專利名稱：試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品安全檢測領(lǐng)域，特別涉及基于試劑比色與光譜技術(shù)相結(jié)合的一種試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法。
背景技術(shù)：
在世界人口不斷增長的今天，糧食需求越來越趨于緊張。估計到2020年，世界糧食需求量將由2000年的19. 04億噸增長至24. 87億噸，但耕地卻有減無增。同時，當(dāng)前在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中遭受病蟲草等危害的情況年年總有發(fā)生。據(jù)統(tǒng)計，每年全世界因受病蟲草害所減少的糧食產(chǎn)量，約占糧食總量的30%左右。農(nóng)藥在糧食增產(chǎn)方面發(fā)揮著極為重要的作用，可以說如果停止使用農(nóng)藥等化學(xué)品，全世界就會有上億人面臨著饑餓的威脅，今后在相當(dāng)長的時期內(nèi)，農(nóng)藥將是實現(xiàn)糧食產(chǎn)量增加的重要措施之一。世界農(nóng)藥產(chǎn)量自1985年以后維持在200-250萬噸。我國自1990年開始，農(nóng)藥產(chǎn)量位于世界第二位，并且由1991年的25. 3萬噸增加到1999年的42. 6萬噸。我國的農(nóng)藥生產(chǎn)使用經(jīng)歷了 20世紀(jì)50年代的砷、鉛、汞制劑已于上世紀(jì)70年代起就停止使用；自80年代有機氯農(nóng)藥由于化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，殘留時間長，脂溶性強，且利用率較低，給土壤和農(nóng)業(yè)環(huán)境造成嚴(yán)重污染等原因被停用以后，各類取代農(nóng)藥便得到快速發(fā)展，其中最主要的就是有機磷農(nóng)藥。近年來，有機磷農(nóng)藥的檢測方法得到迅速發(fā)展。世界各國的專家都加速開展快速、靈敏、準(zhǔn)確、簡便的檢測方法的研究。根據(jù)有機磷農(nóng)藥的化學(xué)特性和毒理學(xué)性質(zhì)，檢測有機磷農(nóng)藥的分析方法主要有波譜法、色譜法和酶抑制法。另外，還有經(jīng)典的化學(xué)比色法、薄層分析法、免疫法等。近年來，生物傳感器技術(shù)因具有靈敏、快速、選擇性高、一般不須對樣品進(jìn)行預(yù)處理、適合現(xiàn)場和在線檢測等優(yōu)點，成為研究的熱點。此外，人們還開展了生物芯片技術(shù)的研究。(I)波譜法該方法是根據(jù)有機磷農(nóng)藥中某些官能團(tuán)或水解、還原產(chǎn)物與特殊的顯色劑在一定的條件下，發(fā)生氧化、磺酸化、酯化、絡(luò)合等化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生特定波長的顏色反應(yīng)來進(jìn)行定性或定量(限量)測定。早期所用的只是一種微量化學(xué)試驗法。(2)色譜法色譜法是目前有機磷農(nóng)藥的最主要檢測方法，根據(jù)檢測過程中的物理化學(xué)特性又可分為薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法三類。薄層色譜法是一種較為成熟的、應(yīng)用也較廣泛的微量快速檢測方法，先用適宜的溶劑提取有機磷農(nóng)藥，經(jīng)純化濃縮后，在薄層硅膠板上分離展開，顯色后再與標(biāo)準(zhǔn)有機磷農(nóng)藥比較其比移值(Rf)進(jìn)行定性測定，也可用薄層掃描儀進(jìn)行定量測定。該方法的特點是經(jīng)濟(jì)、簡便、快速，但其精確度不是太高，檢出限通常為O. 1-0. Olugo氣相色譜法是進(jìn)入20世紀(jì)50年代以后，在柱層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的儀器分析方法，已成為目前典型的、應(yīng)用最廣的儀器分析方法。該方法是利用經(jīng)提取、純化、濃縮后的有機磷農(nóng)藥注入氣相色譜柱，程序升溫氣化后，不同的有機磷農(nóng)藥在固定相中分離，經(jīng)不同的檢測器檢測掃描繪出氣相色譜圖，通過保留時間來定性，通過峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照來定量。該方法的檢測精度非常高，可以檢出lng高效液相色譜法是在液相柱層析的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜理論并加以改進(jìn)而發(fā)展起來的色譜分析方法。與氣相色譜法相比，不僅分離效能好，靈敏度高，檢測速度快，而且應(yīng)用面廣。但缺點是價格昂貴，難以大面積推廣。(3)酶抑制法酶抑制法是利用有機磷農(nóng)藥的毒理特性建立的一種快速檢測方法。由于有機磷農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶(Acctylcholinesterase,簡稱AchE)的活性,在無有機磷農(nóng)藥存在時，乙酰膽堿(Acetylcholine，簡稱Ach)在AcHE作用下可以產(chǎn)生膽堿和乙酸；當(dāng)有有機磷農(nóng)藥存在時，Ache的活性受到抑制，作為其分解產(chǎn)物的乙酸也相應(yīng)減少。利用上述反應(yīng)特性，根據(jù)指示劑顏色或反應(yīng)液PH值的變化，就可以達(dá)到檢測有機磷農(nóng)藥的目的。(4)免疫分析免疫分析法是利用抗原和相應(yīng)抗體在體外也能特異性結(jié)合的原理發(fā)展起來的一類特異、靈敏、快速的檢測技術(shù)，由于其內(nèi)在的優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于包括農(nóng)藥殘留檢測在內(nèi)的諸多領(lǐng)域。(5)生物芯片技術(shù)生物芯片的概念源于計算機芯片，生物芯片技術(shù)是在一小片固相載體上儲存大量的生物信息(多至幾十萬個)，并與生物化學(xué)處理等技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展起來的一種新興技術(shù)。將抗有機磷抗體固定于生物芯片上，通過被標(biāo)記過的抗原(有機磷與其他大分子物質(zhì)的結(jié)合物)與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)達(dá)到對有機磷的檢測。毒死蜱(chlorpyrifos)，美國陶氏益農(nóng)公司開發(fā)的一種廣譜性殺蟲劑，在中國登記的商品名是樂斯本。原藥為白色或灰白色顆粒狀晶體(或塊狀固體)，熔點41. 5 43. 5度；對魚類及蜜蜂有毒，對煙草敏感。毒死蜱是目前全世界生產(chǎn)和銷售最大的殺蟲劑品種之一，也是世界衛(wèi)生組織許可的有機磷品種，現(xiàn)已經(jīng)在中國、美國、澳大利亞、日本等14個國家登記和注冊。該品種具有觸殺、胃毒和熏蒸三種作用方式，其殺蟲譜廣，毒性較低，對地上地下害蟲同樣高效，是防治糧食、果樹、蔬菜和其他經(jīng)濟(jì)作物的理想殺蟲劑，對地下害蟲的防治效果尤為突出。2006年4月4日，農(nóng)業(yè)部、發(fā)改委、工商總局、質(zhì)檢總局聯(lián)合發(fā)文(第632號)再次強調(diào)五個高毒有機磷品種(甲胺磷、乙基對硫磷、甲基對硫磷、久效磷、磷銨)全面禁止生產(chǎn)、銷售、使用的具體細(xì)節(jié)問題，進(jìn)一步加快了替代品種開發(fā)的力度。作為國家發(fā)改委推薦的高效、低毒、低殘留的有機磷品種之一的毒死蜱，與氟蟲腈、吡蟲啉、阿維菌素等被農(nóng)技推廣部門所認(rèn)可。隨著毒死蜱生產(chǎn)工藝中技術(shù)難度最大的中間體三氯吡啶醇鈉技術(shù)的突破，國內(nèi)原藥合成技術(shù)突飛猛進(jìn)，大多數(shù)生產(chǎn)廠家原藥含量已大于97%，制造成本大幅降低，主要依靠進(jìn)口印度原藥的局面徹底打破。毒死蜱也成為現(xiàn)在市場上使用最廣的有機磷農(nóng)藥之一。近年來，毒死蜱殘留帶來的食品安全隱患逐漸被人們重視起來。但是現(xiàn)在還沒有一種非常方便、直觀、準(zhǔn)確的有機磷類農(nóng)藥殘留的檢測方法，因此借用比色劑結(jié)合光譜檢測葉菜中有毒死蜱農(nóng)藥殘留的檢測技術(shù)恰恰擁有方便，直觀等特點，可以為進(jìn)一步設(shè)計便攜式農(nóng)藥檢測儀器提供基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對相關(guān)研究表明，葉菜類蔬菜在噴灑農(nóng)藥后，超過60wt%的有效成份都?xì)埩粼谌~子部分上，同時，葉子的接觸面較廣，適合進(jìn)行顯色反應(yīng)預(yù)處理；所以要檢測葉菜類蔬菜的毒死蜱的殘留量，葉子正好是最佳的檢測部位而提供一種試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法，其特征在于，所述毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法包括以下步驟 I)采用間苯二酚作試劑比色原料，找出與間苯二酚發(fā)生顯色反應(yīng)的特征吸收峰；由于物質(zhì)在近紅外區(qū)的化學(xué)組成性狀特征的信息量非常豐富，對毒死蜱的目標(biāo)特征吸收峰進(jìn)行篩選和驗證；2)根據(jù)步驟I)及相關(guān)食品安全指標(biāo)，建立不同品種葉菜中殘留農(nóng)藥毒死蜱的光譜信息的原始譜圖和毒死蜱含量標(biāo)準(zhǔn)檢測模型；3)采集待測葉菜樣品的近紅外光譜圖；4)提取步驟2)中不同葉菜品種的近紅外光譜原始譜圖與步驟3)中采集的待測葉菜樣品的近紅外光譜圖進(jìn)行吸收峰特征比較；5)如果檢測模型判斷樣品特征處于含有殘留的區(qū)間內(nèi)，則說明待測葉菜樣品中含有毒死蜱，同時根據(jù)特征變量的具體值，估計毒死蜱殘留的濃度；如果檢測模型判斷樣品特征處于不含殘留的區(qū)間內(nèi)，則說明被測葉菜樣品不含有毒死蜱。所述步驟I)的對特征吸收峰的篩選包括如下步驟a.采集毒死蜱的標(biāo)準(zhǔn)純制品的近紅外光譜譜圖；b.采集市售40wt%濃度的毒死蜱中各種添加成分的標(biāo)準(zhǔn)純制品的近紅外光譜譜圖；c.采集標(biāo)準(zhǔn)純間苯二酚制品的近紅外光譜圖；d.將a，b，c中得到的近紅外光譜圖進(jìn)行對比，篩選出目標(biāo)特征吸收峰的特征吸收峰。所述步驟I)的對目標(biāo)特征吸收峰進(jìn)行驗證采用以下步驟(I)大量采集含有不同濃度的毒死蜱農(nóng)藥殘留的葉菜類樣品，進(jìn)行顯色反應(yīng)預(yù)處理，再進(jìn)行近紅外光譜掃描，得到采集樣品的譜圖；(2)對采集的所有樣品按照國家標(biāo)準(zhǔn)對毒死蜱殘留進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，檢測結(jié)果作為參考標(biāo)準(zhǔn)；(3)用上述步驟d中篩選出的特征吸收峰，對照步驟⑴的所有采集樣品的譜圖，判斷毒死蜱的殘留狀況，將判斷結(jié)果與步驟(2)得到的參考標(biāo)準(zhǔn)作比對，驗證上述步驟d篩選出的特征吸收峰對含氯基團(tuán)與間苯二酚產(chǎn)生的顯色反應(yīng)是否具有特征性。(4)經(jīng)過篩選和驗證，含氯基團(tuán)與間苯二酚發(fā)生顯色反應(yīng)后變化的特征吸收峰在5200cm-l附近，根據(jù)儀器的分辨率以及圖像采取系統(tǒng)的精度，以5200cm-l為中心向兩邊延伸5cm-l，即以5195cm-l至5205cm-l之間出現(xiàn)的特征吸收峰為識別含氯基團(tuán)與間苯二酚產(chǎn)生顯色反應(yīng)的特征吸收峰值范圍。所述步驟2)的毒死蜱含量標(biāo)準(zhǔn)檢測模型的建立包含如下的步驟①對某一品種葉菜廣泛采集未經(jīng)毒死蜱等其它有機磷農(nóng)藥污染的樣品，并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對采集的樣品進(jìn)行檢測驗證，確保所有該品種葉菜樣品中不含有毒死蜱殘留。②對步驟①中的葉菜樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描，得到該品種葉菜樣品的近紅外光譜原始譜圖；③對樣品群人工噴灑不同濃度的毒死蜱農(nóng)藥，進(jìn)行標(biāo)注；④對噴灑不同濃度的毒死蜱的樣品進(jìn)行與步驟①中的葉菜樣品同等條件的顯色反應(yīng)預(yù)處理；
⑤采集④中所有樣品的近紅外譜圖；⑥對每一組樣品在5195cm_l至5205cm_l之間的吸光度進(jìn)行均值化處理,得到每一組樣品在特征區(qū)間的特征值；⑦根據(jù)⑥中得到的特征數(shù)據(jù)，用最小二乘法建立標(biāo)準(zhǔn)檢測模型。本發(fā)明的有益效果是使用本發(fā)明方法對常見葉菜的未知樣品進(jìn)行毒死蜱檢測，只需要對樣品進(jìn)行簡單的顯色反應(yīng)預(yù)處理后，測定樣品的近紅外光譜，得到樣品在特征區(qū)間的特征值，然后用其特征值匹配標(biāo)準(zhǔn)檢測模型，就可以判斷出毒死蜱殘留是否超標(biāo)以及高精度的估計值。全部分析過程只需要3-5分鐘其檢測靈敏度可以達(dá)到O. lmg/kg。


圖I為5界七％間苯二酚樣品在4000 8000cm_l的吸光度光譜圖。圖2為16mg/kg毒死蜱樣品在4000 8000cm_l的吸光度光譜圖。圖3 為含有不同濃度毒死蝶(16mg/kg、8mg/kg、2mg/kg、lmg/kg、0. 5mg/kg)體系的吸光度譜圖。圖4 為含有不同濃度毒死蝶(16mg/kg、8mg/kg、2mg/kg、lmg/kg、0. 5mg/kg)體系在5195cm-l至5205cm_l之間的吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實施例方式本發(fā)明提供一種試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法。經(jīng)相關(guān)研究表明，葉菜類蔬菜在噴灑農(nóng)藥后，超過農(nóng)藥60wt%的有效成份都?xì)埩粼谌~子部分上，同時，葉子的接觸面較廣，適合進(jìn)行顯色反應(yīng)預(yù)處理；所以要檢測葉菜類蔬菜的毒死蜱的殘留量，葉子正好是最佳的檢測部位。毒死蜱，英文名Chlopyrifos，化學(xué)名稱0，O-二乙基_0_ (3，5，6_三氯_2_吡啶基)硫代磷酸酯，分子式C9H11C13N03PS，分子量350. 5。毒死蜱是一種廣譜性殺蟲劑，具有較強的觸殺、胃毒及熏蒸功能，其作用機制為破壞害蟲的神經(jīng)系統(tǒng)，使昆蟲過度興奮，麻痹而死亡。毒死蜱作為有機磷農(nóng)藥，除了具有含磷基團(tuán)外，還具有含氯基團(tuán)。間苯二酹英文名稱m-dihydroxybenzene。分析式C6H602,分子量110.11。間苯二酚主要用于橡膠粘合劑、合成樹脂、染料、防腐劑、醫(yī)藥和分析試劑等方面。相關(guān)試劑比色的研究文獻(xiàn)表明，間苯二酚在弱堿的環(huán)境下，會與含氯基團(tuán)的有機磷農(nóng)藥發(fā)生紅色顯色反應(yīng)，在靜止?fàn)顟B(tài)下，30min充分反應(yīng)完成，在可見光譜區(qū)體現(xiàn)出一定的特征。但基于快速檢測方法的要求，加上間苯二酚本身在近紅外譜區(qū)內(nèi)有比較豐富的特征吸收峰，因此，通過對間苯二酚在近紅外譜區(qū)特征吸收峰的峰值變化，可以更快地達(dá)到檢測毒死蜱的目的。鑒于近紅外光區(qū)的吸收強度弱、信噪比低、光譜背景復(fù)雜的特點，必須盡可能地降低光譜中的干擾信息和無效信息，增加信噪比，把復(fù)雜、重疊的近紅外光譜中的有效信息提取出來，則要求有一批有代表性的盡可能包含所有復(fù)雜背景信息的樣品群體作為校正集，采集全波段的連續(xù)光譜；再從全譜中選擇某區(qū)段(或某些區(qū)段)的全部波長點組成光譜數(shù)據(jù)群體與樣品中某成份的化學(xué)值相對應(yīng)，建立起光譜數(shù)學(xué)模型。本發(fā)明毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法包括以下步驟I)采用間苯二酚作試劑比色原料，找出與間苯二酚發(fā)生顯色反應(yīng)的特征吸收峰；由于物質(zhì)在近紅外區(qū)的化學(xué)組成性狀特征的信息量非常豐富，對毒死蜱的目標(biāo)特征吸收峰進(jìn)行篩選和驗證；2)根據(jù)步驟I)及相關(guān)食品安全指標(biāo)，建立不同品種葉菜中殘留農(nóng)藥毒死蜱的光譜信息的原始譜圖和毒死蜱含量標(biāo)準(zhǔn)檢測模型；3)采集待測葉菜樣品的近紅外光譜圖；4)提取步驟2)中不同葉菜品種的近紅外光譜原始譜圖與步驟3)中采集的待測葉菜樣品的近紅外光譜圖進(jìn)行吸收峰特征比較；5)如果檢測模型判斷樣品特征處于含有殘留的區(qū)間(5195cm-l至5205cm-l)內(nèi)，則說明待測葉菜樣品中含有毒死蜱，同時根據(jù)特征變量的具體值，估計毒死蜱殘留的濃度；如果檢測模型判斷樣品特征處于不含殘留的區(qū)間內(nèi)，則說明被測葉菜樣品不含有毒死蜱。下面通過對無公害綠色油菜進(jìn)行的檢測的實例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。具體檢測步驟為將所有的玻璃器皿都經(jīng)過王水浸泡，雙蒸水清洗，晾干備用，配制試劑所用蒸餾水需要通過O. 45的濾膜過濾。(I)樣品制備將間苯二酹溶于IOOml蒸懼水中，配制成5wt%的間苯二酹溶液,并加入O. 5ml按體積比為蒸餾水氨水=I I的氨水溶液，使比色液處于弱堿性環(huán)境下。取6組不同濃度毒死蝶溶液各Iml,其中16mg/kg 2組,8mg/kg、2mg/kg、lmg/kg及O. 5mg/kg 各 I 組。將6組毒死蜱溶液均勻噴灑在6無公害綠色油菜上，在25°C晾干待用。(2)取6組各IOg噴灑有不同濃度毒死蜱溶液的油菜樣品，將其切碎并和甲醇混合并超聲攪拌60分鐘，取上清液，并用過濾紙過濾。提取和過濾兩次，過濾液用IOml甲醇漂洗，其混合液在真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器里被濃縮，溶液的體積被濃縮到O. 5ml之后達(dá)到干燥狀態(tài)，殘渣在蒸餾水中溶解，并定容到5ml。對6組樣品分別加入O. 5ml配制好的間苯二酚溶液，輕微震蕩后靜制3分鐘，并采集其近紅外光譜信息(如圖I所示)。掃描譜區(qū)為4000 12000cm-l，光譜采集間隔為2cm-l，掃描次數(shù)為32次(MPA將32次掃描結(jié)果的平均值作為一次進(jìn)樣掃描數(shù)據(jù)保存下來)。實驗采用空氣為參比在室溫下進(jìn)行光譜采集，樣品池光程為1_，每個樣品重復(fù)測量三次，取平均光譜作為分析用數(shù)據(jù)(如圖2-4所示)，對光譜數(shù)據(jù)采用Savitzky-Golay卷積平滑濾波、一階微分作預(yù)處理后，用相關(guān)系數(shù)法確定5200cm-l為特征波峰(3)分析結(jié)果如表I的樣品的加標(biāo)回收率(其中加標(biāo)回收率是指在空白的樣品無、公害油菜中加入定量的檢測物質(zhì)毒死蜱，然后用檢測量除以添加量。η是重復(fù)的次數(shù))所示。樣品在所測范圍內(nèi)，其吸光強度與毒死蜱濃藥的濃度成負(fù)相關(guān)關(guān)系，毒死蜱濃度越高，在該范圍內(nèi)，其峰值越低(其波峰趨勢仍是非常明顯)。因此可以以5200cm-l處的波峰作為判斷毒死蜱農(nóng)藥是否存在的依據(jù)，并可根據(jù)其強度作定量分析。表I樣品的加標(biāo)回收率
權(quán)利要求
1.一種試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法，其特征在于，所述毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法包括以下步驟 1)采用間苯二酚作試劑比色原料，找出與間苯二酚發(fā)生顯色反應(yīng)的特征吸收峰；由于物質(zhì)在近紅外區(qū)的化學(xué)組成性狀特征的信息量非常豐富，對毒死蜱的目標(biāo)特征吸收峰進(jìn)行篩選和驗證； 2)根據(jù)步驟I)及相關(guān)食品安全指標(biāo)，建立不同品種葉菜中殘留農(nóng)藥毒死蜱的光譜信息的原始譜圖和毒死蜱含量標(biāo)準(zhǔn)檢測模型； 3)采集待測葉菜樣品的近紅外光譜圖； 4)提取步驟2)中不同葉菜品種的近紅外光譜原始譜圖與步驟3)中采集的待測葉菜樣品的近紅外光譜圖進(jìn)行吸收峰特征比較； 5)如果檢測模型判斷樣品特征處于含有殘留的區(qū)間內(nèi)，則說明待測葉菜樣品中含有毒死蜱，同時根據(jù)特征變量的具體值，估計毒死蜱殘留的濃度；如果檢測模型判斷樣品特征處于不含殘留的區(qū)間內(nèi)，則說明被測葉菜樣品不含有毒死蜱。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法，其特征在于，所述步驟I)的對特征吸收峰的篩選包括如下步驟 a.采集毒死蜱的標(biāo)準(zhǔn)純制品的近紅外光譜譜圖； b.采集市售40wt%濃度的毒死蜱中各種添加成分的標(biāo)準(zhǔn)純制品的近紅外光譜譜圖； c.采集標(biāo)準(zhǔn)純間苯二酚制品的近紅外光譜圖； d.將a，b，c中得到的近紅外光譜圖進(jìn)行對比，篩選出目標(biāo)特征吸收峰的特征吸收峰。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法，其特征在于，所述步驟I)的對目標(biāo)特征吸收峰進(jìn)行驗證采用以下步驟 (1)大量采集含有不同濃度的毒死蜱農(nóng)藥殘留的葉菜類樣品，進(jìn)行顯色反應(yīng)預(yù)處理，再進(jìn)行近紅外光譜掃描，得到采集樣品的譜圖； (2)對采集的所有樣品按照國家標(biāo)準(zhǔn)對毒死蜱殘留進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，檢測結(jié)果作為參考標(biāo)準(zhǔn)； (3)用上述步驟d中篩選出的特征吸收峰，對照步驟(I)的所有采集樣品的譜圖，判斷毒死蜱的殘留狀況，將判斷結(jié)果與步驟(2)得到的參考標(biāo)準(zhǔn)作比對，驗證上述步驟d篩選出的特征吸收峰對含氯基團(tuán)與間苯二酚產(chǎn)生的顯色反應(yīng)是否具有特征性。
(4)經(jīng)過篩選和驗證，含氯基團(tuán)與間苯二酚發(fā)生顯色反應(yīng)后變化的特征吸收峰在5200cm-l附近，根據(jù)儀器的分辨率以及圖像采取系統(tǒng)的精度，以5200cm-l為中心向兩邊延伸5cm-l，即以5195cm-l至5205cm_l之間出現(xiàn)的特征吸收峰為識別含氯基團(tuán)與間苯二酚產(chǎn)生顯色反應(yīng)的特征吸收峰值范圍。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法，其特征在于，所述步驟2)的毒死蜱含量標(biāo)準(zhǔn)檢測模型的建立包含如下的步驟 ①對某一品種葉菜廣泛采集未經(jīng)毒死蜱等其它有機磷農(nóng)藥污染的樣品，并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對采集的樣品進(jìn)行檢測驗證，確保所有該品種葉菜樣品中不含有毒死蜱殘&3甶o ②對步驟①中的葉菜樣品進(jìn)行近紅外光譜掃描，得到該品種葉菜樣品的近紅外光譜原始譜圖；③對樣品群人工噴灑不同濃度的毒死蜱農(nóng)藥，進(jìn)行標(biāo)注； ④對噴灑不同濃度的毒死蜱的樣品進(jìn)行與步驟①中的葉菜樣品同等條件的顯色反應(yīng)預(yù)處理； ⑤采集④中所有樣品的近紅外譜圖； ⑥對每一組樣品在5195cm-l至5205cm-l之間的吸光度進(jìn)行均值化處理,得到每一組樣品在特征區(qū)間的特征值； ⑦根據(jù)⑥中得到的特征數(shù)據(jù)，用最小二乘法建立標(biāo)準(zhǔn)檢測模型。
全文摘要
本發(fā)明公開了屬于食品安全檢測的一種試劑比色與光譜檢測相結(jié)合的毒死蜱農(nóng)藥殘留速測方法。包括采用間苯二酚作試劑比色原料，找出與間苯二酚發(fā)生顯色反應(yīng)的特征吸收峰，建立不同品種葉菜中殘留農(nóng)藥毒死蜱的光譜信息的原始譜圖和毒死蜱含量標(biāo)準(zhǔn)檢測模型，采集待測葉菜樣品的近紅外光譜圖，將近紅外光譜圖進(jìn)行吸收峰特征比較，判斷待測葉菜樣品中含有毒死蜱，同時根據(jù)特征變量的具體值，估計毒死蜱殘留的濃度。本發(fā)明可以快速判斷出毒死蜱殘留是否超標(biāo)以及高精度的估計值。全部分析過程只需要3-5分鐘其檢測靈敏度可以達(dá)到0.1mg/kg。
文檔編號G01N21/35GK102636482SQ20121007319
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月19日
發(fā)明者夏錦聞, 孫明, 韓雪 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)