專利名稱：一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
烏頭類藥物能祛風(fēng)除濕，溫經(jīng)止痛，用于風(fēng)濕麻痹，關(guān)節(jié)疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛，麻醉止痛等，被廣泛應(yīng)用于臨床治療中。烏頭類中成藥是以毛茛科植物川烏、附子、草烏等為原料，通過(guò)炮制、配伍而得到的一類中成藥。由于該類中成藥所含的活性成分烏頭堿有一定毒性，臨床上中毒反應(yīng)時(shí)有報(bào)道。近代藥理學(xué)研究證明，人口服烏頭堿O. 2mg^l. Omg即可引起中毒，口服2mg 3mg或肌肉注射O. 2mg^0. 3mg即可引起死亡。故必須 嚴(yán)格控制烏頭類中藥的質(zhì)量與用藥劑量，使藥物既達(dá)到治療目的，又不致發(fā)生中毒。但目前，中藥質(zhì)量檢測(cè)方法無(wú)法滿足臨床醫(yī)學(xué)對(duì)烏頭類中成藥質(zhì)量檢測(cè)的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決現(xiàn)有中藥質(zhì)量檢測(cè)方法無(wú)法滿足臨床醫(yī)學(xué)對(duì)中藥烏頭飲片質(zhì)量檢測(cè)要求的問(wèn)題，而提供了一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法。該方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)中藥的原位快速鑒別，保證了質(zhì)量檢測(cè)的準(zhǔn)確性，進(jìn)而也保證了中醫(yī)臨床用藥的安全性。為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供的一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，其具體的技術(shù)方案如下一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法的步驟和條件如下步驟(I):供試樣品的制備，包括以下步驟①至⑤中的任意一個(gè)步驟，所述步驟①至⑤分別為步驟①烏頭類中成藥糖衣片類樣品的制備取烏頭類中成藥糖衣片，去除外層糖衣；步驟②烏頭類中成藥膠囊類樣品的制備取烏頭類中成藥膠囊內(nèi)容物，加入0.5-1. 5mL溶劑，震動(dòng)，離心，離心轉(zhuǎn)數(shù)為10000轉(zhuǎn)/分鐘至14000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為l_5min ;所述的溶劑為乙腈、甲醇、水或體積比為1:1的甲醇和水；步驟③烏頭類中成藥丸類樣品的制備取烏頭類中成藥藥丸，切成小塊；步驟④烏頭類中成藥液體類樣品的制備取液體烏頭類中成藥；步驟⑤烏頭類中成藥膏藥類樣品的制備取烏頭類中成藥藥膏藥的藥物部分；得到供試樣品；步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜取步驟(I)中制備的供試樣品做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為3-6kV，格柵電壓為+250-+400V，調(diào)節(jié)工作氣體壓力O.l-o. 8kPa，氣體溫度為150-500°c ;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度150-300°C，毛細(xì)管電壓10-50V，透鏡電壓50-150V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa，在m/z300 1000掃描范圍內(nèi)，存在 m/z 330、m/z 358、m/z408、m/z 454>m/z 556、m/z 572>m/z 586、m/z 590、m/z 604>m/z 616 離子。在上述技術(shù)方案中，所述步驟(2)中的工作氣體為高純氮?dú)狻⒏呒兒饣蚋呒儦鍤?。所述的高純氣體是指利用現(xiàn)代提純技術(shù)能達(dá)到的某個(gè)等級(jí)純度的氣體，例如對(duì)于氮，氬，氦而言，通常指純度等于或高于99. 999%的為高純氣體。在上述技術(shù)方案中，所述步驟(2)中的格柵電壓為25(T350V。
在上述技術(shù)方案中，所述步驟(2)中的氣體壓力為O. 5^0. SkPa0在上述技術(shù)方案中，所述步驟(2)中的氣體溫度為35(T500°C。本發(fā)明提供的烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法的有益效果(I)本方法對(duì)烏頭類中成藥做質(zhì)譜分析，根據(jù)得到的質(zhì)譜指紋圖譜中的特征指紋峰及其相對(duì)強(qiáng)度，對(duì)烏頭類中成藥的質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)；(2)本方法整個(gè)過(guò)程在大氣壓條件下進(jìn)行，對(duì)樣品進(jìn)行低損耗定性分析且無(wú)需復(fù)雜樣品前處理過(guò)程，大大縮短了分析時(shí)間，可實(shí)現(xiàn)原位、快速、準(zhǔn)確且高通量的檢測(cè)；(3)圖1、2、3、4分別為烏頭類中成藥糖衣片類、烏頭類中成藥膠囊類、烏頭類中成藥液體類、烏頭類中成藥膏藥類樣品的質(zhì)譜指紋圖譜，可以說(shuō)明本發(fā)明的方法適用于多種藥物劑型，并能夠?qū)躅^類中成藥的質(zhì)量進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)，以滿足臨床醫(yī)學(xué)對(duì)烏頭類中成藥質(zhì)量檢測(cè)要求。


圖I是一種烏頭類中成藥糖衣片類供試樣品I的質(zhì)譜指紋圖譜；圖2是一種烏頭類中成藥膠囊類供試樣品3的質(zhì)譜指紋圖譜；圖3是一種烏頭類中成藥液體類供試樣品4的質(zhì)譜指紋圖譜；圖4是一種烏頭類中成藥膏藥類供試樣品5的質(zhì)譜指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I步驟(I):供試樣品的制備取風(fēng)濕安泰片一粒，本品配方為生川烏、生草烏、馬錢子(制)、羌活、烏梢蛇、紅花、骨碎補(bǔ)(制)、烏梅、金銀花、細(xì)辛、紅參、鹿茸、黃柏、沒藥、廣地龍、地楓皮、老貫草、五加皮、續(xù)斷、麻黃、甘草、槲寄生、淫羊藿、牛膝、桂枝；小心除去糖衣，露出棕褐色藥物部分，得到供試樣品I ;步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜取步驟(I)中制備的供試樣品I做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為3kV，格柵電壓為+250V，工作氣體為高純氮?dú)?，調(diào)節(jié)氣體壓力O. 5kPa，氣體溫度為350°C;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度300°C，毛細(xì)管電壓50V，透鏡電壓150V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa。
圖I是一種烏頭類中成藥糖衣片類供試樣品I的質(zhì)譜指紋圖譜。圖中，m/z438，m/z454,m/z 556,m/z 574,m/z 590,m/z 604分別代表尼奧靈，附子靈，次烏頭堿碎片[M-60]+,苯甲酰次烏頭原堿，苯甲酰中烏頭原堿，苯甲酰烏頭原堿；可以發(fā)現(xiàn)多為低毒性的醇胺型或單酯型烏頭類生物堿，毒性成分雙酯型生物堿含量較低，種類較少。該圖說(shuō)明了本藥物中生川烏和生草烏用量較少，基本上觀察不到雙酯型烏頭堿，安全性較高。實(shí)施例2步驟(I):供試樣品的制備取附子理中丸一粒，本品配方為制附子、黨參、炒白術(shù)、干姜、甘草、蜂蜜；切成小塊，直接用鑷子夾取除去糖衣的藥片，得到供試樣品2 ；步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜
取步驟(I)中制備的供試樣品2做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為6kV，格柵電壓為+250V，工作氣體為高純氦氣，調(diào)節(jié)氣體壓力O. 8kPa，氣體溫度為150°C ;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度200°C，毛細(xì)管電壓35V，透鏡電壓100V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa，在m/z 300 1000掃描范圍內(nèi)存在m/z 408、m/z 424、m/z 438、m/z 454、m/z 540、m/z 556、m/z 572、m/z 574、m/z 586、m/z590、m/z 604、m/z 616、m/z 632離子?？梢园l(fā)現(xiàn)多為低毒性的醇胺型或單酯型烏頭類生物堿，雙酯型生物堿含量較低，安全性較高。實(shí)施例3步驟(I):供試樣品的制備取麝香風(fēng)濕膠囊一粒，本品配方為制川烏、全蝎、地龍(酒洗)、黑豆(炒)、蜂房(酒洗)、人工麝香、烏梢蛇(去頭酒浸)；取膠囊內(nèi)容物置于I. 5mL離心管中，加入I. 5mL體積比為I: I的甲醇和水，簡(jiǎn)單震動(dòng)lmin，然后置于高速離心機(jī)中以10000轉(zhuǎn)/分鐘至14000轉(zhuǎn)/分鐘高速離心l_5min,得到到供試樣品3 ；步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜取步驟(I)中制備的供試樣品3做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為3kV，格柵電壓為+400V，工作氣體為高純氬氣，調(diào)節(jié)氣體壓力O. lkPa，氣體溫度為500°C;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度150°C，毛細(xì)管電壓30V，透鏡電壓150V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa。圖2是一種烏頭類中成藥膠囊類供試樣品3的質(zhì)譜指紋圖譜。圖中，m/z 438，m/z 454, m/z 486, m/z 500, m/z 556, m/z 574, m/z 590, m/z 632 分別代表尼奧靈，附子靈，中烏頭胺，烏頭原堿，次烏頭堿碎片[M-60]+，苯甲酰次烏頭原堿，苯甲酰新烏頭堿，中烏頭堿。該圖說(shuō)明了本藥物中制川烏用量較少，或?yàn)槌浞峙谥频闹拼?，有毒成分雙酯型烏頭堿相對(duì)含量較低，安全性較高。實(shí)施例4步驟(I):供試樣品的制備跌打扭傷靈酊，其配方為破天菜、吹風(fēng)散、五味藤、桂枝、兩面針、生草烏、了歌王、九龍川、大風(fēng)艾、薄荷油、冰片、樟腦；得到供試樣品4 ；步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜取步驟(I)中制備的供試樣品4做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為4kV，格柵電壓為+350V，工作氣體為高純氮?dú)?，調(diào)節(jié)氣體壓力O. 6kPa，氣體溫度為300°C;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度200°C，毛細(xì)管電壓10V，透鏡電壓110V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa。圖3是一種烏頭類中成藥液體類供試樣品4的質(zhì)譜指紋圖譜。圖中，m/z 438，m/z 454，m/z 556，m/z 572，m/z 586，m/z 590，m/z 604，m/z 616，m/z 632，m/z 646 分別代表，尼奧靈，附子靈，次烏頭堿碎片[M-60]+，中烏頭堿碎片[M-60]+，烏頭堿碎片[M-60]+，苯甲酰中烏頭原堿，苯甲酰次烏頭原堿，次烏頭堿，新烏頭堿，烏頭堿。該圖說(shuō)明了本品生草烏用量較大，多種雙酯型生物堿也可觀察到，并且相對(duì)含量較高，但是跌打扭傷靈酊為外用藥物，安全性高，但禁止內(nèi)服和應(yīng)避免傷口使用。實(shí)施例5步驟(I):供試樣品的制備取骨增生鎮(zhèn)痛膏一張，其配方為紅花、骨碎補(bǔ)、川芎、豬牙皂、當(dāng)歸尾、生川烏、細(xì)辛、生草烏、羌活、白芥子、獨(dú)活、生天南星、桅子、生半夏、干姜、桉油、姜黃、樟腦、雄黃；將膏藥剪成合適的小片，揭開膏藥露出藥物部分，直接用鑷子夾取將藥物部分露出，不經(jīng)過(guò)其他·處理，得到到供試樣品5;步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜取步驟(I)中制備的供試樣品5做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為6kV，格柵電壓為+250V，工作氣體為高純氬氣，調(diào)節(jié)氣體壓力O. 5kPa，氣體溫度為400°C ;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度200°C，毛細(xì)管電壓25V，透鏡電壓50V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa。圖4是一種烏頭類中成藥膏藥類供試樣品5的質(zhì)譜指紋圖譜。圖中，m/z 438，m/z 454,m/z 556,m/z 572,m/z 586,m/z 590,m/z 604分別代表尼奧靈，附子靈，次烏頭喊碎片[M-60]+，中烏頭堿碎片[M-60]+，烏頭堿碎片[M-60]+，苯甲酰中烏頭原堿，苯甲酰烏頭原堿?？梢园l(fā)現(xiàn)多為低毒性的醇胺型或單酯型烏頭類生物堿，沒有觀察到雙酯型生物堿。該圖說(shuō)明了本膏藥中生川烏用量較少，基本上觀察不到有毒成分雙酯型烏頭堿，安全性較高。
權(quán)利要求
1.一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法的步驟和條件如下 步驟(I):供試樣品的制備，包括以下步驟①至⑤中的任意一個(gè)步驟，所述步驟①至⑤分別為 步驟①烏頭類中成藥糖衣片類樣品的制備 取烏頭類中成藥糖衣片，去除外層糖衣； 步驟②烏頭類中成藥膠囊類樣品的制備 取烏頭類中成藥膠囊內(nèi)容物，加入O. 5-1. 5mL溶劑，震動(dòng)，離心， 離心轉(zhuǎn)數(shù)為10000轉(zhuǎn)/分鐘至14000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為l-5min ;所 述的溶劑為乙腈、甲醇、水或體積比為1:1的甲醇和水； 步驟③烏頭類中成藥丸類樣品的制備 取烏頭類中成藥藥丸，切成小塊； 步驟④烏頭類中成藥液體類樣品的制備 取液體烏頭類中成藥； 步驟⑤烏頭類中成藥膏藥類樣品的制備 取烏頭類中成藥藥膏藥的藥物部分；得到供試樣品； 步驟(2):供試樣品的質(zhì)譜指紋圖譜 取步驟(I)中制備的供試樣品做質(zhì)譜分析；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下 正離子電離方式，設(shè)定離子源的放電針電壓為3-6kV，格柵電壓為+250-+400V，調(diào)節(jié)工作氣體壓力O. 1-0. 8kPa，氣體溫度為150-500°C ;在正離子模式下，設(shè)定毛細(xì)管溫度150-300°C，毛細(xì)管電壓10-50V，透鏡電壓50-150V，掃描范圍m/z質(zhì)荷比為300 lOOODa，在 m/z300 1000 掃描范圍內(nèi)，存在 m/z 330、m/z 358、m/z 408、m/z 454、m/z 556、m/z572>m/z 586、m/z 590、m/z 604、m/z 616 離子。
2.如權(quán)利要求I所述的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(2)中的工作氣體為高純氮?dú)?、高純氦氣或高純氬氣?br> 3.如權(quán)利要求I所述的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(2)中的格柵電壓為+250 +350V。
4.如權(quán)利要求I所述的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(2)中的氣體壓力為O. 5^0. 8kPa。
5.如權(quán)利要求I所述的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(2)中的氣體溫度為350^500 0C ο
全文摘要
本發(fā)明提供了一種烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法。解決現(xiàn)有中藥質(zhì)量檢測(cè)方法無(wú)法滿足臨床醫(yī)學(xué)對(duì)中藥烏頭飲片質(zhì)量檢測(cè)要求的問(wèn)題。該烏頭類中成藥的原位質(zhì)量檢測(cè)方法，首先采用不同的方法對(duì)不同藥物劑型的樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單的前處理，對(duì)處理好的樣品進(jìn)行質(zhì)譜分析得到指紋圖譜，根據(jù)得到的質(zhì)譜指紋圖譜中的特征指紋峰及其相對(duì)強(qiáng)度，對(duì)烏頭類中成藥的質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，實(shí)現(xiàn)了烏頭類中成藥的原位快速鑒別，并且該質(zhì)量檢測(cè)方法準(zhǔn)確、快捷、方便、有效。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102798687SQ20121027712
公開日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2012年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月6日
發(fā)明者宋鳳瑞, 朱洪彬, 劉舒, 鄭重, 劉志強(qiáng), 劉淑瑩 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所