專利名稱：一種含有幾種農(nóng)藥殘留的中草藥樣品測(cè)定前的處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，涉及含有氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的中草藥 樣品的測(cè)定方法，更具體的說是含有15種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的中草藥樣品測(cè)定前的 處理方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)藥殘留指的是在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬 菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品中以及土壤和水體中的現(xiàn)象。農(nóng)藥殘留問題是隨著農(nóng)藥大量生產(chǎn) 和廣泛使用而產(chǎn)生的。目前使用的農(nóng)藥，有些在較短時(shí)間內(nèi)可以通過生物降解成為無害物 質(zhì)，而一些有機(jī)氯類農(nóng)藥卻難以降解，是殘留性強(qiáng)的農(nóng)藥。蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)，會(huì)直接危及 人體的神經(jīng)系統(tǒng)和肝、腎等重要器官。同時(shí)殘留農(nóng)藥在人體內(nèi)蓄積，超過一定量度后會(huì)導(dǎo)致 一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至?xí)T發(fā)血管疾病、糖尿病和癌癥等。由于農(nóng)藥殘留 對(duì)人類和生物危害很大，各國對(duì)農(nóng)藥的施用都進(jìn)行嚴(yán)格的管理，并對(duì)食品中農(nóng)藥殘留容許 量作了規(guī)定。中醫(yī)藥是我們中華民族的瑰寶，有著幾千年的悠久歷史。我國現(xiàn)有中藥資源12807 種，其中藥用植物11146種，藥用動(dòng)物1581種，藥用礦物80種，中藥材種植面積近600萬畝， 產(chǎn)量超過35萬噸，這些豐富的天然藥用資源為我國的中藥生產(chǎn)提供了豐富的原材料。然而 在中藥生產(chǎn)中出現(xiàn)的質(zhì)量安全問題，制約了我國中藥的發(fā)展。中藥的質(zhì)量安全直接關(guān)系人 民群眾的日常生活和生命安全，關(guān)系社會(huì)和諧穩(wěn)定。人民群眾要將健康掌握在自己手中，增 強(qiáng)自我保護(hù)意識(shí)。超過最低限度的重金屬及砷鹽、黃曲霉素、農(nóng)藥殘留、微生物等有毒有害 物質(zhì)，會(huì)對(duì)給人體的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼造血功能、血管和消化系統(tǒng)等人體 器官造成巨大的傷害。中藥材作為一種特殊食品為患者及體弱者所服用，服用時(shí)間長(zhǎng)，更易 造成蓄積中毒。中草藥樣品中含有氨基甲酸酯類農(nóng)藥等多種殘留的農(nóng)藥雜質(zhì)。氨基甲酸酯類農(nóng)藥是一類具有良好殺蟲效果的廣譜性農(nóng)藥，因其高效、低毒等特 點(diǎn)而被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物種植和中藥材栽培等過程中病蟲害的防治。與此同時(shí)，這 類藥產(chǎn)生的水環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題也已引起人們的廣泛關(guān)注。關(guān)于氨基甲酸酯類農(nóng)藥，目前報(bào)道的檢測(cè)方法有氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質(zhì) 譜聯(lián)用法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)以及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等。由于該 類藥物具有極性強(qiáng)、不易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定等特點(diǎn)，不適合用GC法和GC-MS法檢測(cè)。雖然HPLC 柱后衍生化法是經(jīng)典方法，但同時(shí)檢測(cè)多種組分殘留時(shí)色譜分離難度較大，靈敏度差，且不 能進(jìn)行可靠的定性分析。而LC-MS技術(shù)集HPLC的高分離能力與MS的高靈敏度、高選擇性和 極強(qiáng)的定性能力等眾優(yōu)點(diǎn)于一身，尤其是超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS/ MS)，具有分析范圍廣、分離能力強(qiáng)、靈敏度高、分析速度快等特點(diǎn)，非常適用于氨基甲酸酯 類農(nóng)藥的分析。近年來，UPLC-MS/MS被越來越多的應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留 的測(cè)定，但其在中藥材中的應(yīng)用研究還很少。目前，中藥材中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)方法 多是采用HPLC法，而且前處理方法繁瑣，檢測(cè)的藥材品種單一。
是否能準(zhǔn)確的檢測(cè)出微量的殘留其關(guān)鍵是樣品的前處理方法，樣品處理的好，可 以減少雜質(zhì)干擾，減少雜質(zhì)對(duì)儀器的污染，提高分析結(jié)果的靈敏度和準(zhǔn)確度。本專利所建立 的樣品前處理方法為我單位自行研制的方法，國內(nèi)公開文獻(xiàn)沒有查到相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足提供一種含有氨基甲酸酯類農(nóng)藥 殘留的中草藥樣品測(cè)定前的處理方法，按如下的步驟進(jìn)行(1)準(zhǔn)確稱取粉碎的中草藥樣品2g，于離心管中，加入20-30mL乙腈，渦旋2min， 4000rpm離心5min，取上清液，殘?jiān)?0_20mL乙腈重復(fù)提取一次，渦旋2min，4000rpm離心 5min，合并上清液；(2)將提取液在40°C下蒸干，殘?jiān)皿w積比20 80的丙酮-正己烷5mL溶解，待 凈化；(3)將PSA固相萃取柱先用6mL丙酮，6mL丙酮-正己烷體積比20 80活化，并 將PSA柱用固相萃取柱轉(zhuǎn)接頭與25mL注射器相連；(4)將樣品液轉(zhuǎn)移至注射器中，再用體積比，1/4的丙酮/正己烷洗滌樣品瓶，每次 5mL，洗兩次，并將洗滌液全部轉(zhuǎn)移至注射器中，收集所有流出液；待樣品液全部流干后，再 用體積比50/50的丙酮/正己烷30mL洗脫，合并流出液；將其在40°C下蒸干后，用體積比 40/60的甲醇/0. 1 %甲酸水2mL復(fù)容，并過0. 22 μ m濾膜進(jìn)樣，采用超高效液相-質(zhì)譜/質(zhì) 譜聯(lián)用儀測(cè)定。本發(fā)明結(jié)合固相萃取樣品處理技術(shù)，克服了中草藥樣品中復(fù)雜的基質(zhì)干擾問題， 首次建立了中藥材中15種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法。適用于各種中藥材 中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥同時(shí)測(cè)定。特別是人參、黃芪、白菊、決明子等中藥材可以測(cè)定本 身含有氨基甲酸酯類農(nóng)藥的微量數(shù)值，為中藥材的合理正確使用提供了有力的依據(jù)。本發(fā)明通過15種氨基甲酸酯類農(nóng)藥添加回收率研究，采用超高效液相-質(zhì)譜/質(zhì) 譜聯(lián)用儀(UPLC/MS/MQ法法，建立簡(jiǎn)捷可行的15種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析方法。本發(fā)明測(cè)定的保留時(shí)間為2. 38-10. 04min,定量限2 10 μ g/kg，檢出限為 0. 2-2. 5μ g/kg，回收率為 60% 95%。本發(fā)明的更加詳細(xì)的處理方法及測(cè)定條件如下1、儀器條件1.1色譜條件色譜柱AcquityBEH C18 O. ImmX 100mm，1. 7 μ m)；進(jìn)樣量10 μ L ；柱溫30°C。 以乙腈(A相)和0.1%甲酸水溶液(B相)為流動(dòng)相進(jìn)行線性梯度洗脫。梯度洗脫程序 0 10min，A相的比例由10%線性變化至90%,10- 12min，A相的比例保持10%;流速為 0. 2mL/min。1.2質(zhì)譜條件電離模式ESI⑴；毛細(xì)管電壓3.01^;離子源溫度1101；脫溶劑氣溫度 3500C ；脫溶劑氣流量550L/h ；錐孔反吹氣流量50L/h ；檢測(cè)方式多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式 (MRM)；質(zhì)譜采集參數(shù)見表1。表115種農(nóng)藥的質(zhì)譜檢測(cè)條件
權(quán)利要求
1. 一種含有氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的中草藥樣品測(cè)定前的處理方法，其特征在于按如 下的步驟進(jìn)行(1)準(zhǔn)確稱取粉碎的中草藥樣品2g，于離心管中，加入20-30mL乙腈，渦旋2min， 4000rpm離心5min，取上清液，殘?jiān)?0_20mL乙腈重復(fù)提取一次，渦旋2min，4000rpm離心 5min，合并上清液；(2)將提取液在40°C下蒸干，殘?jiān)皿w積比20/80的丙酮/正己烷5mL溶解，待凈化；(3)將PSA固相萃取柱先用6mL丙酮沖洗，然后再用6mL丙酮/正己烷體積比20/80活化；(4)將樣品液轉(zhuǎn)移至注射器中，再用體積比1/4的丙酮/正己烷洗滌，并將洗滌液全部 轉(zhuǎn)移至注射器中，收集所有流出液；待樣品液全部流干后，再用體積比50 50的丙酮-正 己烷30mL洗脫，合并流出液；將其在40°C下蒸干后，用體積比40 60的甲醇-0. 1 %甲酸 水2mL復(fù)容，并過0. 22 μ m濾膜進(jìn)樣，采用超高效液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的中草藥樣品測(cè)定前的處理方法，它是準(zhǔn)確稱取粉碎的中草藥樣品2g，于離心管中，加入30ml乙腈，渦旋2min，4000rpm離心5min，取上清液，殘?jiān)?0-20ml乙腈重復(fù)提取一次，渦旋2min，4000rpm離心5min，合并上清液；將提取液在40℃下蒸干，殘?jiān)皿w積比20∶80的丙酮-正己烷5ml溶解，待凈化；將PSA固相萃取柱先活化，并將PSA柱用固相萃取柱轉(zhuǎn)接頭與25ml注射器相連；用甲醇-0.1％甲酸水2ml復(fù)容，并過0.22μm濾膜進(jìn)樣，采用超高效液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。本發(fā)明公開的處理方法，測(cè)定速度快，設(shè)備簡(jiǎn)單、測(cè)定成本低，準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和可靠性高。
文檔編號(hào)G01N30/12GK102121927SQ20101059720
公開日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者劉磊, 張玉婷, 李娜, 李輝, 邵輝, 郭永澤 申請(qǐng)人:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室