專(zhuān)利名稱(chēng)：一種檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法。
背景技術(shù)：
酚酸是植物典型的根系分泌物質(zhì)，也是植物最重要的化感物質(zhì)之一,其對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育和根系微生態(tài)具有重要的修飾限制作用。植物根系分泌物中一般包含5種酚酸對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸。大量研究表明，根系分泌物中酚酸類(lèi)物質(zhì)能抑制其他植物的生長(zhǎng)及根系活動(dòng)，造成一種克生現(xiàn)象，同時(shí)酚酸的積累可對(duì)作物的連作產(chǎn)生自毒作用從而造成連作障礙?？緹熓堑湫偷募蛇B作作物，烤煙連作會(huì)造成烤煙產(chǎn)質(zhì)量下降、病蟲(chóng)害加重、土壤環(huán)境惡化等不利影響。因此研究烤煙根系分泌物中化感物質(zhì)特別是酚酸類(lèi)物質(zhì)的種類(lèi)和含量，對(duì)深入研究烤煙連作障礙機(jī)理和生物防治具有重要意義。現(xiàn)有根系分泌物酚酸的檢測(cè)技術(shù)主要有高效液相色譜、氣相色譜、液-質(zhì)和氣-質(zhì)聯(lián)用等，其中高效液相色譜法具有不受試樣揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性限制，應(yīng)用范圍廣，可選擇流動(dòng)相較多等特點(diǎn)，較適宜于根系分泌物中有機(jī)酸的分析。采用反相色譜法分析根系分泌物酚酸已在水稻、大豆和番茄等作物上得到應(yīng)用，但分析手段存在差異，主要原因是作物種類(lèi)不同而導(dǎo)致根系分泌物提取方法和檢測(cè)手段存在差異。目前，對(duì)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的檢測(cè)尚未見(jiàn)有成功的報(bào)道。因此，制定一種烤煙根系分泌物中酚酸類(lèi)物質(zhì)的分析方法對(duì)較好開(kāi)展烤煙根系研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。一種檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法，包括以下步驟I、波長(zhǎng)選擇選擇280nm作為對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸的檢測(cè)波長(zhǎng)；2、色譜選擇采用甲醇和乙酸水溶液體系，甲醇濃度為體積百分?jǐn)?shù)30%，乙酸濃度為體積百分?jǐn)?shù)O. 2%，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為I. OmL/mim，檢測(cè)時(shí)間30min ；3、標(biāo)準(zhǔn)工作液制作分別稱(chēng)取對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各 O. lOOOg，用5mL甲醇溶解并用超純水定容至IOOOmL,制成質(zhì)量濃度為100 μ g/mL的酚酸混合儲(chǔ)備液，將混合儲(chǔ)備液分別稀釋5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作為標(biāo)準(zhǔn)工作液；4、對(duì)各酚酸標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度與其相應(yīng)峰面積進(jìn)行回歸，并計(jì)算線性回歸方程、線性范圍、回收率、標(biāo)準(zhǔn)偏差、檢測(cè)限和工作曲線；5、樣品前處理采用水培法收集根系分泌物,體積為500mL,用二氯甲燒IOOmL萃取3次，收集有機(jī)相并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，超純水溶解定容至2mL，過(guò)0. 45 μ m有機(jī)相濾膜，備用；6、樣品測(cè)定采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，以不同酚酸種類(lèi)保留時(shí)間定性，定量采用峰面積外標(biāo)法，得到烤煙根系分泌物中酚酸的種類(lèi)和含量。步驟(6)中所述的不同酚酸種類(lèi)保留時(shí)間具體為對(duì)羥基苯甲酸，10. 839min ;香草酸，12. 624min ;丁香酸，13. 688min ;香豆酸，24. 955min ;阿魏酸，28. 970min。同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)I、本發(fā)明填補(bǔ)了烤煙根系分泌物中酚酸物質(zhì)種類(lèi)和含量檢測(cè)空白。烤煙根系分泌物研究尚屬起步階段，目前并無(wú)與烤煙根系分泌物質(zhì)相關(guān)的檢測(cè)技術(shù)，本發(fā)明首創(chuàng)利用高效液相色譜法對(duì)烤煙根系分泌物中酚酸類(lèi)物質(zhì)的定性和定量檢測(cè)，為今后開(kāi)展烤煙根系分泌物研究提供了可靠保證。2、本發(fā)明可同時(shí)檢測(cè)5種酚酸，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。3、檢測(cè)成本較低，所需高效液相色譜儀和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等儀器均為實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)設(shè)備，無(wú)需配置專(zhuān)門(mén)儀器即可完成。4、操作方法簡(jiǎn)單易行，可由一人獨(dú)立完成且對(duì)操作人員無(wú)特殊技術(shù)要求。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。實(shí)施例I實(shí)施例中根系分泌物樣品均系烤煙根系分泌物。I、分別稱(chēng)取對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各O. lOOOg，用5mL甲醇溶解并用超純水定容至IOOOmL,制成質(zhì)量濃度為100 μ g/mL的酚酸混合儲(chǔ)備液，將混合儲(chǔ)備液分別稀釋5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作為標(biāo)準(zhǔn)工作液。2、對(duì)各種酚酸標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度與其相應(yīng)峰面積進(jìn)行回歸，回歸方程、線性范圍及檢出限見(jiàn)表I。表I各種酚酸的回歸分析和檢出限Table I Regression analysis and detection limit of the five phenolic acids
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法，包括以下步驟(1)波長(zhǎng)選擇選擇280nm作為對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸的檢測(cè)波長(zhǎng);(2)色譜選擇采用甲醇和乙酸水溶液體系，甲醇濃度為體積百分?jǐn)?shù)30%，乙酸濃度為體積百分?jǐn)?shù)O. 2%，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為I. OmL/mim，檢測(cè)時(shí)間30min ；(3)標(biāo)準(zhǔn)工作液制作分別稱(chēng)取對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各O.lOOOg，用5mL甲醇溶解并用超純水定容至IOOOmL,制成質(zhì)量濃度為100 μ g/mL的酚酸混合儲(chǔ)備液，將混合儲(chǔ)備液分別稀釋5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作為標(biāo)準(zhǔn)工作液；(4)對(duì)各酚酸標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度與其相應(yīng)峰面積進(jìn)行回歸，并計(jì)算線性回歸方程、線性范圍、回收率、標(biāo)準(zhǔn)偏差、檢測(cè)限和工作曲線；(5)樣品前處理采用水培法收集根系分泌物，體積為500mL，用二氯甲烷IOOmL萃取3 次，收集有機(jī)相并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，超純水溶解定容至2mL，過(guò)0. 45 μ m有機(jī)相濾膜， 備用;(6)樣品測(cè)定采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，以不同酚酸種類(lèi)保留時(shí)間定性，定量采用峰面積外標(biāo)法，得到烤煙根系分泌物中酚酸的種類(lèi)和含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法，其特征在于步驟(6)中所述的不同酚酸種類(lèi)保留時(shí)間具體為對(duì)羥基苯甲酸，·10.839min;香草酸，12.624min ;丁香酸，13. 688min ;香豆酸，24. 955min ;阿魏酸，28. 970min。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)烤煙根系分泌物中酚酸種類(lèi)和含量的方法。包括波長(zhǎng)選擇、色譜條件選擇、標(biāo)準(zhǔn)工作液制作、工作曲線繪制、樣品前處理和樣品測(cè)定，最后以不同酚酸種類(lèi)保留時(shí)間定性，定量采用峰面積外標(biāo)法，得到烤煙根系分泌物中酚酸的種類(lèi)和含量。本發(fā)明填補(bǔ)了烤煙根系分泌物中酚酸物質(zhì)種類(lèi)和含量檢測(cè)空白。該方法可同時(shí)檢測(cè)5種酚酸，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。使用常規(guī)檢測(cè)設(shè)備，無(wú)需配置專(zhuān)門(mén)儀器，由一人即可獨(dú)立完成。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102590372SQ20121001763
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月19日
發(fā)明者丁元明, 劉永嘉, 呂平, 吳濤, 旦有明, 易建華, 曹紅, 李佛琳, 楊煥文, 牛蕓, 王戈, 趙正雄 申請(qǐng)人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué), 云南出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心