專(zhuān)利名稱(chēng)：應(yīng)用非粒子化學(xué)發(fā)光試劑的免疫分析的制作方法
應(yīng)用非粒子化學(xué)發(fā)光試劑的免疫分析背景
本發(fā)明涉及能夠產(chǎn)生信號(hào)的 試劑，其在用于測(cè)定樣品中分析物的方法、組合物和試劑盒中應(yīng)用。臨床診斷領(lǐng)域在近年來(lái)已得到廣泛擴(kuò)展，關(guān)于可被容易和準(zhǔn)確地測(cè)定的目的材料的種類(lèi)以及用于所述測(cè)定的方法也得到擴(kuò)展。大多數(shù)方法牽涉與樣品中一種或多種分析物的存在和/或數(shù)量有關(guān)的信號(hào)的產(chǎn)生。發(fā)光化合物，如熒光化合物和化學(xué)發(fā)光化合物，由于它們發(fā)射光的能力在分析領(lǐng)域中具有廣泛應(yīng)用。粒子例如膠乳粒子、脂質(zhì)體等已經(jīng)被應(yīng)用于分析中。已將吸收性染料和賦予熒光或化學(xué)發(fā)光性質(zhì)的染料摻入粒子中。在一個(gè)特定方法中，使用包含一種或多種金屬螯合物如例如鑭系元素螯合物的粒子以產(chǎn)生信號(hào)。美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，340，716和6，251，581中描述了誘導(dǎo)發(fā)光免疫分析，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。在一個(gè)方法中，分析使用摻入光敏劑的粒子和摻入化學(xué)發(fā)光化合物的標(biāo)記粒子。標(biāo)記粒子與結(jié)合配偶體偶聯(lián)，所述配偶體能夠與分析物結(jié)合以形成復(fù)合物，或與其它部分結(jié)合以形成與分析物的存在有關(guān)的復(fù)合物。如果分析物存在，光敏劑和化學(xué)發(fā)光化合物會(huì)緊密接近。當(dāng)兩個(gè)標(biāo)記緊密接近時(shí)，光敏劑產(chǎn)生單線態(tài)氧并激活化學(xué)發(fā)光化合物。被激活的化學(xué)發(fā)光化合物隨后產(chǎn)生光。產(chǎn)生的光的數(shù)量與形成的復(fù)合物的數(shù)量相關(guān)，形成的復(fù)合物的數(shù)量進(jìn)而與存在的分析物數(shù)量相關(guān)。在一個(gè)特定方法中，化學(xué)發(fā)光粒子包含一種或多種金屬螯合物，如例如鑭系元素螯合物。在誘導(dǎo)發(fā)光方法的一個(gè)變體中，應(yīng)用粒子支持體，其包含(a)能夠在照射后產(chǎn)生單線態(tài)氧的光敏劑，和(b)能夠被單線態(tài)氧激活的化學(xué)發(fā)光化合物。該方法使得能夠產(chǎn)生延遲發(fā)光，這可以在照射支持體后實(shí)現(xiàn)。該方法應(yīng)用于測(cè)定懷疑含有分析物的介質(zhì)中的分析物。一種方法包含對(duì)懷疑含有分析物的介質(zhì)實(shí)施以下條件，在該條件下，結(jié)合配偶體的復(fù)合物有關(guān)分析物的存在而形成；和通過(guò)使用具有化學(xué)發(fā)光和光敏劑性質(zhì)的粒子組合物作為標(biāo)記來(lái)測(cè)定是否形成了復(fù)合物。在光敏劑性質(zhì)激活后，單線態(tài)氧產(chǎn)生并激活化學(xué)發(fā)光性質(zhì)。這樣的組合物和方法描述在美國(guó)專(zhuān)利5，709，994號(hào)中，其相關(guān)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。概沭
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是用于測(cè)定在懷疑包含分析物的樣品中分析物的存在和/或數(shù)量的化學(xué)發(fā)光試劑。該化學(xué)發(fā)光試劑是非粒子的，并且包含對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體以及包含烯烴化合物和金屬螯合物的化學(xué)發(fā)光組合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是用于測(cè)定在懷疑包含分析物的樣品中分析物的存在和/或數(shù)量的方法。提供了包含樣品、如上所述的化學(xué)發(fā)光試劑和能夠產(chǎn)生單線態(tài)氧的敏化劑試劑的聯(lián)合物。對(duì)該聯(lián)合物實(shí)施用于將分析物與對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體結(jié)合的條件。敏化劑得以激活并且化學(xué)發(fā)光組合物產(chǎn)生的發(fā)光數(shù)量得以檢測(cè)，其中發(fā)光數(shù)量與樣品中分析物的數(shù)量相關(guān)。附圖簡(jiǎn)述


圖1是用于生產(chǎn)依照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑的示意圖描述。
圖2是描繪使用依照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行TSH分析的校準(zhǔn)曲線的圖。 圖3是使用依照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行TSH分析的結(jié)果的表格描述，并顯示了在校準(zhǔn)器之間獲得的信號(hào)的分離。圖4是描繪依照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑的穩(wěn)定性研究結(jié)果的圖。圖5是描繪依照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑的穩(wěn)定性研究結(jié)果的圖。具體實(shí)施方案詳述一般論沭
本發(fā)明方法和試劑的實(shí)施方案涉及化學(xué)發(fā)光試劑，其用于測(cè)定在懷疑含有分析物的樣品中分析物的存在和/或數(shù)量。試劑是非粒子的，并且包含對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體以及包含烯烴化合物和金屬螯合物的化學(xué)發(fā)光組合物。依照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑在含水介質(zhì)例如含水分析介質(zhì)中顯示良好的溶解性。非粒子學(xué)發(fā)光試劑具有增強(qiáng)的穩(wěn)定性以用于檢測(cè)分析物的分析中；此外，該試劑對(duì)分析物的濃度變化顯示良好的信號(hào)反應(yīng)。當(dāng)應(yīng)用于分析中時(shí)，按照本發(fā)明實(shí)施方案的非粒子化學(xué)發(fā)光試劑在含水分析介質(zhì)中可溶并提供包括產(chǎn)生的信號(hào)的準(zhǔn)確性和靈敏度以及穩(wěn)定性的最大化性能。在醫(yī)療決策范圍低端(low end)的具體分析形式的性能可以通過(guò)監(jiān)測(cè)跨越目的分析物懷疑濃度范圍的校準(zhǔn)器所得到信號(hào)數(shù)量的差異進(jìn)行監(jiān)測(cè)。期望對(duì)于校準(zhǔn)器如例如校準(zhǔn)器Ll和校準(zhǔn)器L2或校準(zhǔn)器L2和校準(zhǔn)器L3的信號(hào)之間有大的差異或分離。例如，可以使用6個(gè)校準(zhǔn)器，其隨意命名為L(zhǎng)1-L6。信噪比可以通過(guò)測(cè)定使用不含分析物的校準(zhǔn)器即隨意命名的校準(zhǔn)器Ll (背景)的信號(hào)數(shù)量和對(duì)于包含大于零的第一已知分析物數(shù)量的校準(zhǔn)器即隨意命名的校準(zhǔn)器L2獲得的信號(hào)數(shù)量來(lái)評(píng)估。這一評(píng)估也可包括測(cè)定使用校準(zhǔn)器Ll的信號(hào)數(shù)量和對(duì)于包含大于零的第二已知分析物數(shù)量的校準(zhǔn)器即隨意命名的校準(zhǔn)器L3的信號(hào)數(shù)量。這樣的評(píng)估也可以包括使用校準(zhǔn)器L4、L5、L6等的這種測(cè)定。本文所論述的實(shí)施方案在對(duì)分析物的分析中比不依據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的試劑提供更好的性能。期望校準(zhǔn)器，例如對(duì)于校準(zhǔn)器Ll和校準(zhǔn)器L2、或校準(zhǔn)器Ll和校準(zhǔn)器L6的信號(hào)之間有大的差異。對(duì)于在醫(yī)療決策范圍內(nèi)良好的靈敏度，在校準(zhǔn)器Ll和校準(zhǔn)器L2之間測(cè)定的信號(hào)中的差異是至少大約50%、至少大約75%、至少大約90%、至少大約100%、至少大約 125%、至少大約150%、至少大約175%、至少大約200%、至少大約225%、至少大約250%、 至少大約275%、至少大約300%、至少大約325%、至少大約350%、至少大約375%、至少大約400 %、至少大約425 %等等。在某些實(shí)施方案中，對(duì)校準(zhǔn)器L6檢測(cè)的信號(hào)是對(duì)校準(zhǔn)器Ll 檢測(cè)的信號(hào)的至少大約10倍、至少大約20倍、至少大約30倍、至少大約40倍、至少大約50 倍、至少大約60倍、至少大約70倍、至少大約80倍、至少大約90倍、至少大約100倍。根據(jù)分析形式，信號(hào)中的差異可以是信號(hào)的增強(qiáng)或者信號(hào)的減弱。一般地，使用校準(zhǔn)器的分析結(jié)果以圖形式呈現(xiàn)，其中將信號(hào)的數(shù)量針對(duì)校準(zhǔn)器的濃度繪圖。按照本發(fā)明的實(shí)施方案，校準(zhǔn)器Ll和校準(zhǔn)器L2之間的線的斜率通常比用不按照本發(fā)明實(shí)施方案的分析試劑得到的結(jié)果陡。而且，從校準(zhǔn)器Ll至校準(zhǔn)器L6的線的斜率通常比用不按照本發(fā)明實(shí)施方案的分析試劑得到的結(jié)果陡。如上所述，本發(fā)明化學(xué)發(fā)光試劑的實(shí)施方案是非粒子的。如此地，將所述試劑與前面提到的利用粒子化學(xué)發(fā)光試劑的已知誘導(dǎo)發(fā)光分析中使用的那些試劑區(qū)分開(kāi)。本發(fā)明化學(xué)發(fā)光試劑顯示含水介質(zhì)中的良好溶解性。在化學(xué)發(fā)光試劑的實(shí)施方案中，將對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體共價(jià)或非共價(jià)地與包含烯烴化合物和金屬螯合物的化學(xué)發(fā)光組合物結(jié)合。
對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體可以通過(guò)鍵與化學(xué)發(fā)光組合物共價(jià)結(jié)合。另一方面，對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體可以通過(guò)連接基團(tuán)與化學(xué)發(fā)光組合物共價(jià)結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，連接基團(tuán)是親水的。術(shù)語(yǔ)“親水的”或“親水性”是指極性部分，并且因而優(yōu)選極性分子和優(yōu)選極性溶劑。親水分子相比于疏水部分具有對(duì)其它親水部分的親和性。親水性程度由連接基團(tuán)中雜原子的數(shù)目來(lái)控制。在某些實(shí)施方案中，連接基團(tuán)是高分子并且可以是聚合的。聚合高分子大致為大約1至大約10，000個(gè)單體單元或更長(zhǎng)長(zhǎng)度、或大約10至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、 或大約100至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約500至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、 或大約1,000至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約2，000至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約3，000至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約5，000至大約10，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約10至大約8，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約100至大約8，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約1，000至大約8，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度、或大約100至大約7，000個(gè)單體單元長(zhǎng)度等。單體單元的數(shù)目取決于單體單元鏈中的原子數(shù)目、單體單元的組成等等。聚合高分子的分子量是至少大約2，000。分子量可以是大約2，000至大約 10，000，000或更高、或大約2，000至大約8，000，000、或大約2，000至大約6，000，000、 或大約2，000至大約5，000，000、或大約2，000至大約4，000，000、或大約2，000至大約3，000，000、或大約2，000至大約2，000，000、或大約2，000至大約1，000，000、或大約5，000至大約10，000，000或更高、或大約5，000至大約8，000，000、或大約5,000 至大約6，000，000、或大約5，000至大約5，000，000、或大約5，000至大約4，000，000、 或大約5，000至大約3，000，000、或大約5，000至大約2，000，000、或大約5，000至大約1，000，000、或大約10，000至大約10，000，000或更高、或大約10，000至大約 8，000，000、或大約10，000至大約6，000，000、或大約10，000至大約5，000，000或大約10，000至大約4，000，000、或大約10，000至大約3，000，000或大約10，000至大約 2，000，000、或大約 10，000 至大約 1,000，000 等。聚合高分子可以是線性的或者支化的或者它們的結(jié)合。線性聚合物包含線性原子鏈，以及支化聚合物包含支化原子鏈。線性鏈的每個(gè)原子可以有一個(gè)或多個(gè)取代基替代氫。 在某些實(shí)施方案中，聚合物可以是包含多于一種類(lèi)型的單體單元的共聚物。聚合物中不同單體單元的關(guān)聯(lián)可為交替的、隨機(jī)的、周期性的等，以及也可以是其中重復(fù)單體單元的嵌段形成聚合物鏈的嵌段共聚物排列。在某些實(shí)施方案中，聚合高分子的單體單元中的一個(gè)或多個(gè)包含碳原子、和一個(gè)或多個(gè)雜原子，如例如氧、硫、氮、磷等。單體單元可以包含大約2至大約50個(gè)原子或更多、或5至大約50個(gè)原子、或大約10至大約50個(gè)原子、或大約20至大約50個(gè)原子、或大約30至大約50個(gè)原子、或大約2至大約40個(gè)原子或更多、或5至大約40個(gè)原子、或大約10至大約40個(gè)原子、或大約20至大約40個(gè)原子、或大約30至大約40個(gè)原子、或大約2至大約30個(gè)原子或更多、或5至大約30個(gè)原子、或大約10至大約30個(gè)原子、或大約20至大約30個(gè)原子，不計(jì)數(shù)氫；并且可以包含2至大約30個(gè)原子、或大約5至大約 30個(gè)原子或更多、或10至大約30個(gè)原子、或大約15至大約30個(gè)原子、或大約20至大約30個(gè)原子、或大約2至大約25個(gè)原子或更多、或5至大約25個(gè)原子、或大約10至大約25個(gè)原子、或大約15至大約25個(gè)原子、或大約20至大約25個(gè)原子、或大約2至大約20個(gè)原子或更多、或5至大約20個(gè)原子、或大約10至大約20個(gè)原子、或大約15至大約20個(gè)原子、或大約2至大約15個(gè)原子、或大約5至大約15個(gè)原子、或大約10至大約 15個(gè)原子的鏈，每一原子獨(dú)立地選自通常由碳、氧、硫、氮和磷構(gòu)成的集合。聚合高分子的單體單元中雜原子的數(shù)目可以是從大約0至大約20、或大約0至大約15、或大約0至大約10、或大約0至大約5、或大約1至大約20、或大約1至大約 15、或大約1至大約10、或大約1至大約5、或大約2至大約20、或大約2至大約15、 或大約2至大約10、或大約2至大約5、或大約5至大約20、或大約5至大約15、或大約5至大約10等的范圍。在某些實(shí)施方案中，雜原子數(shù)目足以使連接基團(tuán)親水并增強(qiáng)按照本發(fā)明實(shí)施方案的化學(xué)發(fā)光試劑的溶解性。就這點(diǎn)而言，聚合高分子的單體單元中的雜原子數(shù)目可以是從大約1至大約20、或大約1至大約15、或大約1至大約10、或大約1 至大約5、或大約2至大約20、或大約2至大約15、或大約2至大約10、或大約2至大約5、或大約5至大約20、或大約5至大約15、或大約5至大約10等的范圍。當(dāng)雜原子存在時(shí)，氧一般作為氧代或氧基存在，與碳、硫、氮或磷結(jié)合；氮一般作為偶氮、氰基、異氰基、硝基，亞硝基，酰氨基或氨基存在，一般與碳、氧、硫或磷結(jié)合；硫類(lèi)似于氧；而磷通常作為膦酸酯和磷酸一酯或二酯與碳、硫、氧或氮結(jié)合。在連接基團(tuán)和待偶聯(lián)分子之間形成共價(jià)鍵中的一般官能度是烷基胺、脒、硫代酰胺、醚、脲、硫脲、胍、偶氮、硫醚以及羧酸酯、硫酸酯和磷酸酯、酰胺和硫酯。多半，當(dāng)連接基團(tuán)具有連接官能度(用于與部分反應(yīng)的官能度)如例如，包括氮和硫類(lèi)似物的非氧代羰基基團(tuán)、磷酸酯基團(tuán)、氨基基團(tuán)、烷化劑例如商代或甲苯磺酰烷基、氧基(羥基或硫類(lèi)似物，巰基)、氧代羰基(例如醛或酮)、或活性烯烴例如乙烯砜、或α -，β-不飽和酯時(shí)，這些官能度與胺基、羧基基團(tuán)、活性烯烴、烷基劑例如溴乙?；Y(jié)合。在胺和羧酸或其氮衍生物或磷酸衍生物連接的情況下，分別形成酰胺、脒和磷酰胺。在硫醇和活性烯烴連接的情況下形成硫醚。在硫醇和烷化劑連接的情況下形成硫醚。在醛和胺在還原條件下連接的情況下形成烷基胺。在酮或醛和羥胺(包括羥基中的氫被取代基替代的其衍生物)連接的情況下形成肟官能度(=N-O-)。在羧酸或磷酸和醇連接的情況下形成酯。在某些實(shí)施方案中，連接基團(tuán)不是高分子，并具有小于大約2000、或者小于大約 1500、或者小于大約1000、或者小于大約500等的分子量。這類(lèi)連接基團(tuán)可以包含大約2到大約200個(gè)原子、或者4到大約150個(gè)原子、或者大約5到大約100個(gè)原子，不計(jì)數(shù)氫原子； 并且可以包含2到大約100個(gè)原子、或者3到大約90個(gè)原子、或者大約4到大約80個(gè)原子、 或者大約5到大約70個(gè)原子等的鏈，每一原子獨(dú)立選自一般由碳、氧、硫、氮和磷組成的集合。這類(lèi)連接基團(tuán)中雜原子的數(shù)目取決于連接基團(tuán)的大小，并且一般是大約0到大約50、1 到大約45或者大約2到大約40的范圍。雜原子可以是上文關(guān)于高分子連接基團(tuán)的論述中指出的形式。在某些實(shí)施方案中，雜原子的數(shù)目足以使連接基團(tuán)親水，并增強(qiáng)根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案得到的組合物的溶解性。在這點(diǎn)上，連接基團(tuán)中雜原子的數(shù)目取決于連接基團(tuán)的大小，并且可以是大約5到大約50、或大約10到大約50、或大約15到大約50、或大約5到大約40、或大約10到大約40、或大約15到大約40、或大約5到大約30、或大約10到大約30、 或大約15到大約30、或大約5到大約25、或大約10到大約25等的范圍。
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作為連接基團(tuán)的聚合高分子可以是天然發(fā)生的材料或者合成構(gòu)建體。在某些實(shí)施方案中，聚合高分子連接基團(tuán)是多肽。舉例說(shuō)明但非限制地，多肽的例子包括蛋白質(zhì)，例如白蛋白、Y-球蛋白、免疫球蛋白、血藍(lán)蛋白、合成多肽等。舉例說(shuō)明但非限制地，其它聚合高分子的例子包括樹(shù)枝狀大分子、聚合羧酸酯(例如聚天冬氨酸、聚谷氨酸、聚半乳糖醛酸、 聚甲基丙烯酸等)、聚合胺(例如聚乙烯胺、聚賴(lài)氨酸、聚谷氨酰胺、聚乙烯亞胺、聚烯丙基胺等)、聚合醚(聚乙二醇或聚環(huán)氧乙烷等)、聚合硫醚(例如聚乙烯硫醚等)、聚合巰基(例如聚半胱氨酸)等等。對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體可以以多種不同的方式與化學(xué)發(fā)光組合物結(jié)合，其中的某些方式在下面以舉例說(shuō)明但非限制的方式進(jìn)行論述。在某些實(shí)施方式中，連接基團(tuán)是蛋白質(zhì)，并且化學(xué)發(fā)光組合物的成分即烯烴化合物和金屬螯合物各自結(jié)合于該蛋白質(zhì)，對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體也與該蛋白質(zhì)結(jié)合。這一實(shí)施方案闡述如下
權(quán)利要求
1.化學(xué)發(fā)光試劑，其用于測(cè)定懷疑含有分析物的樣品中所述分析物的存在和/或數(shù)量，所述試劑是非粒子的、并且包含對(duì)于所述分析物的結(jié)合配偶體和化學(xué)發(fā)光組合物，所述化學(xué)發(fā)光組合物包含烯烴化合物和金屬螯合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體通過(guò)鍵或連接基團(tuán)與所述化學(xué)發(fā)光組合物共價(jià)結(jié)合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體通過(guò)連接基團(tuán)與所述化學(xué)發(fā)光組合物共價(jià)結(jié)合，并且其中所述連接基團(tuán)包含親水性高分子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述烯烴化合物和所述金屬螯合物與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體共價(jià)結(jié)合的所述連接基團(tuán)的同一分子連接。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述烯烴化合物和所述金屬螯合物與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體共價(jià)結(jié)合的所述連接基團(tuán)的分開(kāi)分子連接，并且其中所述連接基團(tuán)可以是相同的或不同的。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述親水性高分子選自多肽、樹(shù)枝狀大分子、 聚羧酸酯、聚胺、聚巰基和聚乙二醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體通過(guò)特異性結(jié)合對(duì)與所述化學(xué)發(fā)光組合物非共價(jià)結(jié)合，其中所述特異性結(jié)合對(duì)的一個(gè)成員與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體連接，并且所述特異性結(jié)合對(duì)的另一個(gè)成員通過(guò)鍵或連接基團(tuán)與所述化學(xué)發(fā)光組合物連接。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體通過(guò)特異性結(jié)合對(duì)與所述化學(xué)發(fā)光組合物非共價(jià)結(jié)合，其中所述特異性結(jié)合對(duì)的一個(gè)成員與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體連接，并且所述特異性結(jié)合對(duì)的另一個(gè)成員通過(guò)連接基團(tuán)與所述化學(xué)發(fā)光組合物連接，其中所述連接基團(tuán)是蛋白質(zhì)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述烯烴化合物和所述金屬螯合物與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體非共價(jià)結(jié)合的所述連接基團(tuán)的同一分子連接。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述烯烴化合物和所述金屬螯合物與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體非共價(jià)結(jié)合的所述連接基團(tuán)的分開(kāi)分子連接，并且其中所述連接基團(tuán)可以是相同的或不同的。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述親水性高分子是蛋白質(zhì)。
12.根據(jù)權(quán)利要求7的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述特異性結(jié)合對(duì)選自(i)小分子和對(duì)于所述小分子的結(jié)合配偶體，以及(ii)大分子和對(duì)于所述大分子的結(jié)合配偶體。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述金屬螯合物的金屬是稀土金屬或VIII 族金屬。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述金屬選自銪、鋱、鏑、釤、鋨和釕。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述金屬螯合物包含選自下列的螯合劑 NHA、BHHT、BHHCT、DPP、TTA、NPPTA、NTA、TOPO、TPPO、BFTA、2, 2- 二甲基-4-全氟丁酰-3- 丁酮(fod)、2，2’ -聯(lián)吡啶(bpy)、聯(lián)吡啶基羧酸、氮雜冠醚、氮雜穴狀配體和三辛基氧化膦以及它們的衍生物。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述烯烴化合物選自二甲基噻吩、二氧雜環(huán)己烯、烯醇醚、烯胺、9-亞烷基蒼耳烷、9-亞烷基-N-9，10 二氫化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光澤精以及它們的衍生物。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)發(fā)光試劑，其中所述金屬是銪，所述螯合劑是BHHCT，并且所述烯烴化合物是二甲基噻吩的羧基衍生物。
18.用于測(cè)定懷疑含有分析物的樣品中所述分析物的存在和/或數(shù)量的方法，所述方法包括(a)在介質(zhì)中以聯(lián)合物方式提供⑴樣品，( )化學(xué)發(fā)光試劑，所述試劑是非粒子的、并且包含與化學(xué)發(fā)光組合物連接的對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體，所述化學(xué)發(fā)光組合物包含金屬螯合物和烯烴化合物，和(iii)能夠產(chǎn)生單線態(tài)氧的敏化劑試劑，(b)對(duì)所述聯(lián)合物實(shí)施用于使所述分析物與對(duì)于所述分析物的特異性結(jié)合對(duì)成員結(jié)合的條件，以及(c)激活所述敏化劑并檢測(cè)由所述化學(xué)發(fā)光組合物產(chǎn)生的發(fā)光的數(shù)量，所述發(fā)光的數(shù)量與所述樣品中所述分析物的數(shù)量有關(guān)。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體通過(guò)連接基團(tuán)與所述化學(xué)發(fā)光組合物共價(jià)結(jié)合，并且其中所述連接基團(tuán)包含親水性高分子。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體通過(guò)特異性結(jié)合對(duì)與所述化學(xué)發(fā)光組合物非共價(jià)結(jié)合，其中所述特異性結(jié)合對(duì)的一個(gè)成員與所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體連接，并且所述特異性結(jié)合對(duì)的另一個(gè)成員通過(guò)連接基團(tuán)與所述化學(xué)發(fā)光組合物連接，其中所述連接基團(tuán)包含親水性高分子。
21.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體與所述敏化劑試劑相關(guān)聯(lián)并且所述敏化劑試劑包含粒子。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了用于進(jìn)行分析的方法和試劑。本發(fā)明方法和試劑的實(shí)施方案涉及用于測(cè)定懷疑含有分析物的樣品中分析物的存在和/或數(shù)量的化學(xué)發(fā)光試劑。該試劑是非粒子的，并且包含對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體和含有烯烴化合物和金屬螯合物的化學(xué)發(fā)光組合物。在分析的實(shí)施方案中，提供了包含懷疑含有分析物的樣品、如上所述的化學(xué)發(fā)光試劑以及能夠產(chǎn)生單線態(tài)氧的敏化劑試劑的聯(lián)合物。對(duì)該聯(lián)合物實(shí)施用于使分析物與對(duì)于分析物的結(jié)合配偶體結(jié)合的條件。敏化劑被激活并且化學(xué)發(fā)光組合物產(chǎn)生的熒光的數(shù)量被檢測(cè)，其中所述發(fā)光的數(shù)量與樣品中分析物的數(shù)量有關(guān)。
文檔編號(hào)G01N33/50GK102348980SQ201080010999
公開(kāi)日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2010年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月12日
發(fā)明者謝爾普 C., 辛赫 P., 延岑 R., 耿利萍, 鄭一楓 申請(qǐng)人:西門(mén)子醫(yī)療保健診斷公司