專利名稱：銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水體葉綠素a檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種廉價(jià)的、且能夠在線實(shí)時(shí)對水體中葉綠素a的含量進(jìn)行測定的方法。
背景技術(shù)：
對于水體中葉綠素a含量的測定，相較于紫外分光光度法、高效液相色譜法等傳統(tǒng)方法的步驟繁雜、費(fèi)時(shí)且不便于在線監(jiān)測等缺點(diǎn)，直接熒光法操作更簡便、靈敏度更高，且結(jié)果與傳統(tǒng)方法相比無顯著性差異。熒光法測定葉綠素基本原理是當(dāng)葉綠素a經(jīng)波長為450nm左右的光激發(fā)后，會發(fā)出波長為680nm左右的熒光，熒光光強(qiáng)與葉綠素a含量有關(guān)因此，通過測定特定光強(qiáng)下浮游植物發(fā)出的葉綠素?zé)晒鈴?qiáng)度就能檢測到葉綠素a的濃度。目前熒光法中用到的葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)品多購自與國外，價(jià)格昂貴且劑量較小難以滿足大量水體葉綠素含量分析實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。針對這一現(xiàn)狀，采用淡水湖泊中最常見且實(shí)驗(yàn)室極易培養(yǎng)的銅綠微囊藻作為研究對象，利用熒光法對比測定藻液葉綠素a提取液與葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)品的熒光值，做出銅綠微囊藻藻液的直接熒光法校準(zhǔn)曲線。從而直接利用此校正曲線測定水體中葉綠素a含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法，不僅十分廉價(jià)，而且能夠在線實(shí)時(shí)對水體中葉綠素a的含量進(jìn)行測定。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下。銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法，該方法包括如下步驟A、銅綠微囊藻葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取銅綠微囊藻液，抽濾，抽濾完畢后取下濾膜，將濾膜夾在濾紙中冷凍，反復(fù)凍融，使細(xì)胞完全裂解以利于葉綠素a的提?。粚V膜放入比色管中，加入95%乙醇定容，放入4°C冰箱中靜置，然后以4000r/min離心15min，將上清液分別轉(zhuǎn)移至容量瓶中用95%乙醇定各；作為儲備液備用；B、儲備液中葉綠素a濃度的測定用國標(biāo)法標(biāo)定儲備液中葉綠素a的濃度，以相應(yīng)的95%乙醇作為空白，用紫外分光光度計(jì)測定儲備液掃描波長在750nm、664nm、645nm和630nm處的吸光值，將測得的結(jié)果
數(shù)據(jù)帶入國標(biāo)法計(jì)算公式
權(quán)利要求
1.銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法，其特征步驟包括: A、銅綠微囊藻葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取銅綠微囊藻液，抽濾，抽濾完畢后取下濾膜，將濾膜夾在濾紙中冷凍，反復(fù)凍融，使細(xì)胞完全裂解以利于葉綠素a的提??；將濾膜放入比色管中，加入95%乙醇定容，放入4°C冰箱中靜置，然后以4000r/min離心15min，將上清液分別轉(zhuǎn)移至容量瓶中用95%乙醇定容；作為儲備液備用； B、儲備液中葉綠素a濃度的測定 用國標(biāo)法標(biāo)定儲備液中葉綠素a的濃度，以相應(yīng)的95%乙醇作為空白，用紫外分光光度計(jì)測定儲備液掃描波長在750nm、664nm、645nm和630nm處的吸光值,將測得的結(jié)果數(shù)據(jù)帶入國標(biāo)法計(jì)算公式:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法，其特征在于:步驟A的具體操作步驟如下:取200ml銅綠微囊藻液，用裝好乙酸纖維濾膜的抽濾裝置分四次對藻液進(jìn)行抽濾，抽濾完畢后取下濾膜，將濾膜夾在濾紙中放入_20°C冰箱中冷凍，每隔30min取出在室溫中解凍15min，反復(fù)凍融3次，使細(xì)胞完全裂解以利于葉綠素a的提取；將濾膜放入50ml比色管中，加入95%乙醇定容，蓋上塞子振搖l-2min,放入4°C冰箱中靜置,每隔30min取出振搖一次,反復(fù)操作3次,然后以4000r/min離心15min，將上清液分別轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中用95%乙醇定容；作為儲備液備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法，其特征在于:步驟E -1和E-2中，采用步驟C的熒光測定條件進(jìn)行熒光測定。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用銅綠微囊藻替代葉綠素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)快速實(shí)時(shí)測定水體葉綠素的方法，該方法包括如下步驟A.銅綠微囊藻葉綠素ａ標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備；B.儲備液中葉綠素ａ濃度的測定，用國標(biāo)法標(biāo)定儲備液中葉綠素ａ的濃度；C.儲備液熒光測定，分別測定各溶液的熒光強(qiáng)度；D.銅綠微囊藻標(biāo)準(zhǔn)熒光曲線的建立，將儲備液的濃度對其熒光強(qiáng)度作圖繪制銅綠微囊藻葉綠素ａ熒光法曲線；E.銅綠微囊藻校正熒光曲線的建立。根據(jù)所建立的銅綠微囊藻藻液熒光強(qiáng)度和葉綠素ａ濃度之間的校正曲線，只需采用熒光儀直接測出水樣的熒光強(qiáng)度，便可實(shí)時(shí)、快速得到葉綠素ａ的濃度。
文檔編號G01N21/64GK103076297SQ20121058653
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者崔建升, 程玉欣, 王曉輝, 王改珍 申請人:河北科技大學(xué)