專利名稱：：一種血清鎂標準物質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種血清鎂標準物質(zhì)。
背景技術(shù)：
：鎂在人體內(nèi)的含量很豐富，是人體必需的元素之一，鎂在生命過程中能夠促進骨及細胞形成，催化和激活機體內(nèi)多種酶，參與體內(nèi)能量代謝，并在能量的輸送、儲存中起著關(guān)鍵的作用。鎂對神經(jīng)、肌肉和心臟功能具有重要作用，鎂不僅在機體代謝中起著關(guān)鍵作用，而且在心肌收縮和傳導性、神經(jīng)化學傳遞、骨骼肌興奮性，以及維持正常Ca"、K+和Na+濃度也起著重要作用。鎂代謝異常與消化系統(tǒng)、腎臟和內(nèi)分泌等各種疾病關(guān)系密切。因而血清鎂測定作為臨床生化的重要組成部分，在疾病的預(yù)防、診斷以及治療監(jiān)測中起著重要的作用。在血清鎂檢測中，血清鎂標準物質(zhì)起著至關(guān)重要的作用。標準物質(zhì)/標準樣品(referencematerial,RM)是一種材料或物質(zhì)，其一種或多種特性值足夠均勻和穩(wěn)定并被良好確定，用于校準測量系統(tǒng)、評價測量程序或為材料賦值。標準物質(zhì)包括校準物質(zhì)(calibrationmaterial)禾口正確性質(zhì)控物質(zhì)(t潔nesscontrolmaterial)。校準物質(zhì)又稱校準物(calibrator)，是在校準函數(shù)中其值被用作自變量的標準物質(zhì)，用于校準測量系統(tǒng)或為材料賦值；正確性質(zhì)控物質(zhì)是用于評價一種測量系統(tǒng)的測量偏差的標準物質(zhì)?？梢姌藴饰镔|(zhì)有校準和評價測量系統(tǒng)兩個主要功能。一種標準物質(zhì)在一個測量程序或測量系統(tǒng)中即可以用作校準物質(zhì)，也可以用作正確性質(zhì)控物質(zhì)，但不可以同時用作校準物質(zhì)和正確性質(zhì)控物質(zhì)。一般情況下標準物質(zhì)是指較高級別的標準物質(zhì)，它們多數(shù)是有證標準物質(zhì)(certifiedreferencematerial)。有證標準物質(zhì)是附有證書的標準物質(zhì)，其一種或多種特性值用可建立溯源性的程序確定，使之可溯源至準確復現(xiàn)的表示該特性值的測量單，每種確定的特性值都有給定置信水平的不確定度。可見有證標準物質(zhì)和標準物質(zhì)的區(qū)別是前者有明確的溯源性和不確定度要求。2007年8月1日我國正式發(fā)布和實施的《標準物質(zhì)標準樣品生產(chǎn)者能力認可準則》中對標準物質(zhì)生產(chǎn)者的組織生產(chǎn)管理、標準物質(zhì)的賦值及統(tǒng)計方法、不確定度評定、標準物質(zhì)所須達到的性能指標等提出了較高的要求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種血清鎂標準物質(zhì)。本發(fā)明所提供的血清鎂標準物質(zhì)，是按照包括如下步驟的方法制備的對離體血清進行稀釋或鎂添加，得到5種不同鎂濃度的血清溶液，再分別對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值，得到如下5種鎂濃度的血清鎂標準物質(zhì)1)鎂濃度的標準值為0.50-0.80mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78%-1.71%;2)鎂濃度的標準值為0.80-1.10mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78%-1.71%;3)鎂濃度的標準值為1.10-1.40mmol/L，相對合成標準不確定度為O.78%-1.71%;4)鎂濃度的標準值為1.40-1.70mmol/L，相對合成標準不確定度為O.78%-1.71%;5)鎂濃度的標準值為1.70-2.00mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78%-1.71%。上述各血清鎂標準物質(zhì)中，取置信區(qū)間為95%，擴展因子為2，得到各血清鎂標準物質(zhì)的絕對擴展合成標準不確定度，均為0.012mmol/L-0.080mmol/L。上述血清鎂標準物質(zhì)中，在所述定值前，5種不同鎂濃度的血清溶液中鎂濃度具體如下第1種血清溶液鎂濃度為0.50mmol/L-0.80mmol/L;第2種血清溶液鎂濃度為0.80mmol/L-l.10mmol/L;第3種血清溶液鎂濃度為1.lOmmol/L-l.40mmol/L;第4種血清溶液鎂濃度為1.40mmol/L-l.70mmol/L;第5種血清溶液鎂濃度為1.70mmol/L-2.00,1/L。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述離體血清為無肝腎功能疾病、無溶血、無黃疸且非乳糜的血清。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述稀釋是用如下稀釋劑進行的，所述鎂添加是用如下鎂添加劑進行的1)稀釋劑為氯化鈉和氯化鉀的混合水溶液，所述氯化鈉在所述稀釋劑中的濃度為135.Ommol/L-145.Ommol/L，所述氯化鉀在所述稀釋劑中的濃度為4.5mmol/L_5.5mmol/L;2)鎂添加劑為在國家標準物質(zhì)研究中心的編號為GBW(E)080126的物質(zhì)。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述對離體血清進行稀釋的方法包括如下步驟通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述稀釋劑，將所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述稀釋劑混勻；所述對離體血清進行鎂添加的方法包括如下步驟通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述鎂添加劑，將所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述鎂添加劑混勻。上述血清鎂標準物質(zhì)中，在所述對離體血清進行稀釋或鎂添加前，包括對所述離體血清過濾的步驟。上述血清鎂標準物質(zhì)中，在得到5種不同鎂濃度的血清溶液后，在分別對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值前，還可包括對每種血清溶液過濾的步驟。所述過濾的方法為依次進行0.8um孔徑、0.45um孔徑和0.2um孔徑的過濾。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述離體血清是由來自于不同個體的離體血清混合而成的。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值的方法包括如下步驟(—)用火焰原子吸收光譜法測量所述血清溶液中鎂濃度值，包括如下步驟(1)檢測空白工作液和鎂濃度不同的鎂標準工作液中鎂的吸光度值，得到工作曲線；所述工作曲線為一元線性回歸曲線，其自變量為所述鎂標準工作液中鎂的濃度值，因變量為所述鎂標準工作液中鎂的吸光度值；所述空白工作液中除不含有鎂外，其余與所述鎂標準工作液相同；所述鎂標準工作液和所述空白工作液是按照包括如下步驟的方法配制的通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的溶質(zhì)和所需質(zhì)量的溶劑，將所需質(zhì)量的溶質(zhì)和所需質(zhì)量的溶劑混合；所述鎂標準工作液中鎂的濃度為鎂的質(zhì)量與鎂標準工作液質(zhì)量的比；(2)檢測所述血清溶液中鎂的吸光度，得到所述血清溶液中鎂的吸光度讀數(shù)值；(3)重復步驟(1)和(2);(4)對于每種鎂標準工作液而言，取步驟(1)和(3)得到的吸光度讀數(shù)值的和，記作EW，5種鎂標準工作液分別記作EW1、EW2、EW3、EW4、EW5;對于每種血清溶液而言，取步驟(2)和(3)得到的吸光度讀數(shù)值的和，記作EU;根據(jù)公式I換算得到所述血清溶液中鎂濃度值，記作U;所述血清溶液中鎂濃度值為所述血清溶液中鎂的質(zhì)量與所述血清溶液質(zhì)量的比；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中，r為測量次數(shù)；(二)測量所述血清溶液的密度，得到所述血清溶液的密度值，根據(jù)所述密度值和所述步驟(一)中得到的所述血清溶液中鎂濃度值，得到所述血清溶液中鎂濃度的標準值；所述血清溶液中鎂濃度的標準值為所述血清溶液中鎂的物質(zhì)的量與所述血清溶液的體積的比；所述鎂標準工作液有如下5種鎂標準工作液1、鎂標準工作液2、鎂標準工作液3、鎂標準工作液4、鎂標準工作液5;所述鎂標準工作液1與所述鎂標準工作液2相同，所述鎂標準工作液4與所述鎂標準工作液5相同，所述鎂標準工作液1、所述鎂標準工作液3和所述鎂標準工作液4中除了鎂濃度不同外，其余相同。所述測量所述血清溶液的密度的方法中，是用稱量質(zhì)量的方法進行的。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述用火焰原子吸收光譜法測量所述血清溶液中鎂濃度值的方法，在操作過程中，使儀器滿足如下條件1)對同一種所述鎂標準工作液而言，同日內(nèi)每次測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于1.25%;2)對同一種所述鎂標準工作液而言，不同日間測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于2%;3)所述空白工作液的吸光度讀數(shù)小于鎂濃度最低的所述鎂標準工作液的吸光度讀數(shù)的3%;3)所述工作曲線的相關(guān)系數(shù)的平方大于0.9995。上述血清鎂標準物質(zhì)中，所述鎂標準工作液由氯化鎂、氯化鈉、氯化鉀、氯化鑭和去離子水組成；所述空白工作液由氯化鈉、氯化鉀、氯化鑭和去離子水組成；所述氯化鎂是通過加入葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)和鹽酸反應(yīng)得到的；所述氯化鑭是通過加入三氧化二鑭和鹽酸反應(yīng)得到的；鎂標準工作液1的組成由終濃度為12ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液1中的濃度。鎂標準工作液3的組成由終濃度為30ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液3中的濃度。鎂標準工作液4的組成由終濃度為48ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液4中的濃度。上述血清鎂標準物質(zhì)中，在其制備方法中，在所述分別對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值前，包括如下對所述血清溶液進行稀釋的步驟通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的血清溶液和所需質(zhì)量的稀釋液，將所需質(zhì)量的血清溶液和所需質(zhì)量的稀釋液混勻。稀釋液的組成由終濃度為1Ommol/L的氯化鑭、終濃度為50mmol/L的鹽酸和去離子水組成。上述任一所述稱量質(zhì)量是用萬分之一電子天平進行的；上述定值過程中，所述儀器為原子吸收分光光度計，所述原子吸收分光光度計的參數(shù)設(shè)置如下空心陰極燈電流大小為8mA;單色器狹縫寬度為0.5nm;乙炔-空氣火焰，乙炔流量1.9L/min，為輕度富燃火焰；燃燒器高度為7mm;采用氖燈除背景，采用手動進樣。采用儀器默認延遲時間和手動連續(xù)進樣模式，進樣量在36mL/min，測定波長為285.2nm。上述定值過程中，操作在環(huán)境溫度2025t:，變化不大于3°C/h，濕度20%50%，交流電壓波動小于5%，乙炔氣體純度大于99%，排風通暢的環(huán)境下進行。本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于制備血清鎂標準物質(zhì)的稀釋添加試劑盒。本發(fā)明所提供的用于制備血清鎂標準物質(zhì)的稀釋添加試劑盒，由稀釋劑和鎂添加劑組成；所述稀釋劑為氯化鈉和氯化鉀的混合水溶液，所述氯化鈉在所述稀釋劑中的濃度為135.0mmol/L-145.0mmol/L，所述氯化鉀在所述稀釋劑中的濃度為4.5mmol/L_5.5mmo1/所述鎂添加劑為在國家標準物質(zhì)研究中心的編號為GBW(E)080126的物質(zhì)。本發(fā)明的血清鎂標準物質(zhì)中不添加其它物質(zhì)，只以血清作為基體，其互通性好，均勻性好，-S(TC儲存條件下穩(wěn)定性也良好，可以溯源到SRM929a純度葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)與SRM956b冰凍人血清電解質(zhì)標準物質(zhì)，相對合成不確定度為0.828%-1.707%，合成不確定度較小，說明定值結(jié)果可靠。另外，其與現(xiàn)有的其它血清鎂標準物質(zhì)相比，具有成本低廉、制備方法簡單、基質(zhì)效應(yīng)小、互通性好的優(yōu)點。在制備本發(fā)明血清鎂標準物質(zhì)的過程中，溶液的配制都是采用了重量/重量法(即稱量質(zhì)量的方法)(如血清的稀釋或鎂添加、空白工作液和鎂標準工作液的配制)，減少了容量瓶與吸量管等體積測量引起的測量不確定度，使定值結(jié)果更精確；重量法測定血清密度，血清密度更加精確，不確定度小，從而使定值結(jié)果更加準確。在稀釋血清的過程中，添加的稀釋劑，其電解質(zhì)濃度與血清中的電解質(zhì)濃度一致，盡可能地減少了基質(zhì)效應(yīng)；在鎂添加的過程中，用的是國家標準物質(zhì)水中鎂成分分析標準物質(zhì)，純度高，添加的量少，盡可能地減少了基質(zhì)效應(yīng)。因此，本發(fā)明血清鎂標準物質(zhì)在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的應(yīng)用前景。具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中使用的儀器、試劑等如下1.儀器1.1AA-6800型原子吸收分光光度計，日本島津。北京市計量局每年一次強檢，廠家定期檢修，每天使用前自檢。1.2Milli-Q凈化水裝置，密理博中國有限公司。用于實驗室去離子水的制備。1.3瑞士梅特勒十萬分之一天平。用于標準物質(zhì)、貯備液、血清溶液樣品的準確稱量；容量瓶等的內(nèi)校。北京市計量局每年一次強檢，每天使用前自檢。1.4E卯endorfreference移液器。每年送生產(chǎn)廠家校準1次，每月1次內(nèi)校。1.5小型磁力攪拌器90-1型，上海振榮科學儀器廠。1.6血清過濾裝置，濾膜孔徑大小分別為0.8咖，0.45um，0.2咖。配有真空抽吸泵，美國HENGAO公司。2.試齊U2.1超純?nèi)ルx子水(>18.2MQ.cm)，要有充足的水，用于試劑溶液配置和對所有玻璃器具的沖洗。2.2血清電解質(zhì)標準參考物質(zhì)SRM956b水平I和II，購自美國NIST，用于室內(nèi)質(zhì)量控制與準確度驗證。相對擴展不確定度為0.6%。2.3葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)，購自美國國家標準技術(shù)研究所(NIST)，產(chǎn)品名稱為SRM929a。用于配制鎂標準溶液，使用前必須在含氧化磷的干燥器中干燥12小時，相對標準不確定度為0.027%/2。2.4水中鎂成分分析標準物質(zhì)產(chǎn)品名稱為水中鎂成分分析標準物質(zhì)，購自國家標準物質(zhì)中心，其在國家標準物質(zhì)研究中心的編號為GBW(E)080126)(1000mg/L)，相對擴展不確定度為0.5%。2.5氧化鑭，優(yōu)級純，上?；瘜W試劑公司。2.6氯化鈉、氯化鉀，分析純，上?；瘜W試劑公司。每千克中鎂含量低于10mg。使用前在干燥器中20(TC干燥4小時，并儲存于含有硅膠并具有濕度指示的干燥器中冷卻到室溫。2.7濃鹽酸，優(yōu)級純，上?；瘜W試劑公司。其鎂含量低于10-6%。3.試劑配制3.1HC1，7.80mol/L，100ml:量取濃鹽酸(12mol/L)65ml置于事先盛有少量去離子水的100ml容量瓶中，邊加邊搖動，盡量減少鹽酸揮發(fā)，加入去離子水至校準刻度。3.2HC1，1.00mol/L，100ml:量取濃鹽酸(12mol/L)8.33ml，置于事先盛有少量去離子水的100ml容量瓶中，邊加邊搖動，盡量減少鹽酸揮發(fā)，加入去離子水至校準刻度.實施例1、血清鎂標準物質(zhì)I的制備及效果檢測—、血清的收集血清標本收集自北京朝陽醫(yī)院檢驗科，收集體檢后的剩余血清，年齡2070歲，所有血清均為無肝腎功能疾病、無溶血、無黃疸且非乳糜的血清。所有血清的收集均經(jīng)過受采者的同意。血清采集方法遵照IS0指南34(IS0Guide34，Generalrequirementsforthecompetenceofreferencematerialproducers.)。收集血清于50ml聚乙烯密閉離心管中，75%酒精或碘酒消毒瓶體表面并密封，外觀澄清透明，不加任何添加物或防腐劑。共收集5000個個體的血清，混勻，過濾，共得到混合血清約3000毫升，-s(rc冰箱保存?zhèn)溆?。二、不同鎂濃度的血清溶液樣品的配制本實驗中測量混合血清中血清鎂濃度是用全自動生化分析儀SynchronLX20進行的，配套原裝試劑，美國貝克曼公司生產(chǎn)。其中血清鎂檢測試劑，生產(chǎn)批號M807634，質(zhì)控血清為常規(guī)化學水平2和3，生產(chǎn)批號為M701602和M701603，定標液為MultiCalibrator,生產(chǎn)批號M603320。將收集好的混合血清隨機分為5批，每批約500ml。每天從-S(rC冰箱取出一批血清，置于室溫融化。然后將融化后的血清，充分混勻后，取出約0.5ml，用SynchronLX20全自動生化分析儀測定，確定混合血清的血清鎂濃度(血清鎂濃度值的單位名稱為mmol/L)。根據(jù)測定值，通過鎂添加或稀釋，得到如下5種鎂濃度的血清溶液樣品血清溶液樣品1，鎂濃度為0.60mmol/L;血清溶液樣品2，鎂濃度為0.90mmol/L;血清溶液樣品3，鎂濃度為1.20mmol/L;血清溶液樣品4，鎂濃度為1.50mmol/L;血清溶液樣品5，鎂濃度為1.80mmo1/L。鎂添加的方法結(jié)合混合血清中鎂的濃度，計算確定所需混合血清的質(zhì)量和所需鎂添加劑的質(zhì)量，再用天平稱量得到所需量的混合血清和鎂添加劑，將其混勻，即得到所需濃度的血清溶液樣品；稀釋的方法結(jié)合混合血清中鎂的濃度，計算確定所需混合血清的質(zhì)量和所需稀釋劑的質(zhì)量，再用天平稱量得到所需量的混合血清和稀釋劑，將其混勻，即得到所需濃度的血清溶液樣品；電解質(zhì)溶液(即稀釋劑)的組成由終濃度為5.0mmol/L的KC1、終濃度為140.Ommol/L的NaCl和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在電解質(zhì)溶液中的濃度。電解質(zhì)溶液的配制取l個干凈干燥的小燒杯，準確加入0.8120g氯化鈉和0.0373g氯化鉀。沿小燒杯壁緩慢加入去離子水溶解。取潔凈干燥的100ml容量瓶l只，置于天平上調(diào)零，將小燒杯內(nèi)的液體用玻璃棒小心轉(zhuǎn)移進入容量瓶，再加入適量去離子水沖洗燒杯、玻璃棒，將沖洗燒杯和玻璃棒的去離子水轉(zhuǎn)移至容量瓶，重復沖洗至少5遍，所有沖洗用的去離子水均收集于容量瓶內(nèi)。注意液體不能灑到容量瓶之外。在天平上準確稱量，加去離子水至100ml。顛倒6次混勻，靜置5分鐘，再顛倒6次。使用之前上述步驟重復2遍。配制溶液過程中室內(nèi)溫度控制在2(TC25"，濕度20%50%。鎂添加劑為水中鎂成分分析標準物質(zhì)。三、血清溶液樣品的過濾將步驟二中得到的不同血清溶液樣品分別放入錐形瓶中，用磁力攪拌器充分混勻1小時；混勻后的血清溶液樣品依次使用孔徑為0.8um濾膜、0.4Sum濾膜和0.2um濾膜過濾三次達到清除血清雜質(zhì)和除菌的目的。將過濾好的無菌血清，將過濾好的無菌血清，取出60ml用于血清密度的測量，其余用加樣槍分裝到已經(jīng)貼好標識的無菌聚乙烯分裝管中，每管1.Oml，密封。所有的容器及過濾裝置必須在12(TC條件下高壓滅菌；所有操作須在生物安全柜中行無菌操作。分裝小管的標識包括血清鎂濃度水平、小管編號、分裝時間等項目。分裝后的血清小管立刻放入-S(TC冰箱中保存，每日監(jiān)測冰箱溫度情況。四、血清溶液樣品的密度測定1.1容量瓶體積的校正控制室溫為20。C22。C，濕度20^-50X。根據(jù)JJG196-1990中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程校準容量瓶。將1只待校準的10ml容量瓶清潔、干燥至恒重，稱重(Ml);測量去離子水的溫度(將去離子水置實驗室1小時以上，實驗室室溫即為水的溫度)，將去離子水注入容量瓶標線處，液面凹陷底部與容量瓶刻線相平齊，稱重(M2);根據(jù)去離子水的溫度，查出該溫度下水的密度(p7"，計算該溫度下該容量瓶實際體積為(M2-M1)/p*。重復上述步驟20次，計算該容量瓶實際體積均值(V)與相對標準不確定度。該容量瓶的實際體積為9.964ml，相對標準不確定度為0.034%。1.2血清溶液樣品的密度的計算將經(jīng)過體積校正的10ml容量瓶稱重為Ml;將血清溶液樣品小心轉(zhuǎn)移至容量瓶，液面凹陷底部與容量瓶刻線相平齊，稱重為M3。血清溶液樣品密度(p血清溶液樣品)為(M3-M1)/V。重復上述步驟加次，計算p血清溶液樣品的均值與標準差。測量血清溶液樣品的密度的總不確定度是由如下不確定度構(gòu)成的合成不確定度容量瓶體積的相對標準不確定度(0.034%)、重復操作引起的不確定度、稱量引起的不確定度；測量血清溶液樣品的密度的相對合成標準不確定度為0.05%。測得5種血清溶液樣品的密度分別為如下血清溶液樣品1:1.024±0.OOlg/ml;血清溶液樣品2:1.025±0.OOlg/ml;血清溶液樣品3:1.025±0.OOlg/ml;血清溶液樣品4:1.025±0.OOlg/ml;血清溶液樣品5:1.025±0.001g/ml。本發(fā)明將以此密度值對鎂標準物質(zhì)中血清鎂濃度標準值及絕對合成擴展不確定度值進行濃度單位換算。五、冰凍混合血清溶液樣品均勻性檢驗均勻性是標準物質(zhì)的重要屬性之一，ISOGuide35中完全按照不均勻性的不確定度來判定標準物質(zhì)的不均勻性。以往的許多文獻中，均勻性檢驗存在一些問題，如測量方法的重復性與靈敏度不夠，抽樣方法不合理，沒有注意測量順序，用F檢驗直接判定標準物質(zhì)的均勻性等。雖然一般認為血清溶液樣品為均勻的物質(zhì)，但均勻性檢驗不可或缺，血清均勻性檢驗的主要目的是檢出沒有預(yù)料到的問題，例如在分裝過程中受到的差異性污染，或者添加的過程造成的不均勻等。冰凍混合血清溶液樣品的均勻性包括瓶間均勻性和瓶內(nèi)均勻性。冰凍混合血清溶液樣品溶化后為液體，從物理(熱力學)的角度來看具有高度的均勻性?？梢酝ㄟ^攪拌，使瓶內(nèi)血清物質(zhì)均勻，故一般不需檢測瓶內(nèi)均勻性。瓶間均勻性檢驗主要是檢測制備期間可能由于未被發(fā)現(xiàn)的問題所產(chǎn)生的雜質(zhì)、干擾物或異常，在這種情況下預(yù)計從瓶間均勻性研究得到的不確定度貢獻很小。本發(fā)明中采用ANOVA方式檢驗均勻性。ANOVA方式較常用，可以得到較多的數(shù)據(jù)。ANOVA方式是抽取有代表性的樣本數(shù)，每瓶重復測量2-3次。(MedicalLaboratories-Particularrequirementofqualityandcompetence[S].InternationalStandard,ISO15189,2003:1-4)(MedicalLaboratories-Particularrequirementofqualityandcompetence[S].InternationalStandard,ISO15189,2003:21-25)。(InVitrodiagnosticmedicaldevices—Measurementofquantitiesinsamplesofbiologicalorigin—Motrologicaltraceabilityofvaluesassignedtocalibratorsandcontrolmaterials[S].IS0/DIS17511,2003:1-2.)。1)抽樣方法采用微軟公司Excel程序中的RAND函數(shù)隨機生成0500內(nèi)的隨機數(shù)字，將血清溶液編號與之相對應(yīng)的血清分裝管抽出，用于均勻性性檢驗。2)抽樣數(shù)量抽樣數(shù)要對整體有足夠的代表性，通常取1030個，最典型的是20個，不能少于10個?！兑患墭藴饰镔|(zhì)技術(shù)規(guī)范》中要求，當總瓶數(shù)少于500個時，抽取瓶數(shù)不少于15個，當總體瓶數(shù)大于500個時，抽取瓶數(shù)為25個。當候選標準物質(zhì)均勻性較好時，當總瓶數(shù)少于500個時，抽取瓶數(shù)不少于10個，當總體瓶數(shù)大于500個時，抽取瓶數(shù)不少于15個。考慮到血清的均勻性較好，用上述方法分別從5種血清溶液樣品中隨機抽取10個血清小管，共50個小管備檢。3)測量方法均勻性檢驗與測量方法的精密度(重復性)密切相關(guān)，所以在最佳重復條件下測量，由同一操作者在同一實驗室用同一儀器在盡可能短的時間內(nèi)完成測量。每天完成1種血清溶液樣品的均勻性檢驗，每種血清溶液樣品測量10管，每管測量3次。用下述實驗七中所述火焰原子吸收光譜法檢測血清溶液樣品中鎂濃度值。4)測量順序均勻性檢驗抽樣數(shù)較多時，測量時間會比較長，測量結(jié)果可能受時間的影響，按隨機順序分析所選樣本以區(qū)分測量的漂移和該批樣本的趨勢變化。在測量過程中間隔插入質(zhì)控樣品。每次重復測量都按隨機順序進行。在配制標準曲線與樣品稀釋的過程中，為了避免蒸發(fā)，每一個血清小管在使用前要密閉。5)測量結(jié)果的數(shù)據(jù)分析均勻性檢驗的數(shù)據(jù)如果出現(xiàn)離群值也不剔除。按IS0Guide35的要求，用單因素方差分析法，以不均勻性的不確定度(ubb)作為評價標準物質(zhì)均勻性的指標。見如下公式(4):&6=(4)式中，MSam。M表示組間的均方，MS^hin表示組內(nèi)的均方，n表示每瓶血清溶液樣品重復測量次數(shù)(本發(fā)明中，n二4)，Sbb表示瓶間不均勻性的標準差。Sbb等同于Ubb。所有數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行處理。瓶間均勻性結(jié)果的判定若ubb相對于測量不確定度(即由重復測量、標準物質(zhì)、稱量等引起的不確定度)可以忽略(Ubb顯著低于測量不確定度，兩者不在同一個數(shù)量級)(JeanPauwels，HeinzSchimmel，AndreeLamberty.Criteriaforthecertificationofinternationallyacceptablereferencematerials.ClinicalBiochemistry，1998，31(6):437-439.)，則認為該標準物質(zhì)均勻；若ubb在測量不確定度中是一個顯著因素，則重新制備或單個定值；更多情況下ubb與測量不確定度在同一個數(shù)量級，應(yīng)將ubb計入總不石角定度內(nèi)(JeanPauwels，AndreeLamberty，HeinzSchimmel.Homogeneitytestingofreferencematerials.AccredQualAssur，1998，3:51-55.)，可以認為樣品的均勻度是可以接受的。異常數(shù)據(jù)的處理應(yīng)注意離散值和異常值的區(qū)別。原則上講，異常值經(jīng)驗證可以被剔除，而離散值應(yīng)在數(shù)據(jù)組中予以保留，不應(yīng)剔出，確保在大多數(shù)情況下不確定度不被低估。因為這些值可能預(yù)示著測量過程或所抽樣品存在嚴重問題(AdriaanMHvanderVeen-Trendsinthecertificationofreferencematerials.AccredQualAssur，2004，9:232-236)。補充測量一般不可接受，因為獲得數(shù)據(jù)的條件已經(jīng)與取得所有結(jié)果時的條件不同了。表1、冰凍血清溶液樣品1的數(shù)據(jù)表2、冰凍血清溶液樣品2數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>瓶間均勻性檢驗結(jié)果見表15。血清鎂濃度的單位為mmol/L。根據(jù)表15分別對應(yīng)得出表610。由表610的數(shù)據(jù)，根據(jù)公式(4)，計算得到冰凍血清溶液樣品1瓶間不均勻性的絕對標準不確定度Sbb=((7.222X10—5-6.667X10—5)/4)1/2=1.1779X10—3,1/L;冰凍血清溶液樣品2瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為Ommol/L;冰凍血清溶液樣品3瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為Ommol/L;冰凍血清溶液樣品4瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為Ommol/L;冰凍血清溶液樣品5瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.581X10—2,1/L。上述5種冰凍血清溶液樣品的相對標準不確定度如表16所示。六、冰凍混合血清溶液樣品-8(TC貯存條件下穩(wěn)定性檢驗只有證明充分均勻之后才能進行穩(wěn)定性檢驗。而任何樣品(只要不小于均勻性檢驗所用的取樣量)都可以認為具有代表性。對所需樣品的數(shù)目沒有限制，也不要求隨機取樣。然而，由于測量技術(shù)的重復性和精密度的影響，結(jié)果會有變化，因此應(yīng)當進行重復測試。本發(fā)明中檢測在-8(TC冰凍條件下保存不同時間的血清溶液樣品的穩(wěn)定性。檢測方法使用下述步驟七中所述的檢測方法，檢測血清溶液樣品中鎂濃度；在同一個實驗室檢測冰凍混合血清溶液樣品的穩(wěn)定性。檢測當天將每種冰凍血清溶液樣品從-8(TC冰箱中各取2管，在室溫下融化后(室溫控制在25t:左右)充分混勻，立即檢測，每管測定3次，取均值。將步驟二中得到的未經(jīng)冷凍的血清溶液樣品，按照實驗七中所述方法測得的鎂濃度值作為穩(wěn)定性檢驗的初始值(相當于表30中第0天)；也是每種檢測2管，每管測定3次。然后分別于第30天、90天、180天(冰凍當天記作第l天)分別從-8(TC冰箱中取出已經(jīng)經(jīng)過均勻性檢驗的同一批冰凍混合血清溶液樣品進行檢測，每次檢測包括SRM956b標準物質(zhì)三個水平之一作為質(zhì)控血清。采用雙因素方差分析(TwoWayANOVA)，用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。五種血清溶液樣品在-8(rC冰箱貯存0天、30天、90天、180天的血清鎂濃度檢測結(jié)果如表11所示。結(jié)果P=0.257>0.05，血清溶液樣品中血清鎂的濃度在不同的時間點上沒有顯著性差異，血清鎂濃度在180天內(nèi)是穩(wěn)定的。表11、冰凍混合血清溶液樣品中血清鎂穩(wěn)定性檢驗數(shù)據(jù)(yg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>七、血清溶液樣品中鎂濃度的定值(—)定值中使用的試劑及其配制方法如下1、空白工作液的組成及配制1)空白貯備液的配制取1個干凈干燥的小燒杯，準確加入0.8120g氯化鈉和0.0373g氯化鉀，沿小燒杯壁緩慢加入去離子水溶解。取潔凈干燥的100ml容量瓶1只，置于天平上調(diào)零，將小燒杯內(nèi)的液體用玻璃棒小心轉(zhuǎn)移進入容量瓶，再加入適量去離子水沖洗燒杯、玻璃棒，將沖洗燒杯和玻璃棒的去離子水轉(zhuǎn)移至容量瓶，重復沖洗至少5遍，所有沖洗用的去離子水均收集于容量瓶內(nèi)。注意液體不能灑到容量瓶之外。在天平上準確稱量，加去離子水至100.0000g。顛倒6次混勻，靜置5分鐘，再顛倒6次。使用之前上述步驟重復2遍。配制溶液過程中室內(nèi)溫度控制在20°C25。C，濕度20%50%?？瞻踪A備液的組成由終濃度為0.0373g/100.OOOOg的KC1、終濃度為0.8120g/100.OOOOg的NaCl和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在空白貯備液中的濃度。2)空白貯備液的稀釋準確稱取1.OOOOg上述空白貯備液，精確加入稀釋液至100.0000g，顛倒混勻30次，得到空白工作液?？瞻坠ぷ饕旱慕M成由終濃度為0.373mg/100.OOOOg的KC1、終濃度為8.12mg/100.OOOOg的NaCl、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在空白工作液中的濃度。2、稀釋液準確稱取三氧化二鑭1.630g，加入到干凈的燒杯中，先沿壁緩慢加入20ml去離子水，再用移液管緩慢滴入7.80mol/L鹽酸10ml，緩慢搖動小燒杯，使之溶解。將燒杯內(nèi)液體轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，以去離子水沖洗燒杯內(nèi)壁至少5次，每次沖洗用的去離子水均收集于容量瓶中。當溶液溫度達到環(huán)境溫度，用去離子水定容到校準的體積，顛倒混勻30次。稀釋液的組成由終濃度為10mmol/L的氯化鑭、終濃度為50mmol/L的鹽酸和去離子水組成。3、鎂標準工作液的組成及配制所述鎂標準工作液在配制過程中，是通過稱量質(zhì)量對溶質(zhì)和溶劑進行定量的，然后將所述溶質(zhì)和溶劑混合，得到鎂濃度單位名稱為質(zhì)量/質(zhì)量的鎂標準工作液；所述鎂標準工作液的配制方法中使用葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)，所述葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)購自美國國家標準技術(shù)研究所，產(chǎn)品名稱為SRM929a。所述鎂標準工作溶液由氯化鎂、氯化鈉、氯化鉀、氯化鑭和去離子水組成；所述氯化鎂是通過加入SRM929a和鹽酸反應(yīng)得到的；所述氯化鑭是通過加入三氧化二鑭和鹽酸反應(yīng)得到的；所述鎂標準工作液在配制過程中，所述溶質(zhì)為SRM929a、氯化鈉、氯化鉀和三氧化二鑭；所述溶劑為去離子水。(1)鎂標準工作液1的組成及配制鎂標準工作液1的組成由終濃度為12ug/100.0000g的鎂離子、終濃度為8.12mg/100.0000g的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液1中的濃度。鎂標準工作液1的配制過程配制溶液過程中室內(nèi)溫度控制在20°C25t:，濕度20%50%。1)鎂標準貯備液1的配制向小燒杯中準確稱量加入SRM929a22.38mg。沿小燒杯壁緩慢加入1ml去離子水，再用移液器輕輕滴入濃鹽酸O.1ml。待葡萄糖酸鎂完全溶解后分別加入O.8120g氯化鈉和0.0373g氯化鉀，再加去離子水溶解，轉(zhuǎn)移至100ml潔凈干燥的容量瓶中，轉(zhuǎn)移方法同空白貯備液的配制。加去離子水稀釋至100.0000g，顛倒容量瓶30次以混勻。將容量瓶做好標記。鎂標準貯備液1的組成由終濃度為1.20mg/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為0.812g/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.0373g/100.OOOOg的氯化鉀和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準貯備液1中的濃度。2)鎂標準貯備液1的稀釋準確稱取1.OOOOg上述鎂標準貯備液l，精確加入稀釋液至100.OOOOg，顛倒混勻30次，得到鎂標準工作液l。(2)鎂標準工作液2的組成及配制鎂標準工作液2的組成及配制與鎂標準工作液1完全相同。(3)鎂標準工作液3的組成及配制鎂標準工作液3的組成由終濃度為30ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液3中的濃度。鎂標準工作液3的配制過程1)鎂標準貯備液3的配制方法與鎂標準貯備液1的配制方法相同；不同的是加入55.95mgSRM929;鎂標準貯備液3的組成由終濃度為3.OOmg/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為0.812g/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.0373g/100.OOOOg的氯化鉀和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準貯備液3中的濃度。2)鎂標準貯備液3的稀釋與上述鎂標準貯備液1的稀釋方法相同，得到鎂標準工作液3。(4)鎂標準工作液4的組成及配制鎂標準工作液4的組成由終濃度為48ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液4中的濃度。鎂標準工作液4的配制過程1)鎂標準貯備液4的配制方法與鎂標準貯備液1的配制方法相同；不同的是加入89.52mgSRM929;鎂標準貯備液4的組成由終濃度為4.80mg/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為0.812g/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.0373g/100.OOOOg的氯化鉀和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準貯備液4中的濃度。2)鎂標準貯備液4的稀釋與上述鎂標準貯備液1的稀釋方法相同，得到鎂標準工作液4。(5)鎂標準工作液5的組成及配制鎂標準工作液5的組成及配制與鎂標準工作液4完全相同。4、標準參考物質(zhì)SRM956b-I和II的稀釋取2只潔凈干燥100ml容量瓶，分別準確稱取SRM956b-I和II各1.OOOg于容量瓶中，加稀釋液至100.OOOg。顛倒混勻30次，標記為SRM956b-I稀釋和SRM956b-II稀釋。5、血清溶液樣品的稀釋準確稱取血清溶液樣品1.OOOg與容量瓶中，加稀釋液至100.000g，顛倒混勻30次，得到血清溶液樣品分析溶液，直接用于定值測量。另外配制平行樣品溶液各一份。顛倒混勻30次。(二)實驗設(shè)計如下:2.1定值實驗室的選擇除了本發(fā)明的發(fā)明人所在實驗室對所制備的標準物質(zhì)進行定值，還選擇能力相當?shù)膶嶒炇覅f(xié)助定值。所選實驗室應(yīng)事先通過能力評估，證明合作者在標準物質(zhì)/標準樣品方面具有足夠的經(jīng)驗和經(jīng)歷，參加有關(guān)的能力驗證計劃，能夠給出符合質(zhì)量要求的結(jié)果。然后將5個血清溶液樣品的待定值血清溶液樣品各3瓶發(fā)放給所選實驗室，同時發(fā)放標準參考物質(zhì)SRM956b水平I和II各1瓶。血清溶液樣品及標準品在運輸過程中應(yīng)置于冰盒中，迅速送達該實驗室，實驗室接收標本后應(yīng)檢查血清溶液樣品外觀，確定沒有融化，立即置于-8(TC冰箱中保存待檢。選定島津國際貿(mào)易(上海)有限公司北京分析中心實驗室。2.2選定實驗室的定值要求要求實驗室在2天內(nèi)完成定值。每天融化各待定值標準品l瓶，平行定值3次。測量待定值標準品之中穿插測SRM956b3次。記錄實驗結(jié)果。并以羅氏公司的"c.fas"定值校準品作為室內(nèi)質(zhì)控之一。記錄實驗結(jié)果。2.3在試驗完成后兩天內(nèi)收集數(shù)據(jù)。對每個實驗數(shù)據(jù)，用格拉布斯法剔除可疑值。2.4匯總?cè)繑?shù)據(jù)后，驗證數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性，在數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布的情況下，所有數(shù)據(jù)構(gòu)成一組新的測量數(shù)據(jù)。繼續(xù)用格拉布斯法剔除可疑值。2.5計算出總平均值和標準差。該均值作為標準品的中間值。2.6根據(jù)單位換算公式求得5個濃度水平的血清溶液樣品中血清鎂濃度(mmo1/L)。(三)鎂濃度標準值的定值儀器參數(shù)設(shè)置AA-6800型原子吸收分光光度計，空心陰極燈電流大小為8mA;單色器狹縫寬度為0.5nm;乙炔-空氣火焰，乙炔流量1.9L/min，為輕度富燃火焰；燃燒器高度為7mm;采用氖燈除背景，采用手動進樣。采用儀器默認延遲時間和手動連續(xù)進樣模式，進樣量在36mL/min，測定波長為285.2nm。實驗室條件環(huán)境溫度2025。C，變化不大于3°C/h，濕度20%50%，交流電壓波動小于5%，乙炔氣體純度大于99%，排風通暢等。(1)吸入去離子水將儀器調(diào)零。(2)保證儀器穩(wěn)定將上述5種鎂標準工作液和空白工作液用儀器重復測量，使儀器滿足如下條件1)對同一種工作液而言，每日內(nèi)重復4次測量，每次測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于1.25%;2)對同一種工作液而言，不同日間測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于2%;3)空白工作液的吸光度讀數(shù)小于鎂濃度最低的鎂標準工作液的吸光度讀數(shù)的3%。期間空白和鎂標準工作液以及鎂標準工作液之間吸入去離子水觀察讀數(shù)是否為O，必要時重新調(diào)零。(3)開始測定前，鎂空心陰極燈預(yù)熱30分鐘，然后點火，使用空氣_乙炔火焰，吸入去離子水10分鐘至火焰穩(wěn)定。(4)用去離子水將儀器重新調(diào)到吸光度為零。(5)繪制工作曲線1)吸入空白工作液、鎂標準工作液1、鎂標準工作液2、鎂標準工作液3、鎂標準工作液4和鎂標準工作液5，并讀取吸光度。在每個工作液之間噴一次去離子水，并保證每次噴去離子水的吸光度讀數(shù)為O。2)重復步驟l);儀器根據(jù)鎂標準工作液的濃度及吸光度讀數(shù)，自動生成工作曲線，所述工作曲線為一元線性回歸曲線，其自變量為所述鎂標準工作液中鎂的濃度值(ug/g)，因變量為所述鎂標準工作液中鎂的吸光度值；此過程中儀器應(yīng)滿足如下條件1)對同一種工作液而言，每次測量得到的鎂標準工作液中鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于1.25%;2)對同一種工作液而言，重復測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的平均值與每次測量的實際測量值之間的偏差小于等于1.5%;3)空白工作液的吸光度讀數(shù)小于鎂標準工作液1(即鎂濃度最低的鎂標準工作液)的吸光度讀數(shù)的3%;4)儀器生成的工作曲線中，R2>0.9995。空白工作液中除了沒有鎂離子外，其它成分與鎂標準工作液完全相同，可以排除其他成分對測定結(jié)果的影響。R值稱為相關(guān)系數(shù)，在-11之間，表示相關(guān)的程度，絕對值越接近于l說明相關(guān)性越好。正值為正相關(guān)，負值為負相關(guān)。R值的平方R2稱為確定系數(shù)，表示X變量的變化有百分之多少是由Y變量引起的。(6)分別吸入SRM956b-I、SRM956b-11、5種血清溶液樣品分析溶液(仏、U2、U3、U4、U5)，檢測其吸光度值，血清溶液樣品分析溶液之間同樣吸入去離子水觀察讀數(shù)是否為O，必要時重新調(diào)零。分別得到5種所述血清溶液樣品分析溶液中鎂的吸光度讀數(shù)值。(7)重復第(5)、(6)步驟三次，共得到四組數(shù)據(jù)。(8)取每種溶液的四次測量吸光度數(shù)據(jù)的和，5種鎂標準工作溶液、5種血清溶液樣品分析溶液的4次吸光度數(shù)據(jù)之和分別記作EW1、EW2、EW3、EW4、EW5、EU"EU2、EU3、EU4、EU5;按下列公式計算血清溶液樣品中血清鎂濃度值ZU廠(環(huán)+環(huán)+:SW3+i:W4+SW5)/5U！=(0.3Xn)+-rXb2W4+2W5-:SW1-2:W2b=.rX2X0.36Xn其中，n為將血清溶液樣品稀釋為血清溶液樣品分析溶液的稀釋倍數(shù)，本實驗中，n=100;r為測量次數(shù)，本實驗中，r=4。同樣的計算方法可以得到U2、U3、U4、U5。血清溶液樣品中鎂濃度定值結(jié)果見表12、13。根據(jù)表12、13，依據(jù)格拉布斯準則，分別剔除可疑數(shù)據(jù)，計算得到定值結(jié)果，如表14。測定SRM956b二個濃度水平及羅氏c.f.a.s的結(jié)果如表15，相對偏差均小于1.5%，因此認為本發(fā)明方法的賦值結(jié)果可靠。表12、本發(fā)明的發(fā)明人所在實驗室的定值結(jié)果(ng,<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表13、島津公司實驗室定結(jié)果(jxg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表14、血清鎂標準物質(zhì)中鎂濃度定值結(jié)果(i!g/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>(四)鎂濃度標準值的不確定度的評定不確定度是指與測量結(jié)果相關(guān)的參數(shù)，表征可合理地賦予被測量的值的分散性。標準差或變異系數(shù)只能反映所使用的測量程序在規(guī)定的條件下的隨機不確定性，還有一些因素如血清的均勻性好壞、天平的稱量誤差、容量器具的校準誤差等都會最終影響測定結(jié)果。而這些因素造成的不確定性，是重復測量結(jié)果的標準差或變異系數(shù)所無法反映的。本研究在制備血清鎂標準物質(zhì)時，從血清溶液樣品的收集、處理、檢測到定值等進行全面質(zhì)量控制，并對過程中產(chǎn)生的不確定度進行全面評定，使最終的血清定值能夠更合理的表征被賦予值的分散程度。確定生產(chǎn)的標準物質(zhì)/標準樣品的特性值時最重要的一個方面是評定測量的不確定度。而每個測量都伴隨有相應(yīng)的不確定度。4.l測量不確定度(1)重復測量引起的不確定度。對同一濃度血清溶液樣品在不同時間按相同的條件進行多次測定即重復測定，包括批內(nèi)和批間重復測定。測量值在一定范圍內(nèi)會出現(xiàn)上下波動，這與儀器自身的性能及測定的濃度水平有關(guān)，由此引入重復測定引起的不確定度。因此為了保證分析的準確性，測定前必須檢查實驗條件，根據(jù)所選測量方法和儀器的實際情況，設(shè)立重復測量的可接受標準；另外還需要對儀器進行維護，使儀器處于最佳狀態(tài)，將由重復測量引起的不確定度降低到最小。本發(fā)明中分析5個血清溶液樣品，每個血清溶液樣品測定2批，每批測定3次。計算重復測量產(chǎn)生的不確定度。重復測量產(chǎn)生的不確定度的檢測方法將每個血清溶液樣品測得的6個值分別計算平均值X、標準差SD，則重復測量產(chǎn)生的相對不確定度為(SD/X)X100%。SD-V(批內(nèi)標準差2+批間標準差2)/2重復測量的相對標準不確定度結(jié)果血清溶液樣品1:1.65%、血清溶液樣品2:1.32%、血清溶液樣品3:1.23%、血清溶液樣品4:1.71%、血清溶液樣品5:0.86%(表16)。(2)標準溶液引起的不確定度。鎂標準工作溶液的配制采用重量法由NISTSRM929a葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)配制而成，由此引入標準物質(zhì)SRM929a產(chǎn)生的不確定度。SRM929aMg含量為5.362%±0.027%，其相對標準不確定度為0.027%/2。(3)稱量質(zhì)量引起的不確定度。鎂標準工作液的配制及血清溶液樣品的稀釋過程都是用稱量質(zhì)量的方法進行的，都要使用到天平，由此引入稱量質(zhì)量引起的不確定度。萬分之一天平精度為0.lmg，按均勻分布計算，取K-V^，其稱量不確定度為O.0001/=0.000058g。其相對標準不確定度約為0.006%。(4)血清溶液樣品密度測量引起的不確定度，其相對標準不確定度為0.05%。(5)血清溶液樣品測量的相對合成標準不確定度(U。(y))，見公式(3)Uc2(y)=(Ul)2+(u2)2+(u3)2+(u4)2(3)其中，w為重復測量引起的不確定度，112為標準物質(zhì)引起的不確定度，113為稱量質(zhì)量引起的不確定度，u4為血清溶液樣品密度測量引起的不確定度。5種血清溶液樣品鎂濃度定值的相對合成標準不確定度為1.65%、1.32%、1.23%、1.71%、0.86%。"絕對合成標準不確定度"，見公式(5)絕對合成標準不確定度=cXUc(y)(ug/g)，(5)式中c為血清溶液樣品中鎂濃度定值。(6)血清溶液樣品測量的相對擴展合成標準不確定度按照"化學分析中不確定度的評估指南"在大多數(shù)情況下，推薦k=2(95%置信區(qū)間)，即擴展因子kp=2。血清溶液樣品測量的相對擴展合成標準不確定度=2XUc(y);血清溶液樣品測量的絕對擴展合成標準不確定度為U95%=2XcXUc(y)5種血清溶液樣品的絕對擴展合成標準不確定度分別為0.467、0.559、0.723、1.287、1.031iig/g。4.2不均勻性引起的不確定度分析。將實驗五中得到的5種血清溶液樣品的不均勻性的不確定度分別與實驗4.1中步驟(5)所述的血清溶液樣品測量的相對合成標準不確定度(簡稱測量不確定度)比較，結(jié)果表明冰凍混合血清溶液樣品1和5的sbb與測量不確定度在同一數(shù)量級，則將sbb計入定值的總不確定度內(nèi)。冰凍混合血清溶液樣品2、3、4相對于測量不確定度可以忽略，均勻性的不確定度不計入定值不確定度?；谏鲜鼋Y(jié)果，冰凍混合血清鎂5種血清溶液樣品的標準物質(zhì)均勻性是可以接受的。4.3血清溶液樣品中鎂濃度定值的合成標準不確定度(1)血清溶液樣品中鎂濃度定值的相對合成標準不確定度血清溶液樣品中鎂濃度定值的相對合成標準不確定度(Uc)=A/U2bb+U2char式中，Uc為血清溶液樣品中鎂濃度定值的相對合成標準不確定度，Ubb=不均勻性引起的相對標準不確定度，U^r為實驗4.1中步驟(5)所述的血清溶液樣品測量的相對合成標準不確定度。確定鎂濃度標準值(即定值)及其相對合成標準不確定度后的血清溶液樣品即為血清鎂標準物質(zhì)。血清鎂標準物質(zhì)中鎂濃度標準值的相對合成標準不確定度結(jié)果見表16。表16、血清鎂標準物質(zhì)定值相對不確定度結(jié)果(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>(2)血清溶液樣品中鎂濃度標準值的絕對擴展合成標準不確定度推薦k=2(95%置信區(qū)間)，即擴展因子kp=2。血清溶液樣品中鎂濃度標準值的絕對擴展合成標準不確定度=2XcXUc(y)，其中，c為血清溶液樣品中鎂濃度的標準值，Uc(y)為血清溶液樣品中鎂濃度標準值的相對合成標準不確定度。各血清溶液樣品中鎂濃度標準值的絕對擴展合成標準不確定度如下血清溶液樣品1:1.655%X2X14.091=0.467(iig/g);血清溶液樣品2:1.319%X2X21.200=0.559(iig/g);血清溶液樣品3:1.226%X2X29.472=0.723(yg/g);血清溶液樣品4:1.707%X2X37.685=1.287(iig/g);血清溶液樣品5:1.182%X2X43.591=1.031(iig/g)。八、將單位名稱為ug/g的鎂濃度值換算為單位名稱為mmol/L的鎂濃度值根據(jù)上文測量的血清溶液樣品密度，將血清鎂濃度由ug/g單位換算為法定計量單位mmol/L，按照公式(2)換算。CtJ#=(C/24.305)/(1/p)(mmol/L)(2)CtJ#:血清溶液樣品中鎂濃度，用mmol/L表示。C:血清溶液樣品中鎂濃度，用ug/g表示。24.305:鎂元素的原子量。P:血清溶液樣品密度。血清溶液樣品1:鎂濃度標準值為0.594mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.020mmol/L;相對擴展合成標準不確定度為3.31%，其相對合成標準不確定度為1.66%。血清溶液樣品2:鎂濃度標準值為0.894mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.024mmol/L;相對擴展合成標準不確定度為2.64%，其相對合成標準不確定度為1.32%。血清溶液樣品3:鎂濃度標準值為1.243mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.030mmol/L;相對擴展合成標準不確定度為2.45%，其相對合成標準不確定度為1.23%。血清溶液樣品4:鎂濃度標準值為1.589mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.054mmol/L;相對擴展合成標準不確定度為3.41%，其相對合成標準不確定度為1.71%。血清溶液樣品5:鎂濃度標準值為1.838mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.043mmol/L;相對擴展合成標準不確定度為2.36%，其相對合成標準不確定度為1.18%。九、血清鎂標準物質(zhì)互通性研究檢測常規(guī)方法評價及其與本實施例中步驟七中方法之間相關(guān)性。用本實施例中步驟七中方法和常規(guī)方法同時測定血清樣本(10例以上，分布范圍較寬)，對測定結(jié)果作線性回歸及相關(guān)分析，如果相關(guān)系數(shù)r>0.995，表明兩種方法間有良好的相關(guān)性。挑選臨床實驗室常用的HITACHI、DADE、BACKMAN、OLYMPUS等生化分析系統(tǒng)作為常規(guī)方法，分別測量10份血清，每份血清測量三次，取均值為橫坐標。本實施例中步驟七中方法同時測定該10份血清，均值為縱坐標分別描記直線。分別用常規(guī)方法和本實施例中步驟七中方法測定待認定標準品。結(jié)果表明，測量結(jié)果描記的點，分別落在上述的直線上，說明待認定標準品在常規(guī)方法與本實施例中步驟七中方法之間互通性良好。十、溯源性關(guān)于標準物質(zhì)的溯源性(traceability)，是指通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準通常是與國家標準或國際標準聯(lián)系起來的特性。為了能在時空上具有可比性，測量需要溯源到適當和規(guī)定的測量標準。溯源鏈的理想終點(即定義中的"參考標準")是國際單位制(SI)單位的定義，但目前只有少部分檢驗項目可以溯源至SI單位，而多數(shù)項目只能溯源至國際約定校準物質(zhì)或國際約定參考測量程序，甚至是廠家校準物和(或)測量程序。本研究基于DGKL火焰原子吸收血清鎂測定參考方法的基礎(chǔ)上進行重要改進，所研制的候選血清鎂標準物質(zhì)經(jīng)兩個權(quán)威實驗室采用國際公認的參考方法的原理進行定值，由NISTSRM929a血清電解質(zhì)標準物質(zhì)進行血清鎂量值的傳遞，溯源關(guān)系明確。實施例2、血清鎂標準物質(zhì)II的組成及制備—、血清的收集方法與實施例1中所述相同。二、不同鎂濃度血清溶液樣品的配制方法與實施例1中所述相同，不同的是稀釋或鎂添加得到的血清溶液樣品中鎂的濃度不同，所用的電解質(zhì)溶液的濃度不同，得到如下5種鎂濃度水平不同的血清溶液樣品血清溶液樣品1:鎂濃度為0.50mmol/L;血清溶液樣品2:鎂濃度為0.80mmol/L;血清溶液樣品3:鎂濃度為1.10mmol/L;血清溶液樣品4:鎂濃度為1.40mmol/L;血清溶液樣品5:鎂濃度為1.70mmol/L。電解質(zhì)溶液的組成由終濃度為4.5mmol/L的KC1、終濃度為135.0mmol/L的NaCl和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在電解質(zhì)溶液中的濃度。三、血清溶液樣品的過濾方法與實施例1中所述相同。四、血清溶液樣品的密度測定方法與實施例1中所述相同。測得5個血清溶液樣品的密度分別為如下血清溶液樣品1:1.023±0.001g/ml;血清溶液樣品2:1.024±0.001g/ml;血清溶液樣品3:1.024±0.001g/ml;血清溶液樣品4:1.024±0.001g/ml;血清溶液樣品5:1.024±0.001g/ml。五、冰凍血清溶液樣品均勻性檢驗方法與實施例1中所述相同。冰凍混合血清溶液樣品1瓶間不均勻性的絕對標準不確定度Sbb為1.216X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品2瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.271X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品3瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.527X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品4瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.623X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品5瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為2.114X10—3,1/L。換算為相對標準不確定度分別為0.24%、0.16%、0.14%、0.12%、0.13%。將此不均勻性的不確定度分別與下述實驗七中得到的測量不確定度比較，結(jié)果表明血清溶液樣品1、2、3、4、5的Sbb與測量不確定度相比，不在同一個數(shù)量級，相對于測量不確定度可以忽略。因此，認為5種血清溶液樣品的均勻性良好。六、冰凍混合血清溶液樣品-8(TC貯存條件下穩(wěn)定性檢驗檢測方法與實施例1中所述相同。結(jié)果表明，P=0.326>0.05，血清鎂的濃度在不同的時間點上沒有顯著性差異。因此在180天內(nèi)其水平是穩(wěn)定的。七、血清中鎂濃度的定值(—)定值中使用的試劑及其配制方法與實施例1中所述相同。(二)實驗設(shè)計與實施例1中所述相同。(三)鎂濃度標準值的定值方法與實施例1中所述相同；結(jié)果5種血清溶液樣品中鎂濃度的定值如表17所示表17、血清鎂標準物質(zhì)中鎂濃度標準值的最終定值結(jié)果(i！g/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>(四)定值不確定度4.1測量不確定度(1)重復測量引起的不確定度方法與實施例1中所述相同。重復測量產(chǎn)生的每種血清溶液樣品的相對標準不確定度結(jié)果血清溶液樣品1:1.40%、血清溶液樣品2:1.45%、血清溶液樣品3:1.02%、血清溶液樣品4:1.11%、血清溶液樣品5:0.85%。(2)標準物質(zhì)引起的不確定度與實施例1中所述相同，其相對標準不確定度為0.027%/2。(3)稱量質(zhì)量引起的不確定度與實施例1中所述相同，其相對標準不確定度約為0.006%。(4)血清溶液樣品密度測量引起的不確定度與實施例1中所述相同，其相對合成標準不確定度為O.05%。(5)血清溶液樣品測量的相對合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同；結(jié)果血清溶液樣品1:1.40%、血清溶液樣品2:1.45%、血清溶液樣品3:1.02%、血清溶液樣品4:1.11%、血清溶液樣品5:0.85%。血清溶液樣品測量的絕對合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。(6)血清溶液樣品測量的相對擴展合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。血清溶液樣品測量的絕對擴展合成標準不確定度為計算方法與實施例1中所述相同。5種血清溶液樣品的絕對擴展合成標準不確定度分別為0.34、0.56、0.54、0.75、0.70iig/g。4.2不均勻性引起的不確定度分析。5種血清溶液樣品的瓶間不均勻性的不確定度如本實施例中實驗五中所述。血清溶液樣品1、2、3、4、5的Ubb不計入血清溶液樣品中鎂濃度標準值的總不確定度。4.3血清溶液樣品中鎂濃度標準值的合成標準不確定度(1)血清溶液樣品中鎂濃度標準值的相對合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。結(jié)果，5種血清溶液樣品中鎂濃度標準值的相對合成標準不確定度分別為1.40%、1.45%、1.02%、1.11%、0.85%。(2)血清溶液樣品中鎂濃度標準值的絕對擴展合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。結(jié)果，5個不同水平的血清溶液樣品的絕對擴展合成標準不確定度分別為0.34、0.56、0.54、0.75、0.70iig/g。八、將單位名稱為ug/g的鎂濃度值換算為單位名稱為mmol/L的鎂濃度值方法與實施例1中所述相同。血清溶液樣品1:鎂濃度標準值為0.499mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.018mmol/L;其相對合成標準不確定度為1.400%;相對擴展合成標準不確定度為2.802%。血清溶液樣品2:鎂濃度標準值為0.788mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.023mmol/L;其相對合成標準不確定度為1.45%;相對擴展合成標準不確定度為2.90%。血清溶液樣品3:鎂濃度標準值為1.088mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.025mmol/L;其相對合成標準不確定度為1.02%;相對擴展合成標準不確定度為2.04%。血清溶液樣品4:鎂濃度標準值為1.389mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.040mmol/L;其相對合成標準不確定度為1.11%;相對擴展合成標準不確定度為2.22%。血清溶液樣品5:鎂濃度標準值為1.686mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.031mmol/L;其相對合成標準不確定度為0.85%;相對擴展合成標準不確定度為1.70%。九、血清鎂候選標準物質(zhì)互通性研究血清鎂標準物質(zhì)沒有添加血清基質(zhì)中不存在的物質(zhì)，如穩(wěn)定劑、防腐劑、防凍液等成分，也沒有對其進行特殊的處理如凍干等，血清外觀、性狀、透明度等均沒有改變，互通性好。十、溯源性由NISTSRM929a血清電解質(zhì)標準物質(zhì)進行血清鎂量值的傳遞，溯源關(guān)系明確。實施例3、血清鎂標準物質(zhì)III的組成及制備—、血清的收集方法與實施例1中所述相同。二、不同鎂濃度血清溶液樣品的配制方法與實施例1中所述相同，不同的是稀釋或鎂添加得到的血清溶液樣品中鎂的濃度不同，所用的電解質(zhì)溶液的濃度不同，得到如下5種鎂濃度水平不同的血清溶液樣品血清溶液樣品1:鎂濃度為0.80mmol/L;血清溶液樣品2:鎂濃度為1.10mmol/L;血清溶液樣品3:鎂濃度為1.40mmol/L;血清溶液樣品4:鎂濃度為1.70mmol/L;血清溶液樣品5:鎂濃度為2.00mmol/L。電解質(zhì)溶液的組成由終濃度為5.5mmol/L的KC1、終濃度為145.0mmol/L的NaCl和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在電解質(zhì)溶液中的濃度。三、血清溶液樣品的過濾方法與實施例1中所述相同。四、血清溶液樣品的密度測定方法與實施例1中所述相同。測得5個血清溶液樣品的密度分別為如下血清溶液樣品1:1.023±0.001g/ml;血清溶液樣品2:1.024±0.001g/ml;血清溶液樣品3:1.024±0.001g/ml;血清溶液樣品4:1.024±0.001g/ml;血清溶液樣品5:1.024±0.001g/ml。五、冰凍混合血清均勻性檢驗方法與實施例1中所述相同。冰凍混合血清溶液樣品1瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.277X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品2瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.443X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品3瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為1.979X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品4瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為2.314X10—3mmol/L;冰凍混合血清溶液樣品5瓶間不均勻性的絕對標準不確定度sbb為2.923X10—3,1/L。將此不均勻性的不確定度分別與下述實驗七中得到的測量不確定度比較，結(jié)果表明血清溶液樣品1、2、3、4和5的Sbb與測量不確定度相比，不在同一個數(shù)量級，相對于測量不確定度可以忽略，因此，認為5種血清溶液樣品的均勻性良好。六、冰凍混合血清-8(TC貯存條件下穩(wěn)定性檢驗檢測方法與實施例1中所述相同。結(jié)果表明，P=0.326>0.05，血清鎂的濃度在不同的時間點上沒有顯著性差異。因此在180天內(nèi)其水平是穩(wěn)定的。七、血清中鎂濃度的定值(—)定值中使用的試劑及其配制方法與實施例1中所述相同。(二)實驗設(shè)計與實施例1中所述相同。(三)鎂濃度標準值的定值方法與實施例1中所述相同；結(jié)果5種血清溶液樣品中鎂濃度的標準值如表18所示表18、血清鎂標準物質(zhì)中鎂濃度標準值的最終定值結(jié)果(i！g/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>(四)定值不確定度4.1測量不確定度(1)重復測量引起的不確定度方法與實施例1中所述相同。重復測量產(chǎn)生的每種水平血清溶液樣品的相對標準不確定度結(jié)果血清溶液樣品1:1.21%、血清溶液樣品2:0.80%、血清溶液樣品3:0.84%、血清溶液樣品4:0.78%、血清溶液樣品5:0.86%。(2)標準物質(zhì)引起的不確定度與實施例1中所述相同，其相對標準不確定度為0.027%/2。(3)稱量質(zhì)量引起的不確定度與實施例1中所述相同，其相對標準不確定度約為0.006%。(4)血清溶液樣品密度測量引起的不確定度與實施例1中所述相同，其相對合成標準不確定度為O.05%。(5)血清溶液樣品測量的相對合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同；結(jié)果血清溶液樣品1:1.21%、血清溶液樣品2:0.80%、血清溶液樣品3:0.84%、血清溶液樣品4:0.78%、血清溶液樣品5:0.86%血清溶液樣品測量的絕對合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。(6)血清溶液樣品測量的相對擴展合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。血清溶液樣品測量的絕對擴展合成標準不確定度為計算方法與實施例1中所述相同。5種血清溶液樣品的絕對擴展合成標準不確定度分別為0.47、0.43、0.57、0.65、0.83iig/g。4.2不均勻性引起的不確定度分析。5種血清溶液樣品的瓶間不均勻性的不確定度(ubb)如本實施例中實驗五中所述。血清溶液樣品1、2、3、4和5的Sbb與測量不確定度相比，不在同一個數(shù)量級，相對于測量不確定度可以忽略，不計入定值不確定度。4.3血清溶液樣品中鎂濃度標準值的合成標準不確定度(1)血清溶液樣品中鎂濃度標準值的相對合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。結(jié)果，5種血清溶液樣品的定值的相對合成標準不確定度分別為1.21%、0.80%、0.84%、0.78%、0.86%。(2)血清溶液樣品中鎂濃度標準值的絕對擴展合成標準不確定度計算方法與實施例1中所述相同。結(jié)果，5種血清溶液樣品中鎂濃度標準值的絕對擴展合成標準不確定度分別為血清溶液樣品1:0.47ilg/g;血清溶液樣品2:0.43ilg/g;血清溶液樣品3:0.67ilg/g;血清溶液樣品4:0.65ilg/g;血清溶液樣品5:0.83ilg/g。八、將單位名稱為ug/g的鎂濃度值換算為單位名稱為mmol/L的鎂濃度值方法與實施例1中所述相同。將所述單位名稱為質(zhì)量/質(zhì)量(yg/g)的鎂濃度值及不確定度換算為單位名稱為物質(zhì)的量/體積(mmol/L)的鎂濃度值及不確定度。血清溶液樣品1:鎂濃度標準值為0.801mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.012mmol/L;其相對合成標準不確定度為1.21%;相對擴展合成標準不確定度為2.42%。血清溶液樣品2:鎂濃度標準值為1.108mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.024mmol/L;其相對合成標準不確定度為0.80%;相對擴展合成標準不確定度為1.60%。血清溶液樣品3:鎂濃度標準值為1.408mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.040mmol/L;其相對合成標準不確定度為0.84%;相對擴展合成標準不確定度為1.68%。血清溶液樣品4:鎂濃度標準值為1.707mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.058mmol/L;其相對合成標準不確定度為0.78%;相對擴展合成標準不確定度為1.56%。血清溶液樣品5:鎂濃度標準值為1.999mmol/L，其絕對擴展合成標準不確定度為0.080mmol/L;其相對合成標準不確定度為0.86%;相對擴展合成標準不確定度為1.72%。九、血清鎂候選標準物質(zhì)互通性研究血清鎂標準物質(zhì)沒有添加血清基質(zhì)中不存在的物質(zhì)，如穩(wěn)定劑、防腐劑、防凍液等成分，也沒有對其進行特殊的處理如凍干等，血清外觀、性狀、透明度等均沒有改變，互通性好。十、溯源性由NISTSRM929a血清電解質(zhì)標準物質(zhì)進行血清鎂量值的傳遞，溯源關(guān)系明確。權(quán)利要求一種血清鎂標準物質(zhì)，是按照包括如下步驟的方法制備的對離體血清進行稀釋或鎂添加，得到5種不同鎂濃度的血清溶液，再分別對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值，得到如下5種鎂濃度的血清鎂標準物質(zhì)1)鎂濃度的標準值為0.50-0.80mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78％-1.71％；2)鎂濃度的標準值為0.80-1.10mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78％-1.71％；3)鎂濃度的標準值為1.10-1.40mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78％-1.71％；4)鎂濃度的標準值為1.40-1.70mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78％-1.71％；5)鎂濃度的標準值為1.70-2.00mmol/L，相對合成標準不確定度為0.78％-1.71％；。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述離體血清為無肝腎功能疾病、無溶血、無黃疸且非乳糜的血清。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述稀釋是用如下稀釋劑進行的，所述鎂添加是用如下鎂添加劑進行的1)稀釋劑為氯化鈉和氯化鉀的混合水溶液，所述氯化鈉在所述稀釋劑中的濃度為135.0mmol/L-145.Ommol/L，所述氯化鉀在所述稀釋劑中的濃度為4.5mmol/L_5.5mmol/L;2)鎂添加劑為在國家標準物質(zhì)研究中心的編號為GBW(E)080126的物質(zhì)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述對離體血清進行稀釋的方法包括如下步驟通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述稀釋劑，將所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述稀釋劑混勻；所述對離體血清進行鎂添加的方法包括如下步驟通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述鎂添加劑，將所需質(zhì)量的所述離體血清和所需質(zhì)量的所述鎂添加劑混勻。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述離體血清是由來自于不同個體的離體血清混合而成的。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值的方法包括如下步驟(一)用火焰原子吸收光譜法測量所述血清溶液中鎂濃度值，包括如下步驟(1)檢測空白工作液和鎂濃度不同的鎂標準工作液中鎂的吸光度值，得到工作曲線；所述工作曲線為一元線性回歸曲線，其自變量為所述鎂標準工作液中鎂的濃度值，因變量為所述鎂標準工作液中鎂的吸光度值；所述空白工作液中除不含有鎂外，其余與所述鎂標準工作液相同；所述鎂標準工作液和所述空白工作液是按照包括如下步驟的方法配制的通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的溶質(zhì)和所需質(zhì)量的溶劑，將所需質(zhì)量的溶質(zhì)和所需質(zhì)量的溶劑混合.所述鎂標準工作液中鎂的濃度為鎂的質(zhì)量與鎂標準工作液質(zhì)量的比；(2)檢測所述血清溶液中鎂的吸光度，得到所述血清溶液中鎂的吸光度讀數(shù)值；(3)重復步驟(1)和(2);(4)對于每種鎂標準工作液而言，取步驟(1)和(3)得到的吸光度讀數(shù)值的和，記作EW，5種鎂標準工作液分別記作EW1、EW2、EW3、EW4、EW5;對于每種血清溶液而言，取步驟(2)和(3)得到的吸光度讀數(shù)值的和，記作EU;根據(jù)公式I換算得到所述血清溶液中鎂濃度值，記作U;所述血清溶液中鎂濃度值為所述血清溶液中鎂的質(zhì)量與所述血清溶液質(zhì)量的比；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，r為測量次數(shù)；(二)測量所述血清溶液的密度，得到所述血清溶液的密度值，根據(jù)所述密度值和所述步驟(一)中得到的所述血清溶液中鎂濃度值，得到所述血清溶液中鎂濃度的標準值；所述血清溶液中鎂濃度的標準值為所述血清溶液中鎂的物質(zhì)的量與所述血清溶液的體積的比；所述鎂標準工作液有如下5種鎂標準工作液1、鎂標準工作液2、鎂標準工作液3、鎂標準工作液4、鎂標準工作液5;所述鎂標準工作液1與所述鎂標準工作液2相同，所述鎂標準工作液4與所述鎂標準工作液5相同，所述鎂標準工作液1、所述鎂標準工作液3和所述鎂標準工作液4中除了鎂濃度不同外，其余相同。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述用火焰原子吸收光譜法測量所述血清溶液中鎂濃度值的方法，在操作過程中，使儀器滿足如下條件1)對同一種所述鎂標準工作液而言，同日內(nèi)每次測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于1.25%;2)對同一種所述鎂標準工作液而言，不同日間測量得到的鎂吸光度讀數(shù)值的變異系數(shù)小于等于2%;3)所述空白工作液的吸光度讀數(shù)小于鎂濃度最低的所述鎂標準工作液的吸光度讀數(shù)的3%;3)所述工作曲線的相關(guān)系數(shù)的平方大于0.9995。8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述鎂標準工作液由氯化鎂、氯化鈉、氯化鉀、氯化鑭和去離子水組成；所述空白工作液由氯化鈉、氯化鉀、氯化鑭和去離子水組成；所述氯化鎂是通過加入葡萄糖酸鎂標準物質(zhì)和鹽酸反應(yīng)得到的；所述氯化鑭是通過加入三氧化二鑭和鹽酸反應(yīng)得到的；鎂標準工作液1的組成由終濃度為12ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為[8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為[0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液1中的濃度。鎂標準工作液3的組成由終濃度為30ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為[8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為[0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液3中的濃度。鎂標準工作液4的組成由終濃度為48ug/100.OOOOg的鎂離子、終濃度為[8.12mg/100.OOOOg的氯化鈉、終濃度為0.373mg/100.OOOOg的氯化鉀、終濃度為[0.2429g/100.OOOOg的氯化鑭和去離子水組成；所述終濃度為各物質(zhì)在鎂標準工作液4中的濃度。9.根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一所述的血清鎂標準物質(zhì)，其特征在于所述方法中，在所述分別對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值前，包括如下對所述血清溶液進行稀釋的步驟通過稱量質(zhì)量的方法得到所需質(zhì)量的血清溶液和所需質(zhì)量的稀釋液，將所需質(zhì)量的血清溶液和所需質(zhì)量的稀釋液混勻。10.—種用于制備血清鎂標準物質(zhì)的稀釋添加試劑盒，由稀釋劑和鎂添加劑組成；所述稀釋劑為氯化鈉和氯化鉀的混合水溶液，所述氯化鈉在所述稀釋劑中的濃度為[135.Ommol/L-145.0mmol/L，所述氯化鉀在所述稀釋劑中的濃度為4.5mmol/L_5.5mmol/L;所述鎂添加劑為在國家標準物質(zhì)研究中心的編號為6BW(E)080126的物質(zhì)。全文摘要本發(fā)明公開了一種血清鎂標準物質(zhì)。該血清鎂標準物質(zhì)，是按照包括如下步驟的方法制備的對離體血清進行稀釋或鎂添加，得到5種不同鎂濃度的血清溶液，再分別對所述5種不同鎂濃度的血清溶液中的每種血清溶液進行定值，得到5種鎂濃度的血清鎂標準物質(zhì)。本發(fā)明的候選血清鎂標準物質(zhì)中不添加其它物質(zhì)，只以血清作為基體，其互通性好，均勻性好，-80℃儲存條件下穩(wěn)定性也良好，定值的量值溯源可靠，相對合成不確定度為0.828％-1.707％；合成不確定度較小。另外，其與現(xiàn)有的其它血清鎂標準物質(zhì)相比，成本低廉、制備方法簡單。文檔編號G01N21/31GK101701962SQ200910237608公開日2010年5月5日申請日期2009年11月19日優(yōu)先權(quán)日2009年11月19日發(fā)明者徐靜,李惠玲,王金英,童清,賈慧敏,馬懷安申請人:首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院