專利名稱：使用薄層層析的樣品檢測(cè)方法、薄層層析板及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種薄層層析板(下面也稱為“TLC板”)，其具有對(duì)紫外線或著色劑的 光學(xué)響應(yīng)不同的兩種分離劑層、所述薄層層析板的制造方法及其使用方法。
技術(shù)背景
薄層層析法(下面也稱為“TLC”)作為從混合物中分離或檢測(cè)特定成分的方法為 人所知。例如，基于分離劑層與檢測(cè)目標(biāo)成分之間光學(xué)響應(yīng)的差異，通過對(duì)由樣品展開提供 的點(diǎn)曝露于紫外線或用著色劑的顯色處理，而通過對(duì)TLC的成分分離進(jìn)行檢測(cè)。
另一方面，已知含有多糖衍生物例如多糖的苯基酯的的分離劑作為光學(xué)異構(gòu)體的 分離劑。當(dāng)這種含芳香環(huán)的分離劑用于TLC板的分離劑層時(shí)，通過曝露于紫外線或用著色 劑進(jìn)行顯色處理可能不能檢測(cè)出檢測(cè)目標(biāo)成分。
此類TLC板已知是將用于光學(xué)拆分的填充劑層設(shè)置于平板上的支持體的一部分 表面上的TLC板的形式(例如，參照專利文件I)。用該TLC板，在單個(gè)支持體的表面上形成 用于光學(xué)拆分的填充劑層和基于硅膠的填充劑層，使在用于光學(xué)拆分的填充劑層上分離的 成分(點(diǎn))另外展開到硅膠基填充劑層；通過使硅膠基填充劑層經(jīng)受曝露于紫外線或者用 著色劑進(jìn)行顯色處理來檢測(cè)出檢測(cè)目標(biāo)成分。
用該TLC板，容易被用于光學(xué)拆分的填充劑層吸附的萃取成分，與對(duì)用于光學(xué)拆 分的填充劑層的吸附有抵抗形的余液成分相比，不能令人滿意地從用于光學(xué)拆分的填充劑 層向硅膠基填充劑層移動(dòng)，因而不可能在硅膠基填充劑層中令人滿意地進(jìn)行檢測(cè)，因而也 不可能確認(rèn)通過用于光學(xué)拆分的填充劑層進(jìn)行的分離的狀態(tài)。因此，此TLC板當(dāng)應(yīng)用于使 用例如柱層析的其他類型的層析法進(jìn)行的光學(xué)拆分的條件研究時(shí)不能提供必要的信息，因 此對(duì)于這一點(diǎn)尚有研究的余地。
專利文件1:日本專利公開第3140138號(hào)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種能利用光學(xué)響應(yīng)對(duì)樣品中的成分的分離進(jìn)行檢測(cè)的TLC板及 TLC，所述樣品已通過不能檢測(cè)樣品中成分的分離的分離劑層進(jìn)行展開。
本發(fā)明人對(duì)于對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的分離劑組成TLC的使用進(jìn)行了 努力研究，并發(fā)現(xiàn)了一種方法，其中，使在具有特定的此類光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑層中展開 的點(diǎn)在不同于此展開方向的方向上展開，并使點(diǎn)進(jìn)一步展開到與第一分離劑層相鄰接的且 不具有前述光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑層，由此發(fā)現(xiàn)在第二分離劑層中維持第一分離劑層中的 展開方向上的點(diǎn)的位置關(guān)系。基于此而完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明提供一種利用具有第一分離劑層以及與第一分離劑層相鄰接的第二 分離劑層的TLC板并檢測(cè)樣品中對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的成分的方法；該方法包括在第一分離劑層中使樣品沿第一和第二分離劑層的邊界的方向展開的步驟；使至少使 第二分離劑層中的流動(dòng)相干燥的步驟；改變前述TLC板的方向和使第一分離劑層中的點(diǎn)展 開入第二分離劑層的步驟；通過曝露于紫外線或用著色劑進(jìn)行顯色處理來對(duì)移動(dòng)入第二分 離劑層的點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)的步驟；其中，第一分離劑層是由具有光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑所形成， 第二分離劑層是由具有不同于第一分離劑的光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑所形成；成分的光學(xué)響 應(yīng)與第一分離劑的光學(xué)響應(yīng)性相同。
本發(fā)明還提供一種具有展開方向?yàn)榈谝环较虻牡谝环蛛x劑層以及在與第一方向 垂直的第二方向上的并與第一分離劑層相鄰接的第二分離劑層的TLC板；其中，第一分離劑層是由對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑所形成；第二分離劑層是由具有不同于第一分離劑的前述光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑所形成；并且 當(dāng)在第一分離劑層中使點(diǎn)在第一方向上展開時(shí)，在第一分離劑層中在第二方向上的點(diǎn) 的移動(dòng)距離W2與在第一分離劑層中在第一方向上的點(diǎn)的移動(dòng)距離Wl之比為不超過±0.5。
此外，本發(fā)明提供在各情況下第一分離劑為用于光學(xué)異構(gòu)體的分離劑的前述方法 及前述TLC板。
此外，本發(fā)明還提供前述方法及前述TLC板，其中，在各情況下，用于光學(xué)異構(gòu)體 的分離劑包含多糖衍生物，所述多糖衍生物包含多糖以及取代多糖的羥基或氨基的一部分 或全部的芳香族酯基、芳香族氨甲?；?、芳香族醚基、或羰基。
此外，本發(fā)明提供一種制造具有第一分離劑層及與該第一分離劑層相鄰接的第二 分離劑層的TLC板的方法；該方法包括通過將含有對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的第 一分離劑及涂布溶劑的第一漿料涂布于支持體上來形成第一分離劑層的步驟；將含有具有 不同于第一分離劑的前述光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑及涂布溶劑的第二漿料涂布于支持體上 來形成與第一分離劑層相鄰接的第二分離劑層的步驟；其中，在第一和第二漿料中使用相 同種類的涂布溶劑。
由于在維持第一方向上的點(diǎn)的位置關(guān)系的情況下使已在第一分離劑層中向第一 方向展開的點(diǎn)移動(dòng)入第二分離劑層，因此，本發(fā)明可以利用光學(xué)性響應(yīng)通過對(duì)不能檢測(cè)樣 品中成分的分離的分離劑層來對(duì)樣品中的成分的分離進(jìn)行檢測(cè)。
此外，對(duì)于TLC板的第一分離劑層，將相對(duì)于展開方向所允許的點(diǎn)的移動(dòng)寬度限 定在規(guī)定范圍內(nèi)，因此，本發(fā)明可以在第二分離劑層中準(zhǔn)確地控制第一分離劑層中的成分 在展開方向的分離狀態(tài)。
此外，由于本發(fā)明提供使用于第一和第二漿料的涂布溶劑的類型的一致，所以，本 發(fā)明提供從第一分離劑層向第二分離劑層的點(diǎn)移動(dòng)性為良好的TLC板。


圖1是顯示當(dāng)將樣品溶液的點(diǎn)施加于本發(fā)明的TLC板的一個(gè)實(shí)例時(shí)的狀態(tài)的圖。
圖2是顯示當(dāng)使樣品在圖1的TLC板的第一分離劑層I中展開時(shí)的狀態(tài)的圖。
圖3是顯示當(dāng)在圖1的TLC板上使在第一分離劑層I中展開的點(diǎn)向第二分離劑層 2展開時(shí)的狀態(tài)的圖。
圖4是顯示當(dāng)在圖1的TLC板的第一分離劑層I中的點(diǎn)向第二分離劑層2展開時(shí) 的狀態(tài)的圖示。
圖5是顯示當(dāng)具有移動(dòng)入第二分離劑層2的點(diǎn)的TLC板曝露于紫外線時(shí)圖1的 TLC板的狀態(tài)的圖。
實(shí)施發(fā)明的最佳模式本發(fā)明的樣品檢測(cè)方法利用具有第一分離劑層以及與第一分離劑層相鄰接的第二分 離劑層的TLC板并檢測(cè)樣品中對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的成分。本發(fā)明的檢測(cè)方 法包括在第一分離劑層中使樣品沿第一分離劑層與第二分離劑層的邊界的方向展開的步 驟；使至少第二分離劑層中的流動(dòng)相干燥的步驟；改變前述TLC板的方向并使第一分離劑 層中的點(diǎn)展開入第二分離劑層的步驟；通過曝露于紫外線或用著色劑進(jìn)行顯色處理對(duì)移動(dòng) 入第二分離劑層的點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)的步驟。
在第一分離劑層中使樣品沿第一分離劑層與第二分離劑層的邊界的方向展開的 步驟(第一步驟)，除了僅在第一分離劑層內(nèi)沿第二分離劑層展開樣品以外，其余可以以與 普通的TLC同樣的方式進(jìn)行。即，可通過以下步驟實(shí)施第一步驟可以將樣品點(diǎn)施加于第一 分離劑層上；必要時(shí)使樣品的點(diǎn)干燥；使用沿第一分離劑層與第二分離劑層的邊界的方向 (也稱為“第一方向”)為縱向方向，將點(diǎn)樣品的分離劑層的邊緣放置在下方并將第一和第 二分離劑層的邊緣浸入流動(dòng)相中；并使樣品在第一分離劑層中展開。
使至少第二分離劑層中的流動(dòng)相干燥的步驟(第二步驟)，可以以與普通TLC中的 流動(dòng)相干燥同樣的方式進(jìn)行。一旦在第二步驟中使第二分離劑層干燥后，則能夠進(jìn)行向第 二分離劑層的點(diǎn)的移動(dòng)；但從防止在第一分離劑層中的點(diǎn)擴(kuò)大或維持其位置關(guān)系的觀點(diǎn)來 看，優(yōu)選地是同時(shí)在第二分離劑層和第一分離劑層上進(jìn)行流動(dòng)相的干燥。在流動(dòng)相含有可 燃性有機(jī)溶劑時(shí)，從防止燃燒或毒性的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選的是在局部排氣裝置的附近通過風(fēng) 干來進(jìn)行第二步驟。也可在減壓下實(shí)施第二步驟。
改變前述TLC板的方向并使第一分離劑層中的點(diǎn)展開入第二分離劑層的步驟(第 三步驟)，除了使第一分離劑層中的點(diǎn)向第二分離劑層展開以外，其余可以以與普通TLC同 樣的方式進(jìn)行。即，通過以下步驟來實(shí)施第三步驟，可以改變TLC板的方向以使流動(dòng)相在與 第一分離劑與第二分離劑層的邊界正交的方向(也稱為“第二方向”)上展開；將該板的邊 緣浸入流動(dòng)相；用流動(dòng)相實(shí)施展開以使第一分離劑層中的前述點(diǎn)越過前述邊界而移動(dòng)入第 二分離劑層中。
第二方向可以是從相對(duì)于第一方向大于0°且小于等于90°的范圍中，從準(zhǔn)確地 維持第一流動(dòng)相中的點(diǎn)的位置關(guān)系的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選為45至90°、更優(yōu)選為60至90°、更 優(yōu)選為90°。
第一步驟中的流動(dòng)相與第三步驟中的流動(dòng)相可以相同或不同。例如，，若在第三步 驟中使用的流動(dòng)相極性高于第一步驟中的流動(dòng)相，則可以更快速地實(shí)施點(diǎn)從第一分離劑層 向第二分離劑層的移動(dòng)。
流動(dòng)相(洗脫劑液)可以使用水、鹽的水溶液、有機(jī)溶劑、及以上各項(xiàng)的混合的溶 劑。可以使用一種有機(jī)溶劑也可使用兩種或兩種以上有機(jī)溶劑。鹽的水溶液，可列舉硫酸銅 水溶液和過氯酸鹽水溶液。有機(jī)溶劑，可列舉例如例如甲醇、乙醇和異丙醇等的醇類；例 如丙酮、和乙基甲基酮等的酮類；例如四氫呋喃、二氧六環(huán)等的醚類；例如乙腈等的腈類； 例如二甲基亞砜等的亞砜類；例如環(huán)丁砜等的砜類；例如乙酸乙酯等的酯類；例如二甲基甲酰胺等的酰胺類；例如戊烷、己烷、石油醚等的烴類；例如苯、甲苯、二甲苯等的芳香族烴類；以及例如二氯甲烷、氯仿、溴仿、氯苯、溴苯等的含鹵素化合物類。從使待檢測(cè)的成分穩(wěn)定的觀點(diǎn)來看，可向流動(dòng)相中加入適量的酸或堿。酸，可列舉乙酸、丙酸和四氟乙酸；堿，可列舉二乙胺、單乙醇胺和三乙胺。
通過曝露于紫外線或用著色劑進(jìn)行顯色處理來對(duì)移動(dòng)入第二分離劑層的點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)的步驟(第四步驟)，除了將第二分離劑層中的點(diǎn)作為檢測(cè)目標(biāo)以外，其余以通過曝露于紫外線或用著色劑進(jìn)行顯色處理來檢測(cè)TLC中的點(diǎn)的普通方法同樣的方式進(jìn)行。
第一分離劑層是由對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑所形成。這里， 對(duì)紫外線的光學(xué)響應(yīng)是指由紫外線誘導(dǎo)的發(fā)光(例如熒光)、或者對(duì)紫外線的吸收。對(duì)著色劑的光學(xué)響應(yīng)，是指由著色劑所誘導(dǎo)的顯色。
第一分離劑層，除了由第一分離劑形成第一分離劑層以外，其余可以以與普通TLC 板的薄層相同的方式形成。
第一分離劑包含具有前述光學(xué)響應(yīng)的分離劑成分。這種第一分離劑，可列舉包含載體、由載體支承或結(jié)合于載體上的前述分離劑成分的載體支承型分離劑、或由前述分離劑成分所組成的粒子。本發(fā)明中第一分離劑優(yōu)選的是用于光學(xué)異構(gòu)體分離劑，關(guān)于此分離劑，由于分離劑的性能和性質(zhì)而使通過TLC進(jìn)行的樣品的簡(jiǎn)單檢測(cè)通常被視為很成問 題。
從提高分離性能的觀點(diǎn)來考慮，前述載體優(yōu)選地為多孔材料。前述載體可列舉例如交聯(lián)聚苯乙烯、交聯(lián)丙烯酸類聚合物、環(huán)氧聚合物的合成高分子；纖維素或通過交聯(lián)而強(qiáng)化纖維素的交聯(lián)纖維素；多糖，例如交聯(lián)瓊脂糖、交聯(lián)葡聚糖和交聯(lián)甘露聚糖的交聯(lián)材料; 以及例如氧化鋁、硅膠、介孔硅膠，沸石、硅藻土、熔融二氧化硅、粘土礦物、氧化鋯和金屬的無機(jī)物質(zhì)。
第一分離劑中的分離劑成分可以使用具有前述光學(xué)響應(yīng)的低分子量分離劑或具有前述光學(xué)響應(yīng)的高分子量分離劑中。所述低分子量分離劑，可列舉配體交換型分離劑、 電荷轉(zhuǎn)移型(η-η)分離劑、氫鍵合型分離劑、包合型(inclusion-type)分離劑、離子鍵合型分離劑、插層型分離劑、冠醚及其衍生物、以及環(huán)糊精及它們的衍生物。高分子量分離劑可列舉多糖衍生物、聚酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、蛋白質(zhì)和酒石酸衍生物。所述多糖衍生物可列舉用于用于光學(xué)異構(gòu)體的分離劑的并且包含多糖以及用于取代多糖的羥基或氨基中的一部分或全部的芳香族酯基、芳香族氨甲?；?、芳香族醚基和羰基的多糖衍生物。此處的實(shí)例是纖維素的氨基甲酸苯酯衍生物、纖維素的苯基酯衍生物、直鏈淀粉的氨基甲酸苯酯衍生物和直鏈淀粉的苯基酯衍生物。這些衍生物中的苯基可具有選自C1J烴及鹵素的一個(gè)或一個(gè)以上的取代基。
第二分離劑層是由具有不同于第一分離劑不同的光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑所形成。 這種不同的光學(xué)響應(yīng)表示由曝露于紫外線或者用著色劑顯色處理誘導(dǎo)的一種光學(xué)響應(yīng)區(qū)別于由曝露于紫外線或者用著色劑顯色處理誘導(dǎo)的另一種光學(xué)響應(yīng)的程度為基于顏色或亮度能進(jìn)行光學(xué)區(qū)別。第二分離劑可具有分離樣品中成分的能力，也可不具有該能力。從準(zhǔn)確地檢測(cè)第一分離劑層中的點(diǎn)的位置關(guān)系的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選的是第二分離劑不具有分離樣品中的成分的性能。這種第二分離劑可列舉以上已描述的載體和分離劑，但優(yōu)選載體。
可以根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法的目的來決定第一和第二分離劑的粒徑。例如，當(dāng)目的是研究用于中等壓力柱層析法的條件時(shí)，則從獲得能夠應(yīng)用于中等壓力層析法的結(jié)果的觀點(diǎn)來看，粒徑優(yōu)選為至少10 μ m、更優(yōu)選為10至100 μ m、更優(yōu)選為20至100 μ m。個(gè)體分離劑的粒徑可以相互相同或可以相互不同。各分離劑的粒徑可以是目錄值或采用由普通粒徑分析儀所測(cè)定的平均粒徑。
當(dāng)利用曝露于紫外線引起的光學(xué)響應(yīng)性來實(shí)施第四步驟中的成分檢測(cè)時(shí)，從達(dá)到更準(zhǔn)確的檢測(cè)的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選的是第二分離劑還含有熒光指示劑。這種熒光指示劑可以使用已知的熒光指示劑，例如鎢酸鎂、或含錳的硅酸鋅?？梢愿鶕?jù)成分分離可能的范圍來決定熒光指示劑的含量，一般而言每100質(zhì)量份的第二分離劑，熒光指示劑的含量為O.1至5 質(zhì)量份。
當(dāng)利用著色劑引起的光學(xué)響應(yīng)來實(shí)施第四步驟中的成分檢測(cè)時(shí)，在著色劑及其顯色處理方面可以采用已知的技術(shù)。這種著色劑可列舉茴香醛溶液、磷鑰酸溶液、碘、茚三酮溶液、高錳酸鉀水溶液、DNPH溶液、氯化錳溶液、和溴甲酚綠溶液。顯色處理可列舉通過涂布、散布著色劑于TLC板上或使TLC板暴露于著色劑來施加著色劑于TLC板并且必要時(shí)加熱TLC板而引起顯色的處理。
樣品成分的光學(xué)響應(yīng)與本發(fā)明中的第一分離劑的光學(xué)響應(yīng)相同。這里，所謂光學(xué)響應(yīng)相同表不不能基于顏色和亮度從光學(xué)角度區(qū)別一種的光學(xué)響應(yīng)與另一種的光學(xué)響應(yīng)性。根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法能夠?qū)悠分谐煞值耐ㄟ^第一分離劑進(jìn)行的在TLC中的分離進(jìn)行簡(jiǎn)便地檢測(cè)，該樣品至少利用第一分離劑來分離但在第一分離劑上不能以光學(xué)方式進(jìn)行檢測(cè)、的。
用于本發(fā)明的檢測(cè)方法的TLC板，優(yōu)選地使用下文所述的本發(fā)明的TLC板。
本發(fā)明的TLC板具有平板狀的支持體、形成于該支持體表面上的第一分離劑層及與第一分離劑層相鄰接的第二分離劑層。
支持體可以使用通常用于TLC板的平板。這種支持體可列舉由玻璃、樹脂、金屬、 或紙制成的平板。對(duì)支持體的形狀并無特別限制，但從在優(yōu)選的方向上緊湊地進(jìn)行在第一分離劑層中的樣品展開及其后從第一分離劑層向第二分離劑層的點(diǎn)展開的觀點(diǎn)來看，支持體的形狀優(yōu)選矩形或正方形。此外，對(duì)于平板的尺寸并無特別限制，但從操作簡(jiǎn)單性、展開時(shí)間和經(jīng)濟(jì)的方面來看，優(yōu)選為I至6，000 cm2、更優(yōu)選為2至410 cm2、更優(yōu)選為5至75 cm2。，在允許用于本發(fā)明的檢測(cè)方法的范圍內(nèi)，對(duì)平板的厚度并無特別限制。
前述第一和第二分離劑可以使用光學(xué)響應(yīng)不同的并且選自上述粒徑至少為10 μm的粒子分離劑的二種或兩種以上分離劑。第一分離劑層可以通過將含有第一分離劑和涂布溶劑的第一漿料涂布于支持體上、必要時(shí)使由此所形成的涂層干燥來形成。第二分離劑層可以通過將含有第二分離劑和涂布溶劑的第二漿料涂布于支持體上、必要時(shí)使由此形成的涂層干燥來形成。
可以利用已知的制造TLC板的方法來形成第一和第二分離劑層。因此，第一和第二分離劑層可以通過使用涂布器將第一和第二漿料涂布于支持體的表面上、或者將第一和第二漿料噴霧至支持體的表面上來形成。對(duì)于形成第一和第二分離劑層的順序并無特別限制，可在形成一層之后形成另一層或者同時(shí)形成這兩種分離劑層。
前述涂布用溶劑可以使用水、有機(jī)溶劑及前兩項(xiàng)的混合溶劑。有機(jī)溶劑可列舉例如甲醇、乙醇和異丙醇的醇類；例如丙酮和乙基甲基酮的酮類；例如四氫呋喃、二氧六環(huán)的醚類；例如乙腈的腈類；例如二甲基亞砜的亞砜類；例如環(huán)丁砜的砜類；例如乙酸乙酯的酯類；例如二甲基甲酰胺的酰胺類；例如戊烷、己烷和石油醚的烴類；例如苯、甲苯和二甲苯 的芳香烴類；例如二氯甲烷、氯仿、溴仿、氯苯和溴苯的含鹵素化合物。
涂布用溶劑優(yōu)選水溶性有機(jī)溶劑與水的混合溶劑、更優(yōu)選醇與水的混合溶劑、更 優(yōu)選乙醇與水的混合溶劑。前述混合溶劑中的醇的含量，優(yōu)選為O.1至50質(zhì)量％、更優(yōu)選為 10至40質(zhì)量％、更優(yōu)選為20至30質(zhì)量％。從防止第一和第二分離層的邊界混亂且實(shí)現(xiàn)從 第一分離劑層向第二分離劑層點(diǎn)的良好的移動(dòng)的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選的是第一和第二漿料使用 相同種類的涂布溶劑、更優(yōu)選的是使用相同的涂布溶劑組成。
可以基于有待形成的分離劑層的均勻性、層厚度、和經(jīng)濟(jì)的考慮來決定第一和第 二漿料中的涂布溶劑的含量，表示為每100質(zhì)量份的第一或第二分離劑，優(yōu)選為10至5000 質(zhì)量份、更優(yōu)選為50至1000質(zhì)量份、更優(yōu)選為100至300質(zhì)量份，同時(shí)對(duì)于第一和第二漿 料而言。
為了提高有待形成的分離劑層的強(qiáng)度，優(yōu)選的是第一和第二漿料還含有粘合劑。 前述粘合劑可以使用獲得在支持體表面上形成分離劑層的顯示粘合性能的成分。這種粘合 劑可列舉例如石膏或膠體二氧化硅的無機(jī)粘合劑；例如微纖化纖維素的有機(jī)纖維；例如 堿性水溶性共聚物、羥乙基纖維素、和羧甲基纖維素的增稠劑；例如聚乙烯醇和丙烯酸的有 機(jī)粘合劑。粘合劑可使用單種或兩種或更多種。
可以從有待形成的分離劑層的強(qiáng)度的考慮、以及流動(dòng)相在第一或第二分離劑層中 的展開的速度的考慮來決定第一和第二漿料中的粘合劑含量。為了提高有待形成的分離 劑層的強(qiáng)度，優(yōu)選的是粘合劑的量較多，但一般而言流動(dòng)相在分離劑層中的展開速度的變 慢與粘合劑添加量的增加成正比。當(dāng)在前述第一步驟中，流動(dòng)相在第二分離劑層中的展開 速度相對(duì)于流動(dòng)相在第一分離劑層中的展開速度明顯更慢時(shí)，發(fā)生樣品的點(diǎn)在展開時(shí)相對(duì) 于第一方向轉(zhuǎn)向第二分離劑層的現(xiàn)象，因而不能對(duì)第一分離劑層的樣品分離進(jìn)行準(zhǔn)確的分 析。相反，當(dāng)在流動(dòng)相在第二分離劑層中的展開速度相對(duì)于流動(dòng)相在第一分離劑層中的展 開速度明顯較大時(shí)，發(fā)生樣品點(diǎn)展開時(shí)相對(duì)于第一方向遠(yuǎn)離第二分離劑層的現(xiàn)象，因此不 能對(duì)第一分離劑層的樣品分離分析進(jìn)行準(zhǔn)確的分析。從準(zhǔn)確地控制由第一分離劑層進(jìn)行的 分離的狀態(tài)的觀點(diǎn)來看，在使樣品在第一分離劑層中展開時(shí)，優(yōu)選的是最大可能地使樣品 的點(diǎn)向第一方向(例如垂直地)展開。
另一方面，當(dāng)在前述第三步驟中，在當(dāng)點(diǎn)橫穿第一分離劑層與第二分離劑層的邊 界時(shí)，流動(dòng)相在第二分離劑層中的展開速度明顯大于流動(dòng)相在第一分離劑層中的展開速度 時(shí)，發(fā)生點(diǎn)的拖尾，第二分離劑層中的成分檢測(cè)變得成問題。從抑制這種現(xiàn)象且在第二分離 劑層中仍保持在第一分離劑層中的展開方向上的點(diǎn)的位置關(guān)系和形狀的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選的 是使流動(dòng)相在第一分離劑層中的展開速度與流動(dòng)相在第二分離劑層中的展開速度相同，或 者使流動(dòng)相在第二分離劑層中的展開速度在一定程度上小于流動(dòng)相在第一分離劑層中的 展開速度。
考慮到前述觀點(diǎn)，在使點(diǎn)在第一分離劑層中向第一方向展開時(shí)，在本發(fā)明的TLC 板中，第一分離劑層中在第二方向上的點(diǎn)移動(dòng)距離W2與第一分離劑層中在第一方向上的 點(diǎn)移動(dòng)距離Wl之比(W2/W1)為不大于O. 5。Wl表不在第一分離劑層中從樣品點(diǎn)施加位置 到點(diǎn)前沿的距離。W2表示沿第二方向從點(diǎn)施加位置到點(diǎn)的前沿的距離。從準(zhǔn)確地控制第一 分離劑層中的分離狀態(tài)的觀點(diǎn)來看，W2/W1優(yōu)選為不超過±0. 3，從抑制拖尾的觀點(diǎn)來看，更優(yōu)選為正值；更優(yōu)選為不超過O.1。另外，就W2而言，將樣品點(diǎn)施加位置設(shè)為0，將從點(diǎn)施 加位置的第二分離劑層的一側(cè)表示為正值，將點(diǎn)施加位置的與第二分離劑層的相反側(cè)表示 為負(fù)值。
前述粘合劑中，從增加層的強(qiáng)度和控制流動(dòng)相的展開速度的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選的是 在第一和第二漿料兩者中同時(shí)組合地使用無機(jī)粘合劑與有機(jī)粘合劑。無機(jī)粘合劑優(yōu)選使用 石膏；有機(jī)類粘合劑優(yōu)選使用羧甲基纖維素。
可考慮待形成的層的強(qiáng)度和產(chǎn)生適當(dāng)范圍的前述W2/W1來決定第一和第二漿料 中的粘合劑含量。例如，第一衆(zhòng)料中的石膏含量，表不為每100質(zhì)量份的第一分離劑,優(yōu)選 為O.1至50質(zhì)量份、更優(yōu)選為5至30質(zhì)量份、甚至更優(yōu)選為10至20質(zhì)量份。第一漿料中 的有機(jī)粘合劑的含量，表示為每100質(zhì)量份的第一分離劑，優(yōu)選為O.1至50質(zhì)量份、更優(yōu)選 為O. 5至10質(zhì)量份、甚至更優(yōu)選為I至3質(zhì)量份。
作為實(shí)例，第二漿料中的石膏含量，表示為每100質(zhì)量份的第二分離劑，優(yōu)選為 O.1至50質(zhì)量份、更優(yōu)選為I至30質(zhì)量份、甚至更優(yōu)選為2至8質(zhì)量份。第二漿料中的有 機(jī)粘合劑的含量，表示為每100質(zhì)量份的第二分離劑，優(yōu)選為O.1至50質(zhì)量份、更優(yōu)選為 O. 5至10質(zhì)量份、甚至更優(yōu)選為2至4質(zhì)量份。
第一和第二分離劑層的強(qiáng)度應(yīng)該足以經(jīng)受與TLC相關(guān)的保存和使用，例如在保存 和使用時(shí)足以防止分離劑層的剝離或崩解的強(qiáng)度。例如，可以通過將有色樣品進(jìn)行點(diǎn)樣并 展開來確定在第一分離劑層中的W2/W1。而且，因?yàn)楫?dāng)分離劑層變得較厚時(shí)流動(dòng)相的展開速 度變慢、當(dāng)分離劑層變得較薄時(shí)流動(dòng)相的展開速度加快，所以，可以利用第一和第二分離劑 層的厚度以及通過粘合劑的種類和粘合劑的加入量來調(diào)整W2/W1。
從使粘合劑均勻地分散于分散劑表面上的觀點(diǎn)來看，第一和第二漿料中還可含有 分散劑。這種分散劑可列舉苯乙烯/順丁烯二酸酐聚合物。
可以根據(jù)TLC板的目標(biāo)用途適當(dāng)?shù)卦O(shè)定第一和第二分離劑層的厚度。例如，若從 將所得結(jié)果應(yīng)用于中等壓力柱層析法、或者將所得結(jié)果應(yīng)用于不對(duì)稱合成反應(yīng)中的反應(yīng)監(jiān) 測(cè)或化合物分離的觀點(diǎn)來看，分離劑層的厚度優(yōu)選為O. 01至100 mm、更優(yōu)選為O. 03至10 mm、甚至更優(yōu)選為O. 05至2 mm。
對(duì)于TLC板的尺寸并無特別限制，可以根據(jù)分離劑、樣品、及流動(dòng)相來適當(dāng)?shù)貨Q定 TLC板的尺寸?；诔煞址蛛x的考慮，TLC板的尺寸以大為好，基于操作的容易性或檢測(cè)的 簡(jiǎn)便性的考慮，TLC板的尺寸不希望太大?？梢曰谶@些考慮來適當(dāng)?shù)貨Q定第一和第二分 離劑層的尺寸。
例如,第一分離劑層在第一方向上的長(zhǎng)度(B)應(yīng)足夠長(zhǎng)以引起樣品在第一方向上 的展開，可以考慮第一分離劑、樣品、及流動(dòng)相而適當(dāng)?shù)貨Q定該長(zhǎng)度?？紤]到提供可靠的可 操作性和檢測(cè)的觀點(diǎn)，第一分離劑層在第一方向上的長(zhǎng)度B優(yōu)選為I至30 cm、更優(yōu)選為3 至20 cm、更優(yōu)選為5至12 cm。
考慮到提供可靠的可操作性或檢測(cè)的觀點(diǎn)，第一分離劑層在第二方向上的長(zhǎng)度 (Al)優(yōu)選為O. 01至200 cm、更優(yōu)選為O. 01至20 cm、更優(yōu)選為O. 02至5 cm。
考慮到提供可靠的可操作性或檢測(cè)的觀點(diǎn)，第二分離劑層在第二方向上的長(zhǎng)度 (A2)優(yōu)選為O.1至30 cm、更優(yōu)選為O. 5至20 cm、甚至更優(yōu)選為I至5 cm。
A2與Al (A2/A1)之比，基于通過用流動(dòng)相展開使點(diǎn)從第一分離劑層向第二分離劑層移動(dòng)的的考慮，希望較大，但基于操作容易性或檢測(cè)的簡(jiǎn)便性的考慮，希望較小。基于這些考慮，A2/A1的比率優(yōu)選為O.1至20、更優(yōu)選為O.1至10、更優(yōu)選為O.1至5。
此外，B與Al之比(B/A1)，基于樣品中的成分在第一分離劑層中分離的考慮，以較大為好，基于可操作性的考慮，希望為某種程度的較小值?；谶@些考慮，B/A1優(yōu)選為O. 01 至9，000、更優(yōu)選為O. 2至4，000、更優(yōu)選為I至600。
此外，B與Al和A2的和之比(B/ (Al + A2))，基于樣品中的成分在第一分離劑層中分離的考慮，希望較大，基于點(diǎn)從第一分離劑層向第二分離劑層的移動(dòng)、特別是從萃取成分的點(diǎn)的移動(dòng)的和可操作性的考慮，希望較小值?；谶@些考慮，B/(A1+A2)優(yōu)選為O. 01至 30、更優(yōu)選為O.1至30、更優(yōu)選為O. 8至12。
對(duì)第一分離劑層或第二分離劑層的形狀無特別限制，只要這些層相互鄰接且滿足前述長(zhǎng)度條件。第一和第二分離劑層優(yōu)選各自具有矩形形狀，這是從可操作性、第一分離劑層中的點(diǎn)的位置關(guān)系的清晰、明確的顯示、及個(gè)體層的形成容易性的觀點(diǎn)來看。更優(yōu)選地， 第一分離劑具有矩形形狀，其中，長(zhǎng)度方向?yàn)榈谝环较?，第二分離劑層具有矩形形狀，該矩形在第一方向上具有與第一分離劑層的長(zhǎng)度相同的長(zhǎng)度并且具有滿足前述A2/A1之比的尺寸。
下面將參照附圖進(jìn)一步說明本發(fā)明。在下文中，以光學(xué)異構(gòu)體的分離、檢測(cè)的構(gòu)造 (configuration)為例來說明本發(fā)明。
如圖1中所示，本發(fā)明的TLC板具有相鄰地設(shè)置在四邊形支持體(未圖示)的表面上的第一分離劑層I和第二分離劑層2。例如，使用玻璃板為支持體；構(gòu)成第一分離劑層I的第一分離劑使用對(duì)樣品中成分具有分離能力的分離劑，例如使直鏈淀粉的氨基甲酸3，5-二甲基苯酯衍生物支持或化學(xué)結(jié)合于硅膠上而成的用于光學(xué)異構(gòu)體的分離劑；構(gòu)成第二分離劑層2的第二分離劑使用具有不同于第一分離劑的光學(xué)響應(yīng)的分離劑，例如硅膠、纖維素、或者用十八烷基修飾硅膠表面提供的十八烷基硅烷基化硅膠。
通過將包含第一分離劑、乙醇水溶液、石膏和羧甲基纖維素的第一漿料涂布于支持體表面上，而形成第一分離劑層I。通過將包含第二分離劑、乙醇水溶液、石膏和羧甲基纖維素、熒光指示劑的第二漿料涂布于支持體表面上鄰接第一分離劑層I的位置，而形成第二分離劑層2。調(diào)整第一和第二漿料中的粘合劑的摻合比(摻合的石膏和羧甲基纖維素的量)以便提供(當(dāng)在已將蘇丹紅和/或1，4-氨基偶氮苯用作標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行展開時(shí))在第一分離劑層I中不超過±0. 5的比率(W2/W1)，該比率為，在第二方向上從點(diǎn)施加位置到提余液成分的點(diǎn)前沿的距離W2與在第一方向上從點(diǎn)施加位置到提余液成分的點(diǎn)的前沿的距離 Wl之比。標(biāo)準(zhǔn)樣品，除了蘇丹紅和1，4-氨基偶氮苯以外，還可以適當(dāng)?shù)貜囊阎镔|(zhì)中選擇具有與成為TCL板分析目標(biāo)的樣品類似的結(jié)構(gòu)特征或同樣的結(jié)構(gòu)特征(例如骨架相同或類似的結(jié)構(gòu))的有色化合物。
第一分離劑和第二分離劑的粒徑各自為20 μ m，第一和第二分離劑層的厚度各自為150 ym。該TLC板的第一方向是沿第一分離劑層I與第二分離劑層2的邊界的方向(圖1中由箭頭X所指的方向)，第二方向是垂直于X方向的方向(圖1中由箭頭Y所指方向)。
將第一分離劑層I形成為將X方向設(shè)定為長(zhǎng)度方向的矩形。將第二分離劑層2形成為與第一分離劑層I共有一長(zhǎng)邊的矩形。第一分離劑層I和第二分離劑層2在X方向上的長(zhǎng)度B為10 cm ;第一分離劑層I在Y方向上的長(zhǎng)度Al為2 cm ;第二分離劑層2在Y方向上的長(zhǎng)度A2為2. 5 cm。
首先，將X方向設(shè)定為前述TLC板的縱方向，將樣品溶液點(diǎn)施加于第一分離劑層I 的下部。樣品溶液例如是具有吸收紫外線能力的的光學(xué)異構(gòu)體的外消旋體在揮發(fā)性溶劑中 的溶液。例如，在距離TLC板下側(cè)緣1. 5 cm及距離TLC板上不與第二分離劑層2相鄰接的 第一分離劑層I的側(cè)緣1. 5 cm的位置，點(diǎn)的直徑不超過2 _，使用毛細(xì)管或微量吸管施加 樣品溶液的點(diǎn)。施加后，使樣品溶液的點(diǎn)3干燥。
將用樣品溶液進(jìn)行點(diǎn)樣后的TLC板放置在可以容納TLC板的并且可以以小于 I cm的深度容納流動(dòng)相(洗脫液)的容器(洗脫液槽)中。例如，流動(dòng)相可使用正己烷/ 乙醇混合的溶劑、或者正己烷/乙酸乙酯混合的溶劑。流動(dòng)相在第一分離劑層I和第二分 離劑層2中向X方向被上吸，隨著流動(dòng)相的展開，樣品溶液中的提余液成分和萃取成分在第 一分離劑層I中展開。如圖2中所示，盡管不能以目視檢查確認(rèn)，但形成了提余液成分的點(diǎn) R和萃取成分的點(diǎn)E。
如圖2中所示，當(dāng)流動(dòng)相在X方向上已到達(dá)TLC板的上端部時(shí)，將TLC板從前述密 閉容器中取出，利用冷空氣流使第一分離劑層I和第二分離劑層2的流動(dòng)相干燥。如圖2 中所示，Wl為第一分離劑層I中在第一方向X上點(diǎn)的移動(dòng)距離，用第一方向上點(diǎn)的前沿與樣 品溶液點(diǎn)的施加位置之間的距離來表示W(wǎng)l。如圖2中所示，W2為第一分離劑層I中在第二 方向Y上點(diǎn)的移動(dòng)距離，用第二方向上前述點(diǎn)的前沿與點(diǎn)施加位置之間的距離來表示W(wǎng)2。
然后，如圖3中所示，使第一分離層I在下方且將Y方向設(shè)定為TLC板的縱方向， 將TLC板放置于前述密閉容器內(nèi)。此時(shí)，流動(dòng)相可以與前面樣品展開中所使用的流動(dòng)相相 同，也可以不同。流動(dòng)相向Y方向從第一分離劑層I向第二分離劑層2被上吸，伴隨該流動(dòng) 相的展開，如圖4中所示，第一分離劑層I的提余液成分和萃取成分移動(dòng)入第二分離劑層2。 雖然不能以目視檢查確認(rèn)，但在第二分離劑層2中形成提余液成分的點(diǎn)R和萃取成分的點(diǎn) E0
如圖4中所示，當(dāng)流動(dòng)相在Y方向上已到達(dá)TLC板的上端部時(shí)，將TLC板從前述密 閉容器中取出，利用冷空氣流使第一分離劑層I和第二分離劑層2的流動(dòng)相干燥，從而使第 二分離劑層2中的點(diǎn)R和點(diǎn)E固定。使該TLC板曝露于紫外線或者向其施加著色劑、按需 要進(jìn)行加熱，由此，如圖5中所示，基于相同的光學(xué)響應(yīng)來鑒定點(diǎn)R、點(diǎn)E、及第一分離劑層 I (例如，由于紫外線吸收所形成的暗區(qū)、或由于用著色劑顯色所形成的有色區(qū)域)。
在第二分離劑層中維持或反映第一分離劑層中樣品中成分的分離狀態(tài)的情況下， 通過在前述第三步驟中在不改變TLC板的方向的情況下使第一分離劑層的點(diǎn)展開入第二 分離劑層(即，在第三步驟中，采用相對(duì)于前述第一方向大于或等于0°至小于或等于90° 的范圍內(nèi)的第二方向，使第一分離劑層的點(diǎn)展開入第二分離劑層)，也能夠通過光學(xué)響應(yīng)性 對(duì)不能檢測(cè)樣品中成分分離的由第一分離劑層進(jìn)行的樣品中成分的分離進(jìn)行檢測(cè)。在這種 情況下可以省略前述第二步驟，本發(fā)明也包含這種情況。
實(shí)施例
實(shí)施例1:TLC板的制作 (第一分離劑層的制作)將6 g填充劑CHIRALPAK IA (Daicel化學(xué)工業(yè)有限公司制造，相同公司的注冊(cè)商標(biāo)) (也稱為“填充劑ΙΑ”)、0. 89 g石膏、和6 g CMC (羧甲基纖維素)1110 (Daicel化學(xué)工業(yè)有限公司)的2%水溶液添加入3. 03 g水與3. 01 g乙醇的混合溶液中，一邊充分?jǐn)嚢枰贿吔邮艹暡ㄖ校@得漿料。
(第二分離劑層的制作)將10. 01 g硅膠(來自Daiso有限公司的液相層析用IR-60-5/20-U)、0· 50 g石膏、 14.99 g CMC(羧甲基纖維素)1110 (Daicel化學(xué)工業(yè)有限公司)的2%水溶液、和O.1 g含錳的硅酸鋅添加入4. 79 g水與6. 51 g乙醇的混合溶液中，一邊接受超聲波一邊充分?jǐn)嚢瑁?而獲得漿料。
(涂布)使用安裝有隔板的TLC板制作用涂布器，將這些漿料均勻地涂布于玻璃平板的表面上，形成分離劑層，其中，圖1中的Al為2 cm、A2為2. 5 cm、B為10 cm、各層的厚度為150 μ m。填充劑IA的平均粒徑為20 μ m。硅膠的平均粒徑為14. 4 μ m。
(干燥)在空氣流中使已涂布漿料的TLC板干燥，然后用真空泵在抽吸下在60°C進(jìn)行3小時(shí)真空干燥，獲得TLC板，其中，將填充劑IA層是第一分離劑層且硅膠層是第二分離劑層。
實(shí)施例2 :反式均二苯乙烯氧化物(stilbenzene oxide)的光學(xué)拆分的例子當(dāng)將實(shí)施例1中所制作的TLC板的長(zhǎng)度方向設(shè)定為縱方向時(shí)，將約I μ L的反式氧化二苯乙烯(t-SO)的1%乙酸乙酯溶液點(diǎn)樣于離底部約1.5 cm的位置。以樣品的點(diǎn)朝下的方式將TLC板放置于容納含有正己烷和乙醇(體積比9:1)的混合溶劑的洗脫液槽內(nèi)，使樣品在IA分離劑層的長(zhǎng)度方向上展開。
在此第一次展開后，用冷空氣流暫時(shí)干燥TLC板后，使TLC板旋轉(zhuǎn)90°以使IA分離劑層在底部。將TLC板放置于前述洗脫劑槽內(nèi)，利用乙醇使樣品從IA分離劑層進(jìn)一步向娃月父層展開。
在此第二次展開后，用冷空氣流干燥TLC板并使TLC板曝露于紫外線，從而在硅膠層中確認(rèn)提余液成分和萃取成分的點(diǎn)的位置?；诘谝环蛛x劑層中從點(diǎn)施加位置到洗脫液到達(dá)的位置之間的距離、第二分離劑層中在第一展開方向上從樣品點(diǎn)施加位置到特定的點(diǎn)的中心之間的距離，計(jì)算出各點(diǎn)的Rf值。此時(shí)，t-SO的提余液成分的Rf值為O. 67，萃取成分的Rf值為O. 58。
實(shí)施例3 :黃烷酮的光學(xué)拆分的例子將約I μ L黃烷酮(FLV)的1%乙酸乙酯溶液點(diǎn)樣于實(shí)施例1中制作的TLC板上，使用與實(shí)施例2相同的方法進(jìn)行展開。
第二次展開后，用冷空氣流干燥TLC板，并使板曝露于紫外線，從而在硅膠層中確認(rèn)提余液成分和萃取成分的點(diǎn)的位置。如實(shí)施例2 —樣計(jì)算Rf值，得到FLV的提余液成分的Rf值為O. 40，萃取成分的Rf值為O. 29。
實(shí)施例4 :安息香乙醚的光學(xué)拆分的例子將約I μ L安息香乙醚的1%乙酸乙酯溶液點(diǎn)樣于實(shí)施例1中制作的TLC板上，將含有正己烷和乙酸乙酯(體積比9:1)的混合溶劑用作第一次展開中的洗脫液，將乙酸乙酯用作第二次展開中的洗脫液，除此以外使用與實(shí)施例2中相同的方法進(jìn)行展開。
第二次展開后，用冷空氣流干燥TLC板，并使TLC板曝露于紫外線，從而在硅膠層中確認(rèn)提余液成分和萃取成分的點(diǎn)位置。如實(shí)施例2 —樣計(jì)算Rf值，得到安息香乙醚的提余液成分的Rf值為O. 57，萃取成分的Rf值為O. 30。
實(shí)施例5 :環(huán)己烯巴比妥的光學(xué)拆分的例子將約I μ L環(huán)己烯巴比妥的1%乙酸乙酯溶液點(diǎn)樣于如實(shí)施例1中制作的TLC板上，將含有正己烷和異丙醇(9:1的體積比)的混合溶劑用作第一次展開中的洗脫劑，將異丙醇用作第二次展開中的洗脫劑，除此以外以與實(shí)施例2的方法相同的方法進(jìn)行展開。
在第二次展開后，用冷空氣流干燥TLC板并使板曝露于紫外線，從而在硅膠層中確認(rèn)提余液成分和萃取成分的點(diǎn)的位置。如實(shí)施例中的方式計(jì)算Rf值，得到環(huán)己烯巴比妥的提余液成分的Rf值為O. 33，萃取成分的Rf值為O. 21。
實(shí)施例6 :朝格爾堿(Tr5ger’ s base)的光學(xué)拆分的例子將約I μ L朝格爾堿(Tr0ger’ s base) (TB)的1%乙酸乙酯溶液點(diǎn)樣于如實(shí)施例1中一樣制作的TLC板上，使用與實(shí)施例2相同的方法進(jìn)行展開。
第二次展開后，用冷空氣流干燥TLC板并使板曝露于紫外線，從而在硅膠層中確認(rèn)提余液成分和萃取成分的點(diǎn)的位置。如實(shí)施例2中一樣計(jì)算Rf值，得到TB的提余液成分的Rf值為O. 56 ，萃取成分的Rf值為O. 41。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例對(duì)粘合劑的添加量的研究以每100質(zhì)量份填充劑CHIRALPAK AD (來自Daicel化學(xué)工業(yè)有限公司，相同公司的注冊(cè)商標(biāo))(也稱為“填充劑AD”)和前述硅膠，基于下述表I中所記載的質(zhì)量份數(shù)來使用石膏和CMC 1110。使用不同的粘合劑添加量來制作TLC板I至6。使用由此制作的TLC板I 至6，將約I μ L各樣品(即蘇丹紅I和對(duì)氨基偶氮苯)的1%乙酸乙酯溶液點(diǎn)樣于當(dāng)將TLC 板長(zhǎng)度方向設(shè)定為縱方向時(shí)離底部約1. 5 cm的位置。以樣品點(diǎn)朝下的方式將TCL板放置于容納乙腈的洗脫劑槽內(nèi)，使樣品在TLC板的長(zhǎng)度方向上展開；測(cè)定TLC板長(zhǎng)度方向上從點(diǎn)施加位置到點(diǎn)前沿的距離Wl、以及在與前述長(zhǎng)度方向垂直的方向上從點(diǎn)施加位置到前述點(diǎn)前沿的距離W2 ;并確定W2與Wl之比(W2/W1)。就W2而言，將點(diǎn)施加位置設(shè)定為零；將朝第二分離劑層的一側(cè)設(shè)為正值；將第一分離劑層的相反的TLC板的端側(cè)設(shè)為負(fù)值?；谶@一事實(shí)蘇丹紅和對(duì)氨基偶氮苯具有其特征性固有的顏色，所以，可通過視覺檢查來進(jìn)行第一分離劑層中的點(diǎn)檢測(cè)。將結(jié)果示于表I。表I中的結(jié)果證明，通過改變石膏和CMC1110的添加量，可以控制W2/W1。
表I
權(quán)利要求
1.一種樣品檢測(cè)方法，其使用具有第一分離劑層以及與第一分離劑層相鄰接的第二分離劑層的薄層層析板，并檢測(cè)對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)性的樣品中的成分； 所述方法包括 在第一分離劑層中使樣品朝向沿第一分離劑層與第二分離劑層的邊界的方向展開的步驟； 在至少第二分離劑層中使流動(dòng)相干燥的步驟； 改變所述薄層層析板的方向并使第一分離劑層中的點(diǎn)展開入第二分離劑層的步驟；和 利用曝露于紫外線或用著色劑進(jìn)行顯色處理來檢測(cè)移動(dòng)入第二分離劑層的點(diǎn)的步驟； 其中 第一分離劑層由具有所述光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑所形成， 第二分離劑層是由具有不同于所述第一分離劑層的所述光學(xué)響應(yīng)的光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑所形成，和 所述成分的光學(xué)響應(yīng)與所述第一分離劑的光學(xué)響應(yīng)相同。
2.如權(quán)利要求1所述的樣品檢測(cè)方法，其中，第一分離劑為用于光學(xué)異構(gòu)體的分離劑。
3.如權(quán)利要求2所述的樣品檢測(cè)方法，其中，所述用于光學(xué)異構(gòu)體的分離劑含有包含多糖以及用于取代多糖的羥基或氨基的全部或一部分的芳香族酯基、芳香族氨甲酰基、芳香族醚基或羰基的多糖衍生物。
4.一種薄層層析板，其具有第一分離劑層，所述第一分離劑層的展開方向?yàn)榈谝环较?，和在與所述第一方向垂直的第二方向上的第二分離劑層，所述第二分離劑層與第一分離劑層相鄰接，其中 所述第一分離劑層是由對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑所形成； 所述第二分離劑層由具有不同于所述第一分離劑的光學(xué)響應(yīng)的光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑所形成；和 當(dāng)在第一分離劑層中使點(diǎn)在第一方向上展開時(shí)，第一分離劑層中在第二方向上的點(diǎn)移動(dòng)距離W2與第一分離劑層中在第一方向上的點(diǎn)移動(dòng)距離Wl之比為不超過±0. 5。
5.如權(quán)利要求4所述的薄層層析板，其中，所述第一分離劑為用于光學(xué)異構(gòu)體的分離劑。
6.如權(quán)利要求5所述的薄層層析板，其中，所述光學(xué)異構(gòu)體的分離劑含有多糖以及用于取代多糖的羥基或氨基的一部分或全部的芳香族酯基、芳香族氨甲?；?、芳香族醚基或擬基。
7.一種制作薄層層析板的方法，所述薄層層析板具有第一分離劑層以及與第一分離劑層相鄰接的第二分離劑層， 所述方法包括 通過將含有涂布溶劑和對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)的第一分離劑的第一漿料涂布于支持體上來形成第一分離劑層的步驟；和 通過將含有涂布溶劑和具有不同于第一分離劑的所述光學(xué)響應(yīng)的光學(xué)響應(yīng)的第二分離劑的第二漿料涂布于支持體上來形成與所述第一分離劑層相鄰接的第二分離劑層的步驟，其中 對(duì)于第一和第二漿料，使用相同種類的涂布溶劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種能夠通過光學(xué)性響應(yīng)通過分離劑層來檢測(cè)樣品中的成分的分離的薄層層析板及薄層層析法，所述分離劑層不能檢測(cè)樣品中成分的分離。對(duì)于對(duì)紫外線或著色劑具有光學(xué)響應(yīng)性的樣品，本發(fā)明使用具有與樣品相同的光學(xué)響應(yīng)性的第一分離劑層以及與第一分離劑層相鄰接而并列設(shè)置的、具有不同于前述光學(xué)響應(yīng)性的光學(xué)響應(yīng)性的第二分離劑層的薄層層析板；實(shí)施樣品在第一分離劑層中的展開；然后實(shí)施點(diǎn)從第一分離劑層向第二分離劑層的進(jìn)一步展開，通過曝露于紫外線輻射或用著色劑顯色處理在第二分離劑層中對(duì)點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。此外，使第一分離劑層中的展開軸保持大致垂直，并且通過調(diào)整粘合劑的混合比來防止發(fā)生邊界面處的點(diǎn)變寬現(xiàn)象。
文檔編號(hào)G01N30/93GK103026224SQ20118002630
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月27日
發(fā)明者蓑田稔治, 池田勇, 能勢(shì)悟, 竹谷德朗, 岡本一郎 申請(qǐng)人:株式會(huì)社大賽璐