專(zhuān)利名稱(chēng)：細(xì)氈毛忍冬正品藥材的鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)氈毛忍冬正品藥材的鑒定方法。
背景技術(shù)：
金銀花，是一種常用的中藥材，能清熱解毒、涼散風(fēng)熱。2005年以前，將忍冬科忍冬、紅腺忍冬、山銀花和毛花柱忍冬均列為金銀花的植物來(lái)源，造成了金銀花一藥多源的局面。但從化學(xué)成分分析上，作為主要藥用成分的木犀草苷，在忍冬中含量比較高，而山銀花中含量很少，兩者成分差異較大。因此，2005年以后，《中國(guó)藥典》規(guī)定了，忍冬科忍冬的干燥花蕾或初開(kāi)的花為正品金銀花，將其余品種灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、華南忍冬、黃褐毛忍冬列為山銀花植物來(lái)源。自此，由于金銀花的來(lái)源較少，其售價(jià)也逐漸上升；而金銀花的其他俗用藥源，由于產(chǎn)量較高，成本較低，也就出現(xiàn)了以山銀花或其他忍冬科植物來(lái)替用的現(xiàn)象。
細(xì)租毛忍冬Lonicera similes Hemsl,為川產(chǎn)金銀花的主流品種,分布廣，資源蘊(yùn)藏量大據(jù)調(diào)查，成都荷花池中藥材專(zhuān)業(yè)市場(chǎng)經(jīng)銷(xiāo)的金銀花，四川省內(nèi)中藥店及醫(yī)療單位使用的金銀花多為南江產(chǎn)金銀花(細(xì)氈毛忍冬)，并銷(xiāo)往全國(guó)各地。近年來(lái)，雖然有不少研究表明，細(xì)氈毛忍冬綠藥理作用與藥典收載金銀花品種相當(dāng)，但目前川銀花優(yōu)勢(shì)品種細(xì)氈毛忍冬仍未入選中國(guó)藥典，尤其是《中國(guó)藥典》2010年版，加強(qiáng)了對(duì)中藥材專(zhuān)屬性成分的鑒別及含量測(cè)定，而細(xì)氈毛忍冬尚缺乏相關(guān)的基礎(chǔ)研究，這極大的制約了川產(chǎn)金銀花資源的利用。為了給細(xì)氈毛忍冬的繼續(xù)使用提供可靠基礎(chǔ)，首先需要研究細(xì)氈毛忍冬的物質(zhì)成分和質(zhì)量指標(biāo)，然而，目前鮮見(jiàn)對(duì)細(xì)氈毛忍冬的此類(lèi)研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種專(zhuān)屬性較強(qiáng)的細(xì)氈毛忍冬正品藥材的鑒定方法。本發(fā)明提供了細(xì)氈毛忍冬正品藥材的鑒定方法，取藥材，通過(guò)高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，藥材中5-羥基-7，3' ,4!-三甲氧基黃酮的含量在O. 3%w/w以上。更進(jìn)一步地，藥材中5-羥基-7，3' ,4'-三甲氧基黃酮的含量在O. 3 I. 2%w/w。進(jìn)一步優(yōu)選地，藥材中5-羥基-7，3 '，4'-三甲氧基黃酮的含量在O. 36^1. 08%w/w。其中，所述高效液相色譜法的色譜條件如下色譜柱十八烷基鍵合硅膠柱流動(dòng)相乙腈0.3-0. 5% 磷酸=(20-24) : (76-80)柱溫25-35O檢測(cè)波長(zhǎng)269±2nm。進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相為乙腈0· 4%磷酸=22:78 ;柱溫為30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)269nm。其中，所述高效液相色譜法中，供試品溶液的制備方法如下取細(xì)氈毛忍冬，粉碎，以60-80%v/v乙醇回流提取，濾過(guò)，量取續(xù)濾液，加酸水解后，濃縮至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容，即得供試品溶液。進(jìn)一步地，所述乙醇的濃度為70%v/v。進(jìn)一步地，加酸水解步驟中，所用酸為鹽酸。進(jìn)一步優(yōu)選地，加酸水解的具體操作為加入lmol/L鹽酸，鹽酸與續(xù)濾液的體積比為5 :1，置90°C水浴中加熱水解。本發(fā)明還提供了細(xì)氈毛忍冬藥材或提取物的的檢測(cè)方法，它是采用HPLC進(jìn)行的，操作步驟如下(I)取細(xì)氈毛忍冬，粉碎，以60-80%v/v乙醇回流提取，濾過(guò)，量取續(xù)濾液，加酸水解后，濃縮至干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓ㄈ?，即得供試品溶液?2)以5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮為對(duì)照品，制備對(duì)照品溶液；·(3)分別將供試品溶液、對(duì)照品溶液注入液相色譜儀中，檢測(cè)，即可，其中，所述高效液相色譜法的色譜條件如下色譜柱十八烷基鍵合硅膠柱流動(dòng)相乙腈0.3-0. 5% 磷酸=(20-24) : (76-80)柱溫25-35°C檢測(cè)波長(zhǎng)269±2nm。本發(fā)明中，首次在細(xì)氈毛忍冬中發(fā)現(xiàn)了 5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮這一化合物的存在，同時(shí)，將該化合物作為鑒定細(xì)氈毛忍冬的指標(biāo)成分，可以將細(xì)氈毛忍冬與現(xiàn)行中國(guó)藥典收載的忍冬類(lèi)其他品種進(jìn)行有效區(qū)分，其專(zhuān)屬性強(qiáng)，為其品質(zhì)鑒定提供了一種新的方法。


圖I 5_輕基 _7，3' ,4'-三甲氧基黃酮(5-hydroxyl-7, 3’，4’-trimethoxyflavone)氫譜2 5_輕基 _7，3' ,4'-三甲氧基黃酮(5_hydroxy 1-7，3’，4’-trimethoxyflavone)碳譜3流動(dòng)相為甲醇-0. 1%磷酸(70:30)時(shí)的液相圖譜圖4流動(dòng)相為甲醇-四氫呋喃-水(13:4:11)時(shí)的液相圖譜圖5流動(dòng)相為乙腈-0. 4%磷酸(22:78)時(shí)的液相圖譜
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I 5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的分離鑒定實(shí)驗(yàn)所用的細(xì)氈毛忍冬藥材采購(gòu)于四川省南江縣，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬逾英教授鑒定，為忍冬科植物細(xì)租毛忍冬Lonicera similis Hemsl。(I)稱(chēng)取細(xì)氈毛忍冬Lonicera similes Hemsl 的干燥花蕾 I. 9Kg，用 90%、80%、70%的乙醇回流提取，物料比為I : 8，過(guò)濾，減壓回收乙醇，得浸膏。經(jīng)測(cè)定，該提取物中含有總黃酮3. 39%ο(2)取上述浸膏，加水配制上柱液，上柱液濃度以生藥計(jì)為0. 10g/ml，上大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用水、濃度為10%、20%、40%、60%、80%、95%V/V的乙醇洗脫，收集95%乙醇部位；
(3)取所得乙醇部位，回收溶劑后，上硅膠柱層析(200-300目，350g，柱體積925ml)，用環(huán)己烷-乙酸乙酯=20 Γθ 1，乙酸乙酯-甲醇=5 Γθ I系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，每流份150ml，收集洗脫液，薄層監(jiān)測(cè)，合并相同流份，取39 59份，回收溶劑后，用甲醇復(fù)溶，再上S印hadexLH-20凝膠柱，用甲醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，重結(jié)晶，即得5-羥基-7，3' ,4'-三甲氧基黃酮(35mg)，轉(zhuǎn)移率為O. 17%，經(jīng)HPLC測(cè)定，純度為99. 5%。梯度洗脫的條件為己燒-乙酸乙酯=20 : I (997. 5ml),環(huán)己燒-乙酸乙酯=10 : I (990ml),環(huán)己烷-乙酸乙酯=8 I (3050ml)，環(huán)己烷-乙酸乙酯=6 I (970ml)，環(huán)己烷-乙酸乙酯=5 : I (1901ml),環(huán)己燒-乙酸乙酯=4:1 (1855ml),環(huán)己燒-乙酸乙酯=3:1 (3755ml),環(huán)己烷-乙酸乙酯=2:1 (1550ml)，環(huán)己烷-乙酸乙酯=1:1 (1960ml)，乙酸乙酯(1500ml)，乙酸乙酯-甲醇=5 :1 (2035ml)，乙酸乙酯-甲醇=3:1 (1430ml)，乙酸乙酯-甲醇=2 :1 (1335ml)，乙酸乙酯-甲醇=1:1 (1500ml)，甲醇(1500ml)。
化合物鑒定所得化合物為黃色粉末，mpl67^169°C。TLC紫外燈下顯色，噴AlCl3有黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽(yáng)性，三氯化鐵反應(yīng)為陽(yáng)性。由此初步判斷為黃酮類(lèi)或黃酮醇類(lèi)化合物。ESI-MS m/z:329[M+H]+。1H-NMR(C5D5N, 400ΜΗζ) δ :7.07 (1H, s, H_3)，6. 60 (1H, s, H_6)，6. 73 (1H, s, H_8)，7.57 (1H, s, H-2' )，7. 06 (1H, d, J=8. 6Hz, H_5’), 7. 66 (1H, d, J=8. 6Hz, H_6' )，13. 60 (1H, s, 5-0H)，3. 82 (3H, s, -OCH3)，3. 79 (3H, s, -OCH3)，3. 72 (3H, s, -OCH3)。13C-NMR (C5D5N, 100MHz) δ 164. 4 (C_2, s)，104. 9 (C_3, d)，182. 9 (C_4, s)，162. 7 (C-5, s)，98. 8 (C-6, d)，166. 0 (C_7, s)，93. I (C_8, d)，158. 2 (C_9, s)，106. 0 (C-10, s)，123. 2(C-Γ，s)，110. 0 (C-2，，d)，149. 6 (C_3，，s)，153. 2 (C_4，，s)，112. 20 (C_5，，d)，120. 7 (C-6’，d)，56. 5 (-OCH3)，56. 4 (-OCH3)，56. 2 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)基本一致，故確定為5-羥基_7，3' ,41 -三甲氧基黃酮。
權(quán)利要求
1.細(xì)氈毛忍冬正品藥材的鑒定方法，其特征在于取藥材，通過(guò)高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，藥材中5-羥基-7，3' ,4!-三甲氧基黃酮的含量在O. 3%w/w以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的鑒定方法，其特征在于藥材中5-羥基_7，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量在O. 3^1. 2%w/w。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于藥材中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量在O. 36 I. 08%w/w。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的鑒定方法，其特征在于所述高效液相色譜法的色譜條件如下 色譜柱十八烷基鍵合硅膠柱 流動(dòng)相乙腈0. 3-0. 5% 磷酸=(20-24) : (76-80) 柱溫25-35 °C 檢測(cè)波長(zhǎng)269±2nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的鑒定方法，其特征在于所述流動(dòng)相為乙腈0.4%磷酸=22:78 ;柱溫為300C ;檢測(cè)波長(zhǎng)269nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的鑒定方法，其特征在于所述高效液相色譜法中，供試品溶液的制備方法如下 取細(xì)氈毛忍冬，粉碎，以60-80%v/v乙醇回流提取，濾過(guò)，量取續(xù)濾液，加酸水解后，濃縮至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容，即得供試品溶液?br> 7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鑒定方法，其特征在于所述乙醇的濃度為70%v/v。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鑒定方法，其特征在于加酸水解步驟中，所用酸為鹽酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或8所述的鑒定方法，其特征在于加酸水解的具體操作為加入lmol/L鹽酸，鹽酸與續(xù)濾液的體積比為5 :1，置90°C水浴中加熱水解。
10.細(xì)氈毛忍冬藥材或提取物的檢測(cè)方法，其特征在于它是采用HPLC進(jìn)行的，操作步驟如下 (1)取細(xì)氈毛忍冬，粉碎，以60-80%v/v乙醇回流提取，濾過(guò)，量取續(xù)濾液，加酸水解后，濃縮至干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓ㄈ?，即得供試品溶液? (2)以5-羥基_7，3'，4'-三甲氧基黃酮為對(duì)照品，制備對(duì)照品溶液； (3)分別將供試品溶液、對(duì)照品溶液注入液相色譜儀中，檢測(cè)，即可，其中，所述高效液相色譜法的色譜條件如下 色譜柱十八烷基鍵合硅膠柱 流動(dòng)相乙腈0. 3-0. 5% 磷酸=(20-24) : (76-80) 柱溫25-35 °C 檢測(cè)波長(zhǎng)269±2nm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了細(xì)氈毛忍冬正品藥材的鑒定方法取藥材，通過(guò)高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，藥材中5-羥基-7,3′,4′-三甲氧基黃酮的含量在0.3%w/w以上。本發(fā)明還提供了細(xì)氈毛忍冬藥材或提取物的檢測(cè)方法。本發(fā)明中，首次在細(xì)氈毛忍冬中發(fā)現(xiàn)了5-羥基-7,3′,4′-三甲氧基黃酮這一化合物的存在，同時(shí)，將該化合物作為鑒定細(xì)氈毛忍冬的指標(biāo)成分，可以將細(xì)氈毛忍冬與現(xiàn)行中國(guó)藥典收載的其他忍冬類(lèi)藥材進(jìn)行有效區(qū)分，為其品質(zhì)鑒定提供了一種新的方法。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102879502SQ201210418049
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者馬逾英, 鄭光雅, 盧曉琳, 穆向榮 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)