜條件為電噴霧離子源，采用正離子模式檢測(cè)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其特征在于，色譜條件為:WatersACQUITYUPLCtmBEH C18 Column (50mmX 2.lmm.1d.，1.7μπι)色譜柱；二元梯度洗脫見(jiàn)下表，A 相為.0.4%甲酸水溶液，B相為乙腈，流速0.4mL/min ;進(jìn)樣量3 μ L，
10.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的提取物或權(quán)利要求6所述制劑在制備皮膚腫瘤、白血病、結(jié)腸癌、肝癌、胃癌、乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N30/36GK103908482SQ201210591366
【公開(kāi)日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月28日
【發(fā)明者】陳士林, 黃林芳, 林森森, 任偉光, 卞兆祥, 徐宏喜, 楊大堅(jiān), 陳新滋 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所, 香港浸會(huì)大學(xué)