專利名稱：一種鑒別藥用植物中活性成分組的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥用植物的鑒別領(lǐng)域，具體地，涉及一種鑒別藥用植物中活性成分組的方法。
背景技術(shù)：
指紋圖譜技術(shù)是借鑒法醫(yī)學(xué)“指紋”的概念，針對(duì)天然產(chǎn)物中活性成分的多樣化與復(fù)雜性而提出的，試圖能夠一一說明這些活性成分而對(duì)其深入研究、科學(xué)評(píng)價(jià)或有效控制其質(zhì)量的一種重要技術(shù)。指紋圖譜是利用現(xiàn)代信息采集技術(shù)和一定的定性、定量分析手段得到的能夠顯現(xiàn)天然產(chǎn)物特性的圖像、圖形、光譜及其數(shù)據(jù)等[周玉新，中藥指紋圖譜研究技術(shù)[M].北京，化學(xué)工業(yè)出版社.2002]，目前國際上已公識(shí)。
指紋圖譜主要包括生物指紋圖譜和化學(xué)指紋圖譜兩大類[羅國安等，中藥指紋圖譜的分類和發(fā)展，中國新藥雜志2002，11(1) :46-51]。生物指紋圖譜包括基因組學(xué)指紋圖譜、蛋白質(zhì)組學(xué)指紋圖譜；化學(xué)指紋圖譜根據(jù)所采用的化學(xué)或物理分析手段不同，主要包括色譜法和譜學(xué)法兩大類。色譜法包括薄層色譜(thin layer chromatography, TLC);氣相色譜(gas chromatography, GC);高效液相色譜(liquid chromatography, HPLC);高效毛細(xì)管電泳法(capillary chromatography, HPCE),主要特點(diǎn)是以分離技術(shù)為基礎(chǔ)。譜學(xué)法包括紫外光譜(UV);紅外光譜(IR);近紅外光譜(NIR) ；X-光衍射(XRD);質(zhì)譜(MS)與核磁共振(NMR)等，主要特點(diǎn)是以化合物分子結(jié)構(gòu)鑒定為基礎(chǔ)。指紋圖譜出現(xiàn)后，雖然發(fā)展很快，但是，用單一手段完成的化學(xué)指紋圖譜，面對(duì)活性成分復(fù)雜的天然產(chǎn)物，既要解決這些活性成分是什么，又要解決活性成分之間的比例及總量，存在著嚴(yán)重的局限性，因此，限制了化學(xué)指紋圖譜的深度發(fā)展。IGD核磁共振碳譜指紋圖譜技術(shù)，也叫反門控去偶核磁共振碳譜(IGD13C NMR)偶聯(lián)(coupling)指紋圖譜技術(shù)是在我們研究多年的核磁共振氫譜(1H NMR)指紋圖譜技術(shù)[趙天增，等.1HNMR指紋法鑒定植物中藥，中草藥2000，31 (11) =868-870]的基礎(chǔ)上提出的IGD核磁共振碳譜指紋圖譜偶聯(lián)其他手段提供的信息而形成的一種新的非單一手段綜合指紋圖譜技術(shù)。趙天增等在國內(nèi)外較早提出并推廣應(yīng)用了天然產(chǎn)物核磁共振氫譜(1H NMR)指紋圖譜技術(shù)，但由于不同磁場(chǎng)強(qiáng)度的儀器得到的同一樣品的核磁共振氫譜的外貌差別很大，加之核磁共振氫譜譜峰之間重疊厲害，嚴(yán)重制約了核磁共振氫譜指紋圖譜技術(shù)的發(fā)展。對(duì)于核磁共振碳譜而言，不存在上述氫譜的兩個(gè)局限性，孫慶雷等[CN200510044396. 0]在國內(nèi)外較早提出并應(yīng)用了中藥常規(guī)核磁共振碳譜(13C NMR)指紋圖譜技術(shù)。但由于常規(guī)碳譜譜峰強(qiáng)度與對(duì)應(yīng)碳數(shù)目不成比例，造成常規(guī)核磁共振碳譜不具有定量性；為此，IGD (一種碳譜譜峰強(qiáng)度與對(duì)應(yīng)碳數(shù)目成比例的技術(shù))核磁共振碳譜指紋圖譜技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，其各碳峰峰強(qiáng)與對(duì)應(yīng)碳數(shù)目成比例。也就是說，目前現(xiàn)有技術(shù)解決鑒別植物品種和評(píng)價(jià)植物源產(chǎn)品質(zhì)量的定性和定量分析方面存在著很大的局限性，但是市場(chǎng)和民生迫切需要這種方法。眾所周知，中藥是歷史悠久的藥物，現(xiàn)代中藥多為植物提取物加工而成。中藥材大多受到采摘地域和采摘時(shí)間的限制，人工培育的中藥材的效果大多不及天然中藥材的效果。特別需要一種方法能夠鑒別植物品種及其提取物中的各種活性成分，并且將其定量，然后選擇出最好的提取物成分或其組合物，以便充分發(fā)揮其效果。另外，中藥走出國門的障礙之一是沒有組成成分及其定量標(biāo)識(shí)，如果能夠解決這個(gè)問題，完全有理由相信，中藥可給人類帶來更大的福音。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種鑒別藥用植物中活性成分組的方法為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種鑒別藥用植物中活性成分組的方法，包括以下步驟I)對(duì)藥用植物進(jìn)行提取，得到含有活性成分組的藥用植物特征提取物；2)對(duì)所述特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，根據(jù)指紋圖譜得到特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式(IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè))測(cè)定出所述各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度；3)通過定量分析手段得到所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量；4)利用所述特征峰峰強(qiáng)度(各活性成分特征峰峰強(qiáng)度及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度)的比值和所述絕對(duì)含量，計(jì)算出各活性成分的含量及該類活性成分的總含量，即活性成分組的含量。其中，采用具有獲得清晰IGD核磁共振碳譜指紋圖譜的提取工藝作為所述藥用植物的提取方式。本發(fā)明所述方法，步驟I)中特征提取物的提取方法和制備方法，都是采用常規(guī)的方法先進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并記錄實(shí)驗(yàn)過程(不同的提取物提取和制備方法不同)，然后利用IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)方法檢測(cè)得到的提取物，從圖譜的清晰程度和是否具有代表性的活性成分組來確定都是哪些提取物是特征提取物，從而篩選出最佳的提取方法和制備方法。其中，步驟2)中，根據(jù)所述特征提取物的結(jié)構(gòu)特性是從IGD核磁共振碳譜指紋圖譜中選擇碳峰作為各活性成分特征峰。進(jìn)一步地，所述碳峰為化學(xué)位移差別較大的活性成分組中各活性成分的碳峰。更進(jìn)一步地，所述化學(xué)位移差別較大指峰和峰之間的化學(xué)位移差別> 0. 01。其中，步驟2)中所述峰強(qiáng)度采用峰高法、面積積分法或重量法計(jì)算。其中，步驟3)中所述定量分析手段為高效液相(HPLC)、氣相色譜(GC)、薄層色譜法(TLC)或稱量法。其中，步驟2)和步驟3)中所述標(biāo)準(zhǔn)參照品為內(nèi)標(biāo)物或外標(biāo)物。其中，步驟3)中所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量是指用定量分析手段測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)參照品的質(zhì)量百分含量。

其中，步驟4)中，計(jì)算各活性成分的含量的偶聯(lián)公式為
權(quán)利要求
1.一種鑒別藥用植物中活性成分組的方法，包括以下步驟 1)對(duì)藥用植物進(jìn)行提取，得到含有活性成分組的藥用植物特征提取物； 2)對(duì)所述特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，根據(jù)指紋圖譜得到特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式測(cè)定出所述各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度； 3)通過定量分析手段得到所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量； 4)利用所述各活性成分特征峰峰強(qiáng)度及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度的比值和所述絕對(duì)含量，計(jì)算出各活性成分的含量及活性成分組的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，采用具有獲得清晰IGD核磁共振碳譜指紋圖譜的提取工藝作為所述藥用植物的提取方式。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟2)中，根據(jù)所述特征提取物的結(jié)構(gòu)特性是從IGD核磁共振碳譜指紋圖譜中選擇碳峰作為各活性成分特征峰。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述碳峰為化學(xué)位移差別較大的活性成分組中各活性成分的碳峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求r4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2)中所述峰強(qiáng)度采用峰高法、面積積分法或重量法計(jì)算。
6.根據(jù)權(quán)利要求r4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述定量分析手段為高效液相、氣相色譜、薄層色譜法或稱量法。
7.根據(jù)權(quán)利要求廣4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2)和步驟3)中所述標(biāo)準(zhǔn)參照品為內(nèi)標(biāo)物或外標(biāo)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量是指用定量分析手段測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)參照品的質(zhì)量百分含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求rs任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟4)中，計(jì)算各活性成分的含量的偶聯(lián)公式為
10.根據(jù)權(quán)利要求I、任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述活性成分組為單味藥用植物中的活性成分組或藥用植物衍生品中的活性成分組。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種鑒別藥用植物中活性成分組的方法。該方法包括對(duì)藥用植物進(jìn)行提取，得到含有活性成分組的藥用植物特征提取物；對(duì)所述特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測(cè)，根據(jù)指紋圖譜得到特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式測(cè)定出所述各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度；通過定量分析手段得到所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對(duì)含量；利用所述各活性成分特征峰峰強(qiáng)度及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度的比值和所述絕對(duì)含量，通過偶聯(lián)公式計(jì)算出各活性成分的含量及活性成分組的含量。本發(fā)明能準(zhǔn)確地反映藥用植物中含有的活性成分以及它們之間的比例及總量，達(dá)到準(zhǔn)確地對(duì)藥用植物品種鑒別和藥用植物源產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)的目的。
文檔編號(hào)G01N24/08GK102749348SQ20121020148
公開日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2012年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月18日
發(fā)明者張海艷, 范毅, 董建軍, 趙天增, 郭唯 申請(qǐng)人:河南省生物技術(shù)開發(fā)中心, 河南省科高植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術(shù)有限公司