專利名稱：：血細(xì)胞分析儀用試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種醫(yī)療診斷儀器用試劑，具體涉及一種血細(xì)胞分析儀用試劑。
背景技術(shù)：
：血細(xì)胞分析是臨床檢驗(yàn)最常用項(xiàng)目，能檢測20多項(xiàng)血液項(xiàng)目的病理性變化，對于抗生素的合理應(yīng)用、各種貧血檢查、血液病篩查、過敏疾病篩查等都有很大幫助；采用血細(xì)胞分析技術(shù)，可及時(shí)監(jiān)測人體的身體狀況，減少發(fā)病機(jī)率或控制病情。血細(xì)胞五分類技術(shù)是當(dāng)前該領(lǐng)域最先進(jìn)的分析技術(shù)，其分析系統(tǒng)由儀器和試劑組成。國外目前只有美國雅培、庫爾特、法國ABX、日本西森美康等公司生產(chǎn)；國內(nèi)廠商，僅見有深圳邁瑞公司報(bào)道有產(chǎn)品。如美國雅培公司推出的CELL-DYN3000、CELL-DYN3200、CELL-DYN3500和CELL-DYN3700血細(xì)胞分析儀在國內(nèi)就存在較大的市場，但與該儀器配套使用的試劑國內(nèi)則長期依賴進(jìn)口，導(dǎo)致試劑價(jià)格偏高，不利于國內(nèi)廣大醫(yī)院，特別是基層醫(yī)院的推廣和應(yīng)用。為降低試劑的成本，國內(nèi)已出現(xiàn)有自行研制出的該類試劑，如公開號為CN1424582的中國發(fā)明專利，公開了一種雅培3700全自動五分類血細(xì)胞分析儀試劑，它包括稀釋液、清洗劑、溶血劑和鞘液四種配套試劑，其中稀釋液的組成為=NaCllO20g/L、Na2S04515g/L、EDTA-K20.10.5g/L、甲基脲0.51.5g/L,噻唑啉酮0.30.8g/L,哌嗪烷基磺酸14g/L；清洗劑的組成為=NaCllO20g/L、Na2S04518g/L、聚氧乙烯烴基苯乙醚0.20.7g/L、磷酸鈉0.71.4g/L、哌嗪烷基磺酸310g/L、噻唑啉酮0.20.8g/L，溶血劑的組成為季胺鹽3070g/L、KCN0.10.5g/L、TritonX-1000.51.5ml/L、乙醇3060ml/L；鞘液的組成為氨基甲烷1.2g/L，聚氧乙烯醚96mg/L，甲基脲4.5g/L，苯醚6g/L，噻唑啉酮8.8g/L。該發(fā)明血細(xì)胞分析儀試劑較國外進(jìn)口試劑成本低，具有較好的推廣使用價(jià)值；但是該試劑中溶血劑中仍含有劇毒化合物氰化鉀，不僅危害操作人員的身體健康，同時(shí)對環(huán)境造成污染。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種成本低廉、試劑性能優(yōu)越且不含氰化物的適于五分類全自動血細(xì)胞分析儀用試劑。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案血細(xì)胞分析儀用試劑，由稀釋液、溶血劑、鞘液和清洗液組成，其中所述稀釋液的組成及含量為硼酸212g/L、硼砂210g/L、氯化鈉515g/L、硫酸鈉820g/L、乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)0.10.5g/L、甲基脲0.52.Og/L、鹽酸羥胺39g/L、氯化鉀0.21.Og/L；所述溶血劑的組成及含量為季銨鹽1025g/L、二乙醇胺15ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)0.52ml/L、異丙醇0.31.5ml/L、氯化鈉15g/L；所述鞘液的組成及含量為氨基甲烷110g/L、甲基脲0.1lg/L、芳香醇115ml/L、乙醇515ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.10.5g/L；所述清洗液的組成及含量為硼酸212g/L、硼砂215g/L、氯化鈉210g/L、硫酸鈉410g/L、聚氧乙烯烴基苯乙醚0.52g/L、次氯酸鈉0.52g/L。上述稀釋液、溶血劑、鞘液和清洗液的組成優(yōu)選如下稀釋液的組成及含量為硼酸8.512g/L、硼砂36g/L、氯化鈉510g/L、硫酸鈉812g/L、乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)0.10.3g/L、甲基脲0.51.Og/L、鹽酸羥胺36g/L、氯化鉀0.20.8g/L；溶血劑的組成及含量為季銨鹽1525g/L、二乙醇胺13ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-IOO)O.5lml/L、異丙醇0.3lml/L、氯化鈉35g/L；鞘液的組成及含量為氨基甲烷15g/L、甲基脲0.10.5g/L、芳香醇110ml/L、乙醇510ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.10.3g/L；清洗液的組成及含量為硼酸712g/L、硼砂26g/L、氯化鈉410g/L、硫酸鈉48g/L、聚氧乙烯烴基苯乙醚0.5lg/L、次氯酸鈉0.51.5g/L。以上配方中，所述的鞘液中的芳香醇選自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一種或兩種。鞘液中的聚氧乙烯月桂醚為聚氧乙烯月桂醚35(Brij35)。所述鞘液的滲透壓為3580m0sm/kg。所述稀釋液的滲透壓為280350m0sm/kg。所述稀釋液的pH值為6.58.0，具體可用鹽酸來調(diào)。所述溶血劑的pH值為PH7.59.5，具體可用鹽酸來調(diào)。所述鞘液的pH值為8.010.0，具體可用鹽酸來調(diào)。所述清洗液的pH值為6.58.5，具體可用鹽酸來調(diào)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、改變國內(nèi)五分類全自動血細(xì)胞分析儀用試劑長期依賴進(jìn)口的現(xiàn)狀，試劑由國內(nèi)生產(chǎn)、銷售，大大降低了其成本；2、試劑中的溶血劑為無氰溶血劑，不僅大大降低了對生產(chǎn)單位人員和實(shí)驗(yàn)操作者身體健康的損害，同時(shí)也避免了使用氰化物對環(huán)境造成的污染；3、該試劑適用于五分類全自動血細(xì)胞分析儀，尤其適用于美國雅培公司的Cell-Dyn3700/3500、Cell_Dyn3000、Cell_Dyn3200五分類全自動血細(xì)胞分析儀，本申請?jiān)噭┑腜H、電導(dǎo)率、滲透壓等參數(shù)均符合進(jìn)口Cell-Dyn3700/3500五分類全自動血細(xì)胞分析儀的測試要求；溶血劑A75tl測試達(dá)到ICSH標(biāo)準(zhǔn)；白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板等與進(jìn)口ABB0TTCELL-DYN3700/3500試劑相關(guān)系數(shù)均大于0.95；白細(xì)胞五分類圖譜與進(jìn)口試劑一致；4、該試劑在去除鞘液后也可適用于三分類血細(xì)胞分析儀；其中的溶血劑等也可用于其它系列的血液分析儀。圖1為本發(fā)明實(shí)施例2制得的試劑與原裝進(jìn)口的ABBOTTCELL-DYN^3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT,CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH試劑對來自桂林市第二人民醫(yī)院和桂林市婦女兒童醫(yī)院的100例臨床樣本上ABBOTTCELL-DYN3700進(jìn)行測試，所測的WBC項(xiàng)目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性圖；圖2為本發(fā)明實(shí)施例2制得的試劑與原裝進(jìn)口的ABBOTTCELL-DYN-3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL_DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH試劑對來自桂林市第二人民醫(yī)院和桂林市婦女兒童醫(yī)院的100例臨床樣本上ABBOTTCELL-DYN3700進(jìn)行測試，所測的RBC項(xiàng)目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例2制得的試劑與原裝進(jìn)口的ABBOTTCELL-DYN^3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL_DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH試劑對來自桂林市第二人民醫(yī)院和桂林市婦女兒童醫(yī)院的100例臨床樣本上ABBOTTCELL-DYN3700進(jìn)行測試，所測的HGB項(xiàng)目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例2制得的試劑與原裝進(jìn)口的ABBOTTCELL-DYN-3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH試劑對來自桂林市第二人民醫(yī)院和桂林市婦女兒童醫(yī)院的100例臨床樣本上ABBOTTCELL-DYN3700進(jìn)行測試，所測的PLT項(xiàng)目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性圖。具體實(shí)施例方式下面以實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。以下實(shí)施例中用到的試劑均為分析純試劑。實(shí)施例1在常溫和常壓下，分別按以下表1中指定的各組分以常規(guī)方法配制稀釋液、溶血齊U、鞘液和清洗液粗品，其中鞘液中的芳香醇為苯甲醇；配制所得的粗品分別用0.2μπι的纖維薄膜過濾，即得本發(fā)明所述的血細(xì)胞分析儀用試劑。實(shí)施例2分別按以下表1中指定的各組分重復(fù)實(shí)施例1的方法，但用苯乙醇代替苯甲醇。實(shí)施例3分別按以下表1中指定的各組分重復(fù)實(shí)施例1的方法，但用二苯醚代替苯甲醇。實(shí)施例4分別按以下表1中指定的各組分重復(fù)實(shí)施例3的方法，但用苯甲醇代替二苯醚。實(shí)施例5分別按以下表1中指定的各組分重復(fù)實(shí)施例3的方法，但用苯乙醇代替二苯醚。實(shí)施例6分別按以下表1中指定的各組分重復(fù)實(shí)施例3的方法，但用乙二醇苯醚代替二苯醚。實(shí)施例7分別按以下表1中指定的各組分重復(fù)實(shí)施例1的方法，但用二苯醚和乙二醇苯醚代替苯甲醇，其中二苯醚和乙二醇苯醚的體積比為11。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述表2中的數(shù)據(jù)表明，實(shí)施例1、2所制得的血細(xì)胞分析儀用試劑的測試結(jié)果與原裝進(jìn)口的美國ABBOTTCELL-DYN3000,3500and3700SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT,CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT、CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH試劑的測試結(jié)果一致。對比實(shí)驗(yàn)例2將本發(fā)明實(shí)施例2制得的血細(xì)胞分析儀用試劑(簡稱試劑2)與原裝進(jìn)口的ABBOTTCELL-DYN3000,3500and3700SystemsDILUENT,CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH試劑(簡稱試劑Α)對來自桂林市第二人民醫(yī)院和桂林市婦女兒童醫(yī)院的100例臨床樣本用ABBOTTCELL-DYN3700進(jìn)行測試，測試結(jié)果如下表3所示，其中所測WBC、RBC、HGB和PLT項(xiàng)目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性圖分別如圖1、2、3和4所示，其相關(guān)性R>0.95。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>對比實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明實(shí)施例3制得的血細(xì)胞分析儀用試劑(簡稱試劑3)、實(shí)施例4制得的血細(xì)胞分析儀用試劑(簡稱試劑4)、實(shí)施例5制得的血細(xì)胞分析儀用試劑(簡稱試劑5)和實(shí)施例6制得的血細(xì)胞分析儀用試劑(簡稱試劑6)的差別僅在于芳香醇的種類不同，為測試本發(fā)明所選用的四種芳香醇類物質(zhì)對測試結(jié)果的影響，申請人分別用上述試劑3、4、5和6對同一支標(biāo)本進(jìn)行平行測試，所得結(jié)果如下表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上述測試結(jié)果表明，本發(fā)明試劑中鞘液所使用的四種芳香醇類物質(zhì)對測試結(jié)果沒有影響，都能夠良好的反應(yīng)出標(biāo)本的實(shí)際情況。當(dāng)然，本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例，只要是不違背本發(fā)明的主題思想，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，如可以在試劑中加入本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易想到的一些不影響本發(fā)明所述試劑性能的其它非必要物質(zhì)，例如在稀釋液中加入少量的疊氮鈉，在溶血劑中加入少量的氟化鈉，在清洗液中加入少量的TritonX-100等，應(yīng)該視為在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。權(quán)利要求血細(xì)胞分析儀用試劑，由稀釋液、溶血劑、鞘液和清洗液組成，其特征在于所述稀釋液的組成及含量為硼酸2～12g/L、硼砂2～10g/L、氯化鈉5～15g/L、硫酸鈉8～20g/L、乙二胺四乙酸二鉀0.1～0.5g/L、甲基脲0.5～2.0g/L、鹽酸羥胺3～9g/L、氯化鉀0.2～1.0g/L；所述溶血劑的組成及含量為季銨鹽10～25g/L、二乙醇胺1～5ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.5～2ml/L、異丙醇0.3～1.5ml/L、氯化鈉1～5g/L；所述鞘液的組成及含量為氨基甲烷1～10g/L、甲基脲0.1～1g/L、芳香醇1～15ml/L、乙醇5～15ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.5g/L；所述清洗液的組成及含量為硼酸2～12g/L、硼砂2～15g/L、氯化鈉2～10g/L、硫酸鈉4～10g/L、聚氧乙烯烴基苯乙醚0.5～2g/L、次氯酸鈉0.5～2g/L。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述稀釋液的組成及含量為硼酸8.512g/L、硼砂36g/L、氯化鈉510g/L、硫酸鈉812g/L、乙二胺四乙酸二鉀0.10.3g/L、甲基脲0.51.0g/L、鹽酸羥胺36g/L、氯化鉀0.20.8g/L；所述溶血劑的組成及含量為季銨鹽1525g/L、二乙醇胺13ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.5lml/L、異丙醇0.3lml/L、氯化鈉35g/L；所述鞘液的組成及含量為氨基甲烷15g/L、甲基脲0.10.5g/L、芳香醇110ml/L、乙醇510ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.10.3g/L；所述清洗液的組成及含量為硼酸712g/L、硼砂26g/L、氯化鈉410g/L、硫酸鈉48g/L、聚氧乙烯烴基苯乙醚0.5lg/L、次氯酸鈉0.51.5g/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于鞘液中的芳香醇選自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一種或兩種。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于鞘液中的聚氧乙烯月桂醚為聚氧乙烯月桂醚35。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述鞘液的滲透壓為3580m0sm/kgo6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述稀釋液的滲透壓為280350m0sm/kgo7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述稀釋液的PH值為6.58.0。8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述溶血劑的PH值為PH7.59.5。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述鞘液的PH值為8·O10.O010.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分析儀用試劑，其特征在于所述清洗液的ρΗ值為6.58.5。全文摘要本發(fā)明公開了一種血細(xì)胞分析儀用試劑，由稀釋液、溶血劑、鞘液和清洗液組成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于改變國內(nèi)血細(xì)胞分析儀用試劑長期依賴進(jìn)口的現(xiàn)狀，由國內(nèi)生產(chǎn)、銷售，大大降低了其生產(chǎn)成本；試劑中的溶血劑為無氰溶血劑，不僅大大降低了對生產(chǎn)單位人員和實(shí)驗(yàn)操作者身體健康的損害，同時(shí)也避免了使用氰化物對環(huán)境造成的污染；該試劑尤其適用于美國雅培公司的CD3700/3500、CD3000、CD3200五分類全自動血細(xì)胞分析儀溶血劑A750測試達(dá)到ICSH標(biāo)準(zhǔn)；白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板等與進(jìn)口ABBOTTCELL-DYN3700/3500試劑相關(guān)系數(shù)均大于0.95。文檔編號G01N33/50GK101819199SQ20101016658公開日2010年9月1日申請日期2010年5月8日優(yōu)先權(quán)日2010年5月8日發(fā)明者余穎玫,劉軍,陳彥華,陳達(dá)輝,黃河清申請人:桂林市朗道診斷用品有限公司