專利名稱：：牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥復方制劑的質(zhì)量檢測方法，特別是一種治療熱痰、燥痰咳嗽，癥見咳嗽、痰黃或干咳、咯痰不爽的牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
：以人工牛黃、川貝母和蛇膽汁為處方制成的牛黃蛇膽川貝液具有清熱、化痰、止咳的作用，用于熱痰、燥痰咳嗽，癥見咳嗽、痰黃或干咳、咯痰不爽?，F(xiàn)有技術(shù)中，所述牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量控制方法僅有兩個化學鑒別反應，分別為人工牛黃和川貝母的化學鑒別，及人工牛黃的薄層色譜鑒別，沒有定量檢測方法，明顯的上述質(zhì)量檢測方法無法反映所述中藥復方制劑的質(zhì)量。另外，現(xiàn)有人工牛黃的薄層色譜鑒別供試品斑點較弱。因此，應當開發(fā)出更完善的質(zhì)量控制方法，從而保證用藥安全。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供治療熱痰、燥痰咳嗽，癥見咳嗽、痰黃或干咳、咯痰不爽的牛黃蛇膽)11貝液的質(zhì)量檢測方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是本發(fā)明所述治療熱痰、燥痰咳嗽，癥見咳嗽、痰黃或干咳、咯痰不爽的牛黃蛇膽川貝液的原料藥組成如下人工牛黃1.0-2.0重量份，川貝母40-60重量份，蛇膽汁6.0-10重量份，薄荷腦0.03-0.05重量份上述原料藥組成優(yōu)選人工牛黃1.6重量份，川貝母48.4重量份，蛇膽汁8.1重量份，薄荷腦0.04重量份所述牛黃蛇膽川貝液是通過如下的工藝制備的取人工牛黃研磨后，用3-10倍量的乙醇浸泡24小時，濾過，制成人工牛黃提取液；川貝母研碎成粗粉，用70%乙醇作溶劑進行滲漉，收集滲漉液，濃縮至體積/重量比為11，得到川貝母提取液；取蔗糖150-200重量份、蜂蜜50-100重量份加水制成糖漿，與蛇膽汁、所述人工牛黃提取液、所述川貝母提取液混合，加入薄荷腦0.04重量份和防腐劑尼泊金乙酯0.5重量份混勻，加水調(diào)整總量至每Iml所述牛黃蛇膽川貝液含相當于0.058g原料藥，攪勻，濾過，灌封，滅菌，即得。上述制備工藝中，優(yōu)選用5倍量的乙醇浸泡研磨后的人工牛黃；優(yōu)選蔗糖180重量份、蜂蜜80重量份制成所述糖漿。所述牛黃川貝蛇膽液口服，一次10ml，一日3次。本發(fā)明所述牛黃川貝蛇膽液的檢測方法包括如下I、II、III的鑒別方法I、取所述牛黃蛇膽川貝液20ml置分液漏斗中，加稀鹽酸12ml，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，棄去三氯甲烷液，水溶液用氨試液調(diào)至堿性，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加稀鹽酸2ml使溶解，濾過，分置三支試管中，一管中加入碘化鉍鉀試液12滴，生成紅棕色沉淀，一管中加碘化汞鉀試液12滴，生成白色沉淀，另一管中加入硅鎢酸試液12滴，生成白色沉淀；II、取所述牛黃蛇膽)丨I貝液40ml置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取人工牛黃對照藥材28mg，加乙醇30ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16211的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1110的硫酸-醋酐-無水乙醇的混合溶液，在110°C加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；III、取所述牛黃蛇膽川貝液50ml，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，所述正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取蛇膽汁對照藥材10mg，加正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；再取?；悄懰徕c對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液25μ1、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比40.54的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點ο本發(fā)明所述的質(zhì)量檢測方法還包括如下的高效液相色譜法的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7525的甲醇-0.2%醋酸溶液為流動相，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按膽酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備取膽酸對照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取所述牛黃蛇膽川貝液IOml置分液漏斗中，加稀鹽酸lml，用三氯甲烷振搖提取5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液5μ1、20μ1，供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；每Iml所述牛黃蛇膽川貝液含人工牛黃和蛇膽汁以膽酸C28H34O15計，不得少于45μg。本發(fā)明所述薄層鑒別II和III可以采用市售的預制硅膠G薄層板，也可以采用手工鋪制的硅膠G薄層板，硅膠層厚度500μm。本領(lǐng)域技術(shù)人員應當理解，本發(fā)明所述的質(zhì)量檢測方法同樣適用于原料藥組成與所述牛黃蛇膽川貝液相同或相似的中藥復方制劑，如合劑、糖漿劑、軟膠囊劑、滴丸劑等。上述中藥復方制劑的日服劑量因為制劑工藝的不同而有差異，但是每單位劑量的制劑，如Ig或Iml所述制劑，折算成的原料藥的量是確定的，采用本發(fā)明所述質(zhì)量檢測方法時，可以用折算成的原料藥量來稱取或量取所要檢測的中藥復方制劑。下面通過實驗說明本發(fā)明所述牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量檢測方法的建立。實驗例1川貝母化學鑒別鑒別方法I為川貝母的化學鑒別，同時進行3個化學反應，可以避免假陽性結(jié)果。1.1專屬性試驗取處方中不含川貝母的其它藥材按照說明書記載的制備方法制成陰性樣品，取本發(fā)明所述合劑20ml，陰性樣品20ml，按說明書所述的方法配制成供試品溶液和陰性樣品溶液，按說明書所述的方法進行化學反應；結(jié)果供試品溶液與三種試劑均反應產(chǎn)生所述顏色的沉淀，陰性樣品溶液與三種試劑都沒有產(chǎn)生任何沉淀反應。說明陰性無干擾。實驗例2人工牛黃薄層色譜鑒別鑒別方法II為人工牛黃的薄層色譜鑒別。2.1供試品溶液的制備現(xiàn)有技術(shù)中供試品溶液的制備采用的是取所述合劑IOml進行提取，后用乙醇0.5ml溶解，供試品斑點較弱。故修改為取本發(fā)明所述牛黃蛇膽川貝液40ml置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；薄層展開后斑點清晰，明顯，見圖1。2.2吸附劑的選擇分別選用以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑制備的硅膠G薄層板和硅膠G薄層板按照說明書記載的方法進行薄層層析，結(jié)果幾乎無差別，見圖1和圖2?？紤]到顯色易炭化，故選用硅膠G薄層板，厚度為500μm。2.3專屬性試驗取處方中不含人工牛黃的其它藥材按照說明書記載的制備方法制成陰性樣品，取本發(fā)明所述合劑40ml，陰性樣品40ml，人工牛黃對照藥材28mg(中國藥品生物制品檢定所，批號1197-200101)，按說明書所述的方法配制成供試品溶液、陰性樣品溶液、對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液、陰性樣品溶液、對照藥材溶液各ΙΟμΙ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16211的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1110的硫酸_醋酐-無水乙醇的混合溶液，在110°C加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性樣品色譜中與對照品色譜相應的位置上無相應的斑點。說明陰性無干擾，見圖1。實驗例3蛇膽汁的薄層鑒別鑒別方法III為蛇膽汁的薄層鑒別。因為?；悄懰徕c為蛇膽汁的主要有效成分，因此同時以蛇膽汁和?；悄懰徕c為對照進行薄層鑒別，以增強鑒別結(jié)果的專屬性。)3.1吸附劑的選擇分別選用以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑制備的硅膠G薄層板和硅膠G薄層板按照說明書記載的方法進行薄層層析，結(jié)果幾乎無差別，見圖3和圖4?？紤]到顯色易炭化，故選用硅膠G薄層板，厚度為500μm。3.2專屬性試驗取處方中不含蛇膽汁的其它藥材按照說明書記載的制備方法制成陰性樣品，取本發(fā)明所述50ml，陰性樣品50ml，蛇膽汁對照藥材IOmg(中國藥品生物制品檢定所，批號0938-200104)，?；悄懰徕c對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110815_200506)，按說明書所述的方法配制成供試品溶液、陰性樣品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液25μ1、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比40.54的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性樣品色譜中與對照品色譜相應的位置上無相應的斑點。說明陰性無干擾，見圖3。實驗例4膽酸含量測定本發(fā)明所述中藥復方制劑中人工牛黃為君藥，系由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、牛磺酸、膽紅素、膽固醇、微量元素等制成，其功能為清熱，解毒，化痰，定驚。臨床上用于痰熱譫狂，神昏不語，小兒急熱驚風，咽喉腫痛，口舌生瘡，癰腫疔瘡。蛇膽汁主要含有膽酸及?；悄懰徕c等有效成分，有清熱瀉火，祛風化痰，鎮(zhèn)痙明目的功用。故以兩者都含有的膽酸為指標成分測定其含量，從而反映人工牛黃和蛇膽汁的含量。4.1儀器與試藥高效液相色譜儀，HPllOO四元低壓梯度泵系列，AlltechELSD2000ES檢測器。水為超純水，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。膽酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110721-200211。4.2色譜條件DiamomsilC18色譜柱(250mmX4.6mm,5μm)，流動相體積比7525的甲醇-0.2%冰乙酸溶液，流速1.Oml/min。漂移管溫度108°C，氣流為2.OL/min。理論板數(shù)以膽酸計算不得低于3000。4.3檢測器選擇在研究過程中，曾研究采用可變波長檢測器對膽酸進行檢測，但由于其波長為192nm，在檢驗過程中，極易受到干擾，故采用蒸發(fā)光檢測的方法，在說明書記載的色譜條件下，膽酸峰形好，見圖5。4.4供試品液相色譜分離情況精密稱量本發(fā)明所述合劑10ml，按照說明書記載的供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，依說明書記載的含量測定方法試驗，結(jié)果膽酸有較好的色譜分離，見圖6。4.5空白試驗取處方中不含人工牛黃和蛇膽汁的其它原料藥，按說明書記載的合劑制備方法制成陰性樣品，再按照說明書中記載的供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液，依說明書記載的含量測定方法試驗，比較陰性樣品溶液色譜及膽酸對照品色譜，結(jié)果陰性樣品中其他成分對膽酸峰無干擾，見圖7。4.6對照品溶液的制備精密稱取膽酸對照品20.06mg,置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。4.7線性關(guān)系考察精密吸取上述對照品溶液2μ1、5μ1、10μ1、20μ1、40μ1，注入液相色譜儀，按照說明書記載的色譜分析條件，測定峰面積，計算膽酸進樣量和峰面積的常用對數(shù)值，結(jié)果見表1。表1線性關(guān)系測定結(jié)果膽酸的量(pg)0.160480.40120.80241.60483.2096Log膽酸的量-0.7946-0.3966-0.09560.20540.5065峰面積2385158517534188650491722136829832338Lognmm6.37756.71396.94777.23617.4747以峰面積常用對數(shù)值為縱坐標，對照品進樣量常用對數(shù)值為橫坐標，繪制標準曲線，見圖8?；貧w方程為y=0.8475x+7.0474，r2=0.9992膽酸在0.160483.2096μg之間對數(shù)方程呈良好線性。4.8精密度試驗精密吸取所述對照品溶液10μ1，按說明書記載的液相色譜條件，重復進樣5次，測定峰面積并計算峰面積的常用對數(shù)值，結(jié)果見表2，膽酸常用對數(shù)值相對標準偏差為0.2%0表2對照品精密度試驗結(jié)果峰面積值_平均峰面積值_RSD(0Zo)478384γ—ι4773904785014776860.2477488476667__4.9供試品精密度試驗精密吸取所述對照品溶液10μL，按說明書記載的液相色譜條件，重復進樣5次，測定峰面積并計算峰面積的常用對數(shù)值，結(jié)果見表3，膽酸常用對數(shù)值相對標準偏差為0.2%0表3供試品精密度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4.10穩(wěn)定性試驗精密吸取所述牛黃川貝蛇膽液10ml，按照說明書記載的方法制成供試品溶液，按說明書記載的色譜條件，精密吸取所述供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，每隔一定時間進樣測定一次，在24小時內(nèi)，供試品溶液中膽酸峰面積常用對數(shù)值無明顯變化，其膽酸峰面積常用對數(shù)值相對標準偏差為0.1%，表明膽酸在所述供試品溶液中24小時內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表4。表4穩(wěn)定性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4.11重復性試驗分別精密吸取同一批所述牛黃川貝蛇膽液10ml，按照說明書記載的方法制成供試品溶液，在說明書記載的色譜條件下，測定膽酸的含量，RSD=1.1%，表明本法重復性良好，結(jié)果見表5。表5重復性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4.12加樣回收率試驗精密吸取同一批已知膽酸含量為58.3μg/ml的所述牛黃川貝蛇膽液5份，每份5ml，分別置分液漏斗中，另精密吸取膽酸對照品溶液(58.86μg/ml)5ml，分別加入上述分液漏斗中，按照說明書記載的方法制成供試品溶液，在說明書記載的色譜條件下，測定膽酸的含量，計算回收率，平均回收率為99.11%,RSD=1.9%，表明本法回收率良好，結(jié)果見表6。測出膽酸量-制劑中已知膽酸量回收率%=-χ100%添加膽酸量表6回收率試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>圖1是人工牛黃薄層鑒別(硅膠G薄層板)，其中1為陰性樣品，2為人工牛黃對照藥材，3、4、5為三批樣品。圖2是人工牛黃薄層鑒別(以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑的硅膠G薄層板)，其中1為陰性樣品，2為人工牛黃對照藥材，3、4、5為三批樣品。圖3是蛇膽汁薄層鑒別(硅膠G薄層板)，其中1、2、3為三批樣品，4為蛇膽汁對照藥材，5為牛磺膽酸鈉對照品，6為陰性樣品。圖4是蛇膽汁薄層鑒別(以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑的硅膠G薄層板)，其中1、2、3為三批樣品，4為蛇膽汁對照藥材，5為?；悄懰徕c對照品，6為陰性樣品。圖5是膽酸對照品溶液的HPLC圖譜。圖6是所述合劑的供試品溶液HPLC圖譜。圖7是陰性樣品溶液HPLC圖譜。圖8是膽酸標準品溶液標準曲線圖。具體實施例方式下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果，但本發(fā)明并不限于所述實施例。實施例1牛黃川貝蛇膽液人工牛黃1.6g川貝母48.4g蛇膽汁8.Ig薄荷腦0.04g取人工牛黃研磨后，用5倍量的乙醇浸泡24小時，濾過，制成人工牛黃提取液；川貝母研碎成粗粉，用70%乙醇作溶劑進行滲漉，收集滲漉液，濃縮至體積/重量比為11，得到川貝母提取液；取蔗糖180g、蜂蜜80g加水制成糖漿，與蛇膽汁、人工牛黃提取液、川貝母流浸膏、加入薄荷腦0.04g及尼泊金乙酯0.5g混合，加水調(diào)整總量至1000ml，攪勻，濾過，灌封，滅菌，即得。服用方法口服，一次10ml，一天三次。每Iml所述牛黃川貝蛇膽液折算成原料藥量，相當于0.058g。實施例2牛黃川貝蛇膽糖漿劑人工牛黃1.2g川貝母50g蛇膽汁7.8g薄荷腦0.04g按照常規(guī)工藝，加入適量輔料制成糖漿劑1000ml。服用方法口服，一次10ml，一天三次。每Iml所述牛黃川貝蛇膽糖漿劑折算成原料藥量，相當于0.059g。實施例3牛黃川貝蛇膽軟膠囊劑人工牛黃2.Og川貝母60g蛇膽汁6g薄荷腦0.04g按照常規(guī)工藝，加入適量輔料制成軟膠囊劑，每粒0.45g。服用方法一次1粒，一天三次。每Ig所述牛黃川貝蛇膽軟膠囊劑內(nèi)容物折算成原料藥量，相當于1.508g。實施例4牛黃川貝蛇膽滴丸劑人工牛黃l.Og川貝母43g蛇膽汁IOg薄荷腦0.04g按照常規(guī)工藝，加入適量輔料制成滴丸劑，每粒0.3g。服用方法一次10丸，一天三次。每Ig所述牛黃川貝蛇膽滴丸劑折算成原料藥量，相當于1.347g。實施例5實施例1制備的本發(fā)明所述牛黃川貝蛇膽液的質(zhì)量檢測方法鑒別I、取所述牛黃蛇膽川貝液20ml置分液漏斗中，加稀鹽酸12ml，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，棄去三氯甲烷液，水溶液用氨試液調(diào)至堿性，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加稀鹽酸2ml使溶解，濾過，分置三支試管中，一管中加入碘化鉍鉀試液12滴，生成紅棕色沉淀，一管中加碘化汞鉀試液12滴，生成白色沉淀，另一管中加入硅鎢酸試液12滴，生成白色沉淀；照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法II、取所述牛黃蛇膽)丨I貝液40ml置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取人工牛黃對照藥材28mg，加乙醇30ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16211的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1110的硫酸-醋酐-無水乙醇的混合溶液，在110°C加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；III、取所述牛黃蛇膽川貝液50ml，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，所述正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，為供試品溶液；另取蛇膽汁對照藥材10mg，加正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；再取?；悄懰徕c對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液25μ1、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比40.54的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點ο含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7525的甲醇-0.2%醋酸溶液為流動相，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按膽酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備取膽酸對照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取所述牛黃蛇膽川貝液IOml置分液漏斗中，加稀鹽酸lml，用三氯甲烷振搖提取5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液5μ1、20μ1，供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；每Iml所述牛黃蛇膽川貝液含人工牛黃和蛇膽汁以膽酸C28H34O15計，不得少于45μg0實施例6實施例2制備的糖漿劑的質(zhì)量檢測方法鑒別I、取所述糖漿劑20ml置分液漏斗中，加稀鹽酸12ml，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，棄去三氯甲烷液，水溶液用氨試液調(diào)至堿性，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加稀鹽酸2ml使溶解，濾過，分置三支試管中，一管中加入碘化鉍鉀試液12滴，生成紅棕色沉淀，一管中加碘化汞鉀試液12滴，生成白色沉淀，另一管中加入硅鎢酸試液12滴，生成白色沉淀；照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法II、取所述糖漿劑39ml，置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取人工牛黃對照藥材28mg，加乙醇30ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各ΙΟμΙ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16211的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1110的硫酸-醋酐-無水乙醇的混合溶液，在110°c加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；III、取所述糖漿劑49ml，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，所述正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取蛇膽汁對照藥材10mg，加正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；再取牛磺膽酸鈉對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液25μ1、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比40.54的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7525的甲醇-0.2%醋酸溶液為流動相，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按膽酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備取膽酸對照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取所述糖漿劑9.83ml，置分液漏斗中，加稀鹽酸1ml，用三氯甲烷振搖提取5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣用甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5μ1、20μ1，供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；相當于原料藥0.058g的所述糖漿劑含人工牛黃和蛇膽汁以膽酸C28H34O15計，不得少于45μgo實施例7實施例3制備的軟膠囊劑的質(zhì)量檢測方法鑒別I、取所述軟膠囊劑內(nèi)容物0.77g，置分液漏斗中，加稀鹽酸12ml，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，棄去三氯甲烷液，水溶液用氨試液調(diào)至堿性，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加稀鹽酸2ml使溶解，濾過，分置三支試管中，一管中加入碘化鉍鉀試液12滴，生成紅棕色沉淀，一管中加碘化汞鉀試液12滴，生成白色沉淀，另一管中加入硅鎢酸試液12滴，生成白色沉淀；照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法II、取所述軟膠囊劑內(nèi)容物1.54g，置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取人工牛黃對照藥材28mg，加乙醇30ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16211的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1110的硫酸-醋酐-無水乙醇的混合溶液，在110°C加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；III、取所述軟膠囊劑內(nèi)容物1.93g，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，所述正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取蛇膽汁對照藥材10mg，加正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；再取?；悄懰徕c對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液25μ1、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比40.54的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點ο含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7525的甲醇-0.2%醋酸溶液為流動相，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按膽酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備取膽酸對照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱量所述軟膠囊劑內(nèi)容物0.385g，置分液漏斗中，加稀鹽酸1ml，用三氯甲烷振搖提取5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干；殘渣用甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5μ1、20μ1，供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；相當于原料藥0.058g的所述軟膠囊劑內(nèi)容物含人工牛黃和蛇膽汁以膽酸C28H34O15計，不得少于45μg。實施例8實施例4制備的滴丸劑的質(zhì)量檢測方法鑒別I、取所述滴丸劑內(nèi)容物0.86g，置分液漏斗中，加稀鹽酸12ml，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，棄去三氯甲烷液，水溶液用氨試液調(diào)至堿性，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加稀鹽酸2ml使溶解，濾過，分置三支試管中，一管中加入碘化鉍鉀試液12滴，生成紅棕色沉淀，一管中加碘化汞鉀試液12滴，生成白色沉淀，另一管中加入硅鎢酸試液12滴，生成白色沉淀；照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法II、取所述滴丸劑內(nèi)容物1.72g，置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取人工牛黃對照藥材28mg，加乙醇30ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16211的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1110的硫酸-醋酐_無水乙醇的混合溶液，在110°C加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；III、取所述滴丸劑內(nèi)容物2.16g，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，所述正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取蛇膽汁對照藥材10mg，加正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液；再取?；悄懰徕c對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液25μ1、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比40.54的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點ο含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7525的甲醇-0.2%醋酸溶液為流動相，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按膽酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備取膽酸對照品，精密稱定，加甲醇制成每Iml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱量所述滴丸劑內(nèi)容物0.430g，置分液漏斗中，加稀鹽酸1ml，用三氯甲烷振搖提取5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干；殘渣用甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5μ1、20μ1，供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；相當于原料藥0.058g的所述滴丸劑內(nèi)容物含人工牛黃和蛇膽汁以膽酸C28H34O15計，不得少于45μg。權(quán)利要求一種原料藥組成如下的牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量檢測方法，人工牛黃1.0-2.0重量份，川貝母40-60重量份，蛇膽汁6.0-10重量份，薄荷腦0.03-0.05重量份；所述牛黃蛇膽川貝液通過如下的工藝制備取人工牛黃研磨后，用3-10倍量的乙醇浸泡24小時，濾過，制成人工牛黃提取液；川貝母研碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑進行滲漉，收集滲漉液，濃縮至體積/重量比為1∶1，得到川貝母提取液；取蔗糖150-200重量份、蜂蜜50-100重量份加水制成糖漿，與蛇膽汁、所述人工牛黃提取液、所述川貝母提取液混合，加入薄荷腦0.04重量份和尼泊金乙酯0.5重量份混勻，加水調(diào)整總量至每1ml所述合劑含相當于0.058g原料藥，，攪勻，濾過，灌封，滅菌，即得；其特征在于所述質(zhì)量檢測方法包括如下I、II、III的鑒別方法I、取所述牛黃蛇膽川貝液20ml置分液漏斗中，加稀鹽酸1～2ml，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，棄去三氯甲烷液，水溶液用氨試液調(diào)至堿性，加三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加稀鹽酸2ml使溶解，濾過，分置三支試管中，一管中加入碘化鉍鉀試液1～2滴，生成紅棕色沉淀，一管中加碘化汞鉀試液1～2滴，生成白色沉淀，另一管中加入硅鎢酸試液1～2滴，生成白色沉淀；II、取所述牛黃蛇膽川貝液40ml置分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人工牛黃對照藥材28mg，加乙醇30ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加稀鹽酸6ml，用三氯甲烷振搖提取2次，每次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為16∶2∶1∶1的乙酸乙酯-正己烷-冰醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1∶1∶10的硫酸-醋酐-無水乙醇的混合溶液，在110℃加熱約10分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；III、取所述牛黃蛇膽川貝液50ml，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，所述正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取蛇膽汁對照藥材10mg，加正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨試液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用乙醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液；再取牛磺膽酸鈉對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液2～5μl、對照藥材溶液和對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比4∶0.5∶4的正丁醇-冰醋酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約5分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥復方制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的檢測方法還包括如下的高效液相色譜法含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7525的甲醇-0.2%醋酸溶液為流動相，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按膽酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備取膽酸對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含80yg的溶液，即得；供試品溶液的制備精密量取所述牛黃蛇膽川貝液10ml置分液漏斗中，加稀鹽酸1ml，用三氯甲烷振搖提取5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液5ia、20ia，供試品溶液loyi，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；每lml所述牛黃蛇膽川貝液含人工牛黃和蛇膽汁以膽酸C28H34015計，不得少于45ug。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述牛黃蛇膽川貝液的原料藥組成是人工牛黃1.6重量份，川貝母48.4重量份，蛇膽汁8.1重量份，薄荷腦0.04重量份；用5倍量的乙醇浸泡研磨后的人工牛黃；所述糖漿由蔗糖180重量份、蜂蜜80重量份加水制成。全文摘要本發(fā)明公開了原料藥組成為人工牛黃1.0-2.0重量份，川貝母40-60重量份，蛇膽汁6.0-10重量份和薄荷腦0.03-0.05重量份的牛黃蛇膽川貝液的質(zhì)量檢測方法，包括川貝母的化學鑒別、人工牛黃的薄層色譜鑒別、蛇膽汁的薄層色譜鑒別，以及膽酸的高效液相法含量測定。本發(fā)明還公開了所述牛黃蛇膽川貝液的制備工藝以及優(yōu)選的原料藥組成。本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法能夠從多方面反映所述牛黃蛇膽川貝液的制劑質(zhì)量，從而保證療效和用藥安全。文檔編號G01N30/90GK101829266SQ20101015877公開日2010年9月15日申請日期2010年4月28日優(yōu)先權(quán)日2010年4月28日發(fā)明者張龍輝,李振華,楊俊華,羅國仕,虞井紅,謝志勇,鄒俊武申請人:江西南昌桑海制藥廠