專利名稱：一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法
一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，特別涉及一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法。
背景技術(shù)：
如圖1所示，比阿培南是一種新型甲基碳青霉烯類抗生素，為非典型的 β -內(nèi)酰胺類，通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成而產(chǎn)生抗菌作用，可耐受多種β -內(nèi)酰胺酶的水解作用，具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，其抑制綠膿桿菌和厭氧菌的活性比亞胺培南強(qiáng)2 4倍，抑制耐藥綠膿桿菌活性比美羅培南強(qiáng)4 8倍，對不動(dòng)桿菌、厭氧菌比頭孢他啶有效。其制劑為注射用比阿培南，2003年在日本批準(zhǔn)上市，臨床適用于治療由敏感細(xì)菌引起的敗血癥、肺炎、肺部膿腫、慢性呼吸道疾病引起的二次感染、難治性膀胱炎、腎盂腎炎、腹膜炎、婦科附件炎等；使用該制劑有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)過敏反應(yīng)，這些不良反應(yīng)與注射用比阿培南中存在的比阿培南聚合物有關(guān)，為了減少使用者出現(xiàn)過敏反應(yīng)，需要減少使用含有過量比阿培南聚合物的比阿培南產(chǎn)品，如何判斷比阿培南產(chǎn)品含有多少比阿培南聚合物就是本發(fā)明的目的。因比阿培南為全合成抗生素類產(chǎn)品，由于空間位阻效應(yīng)，比阿培南聚合物多為二聚物；如圖2Α和圖2Β所示，比阿培南二聚物包括比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，能快速判斷比阿培南原料中含有比阿培南二聚物的量。上述技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案解決一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，其特征在于，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加水溶解稀釋；2)按照以下色譜條件對上述溶液進(jìn)行分離定位流動(dòng)相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min，色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)將色譜圖中比阿培南二聚物的物質(zhì)峰面積與峰總面積之比得出比阿培南中比阿培南二聚物的含量。在所述三氟乙酸-乙腈溶液中，三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。所述流速為lml/min。本方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，能夠有迅速判斷比阿培南中比阿培南的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B，保證比阿培南的安全性。本發(fā)明同時(shí)還提供一種比阿培南二聚物的制備方法，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加體積濃度為0.05%三氟乙酸溶液溶解稀釋，于室溫放置 1-2小時(shí)；
2)按照以下色譜條件對上述溶液進(jìn)行分離定位流動(dòng)相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min，色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)收集上述分離物中的比阿培南二聚物。在所述三氟乙酸-乙腈溶液中，三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。所述流速為lml/min。本發(fā)明具有優(yōu)點(diǎn)各峰之間分離度良好，無干擾雜質(zhì)產(chǎn)生，破壞條件溫和，便于收集制備比阿培南二聚物。

圖1為比阿培南的分子結(jié)構(gòu)式圖；圖2A為比阿培南二聚物A的分子結(jié)構(gòu)式圖；圖2B為比阿培南二聚物B的分子結(jié)構(gòu)式圖；圖3為比阿培南溶液的色譜圖；圖4A為比阿培南二聚物A的紫外光譜圖；圖4B為比阿培南二聚物B的紫外光譜圖。
具體實(shí)施方式實(shí)施例一在判斷比阿培南原料中含有比阿培南二聚物的量之前，本設(shè)計(jì)人通過以下方法在比阿培南溶液中制備比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B及確認(rèn)1)制備系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液取比阿培南樣品約O.lg，加IOml體積濃度為 0. 05%的三氟乙酸溶液溶解后，于室溫放置2小時(shí)(此時(shí)，溶液中存在了比阿培南二聚物A 和比阿培南二聚物B)，再取3ml上述溶液至20ml量瓶中，加水稀釋至20ml刻度，搖勻，備用；[選擇0. 05%三氟乙酸溶液為破壞溶劑(pH值約為2. 4)，在此條件下，比阿培南更易于聚合，能夠形成比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B ；選擇在室溫條件下放置，未產(chǎn)生干擾雜質(zhì)，各峰之間分離度良好；時(shí)間控制在1 2小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生的二聚物量均滿足定位要求， 放置時(shí)間過長，其中一個(gè)二聚物不穩(wěn)定，含量降低。]2)確認(rèn)如圖3所示，采用島津20A型高效液相色譜儀，對系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液進(jìn)行分離， 具體色譜條件為填充劑十八烷基鍵合硅膠，流動(dòng)相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液(三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8)，流速l.Oml/min，色譜柱C18，檢測波長 318nm，等度洗脫；再通過質(zhì)譜儀對上述分離物進(jìn)行檢測確認(rèn)，存在兩個(gè)m/z均為701的物質(zhì)，分別是比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B。因此，我們可以通過以下方法制備比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B 1)取比阿培南樣品，加體積濃度為0.05%的三氟乙酸溶液溶解后，于室溫放置2 小時(shí)備用；2)按照以下色譜條件對上述溶液進(jìn)行分離定位
流動(dòng)相體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸-乙腈溶液，流速1. Oml/min,色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)收集上述分離物中的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B。同時(shí)，通過質(zhì)譜儀的確認(rèn)，我們可以知道按上述色譜條件進(jìn)行分離過程中，那兩個(gè)時(shí)間段的物質(zhì)峰是比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B ；且由圖3可知，按上述色譜條件進(jìn)行分離，各峰之間分離度良好，分析時(shí)間短，無干擾雜質(zhì)產(chǎn)生，破壞條件溫和，滿足測定需要。因此，按上述色譜條件對比阿培南溶液進(jìn)行分離，只要在相應(yīng)時(shí)間出現(xiàn)物質(zhì)峰，就認(rèn)為比阿培南溶液存在相應(yīng)的比阿培南二聚物，然后根據(jù)峰峰面積計(jì)算出比阿培南中含有比阿培南二聚物的量。判斷比阿培南原料中含有比阿培南二聚物的量供試品溶液取比阿培南樣品約15mg，置IOml量瓶中，加水溶解并稀釋至IOml刻度，搖勻，備用；該供試品溶液的作用是再次確認(rèn)比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B的存在。對照溶液取上述供試品溶液anl，置IOOml瓶量中，加水溶解并稀釋至IOOml刻度，搖勻，備用；該溶液的作用是用于計(jì)算比阿培南二聚物的含量。采用島津20A型高效液相色譜儀，對供試品溶液和對照溶液分別進(jìn)行分離定位， 具體色譜條件為填充劑十八烷基鍵合硅膠，流動(dòng)相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液(三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8)，流速1. Oml/min，色譜柱C18，檢測波長 318nm，等度洗脫。經(jīng)檢測，在色譜過程中的相應(yīng)時(shí)間段沒有出現(xiàn)比阿培南二聚物A的物質(zhì)峰和比阿培南二聚物B的物質(zhì)峰；因此，我們認(rèn)為此批比阿培南樣品沒含有比阿培南二聚物A和比阿
培南二聚物B。對于檢測波長的選擇如圖4A和圖4B所示，通過采用二極管陣列檢測器檢測的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B的紫外光譜圖知，比阿培南二聚物A約在318nm的波長處有最大吸收，比阿培南二聚物B約在367nm的波長處有最大吸收，在318nm波長處也有較大吸收。且在318nm 波長下，比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B的響應(yīng)值最大，靈敏度最高。綜合考慮比阿培南二聚物的最大吸收波長和檢測的靈敏度，選擇318nm為檢測波長。實(shí)施例二取比阿培南樣品約2g，加2ml的體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸溶液濕潤后，于 80°C烘箱中烘干，備用。供試品溶液取上述烘干物約15mg，置IOml量瓶中，加水溶解并稀釋至IOml刻
度，搖勻，備用。對照溶液取上述供試品溶液anl，置IOOml瓶量中，加水溶解并稀釋至IOOml刻
度，搖勻，備用。采用島津20A型高效液相色譜儀，對上述供試品溶液和對照溶液進(jìn)行分離測定， 具體色譜條件為填充劑十八烷基鍵合硅膠，流動(dòng)相體積濃度為0. 05%的三氟乙酸-乙腈溶液(三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8)，流速1. Oml/min，色譜柱C18，檢測波長 318nm，等度洗脫。
經(jīng)檢測，在色譜過程的相應(yīng)時(shí)間段均出現(xiàn)比阿培南二聚物A的物質(zhì)峰和比阿培南二聚物B的物質(zhì)峰，根據(jù)峰峰面積比計(jì)算，在烘干物中，阿培南二聚物A的含量為0. 05%，比阿培南二聚物B的含量為0.35%。本發(fā)明不局限于上述實(shí)施例，基于上述實(shí)施例的、未做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的簡單替換， 應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明揭露的范圍。
權(quán)利要求
1.一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，其特征在于，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加水溶解稀釋；2)按照以下色譜條件對上述溶液進(jìn)行分離定位流動(dòng)相體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min,色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)將色譜圖中比阿培南二聚物的物質(zhì)峰面積與峰總面積之比得出比阿培南中比阿培南二聚物的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量分析方法，其特征在于，在所述三氟乙酸-乙腈溶液中， 三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量分析方法，其特征在于，所述流速為lml/min。
4.一種比阿培南二聚物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加體積濃度為0.05%三氟乙酸溶液溶解稀釋，于室溫放置1-2小時(shí)；2)按照以下色譜條件對上述溶液進(jìn)行分離定位流動(dòng)相體積濃度為0. 05 %的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0. 8-1. 2ml/min,色譜柱 C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)收集制備上述分離物中的比阿培南二聚物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，在所述三氟乙酸-乙腈溶液中，三氟乙酸與乙腈的體積比=92 8。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述流速為lml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種比阿培南中比阿培南二聚物的定量分析方法，其特征在于，包括以下步驟1)取比阿培南樣品，加水溶解稀釋；2)按照以下色譜條件對上述溶液進(jìn)行分離定位流動(dòng)相體積濃度為0.05％的三氟乙酸-乙腈溶液，流速0.8-1.2ml/min，色譜柱C18，檢測波長318nm，等度洗脫；3)將色譜圖中比阿培南二聚物的物質(zhì)峰面積與峰總面積之比得出比阿培南中比阿培南二聚物的含量。本方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，能夠有迅速判斷比阿培南中比阿培南的比阿培南二聚物A和比阿培南二聚物B，保證比阿培南的安全性。
文檔編號G01N30/02GK102207492SQ201110065098
公開日2011年10月5日 申請日期2011年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月17日
發(fā)明者劉俊華, 張莉, 杜青波, 王德剛, 赫渦濤, 鐘雅妮 申請人:珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司