專利名稱：用于分離和分析血液的裝置和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于分離血液并分析血液中存在的蛋白質(zhì)的量的裝置。具體地， 本發(fā)明涉及一種用于分析血液中的脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)(FABP)的裝置和使用所述裝置確定 血液中的FABP的量的方法。
背景技術(shù)：
驗(yàn)血能用來確定與正常血像的偏差，根據(jù)此偏差，能夠確定例如病理異常或致病 因素的存在，或者，其至少可指出進(jìn)一步檢查是必須的或可取的。當(dāng)然，也能夠建立健康的 血像。U. S. 2003/0175167描述了這樣一種裝置，通過該裝置，能將一定量的血液吸收到 腔室中，其中，血液被稀釋，然后至少部分血液受壓通過過濾器。選擇過濾器，使得至少血液 中的血漿部分能夠通過過濾器并收集在收集空間中，同時，至少血液中的血細(xì)胞部分無法 通過過濾器并留在腔室中。然后，在腔室與所述收集空間之間的通道中設(shè)置密封件，以防止 血漿與細(xì)胞的交換。然后，通過郵件將該裝置發(fā)送至實(shí)驗(yàn)室，以對血漿進(jìn)行分析。特別重要 的是，要保持血漿與紅血球之間的分離，因?yàn)?，否則的話，血漿對于之后的許多檢驗(yàn)來說都 沒有意義。例如，用光譜分析進(jìn)行血漿的分析。U. S. 2004/0133146描述了一種裝置，由此用薄管抽血，然后在腔室中傳遞血液，這 之后，在活塞的幫助下將其壓靠在過濾器上，使得至少迫使血漿通過過濾器，并且，至少紅 血球留在腔室中。然后，例如，能用光譜分析檢驗(yàn)已分離的血漿。與全血分析相比，這些裝置提供不需要使血液離心的好處。這樣，抽少量的血液就 夠用了，并且，可更快速地進(jìn)行檢驗(yàn)。這些現(xiàn)有技術(shù)裝置以及其使用的方法，具有這樣的缺點(diǎn)在已抽過血的患者或臨 床醫(yī)學(xué)家知道檢驗(yàn)結(jié)果之前，其仍需要相對長的時間周期。畢竟，雖然僅需要抽少量的血 液，并且雖然不再需要離心處理，但是必須在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行分析，使得，對于運(yùn)輸和處理來 說，需要相對長的時間周期。此外，患者可能感受到這樣一個缺點(diǎn)其他人會知道檢驗(yàn)結(jié)果， 甚至?xí)诨颊咦约褐乐熬椭?。此外，例如，從U. S. 4，477，575中得知一種裝置，其中，使用試劑，由此，將一滴血 放置在過濾器的頂部上。由毛細(xì)管作用和/或重力驅(qū)動，引導(dǎo)血漿使其通過過濾層，同時， 將紅血球留在過濾器上。在過濾層中或其周圍，提供能與血漿中的物質(zhì)反應(yīng)的試劑。然后， 裝置的可視表面的目視檢查能夠(通過變色或出現(xiàn)的線)確定血液中是否存在被分析物。 DE 2922958描述了具有用于血液中的不同病理的或其它指示性因素的不同試劑的多層過這種裝置提供能由患者執(zhí)行檢驗(yàn)或當(dāng)著他或她的面執(zhí)行檢驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，使得能夠顯 著縮短獲得檢驗(yàn)結(jié)果所需的時間。然而，這種檢驗(yàn)仍需要幾十分鐘或更長時間，這在許多情況中是不受歡迎的。另 外，這些檢驗(yàn)具有這樣的缺點(diǎn)其非常易于受到例如來自外部的污染，因?yàn)檠b置是開口的，
4同時，另外，無法足夠精確地確定分離的程度以及由此確定所獲得的血漿的量。特別是當(dāng)使 用具有不同的試劑的多層過濾器時，此缺點(diǎn)更嚴(yán)重，因?yàn)椴磺宄^濾器的哪一層提供多 少血漿并且不清楚運(yùn)行時間，因此，直到獲得檢驗(yàn)結(jié)果所需的時間隨著過濾層的數(shù)量而增 加。本發(fā)明旨在提供一種分析血液中是否存在被分析物的裝置和/或方法。具體地，本發(fā)明的一個目的是，提供一種至少將血漿和紅血球從全血中相對快速 地分離，然后至少分析血漿的方法和/或裝置。本發(fā)明的另一目的是，提供一種用戶能夠獨(dú) 立地和相對快速地進(jìn)行驗(yàn)血的方法和/或裝置。本發(fā)明的又一目的是，提供一種用于血液的分離和分析的裝置和/或方法，其給 出關(guān)于血液中存在的一種或多種被分析物(尤其是FABP)的閾值或值的指示。

發(fā)明內(nèi)容
在第一方面中，本發(fā)明涉及一種用于從患者的血液樣本中檢測FABP的裝置，該裝 置包括以下元件a)分離裝置，用于分離血漿與紅血球，其中，所述分離裝置設(shè)置有-腔室，用于容納血液樣本并包括用于所述血液樣本的稀釋液；-過濾器，來自已稀釋的血液樣本的血漿和FABP(可選地與抗體復(fù)合)能通過該過 濾器，但至少紅血球不能通過，以及-加壓裝置，用于使至少部分血液樣本受壓通過所述過濾器，以提供分離的血漿， 以及b)收集裝置，用于收集已分離的血漿，其中，所述分離裝置和/或所述收集裝置提供有以下抗體中的至少一個-抵抗FABP的第一抗原決定基的檢測抗體，所述檢測抗體與可檢測的標(biāo)記物結(jié) 合，并能夠接觸已分離的血漿，以及-抵抗FABP的與所述第一抗原決定基不同的第二抗原決定基的捕獲抗體，其中， 所述捕獲抗體能夠以固定形式提供在所述收集裝置中，并能夠接觸已分離的血漿。這里使用的術(shù)語“能夠接觸”指的是這樣的事實(shí)當(dāng)使用本發(fā)明時，抗體與相應(yīng)的 液體(主要是血漿)接觸或能夠與其接觸。在其中僅提供檢測抗體的優(yōu)選實(shí)施例中，有利的是，檢測抗體能夠在檢測反應(yīng)中 與FABP復(fù)合，檢測反應(yīng)發(fā)生在主要由包含均勻分布的檢測抗體的已稀釋血漿組成的液相 中，由此液相與存在于所述收集裝置中的檢測表面直接接觸，并且，由此能將檢測抗體固定 在所述檢測表面上。在本發(fā)明的裝置的一個優(yōu)選實(shí)施例中，所述過濾器設(shè)置在能夠插入所述腔室中的 管狀元件的端部處或其附近，其中，所述收集裝置由所述管狀元件的內(nèi)部形成。在另一優(yōu)選實(shí)施例中，所述捕獲抗體固定在能夠插入所述收集裝置中的插入元件 處。在本發(fā)明的裝置的又一優(yōu)選實(shí)施例中，所述檢測抗體被提供在所述稀釋液中。在本發(fā)明的裝置的另一優(yōu)選實(shí)施例中，所述FABP選自由H-FABP、LFABP, I-FABP, ILBP, B-FABP, A-FABP, E-FABP, T-FABP 和 M-FABP 及其組合組成的組。
在本發(fā)明的裝置的另一優(yōu)選實(shí)施例中，所述可檢測的標(biāo)記物選自由膠態(tài)金或銀、 抗生蛋白鏈菌素、生物素、微球體、乳膠微珠、過氧化物酶、抗生蛋白鏈菌素標(biāo)記的辣根過氧 化物酶(HRP)、磷酸酶、堿性磷酸酶(AP)發(fā)色標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物、磷光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo) 記物和二次抗體，以及這些物質(zhì)的組合組成的組。在本發(fā)明的裝置的又一優(yōu)選實(shí)施例中，收集裝置至少是部分透明的，使得從所述 收集裝置或裝置的外部至少能部分地看到所述已固定捕獲抗體(的附著位置)。根據(jù)本發(fā)明的用于FABP的檢測的裝置的優(yōu)點(diǎn)是，現(xiàn)在提供在幾分鐘內(nèi)給出檢驗(yàn) 結(jié)果的快速檢驗(yàn)。典型地，從將血液樣本提供給裝置的時間開始，在3分鐘內(nèi)，優(yōu)選地在2 分鐘內(nèi)，讀出檢驗(yàn)結(jié)果。此重要的好處由本裝置及其方法的兩個重要特征來實(shí)現(xiàn)。首先，在 優(yōu)選實(shí)施例中，在檢測試劑和FABP之間使用檢測反應(yīng)，該反應(yīng)發(fā)生在由包含已溶解的或已 懸浮的(均勻分布的)檢測試劑的已稀釋血液或血漿組成的液相中，其中，所述液體與檢測 表面直接接觸，或使所述液體與檢測表面直接接觸。液相中的這種檢測反應(yīng)進(jìn)行地非?？?。 然后，檢測試劑和FABP的反應(yīng)產(chǎn)物的擴(kuò)散從液相擴(kuò)散到檢測表面。在檢測表面處固定之 后，能用眼睛觀察到反應(yīng)產(chǎn)物。在根據(jù)本發(fā)明的用于FABP的檢測的系統(tǒng)的一個優(yōu)選實(shí)施例 中，此擴(kuò)散過程是速度限制步驟，該系統(tǒng)包括如這里描述的裝置的應(yīng)用。然而，與現(xiàn)有技術(shù) 系統(tǒng)相比，這仍是非?？斓?。其次，使用特定系統(tǒng)，以產(chǎn)生血漿。然而在現(xiàn)有技術(shù)系統(tǒng)中用側(cè)向流動原理將血漿 與血細(xì)胞分離，本系統(tǒng)利用具有壓力裝置的過濾器來實(shí)現(xiàn)此效果。這還非常有助于提高本 系統(tǒng)的速度。由于該系統(tǒng)提供第一步驟的事實(shí)，在第一步驟中，在使血液受壓通過過濾器之 前用稀釋液稀釋血液，所以，無法預(yù)料能夠以這樣的方式實(shí)現(xiàn)這種快速檢驗(yàn)(大約是傳統(tǒng) 速度的10倍)。但是，檢驗(yàn)的靈敏度足以在臨床上檢測已稀釋血漿中的FABP的相關(guān)水平。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于分析血液中是否存在FABP的方法，其中，將(已 知)一定量的血液至少分離成血漿和紅血球，其中，至少將血漿收集在收集裝置中，其中， 允許存在于血液中的FABP與至少一種抗體(該抗體具體地與FABP起反應(yīng))接觸，并且，其 中，從收集裝置的外部能觀察到抗體與FABP之間的結(jié)合。在本發(fā)明的方法的一個優(yōu)選實(shí)施例中，從對象或從血液樣本取得預(yù)定量的血液， 并將其放入裝置中，其中，將預(yù)定量的血液與預(yù)定量的稀釋液混合以獲得期望的稀釋物， 然后，將已稀釋的血液壓靠在過濾器上，以便迫使血漿通過過濾器并進(jìn)入所述收集裝置，并 且，由過濾器阻止紅血球通過。在本發(fā)明的方法的一個優(yōu)選實(shí)施例中，所述血漿與所述收集裝置中的所述至少一 種抗體接觸。在本發(fā)明的方法的另一優(yōu)選實(shí)施例中，用檢測抗體抵抗(against)FABP的第一抗 原決定基，該檢測抗體與可檢測的標(biāo)記物結(jié)合，并且，以使得該檢測抗體能與已分離的血漿 接觸的位置將其提供在裝置中。在本發(fā)明的方法的另一優(yōu)選實(shí)施例中，用捕獲抗體抵抗與FABP的所述抗原決定 基不同的第二抗原決定基，其中，可使所述捕獲抗體在所述收集裝置中處于固定狀態(tài)，并 且，以使得其能與已分離的血漿接觸的位置將其提供在裝置中。具體地，提供了一種方法，其中，使用至少兩種抗體，每種抗體具體地與FABP的不 同抗原決定基反應(yīng)，即，用可檢測的標(biāo)記物標(biāo)記的檢測抗體和用于將FABP-檢測抗體復(fù)合物固定在裝置中的固體表面上的捕獲抗體，其中，可將兩種抗體與FABP同時結(jié)合，其中，將 所述檢測抗體添加至所述稀釋液，并且，其中，如這里定義的，將所述捕獲抗體固定在插入 元件或桿件處，并使其與已分離的血漿接觸。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于檢測取自患者的血液樣本中的FABP的方法，其 包括以下步驟-提供如上所述的本發(fā)明的裝置；-將已知量的血液引入所述腔室中的所述稀釋液中，由此，可選地應(yīng)用多孔體， 在多孔體中可吸收固定量的血液，以在稀釋液中提供預(yù)定量的血液，并使血液與稀釋液混 合；-通過接合該裝置的分離裝置將紅血球與血漿分離；-在抗體與FABP之間出現(xiàn)特異性結(jié)合的條件下，使所述血液或血漿中的FABP與所 述檢測抗體和捕獲抗體中的至少之一接觸，以及-檢測所述特異性結(jié)合。例如，特異性結(jié)合將在以下條件下出現(xiàn)，其中，在環(huán)境溫度和壓力下，F(xiàn)ABP和抗體 中的一個或兩個處于液體狀態(tài)，例如磷酸鹽或其它一般緩沖劑。注意，本領(lǐng)域技術(shù)人員非常 了解這些條件，在這些條件中，將出現(xiàn)抗體及其抗原之間的結(jié)合。在本發(fā)明的方法的一個優(yōu)選實(shí)施例中，在所述稀釋液中提供所述檢測抗體，并確 保所述捕獲抗體以固定狀態(tài)與所述收集裝置中的血漿接觸。優(yōu)選地，這通過在所述血漿中 引入一元件(例如，如這里定義的桿件或插入元件)來實(shí)現(xiàn)，將所述捕獲抗體固定在所述元 件上。然后，允許將由FABP和檢測抗體形成的復(fù)合物與捕獲抗體結(jié)合，其中，具有固定的捕 獲抗體的所述元件采用檢測表面的功能。在本發(fā)明的方法的一個替代優(yōu)選實(shí)施例中，首先允許在液體中(例如，在腔室中 的已稀釋血液中，或在收集裝置中的已稀釋血漿中)形成FABP和檢測抗體之間的復(fù)合物， 然后，允許該復(fù)合物與所述固定的捕獲抗體結(jié)合。在本發(fā)明的方法的另一替代優(yōu)選實(shí)施例中，僅將檢測抗體提供給從稀釋液、已稀 釋血液和已分離的血漿中選擇的液體，并允許在該液體中或在通過使用該裝置而形成的后 續(xù)液體中形成檢測抗體-FABP復(fù)合物，然后，允許(例如，通過對檢測試劑施加順磁性微珠) 將所述復(fù)合物固定至面向限定空間27的裝置1的任何元件的一側(cè)的空間27(或第一收集 裝置27)的任何表面，使得捕獲抗體能與血漿觀直接接觸。事實(shí)上，在這種實(shí)施例中，檢測 抗體將也是捕獲抗體。在本發(fā)明的方法的另一替代優(yōu)選實(shí)施例中，所述FABP選自由H-FABP、LFABP, I-FABP, ILBP, B-FABP, A-FABP, E-FABP, T-FABP, M-FABP 及其組合組成的組。在本發(fā)明的方法的另一優(yōu)選實(shí)施例中，從由膠態(tài)金或銀、抗生蛋白鏈菌素、生物 素、微球體、乳膠微珠、過氧化物酶、抗生蛋白鏈菌素標(biāo)記的辣根過氧化物酶(HRP)、磷酸酶、 堿性磷酸酶(AP)發(fā)色標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物、磷光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和二次抗體，以及 這些物質(zhì)的組合組成的組中選擇所述可檢測的標(biāo)記物。在本發(fā)明的另一方面中，提供一種零件套裝，包括至少一用于將血液至少分離成 血漿和紅血球的裝置，其中，所述裝置包括用于收集已分離的血漿的收集空間，并且與FABP 反應(yīng)的至少一特異性抗體適于被引入所述收集空間中。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的零件套裝進(jìn)一步包括用于吸收和釋放預(yù)定量的血液的元 件，例如海綿。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的零件套裝包括如上所述的發(fā)明的裝置。優(yōu)選地，該套裝還包括用于執(zhí)行本發(fā)明的方法、用于操作所述裝置和/或元件、以 及/或用于安全地處理所述所使用的裝置和/或攝取元件的說明。


為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，將基于

根據(jù)本發(fā)明的裝置和方法的實(shí)施例。圖1示出了在第一實(shí)施例中在使用本發(fā)明的裝置之前的橫截面圖；圖2示出了處于部分接合狀態(tài)中的圖1的裝置，其中，管狀元件部分地插在腔室 中；圖3示出了處于完全接合狀態(tài)中的圖1和圖2的裝置，其中，管狀元件完全插在腔
室中；圖4A和圖4B示出了分別處于初始位置和最終位置的本發(fā)明的裝置的替代實(shí)施例 的部分橫截面?zhèn)纫晥D，；圖4C在橫截面?zhèn)纫晥D中示意性地示出了用于圖4的裝置的過濾器；圖5示意性地示出了在本發(fā)明的裝置中使用的插入元件；圖6示出了替代實(shí)施例中的圖1的裝置的插入元件。在此說明書中，相同或相應(yīng)的元件具有相同或相應(yīng)的附圖標(biāo)號。并非所有的附圖 標(biāo)號都提供在所有附圖中。如下所說明的，圖4c中的附圖標(biāo)號57與圖5中的附圖標(biāo)號57 并不相應(yīng)。
具體實(shí)施例方式在第一實(shí)施例中，本發(fā)明的裝置的特征在于，至少包括用于將血漿與紅血球分離 的分離裝置，該分離裝置包括用于使至少一部分血液受壓通過過濾器的壓力裝置，其中，至 少設(shè)置第一收集裝置以收集已分離的血漿，并在所述第一收集裝置中提供至少一種試劑， 或者，可將所述試劑引入所述第一收集裝置中，以與存在于所述血漿中的物質(zhì)或有機(jī)體反應(yīng)。這種裝置提供這樣的優(yōu)點(diǎn)在壓力下使至少血漿與至少紅血球分離，使得幾乎立 刻獲得血漿和紅血球的期望的分離。此外，至少血漿收集在收集裝置中，血漿在收集裝置 中與至少一種試劑接觸或使血漿能夠與至少一種試劑接觸，使得，能夠在非常短的時間內(nèi) (在幾分鐘或幾秒鐘內(nèi))確定在某位患者的血液中是否存在特定的物質(zhì)，或至少超過一定 的值或極限值。優(yōu)選地，使用允許視覺確定是否發(fā)生某一反應(yīng)的試劑，例如通過顏色變化、 結(jié)構(gòu)變化，例如凝結(jié)、溶解等。優(yōu)選地，將血漿收集在第一收集裝置中，以與外部環(huán)境隔離的空間的形式提供第 一收集裝置，使得不會出現(xiàn)血漿的污染、玷污或泄漏。優(yōu)選地，在使用前，給裝置提供已知量 的稀釋液，尤其是在腔室中，同時，在腔室中另外提供已知量的血液，以便精確地得知血液 的稀釋程度。這確保輕松地獲得快速且精確的檢驗(yàn)結(jié)果。在第一特別有利的實(shí)施例中，將該至少一種試劑供應(yīng)在第一收集裝置中或使之在第一收集裝置中可獲得，尤其是在其壁部。優(yōu)選地，所述壁部是至少部分透明的，使得，例 如，不需要打開裝置，從裝置的外部(至少從第一收集裝置的外部)能清楚地看到試劑的顏 色或結(jié)構(gòu)(texture)的變化。在一個替代實(shí)施例中，該至少一種試劑提供在能插入第一收集裝置中的元件上、 提供在該元件中或在該元件處。這至少提供基本上能通用地執(zhí)行本裝置的優(yōu)點(diǎn)，其中，始終 能根據(jù)將執(zhí)行的檢驗(yàn)而選擇適當(dāng)?shù)脑噭?。?yōu)選地，選擇和/或按劑量添加本發(fā)明的裝置和/或方法中的試劑，使得可確定過 渡值，以便至少能確定血液中的特定因素是否高于或低于預(yù)定值。在一個具體實(shí)施例中，本裝置裝配有能夠使血液或至少使血漿受壓通過濾器的活 塞，由此，優(yōu)選地將第一收集裝置設(shè)置在活塞內(nèi)。該至少一種試劑可提供在活塞上或其中。在根據(jù)本發(fā)明的裝置和方法中，每次可應(yīng)用一種試劑，而且可提供試劑的組合，以 在一個裝置中同時進(jìn)行一系列檢驗(yàn)。例如，在第一收集裝置的壁部上，可對環(huán)或表面提供不 同的試劑。如果需要的話，當(dāng)然也可能在另一聚集條件下提供試劑，例如液體或以固體的形 式。在一個替代實(shí)施例中，在分開的容器中或其上提供至少一種試劑，其中，用于特別 是在第一收集裝置中分離血液的裝置裝配有注入口，使得在將血漿與紅血球分離之后，能 將血漿注入到所述容器中或其上的至少所述至少一種試劑處。優(yōu)選地從僅指示血漿中的物質(zhì)或有機(jī)體的存在并且不指示其濃度的值的試劑的 組中選擇該至少一種試劑。優(yōu)選地，該至少一種試劑本質(zhì)上是二元的例如，通過試劑、血漿 或其之間的反應(yīng)的顏色、凝固或其它變化，試劑的反應(yīng)指示是否超過某一閾值。這里示出和討論的實(shí)施例總是以血液的分離和分析為基礎(chǔ)的。然而，可用相同或 相似的裝置檢驗(yàn)其它生物樣本。在實(shí)例中給出的裝置、方法和試劑的實(shí)施例僅為了示意性 的目的而示出，并且，不以任何方式限制本發(fā)明。在圖1中，提供裝置1的部分橫截面圖，根據(jù)本發(fā)明，將第一實(shí)施例示出為在兩個 部分中。在圖1中，在左側(cè)示出了第一部分2，其由透明的塑料殼3形成，殼在底部由錐形底 4封閉并且在相對側(cè)5上是開口的。開口側(cè)5裝配有具有外螺紋7的頸部6，帽8擰在外螺 紋7上。帽8將墊圈9夾在頸部6處，使得封閉殼3內(nèi)的內(nèi)室或腔室10。在腔室10中，提 供有預(yù)定量的稀釋液11。圖1在右側(cè)示出了活塞部分12形式的第二部分20，包括具有開口底部14和相對 的開口頂部15的至少部分透明的管狀元件13，該開口頂部由凸緣16包圍。在底部14的 外側(cè)周圍，裝配有具有外徑Db的柔性環(huán)17，外徑Db以下述方式適應(yīng)第一部分2的殼3的 內(nèi)徑Di。在管狀元件13中引入桿件18，其具有外徑dl，dl比管狀元件13的內(nèi)徑d2小。 在桿件18的頂部設(shè)置有凸緣部分19，凸緣部分在其頂側(cè)連接至擋板21，擋板向外延伸并裝 配有內(nèi)螺紋22，該內(nèi)螺紋能裝配在部分2的外螺紋7上。凸緣部分密封地裝配在頂部15 中，同時，擋板能緊靠凸緣16的外側(cè)。桿件18和凸緣部分19具有這樣的長度，使得，在圖 1所示的位置中，桿件18的下端M保持在距離管狀元件13內(nèi)的下端14 一定距離處。在 桿件18的下端M設(shè)置有擋塊25，其將在下面說明。在管狀元件13的底部端14中附接有 過濾器沈，至少通過血液的任何稀釋，至少血漿能通過該過濾器，但是紅血球不能通過。在 U. S. 2003/0175167A1中給出了使用過濾器和稀釋物的實(shí)例，其通過引證結(jié)合于此，并且不應(yīng)限制性地對其進(jìn)行解釋。在圖2中，示出了處于這樣的狀態(tài)中的第二部分20，其中，將第二部分20部分地 引入或接合入第一部分2中，其中，在稀釋液中混合一滴已知量的血液。在此位置中，過濾 器沈位于已稀釋的血液上，并用環(huán)17密封靠著殼3的內(nèi)部。從而封閉腔室10。從此位置 開始，可將第二部分20在底部4的方向上進(jìn)一步向下推動。從而，過濾器沈?qū)⒂昧嚎恳?稀釋的血液，使得血漿受壓向上通過過濾器沈，而紅血球被阻止并保持在腔室10中。在桿 件18、管狀元件13、過濾器沈以及凸緣部分19之間，形成有環(huán)形腔室形式的第一收集裝置 27，在其中收集有血漿。在圖3中，示出了根據(jù)本發(fā)明的裝置1的橫截面?zhèn)纫晥D，第二部分20被完全向下 壓入第一部分2中至這樣的程度，使得內(nèi)螺紋22擰在外螺紋7上，并使得擋塊25密封過濾 器沈上方的管狀元件13的開口端部分，以防止血漿觀從第一收集裝置27回流到腔室中。在圖1至圖3所示的實(shí)施例中，在管狀元件13的內(nèi)部上設(shè)置至少一個表面29， 該管狀元件容納有用于存在于或可能存在于血漿觀中的至少一種成分或被分析物的試劑 30。優(yōu)選地，將試劑30應(yīng)用為環(huán)形平面，使得能從復(fù)合裝置(composite device) 1的外側(cè) 的所有側(cè)面看到試劑。如果此被分析物在血漿中存在一定的程度，那么這允許清楚地觀察 試劑30與所述被分析物的反應(yīng)，例如，通過顏色變化、結(jié)構(gòu)變化、凝固、溶解等。將顯而易見 的是，可在必須確定被分析物的存在、濃度、水平等的基礎(chǔ)上選擇試劑30或多種試劑。如果 希望的話，對兩個或多個表面^、29A、29B、29C...提供相同的試劑30，但是優(yōu)選地提供不 同的試劑 30A、30B、30C. · ·。在圖6所示的一個替代實(shí)施例中，在環(huán)形表面四的形式的桿件18上提供試劑。 這具有這樣的優(yōu)點(diǎn)根據(jù)待確定的所期望的被分析物，例如，可從一組具有不同試劑的桿件 18中選擇桿件18。實(shí)際上，這當(dāng)然也可用具有不同試劑的各種管狀元件13來實(shí)現(xiàn)。在本發(fā)明的裝置的一個替代實(shí)施例中，如圖6中示意性地示出的，可提供一系列 插入元件，例如，(中空的)桿31、環(huán)32等，其中，各種插入元件承載有不同的試劑30、30A、 30B...，這便于，在任何時間，根據(jù)所期望的檢驗(yàn)，可在管狀元件13中提供適當(dāng)?shù)脑噭┗蜻m 當(dāng)?shù)脑噭┙M合。例如，環(huán)形元件可在桿件18上滑動，以形成如圖6所示的桿件18。例如， 可將桿或類似物放在桿件18中的槽或開口中，或放在圍繞板或腔室的桿件18中，例如空間 27或管13，例如寬松地插入的。圖5示意性地示出了用于在圖1至圖3的裝置中使用的插入元件32的一個替代實(shí) 施例的透視圖。此插入元件32基本上由中空圓柱體50形成，其在第一端51包括環(huán)形部分 52，多個指部53從環(huán)形部分52在相對的第二端M的方向上延伸。指部53在第二端M附 近具有再生部分(rejuvenation) 55，由于每個指部的部分56相對于所述本體50的外表面 57向內(nèi)彎曲。在再生部分55的面向外的表面四上，在每個指部53上提供試劑30。每個 指部上的試劑可以是相同的，但是，在不同的指部53上可提供不同的試劑30、30A、30B...， 例如，為了執(zhí)行不同的、不論是否相關(guān)的檢驗(yàn)。圓柱體50具有外徑D3，其與本體13的內(nèi)徑 D2基本相等，使得其能夠從頂部15插入本體13，優(yōu)選地在端部14的方向上通過指部53插 入。然后，外表面57能與本體13的內(nèi)側(cè)臨靠，同時表面四保持在距離其一定距離處。這 允許試劑30、3(^、3( ...與收集在空間27中的血漿適當(dāng)?shù)亟佑|。當(dāng)然，可以別的方式提供 或應(yīng)用試劑，例如，將試劑直接提供或應(yīng)用在表面57上，如果使其保持遠(yuǎn)離本體13的壁部，或者在插入元件32的面向內(nèi)的表面上，在此情況中，當(dāng)至少指部53的至少位于試劑30的 位置處是至少部分透明的時，這是有利的。圖4A和圖4B示意性地示出了根據(jù)本發(fā)明的裝置1，在一個替代實(shí)施例中，其基礎(chǔ) 在NL 1016646中描述，該公開物的全部內(nèi)容通過引證結(jié)合于此，至少關(guān)于從血液分離血漿 的操作通過引證結(jié)合于此。此裝置1包括中空圓柱體33，其中，在壓力體35的幫助下，第一活塞34能在第一 位置(其中，壓力體?？吭谶B接至第一活塞的第一桿件36的一端)與第二位置(例如，沿 著桿件36繞著通過本體33的軸線相對于第一位置旋轉(zhuǎn)大約90度的角度)之間密封地移 動。在第一位置中，由此可用壓力體35在本體33的下端37的方向上推動第一活塞34，直 到緊靠接合件(abutment) 38。在桿件36周圍設(shè)置具有桿件46的第二活塞39，并密封桿件 以及本體33的內(nèi)部。例如，第二活塞39是橡膠圈。在第一活塞34與第二活塞39之間，封 閉有處理室40，其容積是可變的。處理室可容納處理液或其它材料，例如緩沖劑11，例如磷 酸鹽緩沖劑，與圖1至圖3相似。已經(jīng)在本體33的壁部44中裝配入口 42和出口 43?？蓪?毛細(xì)管44放在入口中，使得毛細(xì)管44的內(nèi)容物能被吸入兩個活塞34、39之間的本體，位于 處理室40中，如將描述的。過濾器沈裝配至出口 43，至少可迫使處理室40的內(nèi)容物進(jìn)入 和/或通過過濾器26。在起始位置中，如圖4A所示，活塞34、39定位在本體33中相對較高的位置，并且 彼此相對靠近。入口優(yōu)選地在處理室中精確地打開，處理室40具有相對小的容積。填充有 全血45的毛細(xì)管44作為樣本放在入口 42中。通過在本體的下端37的方向上對第一活塞 34施壓，其通過出口 43，同時，處理室40的容積增大，因?yàn)榈诙钊?9將不會，或至少不會 完全遵循第一活塞34在最大沖程(即，在壓力體35到達(dá)第二位置之前，其在下端37的方 向上從起始位置能移動的最大距離)的第一部分上的運(yùn)動。由于處理室40的容積的增加， 毛細(xì)管的內(nèi)容物將被吸入處理室，并與處理液11混合。然后，使壓力體相對于桿件36到達(dá)第二位置，使得其能在桿件36上在下端37的 方向上進(jìn)一步受壓，由此，在第一活塞34的方向上擠壓第二活塞39。從而，使處理室的容積 回縮，尤其是減到最小，并且，推動處理液和樣本的混合物通過出口 43，進(jìn)入和/或通過過 濾器沈。過濾器可以是任何適當(dāng)?shù)倪^濾器，例如，玻璃纖維過濾器。從而，將血液與血漿分 離，因?yàn)檠獫{受壓通過過濾器，例如紅血球和白血球的血液微粒被去除。根據(jù)本發(fā)明，在過濾器沈中和/或在過濾器沈處，提供至少一個檢驗(yàn)表面四，如 圖4C所示，由試劑30形成或包括試劑30，例如以上描述的。因?yàn)檠獫{受壓通過過濾器，其 與任何檢驗(yàn)表面四直接并密集地接觸，并由此與任何試劑30接觸，從而允許幾乎立刻讀出 檢驗(yàn)結(jié)果。優(yōu)點(diǎn)是，不需要將其提供至外部試劑表面，由此能防止血漿和/或試劑的污染。此外，可將血漿收集在過濾器沈中，或至少收集在其殼體47中，由此，能防止環(huán)境 的污染，特別是環(huán)境的玷污。在生物樣本(例如，在血液中可能存在致病因子)中使用的情 況中，這特別重要。在圖4C中，示出了用于根據(jù)圖1、圖4A和圖4B的裝置的示意性過濾器沈，該過濾 器沈包括殼體47。殼體47至少部分是透明的，優(yōu)選地是完全透明的，使得，不需要打開殼 體47便能看見被提供有試劑30的過濾器表面48或至少其一部分。這防止了血漿、試劑和 /或環(huán)境的污染。例如，殼體47可包括兩個殼體部分48、49，其彼此附接，同時包括如前所述的過濾器元件57，用于將血漿與血細(xì)胞分離。在過濾器元件57上方的第一殼體部分48 中，腔室58設(shè)置在使用過程中面向出口 43的一側(cè)，血細(xì)胞保留在那里。在第二殼體部分49 中，設(shè)置有在其中收集已分離的血漿觀的收集室或空間27。在此空間中，提供至少一表面 四，在該表面上或其中包括用于與血漿反應(yīng)的試劑。例如，可在過濾器元件57上，在面向收 集室27的一側(cè)，設(shè)置此表面29，由此，例如可提供多孔形式的表面，使得在血漿與試劑之間 形成密集接觸。如圖4C所示，也可在殼體47的內(nèi)部上，在收集室27中，或在這兩處地方， 設(shè)置表面四。在此實(shí)施例中，第二殼體部分至少在表面四的位置處是透明的，這里，將表 面四設(shè)置在塊59上，使得，例如，能從殼體47的外部看到由于血漿和試劑30的成分之間 或血漿和試劑中的成分之間的反應(yīng)而產(chǎn)生的塊的變色。本發(fā)明決不限制于在附圖和說明書中所提供的實(shí)施例。在由本發(fā)明的權(quán)利要求概 括的范圍內(nèi)，許多變型都是可行的。例如，當(dāng)使用過濾器時，可使用將血漿至少部分地收集于其中的殼體，其中，殼體 至少部分是透明的，并且在其中提供有試劑。這提供良好地防止污染和/或玷污的優(yōu)點(diǎn)。此 外，然后可將該裝置或至少收集于其中的血漿用于其它檢驗(yàn)。例如，可將裝置整體或過濾器 和/或殼體發(fā)送至實(shí)驗(yàn)室，在那里可進(jìn)行其它檢驗(yàn)，例如，為了驗(yàn)證或進(jìn)一步檢查通過試劑 獲得的第一指示。用該裝置檢測血液中的被分析物可對本發(fā)明的裝置提供用于檢測的試劑，即，用于被分析物(例如，血漿中的化學(xué) 或生物物質(zhì)或微生物)的定量、半定量或定性存在的確定。例如，血漿中的化學(xué)或生物學(xué)物 質(zhì)或微生物。例如，可使用這樣的試劑，其可指示幽門螺桿菌的存在，或指示凝血因子的過量或 不足。也可使用這樣的試劑，其指示抗原的存在，例如其必須存在的范圍或超過極限的 程度，例如通過抗原可證明或確信腫瘤的存在。也可應(yīng)用這樣的試劑，例如，通過該試劑能確定維生素的存在?？蛇M(jìn)一步使用這樣的試劑，利用該試劑，通過超過或消減(undercutting)閾值或 極限值，其能指示出該超過是否會對患者有害。這種試劑可有利地與指示該極限值的超過 或消減的試劑組合?？蓱?yīng)用其它試劑，通過該試劑，能確定物質(zhì)的治療血液水平，例如藥物 (drug)或毒素，例如，為了最佳的作用，藥物取決于由于例如不期望的副作用而可能不被超 過的最佳血液水平。而且，可應(yīng)用如所述的試劑的組合。這些試劑和應(yīng)用當(dāng)然僅是示意性 的，并且不應(yīng)限制性地進(jìn)行解釋。在本說明書中，術(shù)語“試劑”或“多種試劑”或類似的措辭，應(yīng)至少被理解為包括抗 體或酶，這意味著可基于抗體或酶進(jìn)行檢驗(yàn)?？蓱?yīng)用幾種試劑和其它標(biāo)記物，例如抗原、化學(xué)試劑、酶、化學(xué)標(biāo)記物等?？捎迷?劑和標(biāo)記物來指示心臟、肝臟、腎臟或其它器官的問題、血糖異常(例如糖尿病)、膽固醇紊 亂、一種或多種荷爾蒙或細(xì)胞因子的缺陷、一般診斷參數(shù)等等、病毒性或細(xì)菌性異常(例如 流行性感冒、瘧疾、肝炎、HIV、炎癥、MS、ME)以及其它指標(biāo)，尤其是用于已存在的和/或潛在 的健康問題的指標(biāo)。應(yīng)將此內(nèi)容中的偏差理解為這種偏離于可被期望的正常值的偏差，對 于有問題的患者，這些值指示或應(yīng)該向醫(yī)生指示進(jìn)一步檢查或干預(yù)是必要的，例如，施加藥物、流體或營養(yǎng)物，或通過手術(shù)干預(yù)。試劑的實(shí)例(其決不限制本發(fā)明)包括，例如，用于HTLVI和/或II的抗體，用于 腎功能(例如心臟或心血管問題)的半胱氨酸蛋白酶抑制劑C或標(biāo)記物，心臟病發(fā)作(心 肌梗塞)和/或中風(fēng)，單克隆抗體，凝固試劑(例如，狼瘡抗凝物敏感或不敏感的試劑)，PSA 抗原，HBS-I，HLA抗體，血色素測量中的HbA(Ic)或GlyHb。在表面四的實(shí)施例的第一實(shí)例中，在管狀部分13的內(nèi)部上施加膽固醇試劑，用作 試劑30的CHOD-Pap (Boehringer-Mannheim GmbH)，其適于證明膽固醇(總膽固醇，HDL或 LDL)。在腔室10中，提供一定量的稀釋液(緩沖劑)(例如，220微升)，在此之后，在其中 稀釋血液(例如，60微升的血液，將血液有效地稀釋4至5倍)。通過將第二部分壓入第一 部分中，如上所述，在第一空間27中收集220微升的血漿。通過搖動(水平搖動)使此血 漿與試劑接觸，其結(jié)果是，試劑從中性色變成區(qū)別顏色，在此情況中是紅色，能從外部清楚 地看到。借此，發(fā)現(xiàn)血液中的膽固醇水平比6.5mmole/L的閾值高。通過靜脈采血來抽取并 在實(shí)驗(yàn)室中檢驗(yàn)，以及通過手指刺戳來抽取并在實(shí)驗(yàn)室中檢驗(yàn)的全血的控制測量，表明血 液的確具有高于該閾值的值。以下將描述對于用于腎功能、肝臟、心臟病發(fā)作和/或中風(fēng)的標(biāo)記物的檢測來說 特別優(yōu)選的一個實(shí)施例。此特別優(yōu)選的實(shí)施例可特別應(yīng)用于身體組織或體液的樣本中的FABP的定量、半 定量或定性檢測。脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)(FABP)是一種已知為用于特定組織的損害的早期標(biāo) 記物的蛋白質(zhì)，其中，每種組織類型的特征在于其自己的FABP類型。FABP是包括在脂肪酸 的胞內(nèi)結(jié)合中的15kDa菌體蛋白質(zhì)(cytosolic protein)，并表示為九種不同的異形體，每 種以其第一次在其中被描述的組織命名。-心臟-FABP(H-FABP 或心臟型)；-肝臟-FABP(L FABP 或肝臟型)；-腸-FABP(I-FABP 或小腸型)；-回腸-FABP(ILBP或回腸型)；-腦-FABP(B-FABP 或腦型)；-脂肪細(xì)胞-FABP(A-FABP或脂肪細(xì)胞型)；-上皮/表皮-FABP(E-FABP或上皮細(xì)胞型)；-睪丸-FABP(H-FABP或睪丸型)以及-髓磷脂-FABP(M-FABP或神經(jīng)細(xì)胞型)。至今為止，沒有能夠在少于幾分鐘內(nèi)給出結(jié)果的對FABP的快速檢驗(yàn)。FABP的快 速確定可產(chǎn)生組織損傷的快速診斷和適當(dāng)治療的及早開始，尤其是在危及生命的狀態(tài)中， 例如心臟病或中風(fēng)。特定FABP的量的測量可能(在眾多因素中，但不是唯一地)應(yīng)用于 以下?lián)p傷的診斷心肌損傷(H-FABP)、骨骼肌損傷(H-FABP)、肝臟損傷(L-FABP)、腎臟損傷 (L-FABP 和 / 或 H-FABP)、腸損傷(包括 I-FABP、ILBP 和 / 或 L-FABP)、腦損傷(B-FABP 和 / 或H-FABP)，并在以下診斷中使用脂類代謝的一系列紊亂、糖尿病、發(fā)炎性疾病、多發(fā)性硬 化、動脈硬化癥、癌癥以及移植之后的組織排斥。本發(fā)明提供用于每個可能出現(xiàn)在動物或人類患者中的異形體中的基本上任何以 上FABP的檢測，其中，優(yōu)選地在免疫測定的基礎(chǔ)上，并優(yōu)選地在血液中，執(zhí)行與期望的特異性有關(guān)的檢測。用于FABP的檢測的免疫測定在原則上對技術(shù)人員來說是已知的，并且，這種化 驗(yàn)適于在本發(fā)明中使用?？捎玫拿庖邷y定的一個實(shí)例采用夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的形 式(Pelser MMAL. 2004. “作為用于組織損傷的血漿標(biāo)記物的脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)(Fatty acid-binding protein as plasma markerfor tissue injury)，，馬Jffi)=寺 11 ,大學(xué)ife文， 荷蘭 ISBN 90-9018161-X，第 3 章，第 43 至第 51 頁；Wodzig KffH, Pelser MMAL, van der Vusse GJ, Roos W，Glatz JFC.用于血漿脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)的一步式酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (One-step enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for plasma fattyacid-binding protein)。Ann Clin Biochem 1997;34:263-8)。此化驗(yàn)(總持續(xù)時間是 45 分鐘)是最 快的，最特效的，并是敏感的H-FABP ELISA，其可在商業(yè)上獲得。此化驗(yàn)利用兩種不同的單 克隆抗體，每個涉及H-FABP的不同抗原決定基。這些單克隆抗體中的一個用作捕獲抗體， 并附接至檢測表面。另一抗體與辣根過氧物酶(HRP)結(jié)合，并用作檢測抗體。在別的地方 更詳細(xì)地描述了在此化驗(yàn)中應(yīng)用的單克隆抗體(參見Pelser MMAL. 2004，上述第3章，第 43 至第 51 頁和第 4 章，第 53 至第 67 頁；Roos W, Eymann Ε, M Symannek, Duppenthaler J, Wodzig KffH, Pelser MMAL, Glatz JFC. “對人心臟脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)的單克隆抗體 (Monoclonalantibodies to human heart fatty acid-binding protein)" ^M^Tj^i: 期刊1995 ；183 :149-53)。在捕獲抗體/H-FABP/檢測抗體復(fù)合物的形成之后，可通過使用 HRP-特異酶基質(zhì)來檢測所述檢測，例如色原四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，其在由HRP轉(zhuǎn)化之后提供 藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物，通過測量在450nm處的吸收，可用分光光度法檢測該反應(yīng)產(chǎn)物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解，可在本發(fā)明的各方面中使用關(guān)于以上檢測原理的許多 變型。因此，除了 H-FABP以外，抵抗其它FABP類型的抗體可用來檢測此蛋白質(zhì)的其它異 形體。而且，可對抗體與FABP之間的結(jié)合應(yīng)用其它抗原決定基。抵抗特定FABP(對抗原決 定基的抗體已經(jīng)可用于此FABP)的其它抗原決定基的抗體的開發(fā)，或者表現(xiàn)出與其它FABP 異形體的特異性結(jié)合的抗體的開發(fā)，在本領(lǐng)域技術(shù)人員的理解范圍內(nèi)，在這里不需要詳細(xì) 描述。在本發(fā)明的各方面中，可用作試劑的抗體可以是多克隆或單克隆抗體。優(yōu)選地，使 用單克隆抗體?？贵w可包括全部的免疫球蛋白或其片段，其中，可從不同的類和同種異型中 選擇免疫球蛋白，例如，IgA, IgD, IgE, IgGU IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。其片段可包括 Fab、Fv和F (ab ’)2、Fab ’等。此外，可適當(dāng)?shù)貞?yīng)用免疫球蛋白或其片段的凝聚物、聚合物和 結(jié)合物(conjugate)，只要保持用于給定的FABP的結(jié)合親和力。這里通常被稱做試劑30的成分將通常由捕獲抗體形成?？蓪⒋瞬东@抗體固定至 限制空間27 (或第一收集裝置27)的裝置1的任何元件的表面，并且，該表面朝著空間27 面向內(nèi)部，使得捕獲抗體與血漿觀直接接觸或能夠與血漿觀直接接觸。因此，可將捕獲抗 體應(yīng)用于桿件18 (至少其一部分)、管狀元件13 (的至少一部分)、或至少如這里描述的表 面四。而且，如以下實(shí)例中描述的，可將捕獲抗體固定至多孔元件，該多孔元件固定在限制 空間27 (或第一收集裝置27)的裝置1的任何元件的表面上或其中，并且，該表面朝著空間 27面向內(nèi)部，使得在捕獲抗體與血漿之間能產(chǎn)生改進(jìn)的接觸。例如，通過生物素-親和素抗 生物素蛋白連接(biotin-(sti^pt)avidin link)，可實(shí)現(xiàn)捕獲抗體至固體表面的粘附。可以可選地對捕獲抗體提供順磁性標(biāo)記物，使得能從液體中收集其，并在通過磁吸引進(jìn)行的 反應(yīng)的過程中的任何時間將其固定至固相。桿件(18)優(yōu)選地是這樣的形式，其允許插入壓力裝置的管狀元件中。該桿件可以 是管狀的，這意味著內(nèi)部是中空的，桿件可以是實(shí)心的，并且在橫截面中可以是圓的、橢圓 的、正方形的、三角形的或長方形的。桿件可包括這樣的元件，試劑在元件上或者可對元件 施加試劑。這種元件可以是多孔的或?qū)嵭牡?。?yōu)選地，含有試劑的元件由于其多孔特性而支 持從收集裝置吸收已稀釋的血漿。優(yōu)選地，含有試劑的元件能夠吸收多于來自收集裝置27 的已分離的血漿的10 %，優(yōu)選地多于20 %、30 %、40 %或50 %。結(jié)果，基本上縮短了捕獲抗 體與存在于液相中的FABP之間的擴(kuò)散距離，其中，所述FABP優(yōu)選地存在于這樣的形式中， 其中，其與檢測抗體復(fù)合。非常優(yōu)選地，含有試劑的元件支持毛細(xì)流動，由此，在毛細(xì)力的影 響下，血漿被吸入多孔的含有試劑的元件中，毛細(xì)力作用的結(jié)果是使其與已固定試劑(即， 已固定捕獲抗體)接觸。優(yōu)選地，本發(fā)明的檢驗(yàn)是夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的形式，其中，檢測抗體進(jìn)一步用 于FABP至捕獲抗體的結(jié)合的檢測。檢測抗體至FABP的結(jié)合原則上可在FABP至捕獲抗體的 結(jié)合之前、之中或之后發(fā)生。優(yōu)選地，首先允許檢測抗體結(jié)合至存在于身體樣本中的FABP， 然后允許此復(fù)合物結(jié)合至已固定的或?qū)⒁潭ǖ牟东@抗體。為了實(shí)現(xiàn)此效果，可將檢測抗 體非常適當(dāng)?shù)靥砑又帘景l(fā)明的裝置的腔室10中的稀釋液11。在一個替代實(shí)施例中，可將抗 體添加至(多孔)元件，通過該元件將已知量的血液引入稀釋液11中。這種元件可采用海 綿的形式，其中，存在檢測抗體，使得，能在將整個海綿放入稀釋液11中以將血液和檢測抗 體從海綿轉(zhuǎn)移至稀釋液11之前，該檢測抗體與所采樣的血液直接混合。在另一替代實(shí)施例中，可在之后將抗體添加至該空間，或者，抗體可在將血漿收集 于空間27中之前就已經(jīng)存在于該空間中。重要的是，在發(fā)生至FABP的結(jié)合或者此結(jié)合是 可能的條件下，將檢測抗體與血液或血漿均勻地混合。在一個實(shí)施例中，其中，施加將要固 定的或首先允許與液相中的FABP反應(yīng)的捕獲抗體，還可在血漿在空間27中分離之后，將此 捕獲抗體添加至稀釋液11、添加至抽血元件或血液收集元件或添加至血漿。事實(shí)上，每種可 能的組合或順序都是可能的，只要最終結(jié)果提供捕獲抗體-/-FABP-/-檢測抗體的固定復(fù) 合物。檢測抗體可標(biāo)記有任何適當(dāng)?shù)臋z測標(biāo)記物，例如膠態(tài)金或銀、抗生蛋白鏈菌素、生 物素、微球體、乳膠微珠、過氧化物酶、抗生蛋白鏈菌素標(biāo)記的辣根過氧化物酶(HRP)、磷酸 酶、堿性磷酸酶(AP)發(fā)色標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物、磷光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、二次抗體，或 任何其它適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物，通過所述標(biāo)記物能建立成功結(jié)合的檢測?？蛇x的二次抗體可包括 任何以上標(biāo)記物。優(yōu)選地，使用膠態(tài)金，因?yàn)椴恍枰逑床襟E，并可獲得簡單的一步式檢驗(yàn)。膠態(tài)金 由具有IOnm至IOOnm的直徑和非常高的消光系數(shù)的離散的紅色顆粒組成。當(dāng)集中在固體 表面時，膠態(tài)金會非常容易地從視覺上被看成是紅色。優(yōu)選地，由此將捕獲抗體以可識別的 形式施加至限制空間27的裝置1的任何元件的表面，并且該表面朝著空間27面向內(nèi)，使得 捕獲抗體與血漿觀直接接觸，并且，從裝置的外部至少能觀察到該表面的一部分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解，在本發(fā)明中可以想象到側(cè)向流動應(yīng)用。本領(lǐng)域的技術(shù) 人員還將理解，可與主要檢驗(yàn)一起或并行地執(zhí)行輔助檢驗(yàn)，通過該輔助檢驗(yàn)或者檢測第二FABP,或者通過該輔助檢驗(yàn)提供控制反應(yīng)?？稍诟鶕?jù)本發(fā)明的檢驗(yàn)中使用的身體樣本原則上不限于血液?？蓹z驗(yàn)其它身體樣 本，例如組織樣本，或尿、糞便、唾液、淚液、粘液、痰、精液、宮頸分泌物、腦脊髓液、嘔吐物、 鼻分泌物、汗液、羊膜液或母乳樣本。在另一方面中，本發(fā)明提供一種零件套裝，優(yōu)選地將其部件包裝在一起。根據(jù)本發(fā) 明的套裝優(yōu)選地包括-具有稀釋液的管(裝置1的第一部分2，根據(jù)如圖1所示的發(fā)明，包括腔室10，其 具有如上所述的稀釋液11，并優(yōu)選地具有如附圖所示的外螺紋7)；-可選地，海綿(未在圖中示出)，其提供用于采樣已知量的血液以將其引入裝置1 的腔室10中的稀釋液11中的可能性?？蓱?yīng)用此元件，以將已知量的血液樣本引入裝置的 腔室中的稀釋液(典型地是大約60 μ L的血液，但是此量可能變化)，由此在稀釋液中稀釋 血液成分；-血液過濾器(活塞部分12，其包括具有開口下端14的至少部分地透明的管狀元 件13，其中，設(shè)置至少血漿能通過但是紅血球不能通過的過濾器沈，并且，該活塞部分能被 引入腔室10中并能朝著底部4沿著腔室10的壁部密封地滑動)；-帽(如圖1所示的具有桿件18的凸緣部分19，由此在桿件18的下端M上設(shè)置 有擋塊25，其能在過濾器沈上方密封管狀元件13的開口端，如圖3所示，從而防止血漿觀 從第一收集裝置27返回，并且，其中，凸緣部分19在頂部上并連接至擋板21，該擋板向外延 伸并設(shè)置有內(nèi)螺紋22，該內(nèi)螺紋能夠裝配在裝置1的第一部分2的外螺紋7上，根據(jù)如圖1 所示的發(fā)明)；-捕獲抗體，能特異地結(jié)合至FABP(試劑30)的第一抗原決定基。該捕獲抗體可 有利地是這樣的形式其中，其被固定在限制空間27的元件的面向空間27的一側(cè)的表面中 或該表面上，并且從裝置的外面能觀察到該捕獲抗體。適于用作用來檢測H-FABP的捕獲抗 體的抗體是抗人類單克隆抗體H-FABP 67D3 (例如，可從荷蘭Uden的Hycult生物技術(shù)公司 (Biotechnology BV)獲得的)。適當(dāng)?shù)谋砻媸蔷哂忻?xì)管作用的多孔部分，例如，可在側(cè)向 流動檢測中應(yīng)用此毛細(xì)管作用。-可選地，能夠與FABP的第二抗原決定基特異性結(jié)合的檢測抗體，第二抗原決 定基與第一抗原決定基不同，并且，其中，兩種抗體本質(zhì)上不會以有害方式影響彼此與 FABP的結(jié)合。有利地，可在稀釋液中提供檢測抗體。稀釋液中的檢測抗體的適當(dāng)濃度是 5至20 μ g/L。適于用作用于檢測H-FABP的檢測抗體的抗體是抗人類單克隆抗體H-FABP 66E2 (例如，可從荷蘭Uden的Hycult生物技術(shù)公司獲得的)。根據(jù)本發(fā)明的裝置和檢測系統(tǒng)的應(yīng)用提供即時的(POC)快速檢驗(yàn)，即，由全科醫(yī) 生在救護(hù)車中、在醫(yī)院中使用的快速檢驗(yàn)，或作為檢測血漿中的FABP的家用檢驗(yàn)。檢測來自患者的血液樣本中的FABP的方法優(yōu)選地包括以下步驟-提供如上所述的本發(fā)明的裝置；-將已知量的血液引入所述腔室中的所述稀釋液中，由此，可選地，施加多孔體，在 多孔體中可吸收固定量的血液，以將預(yù)定量的血液提供到稀釋液中，并使血液與稀釋液混 合；-通過接合裝置的分離裝置使紅血球與血漿分離；
-在其中發(fā)生在抗體與FABP之間的特異性結(jié)合的條件下，使所述血液或血漿中的 FABP與所述檢測抗體和捕獲抗體中的至少一個接觸，以及-檢測該特異性結(jié)合。在上面詳細(xì)說明了此過程的實(shí)施例中的不同變型。現(xiàn)在將通過以下決不限制本發(fā)明的實(shí)例來舉例說明本發(fā)明。實(shí)例開發(fā)即時的(POC)快諫檢驗(yàn)(用于在全科醫(yī)牛的辦公室中、在救護(hù)車中、在醫(yī)院中 使用的檢驗(yàn),或作為檢測血漿中的FABP的家用檢驗(yàn))該檢驗(yàn)提供用于在血漿中存在的濃度增加(> 6 μ g/L)的心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白 質(zhì)(H-FABP)的免疫化學(xué)測定，并與如這里描述的裝置結(jié)合。血液樣本的采集與獲得檢驗(yàn)結(jié) 果之間的時間小于90秒。本實(shí)施例詳細(xì)描述了如上所述的并由發(fā)明人所設(shè)計的零件套裝。此實(shí)施例包括-刺血針(手指刺針)，用于刺破指尖以提供血液樣本；-管(腔室)，包括稀釋液(IOOmMHEPES EDTA (pH 7. 4)和 0. 9% NaCl)；-海綿，用于收集限定量的血液；-血液過濾器，用于在管狀元件的尖端分離血漿和血細(xì)胞；-帽，裝配有具有擋塊的桿件，通過擋塊可分別密封腔室(帽)的頂側(cè)和通過血液 過濾器(擋塊)的回流。稀釋液提供有用直接抵抗人類心臟型FABP的鼠單克隆抗體66E2 (可從荷蘭Uden 的Hycult生物技術(shù)公司獲得)(此單克隆抗體叫做“第一抗體”，HiAbi^)，并且，稀釋液與膠 態(tài)金或其它適當(dāng)顏色指示劑結(jié)合。HiAbi^在稀釋液中的適當(dāng)濃度是5至20 μ g/L。應(yīng)用海綿，以將大約60μ L的血液從血液樣本引入裝置的腔室中的稀釋液中，血 液在腔室中被稀釋。存在于血液樣本中的FABP將基本上立刻與存在于稀釋液中的金結(jié)合 單克隆抗體mAb_結(jié)合，以形成FABP-mAb·-金復(fù)合物。例如，平均搖動腔室的內(nèi)容物40 秒，有助于將血液溶解在稀釋液中并通過mAbFABP完全結(jié)合。然后，將血液過濾器放在腔室中，并在腔室底部的方向上向下緩慢擠壓血液過濾 器。用力將血液過濾器壓靠在包含血液-FABP-mAb^-金復(fù)合物的已稀釋血液上，使得血 漿與FABP-HiAbi^-金復(fù)合物一起受壓向上通過血液過濾器，同時將紅血球阻止并保留在腔 室中。將血漿和FABP-mAb -金復(fù)合物一起收集在管狀元件的內(nèi)部空間中的血液過濾器 的另一側(cè)。在放在管狀元件中之后，密封裝配有桿件的密封帽，桿件在管狀元件的位于血液 過濾器上方的開口端具有擋塊，以防止通過血液過濾器的回流。同時，用帽在頂部處密封腔 室。在本實(shí)施例中，以中空管的形式提供將擋塊連接至帽的桿件，該中空管具有至少 部分透明或在大約IOmm的長度上為開口的的壁部。桿件的壁部的透明或開口部分優(yōu)選地 從離桿件下端2_3mm處開始，并優(yōu)選地延伸至離桿部下端大約12_13mm。用多孔部分填充桿 件的中空管，該多孔部分對液體具有毛細(xì)活性，并且，借助桿件的至少部分地透明或開口的 壁部，可從裝置的外部看到該多孔部分。在距離桿件下端大約5mm的距離處，多孔部分包括 固定至其上的一定量的200ng的單克隆抗體67D3 (荷蘭Uden的Hycult生物技術(shù)公司)，其 直接抵抗人類心臟-FABP類型(其叫做“第二抗體”，mAb)，并且，該抗體識別與由HiAbs 識別的抗原決定基不同的人類心臟型FABP上的抗原決定基。類似地，處于距離桿件下端大約IOmm距離處的多孔部分包括固定至其上的直接 抵抗另一蛋白質(zhì)(例如，控制或參考或第二檢驗(yàn)蛋白質(zhì))的單克隆抗體。多孔部分的總長 和體積(即尺寸)優(yōu)選地是這樣的，使得在多孔部分中吸收已稀釋的血漿樣本的絕大部分 (大約 100 μ L)。在將血漿吸入多孔部分之后，在色帶的形成下，F(xiàn)ABP-HiAbi^-金復(fù)合物將結(jié)合至 固定于其上的第二單克隆抗體mAb_s，可通過桿件的透明或開口的壁部看到色帶。此色帶 的色度將隨著血液樣本中的FABP的濃度而增加。在原始血液樣本中的FABP濃度< 6 μ g/ L的情況中，將看不到色帶。類似地，存在于血液中的另一蛋白質(zhì)將與如上所述在離桿件下端IOmm的距離處 固定在多孔部分上的特異性抗體結(jié)合，并且，如果對稀釋液還提供抵抗該蛋白質(zhì)的另一抗 原決定基的金結(jié)合抗體，那么，當(dāng)多孔部分上的色帶處于離桿件下端IOmm的距離處時，將 看到此復(fù)合物。此反應(yīng)可用作對檢驗(yàn)中血漿的存在的控制，并由此用作適當(dāng)執(zhí)行的控制。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測來自患者的血液樣本中的FABP的裝置，所述裝置包括以下元件a)分離裝置，用于將血液分離成血漿和紅血球，其中，所述分離裝置設(shè)置有-腔室，用于容納血液樣本并包括用于所述血液樣本的稀釋液；-過濾器，來自已稀釋的血液樣本的血漿和FABP能夠通過所述過濾器，但至少紅血球 不能通過，F(xiàn)ABP可選地復(fù)合至抗體，以及-加壓裝置，用于使至少部分血液樣本受壓通過所述過濾器，以提供分離的血漿，以及b)收集裝置，用于收集已分離的血漿，并且，其中，所述分離裝置和/或所述收集裝置設(shè)置有以下抗體中的至少一個(i)抵抗FABP的第一抗原決定基的檢測抗體，所述檢測抗體與可檢測的標(biāo)記物結(jié)合， 并能夠接觸已分離的血漿，以及( )抵抗FABP的與所述第一抗原決定基不同的第二抗原決定基的捕獲抗體，其中，所 述捕獲抗體能夠以固定形式提供在所述收集裝置中，并能夠接觸已分離的血漿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的裝置，其中，所述過濾器設(shè)置在能夠插入所述腔室中的管狀 元件的端部處或該端部附近，并且其中，所述收集裝置由所述管狀元件的內(nèi)部形成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的裝置，其中，所述捕獲抗體被固定在能夠插入所述收集裝 置中的插入元件上或插入該插入元件中。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的裝置，其中，所述檢測抗體被提供在所述稀釋液中。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的裝置，其中，所述FABP選自由H-FABP、LFABP, I-FABP、ILBP, B-FABP, A-FABP, E-FABP, T-FABP 及 M-FABP 組成的組。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的裝置，其中，所述可檢測的標(biāo)記物選自由膠態(tài)金 或銀、抗生蛋白鏈菌素、生物素、微球體、乳膠微珠、過氧化物酶、抗生蛋白鏈菌素標(biāo)記的辣 根過氧化物酶(HRP)、磷酸酶、堿性磷酸酶(AP)、發(fā)色標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物、磷光標(biāo)記物、化 學(xué)發(fā)光標(biāo)記物及二次抗體組成的組。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的裝置，其中，所述收集裝置至少是部分透明的，使 得從所述裝置的外部至少能部分地看到所述已固定捕獲抗體的附著位置。
8.一種用于分析血液中的FABP的存在的方法，其中，將一定量的血液至少分離成血漿 和紅血球，其中，至少將所述血漿收集在收集裝置中，其中，允許存在于血液中的FABP與至 少一種抗體接觸，所述抗體具體地與FABP起反應(yīng)，并且，其中，從所述收集裝置的外部能觀 察到所述抗體與所述FABP之間的結(jié)合。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，從血液樣本中取得預(yù)定量的血液，并將其引入裝 置中，其中，將所述預(yù)定量的血液與預(yù)定量的稀釋液混合以獲得期望的稀釋物，然后，使已 稀釋的血液壓靠在過濾器上，以便迫使血漿通過所述過濾器并進(jìn)入所述收集裝置，并且，紅 血球被所述過濾器阻止。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其中，所述血漿與所述收集裝置中的所述抗體接觸。
11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中任一項(xiàng)所述的方法，其中，用檢測抗體抵抗FABP的第一 抗原決定基，并且，其中，所述檢測抗體與可檢測的標(biāo)記物結(jié)合并能夠接觸所述已分離的血 漿。
12.根據(jù)權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)所述的方法，其中，用捕獲抗體抵抗FABP的與所述第一抗原決定基不同的第二抗原決定基，其中，所述捕獲抗體能夠固定在所述收集裝置中 并能夠接觸所述已分離的血漿。
13.一種用于檢測來自患者的血液樣本中的FABP的方法，包括以下步驟-提供根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的裝置；-將預(yù)定量的血液引入所述腔室中的所述稀釋液中，可選地使用多孔體進(jìn)行該引入，在 所述多孔體中能夠吸收預(yù)定量的血液，然后將所述預(yù)定量的血液提供到所述腔室中的所述 稀釋液中，并使所述血液與所述稀釋液混合；-通過接合所述裝置的分離裝置，用過濾將紅血球與血漿分離；-在所述抗體與所述FABP之間出現(xiàn)特異性結(jié)合的條件下，使所述血液或血漿中的FABP 與所述檢測抗體和捕獲抗體中的至少之一接觸，以及-檢測所述特異性結(jié)合。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，在所述稀釋液中提供所述檢測抗體，并且，其 中，所述捕獲抗體能夠以固定狀態(tài)與所述收集裝置中的血漿接觸。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的方法，其中，形成檢測抗體-FABP復(fù)合物，然后允許所 述檢測抗體-FABP復(fù)合物結(jié)合至已固定的捕獲抗體。
16.根據(jù)權(quán)利要求8至15中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述FABP選自由H-FABP、L FABP、I-FABP、ILBP, B-FABP, A-FABP, E-FABP, T-FABP 及 M-FABP 組成的組。
17.一種零件套裝，包括至少一用于將血液至少分離成血漿和紅血球的裝置，其中，所 述裝置包括用于收集已分離的血漿的收集空間，并且與FABP反應(yīng)的至少一特異性抗體適 于被引入所述收集空間中。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的套裝，進(jìn)一步包括用于吸收和釋放預(yù)定量的血液的元件。
19.根據(jù)權(quán)利要求17或18所述的套裝，包括根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的裝 置，并適于執(zhí)行根據(jù)權(quán)利要求8至16中任一項(xiàng)所述的方法。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于檢測來自患者的血液樣本中的FABP的裝置、用于分析血液中的FABP的存在的方法、以及用于檢測來自患者的血液樣本中的FABP的方法和成套工具。
文檔編號G01N33/543GK102099683SQ200980127554
公開日2011年6月15日 申請日期2009年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月14日
發(fā)明者約翰內(nèi)斯·弗雷德里克斯·卡羅盧斯·格拉茲, 赫拉爾杜斯·馬熱拉·別斯布魯克 申請人:菲伯普魯斯有限公司