專利名稱：一種參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法
技術領域：
本發(fā)明涉及參芎葡萄糖注射液，尤指參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法。
背景技術：
參芎葡萄糖注射液具有抗血小板凝集，擴張動脈，降低血液粘度，改善微循環(huán)，改善心肌供血供氧等作用，是臨床常用藥。參芎葡萄糖注射液收錄于國家藥品標準化學藥品地標升國標第12冊，原質量標準熱原檢查方法為家兔法，而家兔法檢驗結果的準確性與一致性取決于實驗動物狀況，故對飼養(yǎng)家兔的飼養(yǎng)環(huán)境、檢測的條件及操作人員都有嚴格的要求，操作繁瑣費時，又不能用于生產過程中的質量監(jiān)控。

發(fā)明內容
本發(fā)明所解決的技術問題在于克服了家兔法檢測方法中的不足之處，提供一種參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法。該方法快速、靈敏，能在保證檢測準確的同時，減少檢驗成本、提高檢驗效率、方便生產過程監(jiān)控及檢驗工作的開展。
本發(fā)明所解決的技術問題可以通過以下技術方案來實現(xiàn)一種參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法，包括如下步驟(I)參芎葡萄糖注射液細菌內毒素限值(L)的確定步驟；(2)鱟試劑靈敏度復核步驟；(3)干擾試驗預試驗步驟，確定參芎葡萄糖注射液最小不干擾稀釋倍數(shù)；(4)正式干擾試驗步驟；(5)供試品細菌內毒素檢測步驟。在所述步驟(I)中，參芎葡萄糖注射液細菌內毒素限值(L)的確定考慮聯(lián)合用藥， 確定限值為I. OEU · mL—1在所述步驟(3)中，干擾試驗預試驗中參芎葡萄糖注射液對應的最大有效稀釋倍數(shù)為2 32倍。本發(fā)明依據(jù)現(xiàn)參照中國藥典2010年版二部附錄細菌內毒素檢查法，對參芎葡萄糖注射液應用鱟試劑進行細菌內毒素檢查的可行性做了研究。本發(fā)明的參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查法代替家兔熱原檢測方法，具有快速、靈敏的優(yōu)點，能在保證檢測準確的同時，減少檢驗成本、提高檢驗效率、方便生產過程監(jiān)控及檢驗工作的開展。下面通過具體實施方式
進一步說明本發(fā)明。
具體實施例方式I、實驗材料及儀器鱟試劑(TAL):湛江博康海洋生物有限公司，規(guī)格0. lmL，批號1012020，靈敏度0. 25EU · πιΓ1 ;湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格0. ImL,批號1101181，靈敏度0.25EU · mL'細菌內毒素工作標準品(WSE):中國藥品生物制品檢定所，效價120EU/支，批號 150601 — 201072。細菌內毒素檢查用水(BET):中國藥品生物制品檢定所，規(guī)格10mL，批號2008 —04。參芎葡萄糖注射液貴州景峰注射劑有限公司，規(guī)格lOOmL，批號1、2、3。儀器電熱干燥箱、ET - 96細菌內毒素凝膠法測定儀、旋渦混合器、微量移液器、 無熱原吸頭、試管、試管架、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、砂輪。所用玻璃器皿均以250°C干烤I小時以上。2、方法和結果2. I細菌內毒素限值(L)的確定
·
根據(jù)公式L = K/M，考慮到可能聯(lián)合用藥，最終確定限值為I. OEU · mL'2. 2鱟試劑靈敏度復核按照中國藥典2010年版附錄細菌內毒素檢查法規(guī)定進行鱟試劑的標示靈敏度復核，2批鱟試劑經檢查Ac與λ —致，結果均符合規(guī)定(見表I)。表I鱟試劑靈敏度復核結果
批U-標示靈敏度，入_內毒素濃度(EU/ml)_ 靈敏度，入c
(Ε /πι1)0.5 0.25 O. 125 0.0625 P/(性 (EU/ml)---
10120200.25++++ ++++ ————--0.25
1101181O. 25++++ ++++ --------———0.252. 3干擾試驗預試驗2. 3. I參芎葡萄糖注射液干擾試驗稀釋倍數(shù)的確定根據(jù)計算公式MVD=cL/X，其中L為參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素限值
1.OEU -πιΓ1, λ為鱟試劑標示靈敏度，目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在O. 5 O. 03EU -πιΓ1 之間，則參芎葡萄糖注射液對應的最大有效稀釋倍數(shù)分別為2倍、6倍、12倍、32倍。2. 3. 2實驗操作將參芎葡萄糖注射液(批號I)用BET水稀釋為原液、2倍、6倍、12倍32倍的溶液，將此系列溶液記為NPC。另制備同樣系列濃度的供試液，并使每一濃度的供試液中均含有2λ (O. 5EU / mL)濃度的細菌內毒素，記此系列溶液為PPC。分別取兩個廠家靈敏度為 O. 25EU / mL的鱟試劑，與上述NPC和PPC進行反應，每一濃度重復2管，并設陽性對照記為 PC和陰性對照記為NC，混勻后，置內毒素凝膠法測定儀60min，結果見表2。表2干擾預試驗結果
權利要求
1.一種參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法，其特征在于，包括如下步驟(1)參芎葡萄糖注射液細菌內毒素限值(L)的確定步驟；(2)鱟試劑靈敏度復核步驟；(3)干擾試驗預試驗步驟，確定參芎葡萄糖注射液最小不干擾稀釋倍數(shù)；(4)正式干擾試驗步驟；(5)供試品細菌內毒素檢測步驟。
2.如權利要求I所述的參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法，其特征在于，在所述步驟(I)中，參芎葡萄糖注射液細菌內毒素限值(L)的確定考慮聯(lián)合用藥，確定限值為 I. OEU · mL'
3.如權利要求I所述的參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法，其特征在于，在所述步驟(3 )中，干擾試驗預試驗中參芎葡萄糖注射液對應的最大有效稀釋倍數(shù)為2 32倍。全文摘要
本發(fā)明公開的一種參芎葡萄糖注射液的細菌內毒素檢查方法，包括如下步驟(1)參芎葡萄糖注射液細菌內毒素限值(L)的確定步驟；(2)鱟試劑靈敏度復核步驟；(3)干擾試驗預試驗步驟，確定參芎葡萄糖注射液最小不干擾稀釋倍數(shù)；(4)正式干擾試驗步驟；(5)供試品細菌內毒素檢測步驟。利用本發(fā)明的方法檢測參芎葡萄糖注射液細菌內毒素檢查，快速、靈敏、大大縮短了檢測時間，降低檢測成本，特別適合實驗室進行的檢測工作。
文檔編號G01N33/15GK102721795SQ201210180839
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月4日 優(yōu)先權日2012年6月4日
發(fā)明者葉湘武, 周光羽, 左紅雨, 畢昌瓊 申請人:貴州景峰注射劑有限公司