專利名稱：毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測醬油中各種防腐劑含量的方法，尤其是一種毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法。
背景技術(shù)：
醬油是一種富含營養(yǎng)、味道鮮美的調(diào)味品，受到微生物的污染時可能發(fā)生腐敗變質(zhì)，因此，生產(chǎn)廠家會添加一些食用防腐劑來抑制可能形成的腐敗，在醬油中常用的防腐劑有苯甲酸、山梨酸以及對羥基苯甲酸酯類等。國家標(biāo)準(zhǔn)對防腐劑的限量作了明確規(guī)定，在安全使用范圍內(nèi)，防腐劑對人體無毒副作用，但過量食用對人體有一定毒性。目前有關(guān)的檢測標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 5009. 29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》和GB/T5009. 31-2003《食品中對羥基苯甲酸酯類的測定》，如果直接采用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行醬油中各種防腐劑含量的測定，一份樣品要用兩種方法分別進(jìn)行預(yù)處理和采用不同的儀器條件，費時費力。而且經(jīng)實踐發(fā)現(xiàn)， 在直接采用該標(biāo)準(zhǔn)對醬油類產(chǎn)品進(jìn)行檢測時，加標(biāo)回收率較低，測定結(jié)果不穩(wěn)定，并且在對較為濃稠的老抽類樣品進(jìn)行萃取時還容易因乳化現(xiàn)象的發(fā)生而難以分層進(jìn)行后續(xù)操作。因此直接采用該標(biāo)準(zhǔn)中的氣相色譜法對醬油類產(chǎn)品特別是老抽類樣品進(jìn)行檢測時，精密度與準(zhǔn)確度均不夠理想，這是由于采用外標(biāo)法定量，無論是樣品處理還是儀器條件都可能導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生，繁瑣的測定步驟增加了操作誤差的發(fā)生幾率，上機(jī)測定更是要求必須具有相當(dāng)高的儀器性能與配置，例如需配置自動進(jìn)樣器來確保準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量等。

發(fā)明內(nèi)容
為克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，該方法可同時測定醬油中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸以及尼泊金酯類等防腐劑的含量，操作簡便易行，能有效減少操作誤差、以及儀器條件等因素對測定結(jié)果的影響，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)措施來實現(xiàn)一種毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其包括以下步驟(1)稱取醬油樣品；(2)在樣品中加入內(nèi)標(biāo)物溶液，然后依次進(jìn)行酸化、乙醚提取，凈化除水和濃縮處理，得到樣品溶液；(3)取步驟O)中的樣品溶液進(jìn)行氣相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)；(4)將步驟(3)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與預(yù)定防腐劑標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)比對，得到醬油中各種防腐劑的含量。本發(fā)明步驟(1)中可根據(jù)不同醬油類別稱取所述的醬油樣品的用量。其中，生抽類醬油推薦稱取量在0. 5 2. 5g之間。由于老抽類醬油采用乙醚提取時，易出現(xiàn)乳化，導(dǎo)致無法達(dá)到有效提取防腐劑的目的，因而在本發(fā)明所述的步驟(1)中如樣品是老抽類醬油時，需對老抽類醬油進(jìn)行預(yù)處理在老抽類醬油樣品中加入氯化鈉溶液稀釋1 2. 5倍。本發(fā)明所述的步驟( 推薦使用以下具體操作將醬油樣品置于具塞容器中，準(zhǔn)確加入0. 3 0. 7ml內(nèi)標(biāo)溶液，再加入0. 3 0. 7ml鹽酸溶液，混勻，用20 40ml乙醚分 2次萃取，合并兩次上層溶液；加入3 5ml硫酸氫鈉溶液，洗滌凈化，然后去除下層溶液， 然后向上層溶液中加入3 7g無水硫酸鈉除水后，吹氮濃縮，再用丙酮稀釋，備用。所述的具塞容器可以采用具塞量筒、具塞試管或比色管。本發(fā)明所述的步驟C3)推薦的色譜條件為所述的毛細(xì)管色譜柱采用極性毛細(xì)管色譜柱或非極性毛細(xì)管色譜柱，要求能對各待測組分與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)同時實現(xiàn)良好分離；恒溫 (柱溫約200 220°C)或適當(dāng)?shù)某绦蛏郎鼐?；恒流或恒壓均可，手動或自動進(jìn)樣均可，載氣為高純氮氣。所述的極性毛細(xì)管色譜柱可以采用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M等，且長度在30m 以上。在本發(fā)明中所述的內(nèi)標(biāo)物溶液推薦采用脂肪酸酯的丙酮溶液，要求內(nèi)標(biāo)峰位于待測組分峰之間，無覆蓋。選用酯類物質(zhì)的丙酮溶液作內(nèi)標(biāo)比用酸類物質(zhì)更穩(wěn)定，在冷藏條件下可保存較長時間不變質(zhì)。所述的脂肪酸酯的丙酮溶液濃度在2 3g/L之間。所述的脂肪酸酯可以是碳數(shù)為16 M的脂肪酸甲酯或其它酯類的丙酮溶液，本發(fā)明所述步驟中預(yù)定防腐劑標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)是通過用加有內(nèi)標(biāo)物溶液的0. 1 2. Og/L的各種待測防腐劑組分的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在設(shè)定的氣相色譜條件下測得防腐劑的校正因子。本發(fā)明所述的乙醚必須經(jīng)過碘化鉀溶液檢查，不得含有過氧化物，否則容易造成山梨酸測定結(jié)果偏低。本發(fā)明的優(yōu)點在于采用內(nèi)標(biāo)法，有效減少了因進(jìn)樣量、溶劑損失、待測樣品的濃度等各種因素造成的誤差，即使測定條件略有變化也不會對結(jié)果產(chǎn)生影響，若采用外標(biāo)法定量，則對儀器用具和人員操作的要求很高。該方法操作簡便，利用一般的檢測儀器與用具，就能獲得較為理想的測定結(jié)果，樣品預(yù)處理時間也比標(biāo)準(zhǔn)方法大大縮短，成本相對較低，易于推廣。而且極性固定相恒溫分離的條件還能用于對食用植物油的脂肪酸組成常規(guī)分析，可在同一臺儀器上實現(xiàn)對兩個檢測項目的交替測定，提高了儀器的利用率。


圖1是本發(fā)明實施例一的毛細(xì)管氣相色譜色譜圖。圖2是本發(fā)明實施例二的毛細(xì)管氣相色譜色譜圖。
具體實施例方式為了更好地理解發(fā)明的實質(zhì)，下面用實施例來詳細(xì)說明發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實施例一1.色譜條件配置FID檢測器的氣相色譜儀；
毛細(xì)管色譜柱為DB-WAX (30m X0. 32mm X0. 25 μ m)柱溫210°C，汽化室與檢測室均為230°C手動進(jìn)樣Ι.ΟμΙ載氣為高純氮氣，柱頭壓0.07Mpa，分流比100 12.校正因子測定配制標(biāo)準(zhǔn)溶液精確稱取苯甲酸、山梨酸各0. 2g，用丙酮溶解并定容至IOOml ；配制內(nèi)標(biāo)溶液精確稱取十七烷酸甲酯0. 2g，用丙酮溶解并定容至IOOml ；配制標(biāo)準(zhǔn)使用溶液取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液與內(nèi)標(biāo)溶液混合，內(nèi)標(biāo)濃度為0. 4g/L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度則分別為0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Og/L。在上述色譜條件下，用系列標(biāo)準(zhǔn)使用溶液進(jìn)樣，以峰面積比和濃度比繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得苯甲酸與山梨酸的校正因子，建立相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)分析方法。3.樣品處理稱取老抽樣品1. Og,精確至0. OOlg,再加入1. 5g氯化鈉溶液O00g/L)，置于25ml 具塞試管中，準(zhǔn)確加入0. 5ml內(nèi)標(biāo)溶液，再加入0. 5ml鹽酸溶液(1+1)，混勻，用30ml乙醚分 2次萃取，每次振搖lmin，將上層溶液并入另一個50ml具塞試管中。加入細(xì)1硫酸氫鈉溶液O0g/L)，充分振蕩lmin，用尖嘴吸管吸除下層，重復(fù)此步驟一次。加入5g無水硫酸鈉， 充分振蕩，將溶液傾入圓底燒瓶中，置于45°C水浴上吹氮濃縮至約0. 5ml，沿壁加入2. Oml 丙酮，移入2ml樣品瓶中，供上機(jī)用。4.樣品測定在與標(biāo)準(zhǔn)使用溶液相同的色譜條件下，選取相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)分析方法，進(jìn)樣測定，從色譜工作站讀取測定結(jié)果，如圖1所示。實施例二1.色譜條件配置FID檢測器的氣相色譜儀；毛細(xì)管色譜柱為DB-WAX (30m X0. 32mm X0. 25 μ m)柱溫210°C，汽化室與檢測室溫為230°C手動進(jìn)樣0. 5 μ 1載氣為高純氮氣，柱頭壓0.07Mpa，分流比100 12.校正因子測定配制標(biāo)準(zhǔn)溶液精確稱取苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯各0. 2g，用丙酮溶解并定容至100ml ；配制內(nèi)標(biāo)溶液精確稱取十七烷酸甲酯0. 2g，用丙酮溶解并定容至100ml ；配制標(biāo)準(zhǔn)使用溶液取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液與內(nèi)標(biāo)溶液混合，內(nèi)標(biāo)濃度為0. 4g/L，苯甲酸與山梨酸的濃度則分別為0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0g/L，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯的濃度則分別為0. 05,0. 1,0. 15,0. 2,0. 25g/L。在上述色譜條件下，用系列標(biāo)準(zhǔn)使用溶液進(jìn)樣，以峰面積比和濃度比繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯的校正因子，建立相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)分析方法。3.樣品處理
稱取生抽樣品2. 5g，精確至0. OOlg，置于25ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入0. 5ml內(nèi)標(biāo)溶液，再加入0. 5ml鹽酸溶液(1+1)，混勻，用25ml乙醚分2次萃取，每次振搖lmin，將上層溶液并入另一個50ml具塞試管中。加入5ml硫酸氫鈉溶液O0g/L)，充分振蕩lmin，用尖嘴吸管吸除下層，重復(fù)此步驟一次。加入5g無水硫酸鈉，充分振蕩，將溶液傾入圓底燒瓶中， 置于45°C水浴上吹氮濃縮至約0. 5ml，沿壁加入2. Oml丙酮，移入2ml樣品瓶中，供上機(jī)用。4.樣品測定在與標(biāo)準(zhǔn)使用溶液相同的色譜條件下，選取相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)分析方法，進(jìn)樣測定，從色譜工作站讀取測定結(jié)果，如圖2所示。以上對本發(fā)明所提供的方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明的原理及實施方式進(jìn)行了闡述，以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實施方式
及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1.一種毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，其包括以下步驟(1)稱取醬油樣品；(2)在樣品中加入內(nèi)標(biāo)物溶液，然后依次進(jìn)行酸化、乙醚提取，凈化除水和濃縮處理，得到樣品溶液；(3)取步驟O)中的樣品溶液進(jìn)行氣相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)；(4)將步驟(3)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與預(yù)定防腐劑標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)比對，得到醬油中各種防腐劑的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的步驟(1)中根據(jù)不同醬油類別稱取所述的醬油樣品的用量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的步驟(1)中的醬油是老抽類醬油時，需對老抽類醬油進(jìn)行預(yù)處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的預(yù)處理為在老抽類醬油樣品中加入氯化鈉溶液稀釋1 2. 5倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的步驟( 的具體操作將醬油樣品置于具塞容器中，準(zhǔn)確加入0. 3 0. 7ml內(nèi)標(biāo)溶液，再加入0. 3 0. 7ml鹽酸溶液，混勻，用20 40ml乙醚分2次萃取，合并兩次上層溶液；加入3 5ml硫酸氫鈉溶液，洗滌凈化，然后去除下層溶液，然后向上層溶液中加入3 7g無水硫酸鈉除水后，吹氮濃縮，再用丙酮稀釋，備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的步驟(3)的色譜條件為所述的毛細(xì)管色譜柱采用極性毛細(xì)管色譜柱或非極性毛細(xì)管色譜柱，要求能對各待測組分與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)同時實現(xiàn)良好分離；恒溫或適當(dāng)?shù)某绦蛏郎?；恒流或恒壓，手動或自動進(jìn)樣，載氣為高純氮氣。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的極性毛細(xì)管色譜柱采用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M，且長度在30m 以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的步驟O)中的內(nèi)標(biāo)物溶液采用脂肪酸酯的丙酮溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的脂肪酸酯的丙酮溶液濃度在2 3g/L之間。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特征是，所述的脂肪酸酯為碳數(shù)為16 M的脂肪酸甲酯。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其包括以下步驟(1)稱取醬油樣品；(2)在樣品中加入內(nèi)標(biāo)物溶液，然后依次進(jìn)行酸化、乙醚提取，凈化除水和濃縮處理，得到樣品溶液；(3)取步驟(2)中的樣品溶液進(jìn)行氣相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)；(4)將步驟(3)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與預(yù)定防腐劑標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)比對，得到醬油中各種防腐劑的含量。該方法可同時測定醬油中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸以及尼泊金酯類等防腐劑的含量，操作簡便易行，能有效減少操作誤差、以及儀器條件等因素對測定結(jié)果的影響，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
文檔編號G01N30/06GK102323367SQ20111014092
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月27日
發(fā)明者劉占, 張慶宇, 曾亞麗, 李婕, 楊明泉, 樊瑞, 陳穗 申請人:廣東美味鮮調(diào)味食品有限公司