專(zhuān)利名稱：大蒜樣品中農(nóng)藥多殘留測(cè)定的前處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，涉及大蒜中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法。更具體的說(shuō)，是利用微波處理去除大蒜中的205種農(nóng)藥殘留的氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法(GC/MS)。

背景技術(shù)：
大蒜在種植過(guò)程中，地下害蟲(chóng)危害嚴(yán)重，使得菜農(nóng)大量使用高毒農(nóng)藥，對(duì)大蒜造成嚴(yán)重污染。農(nóng)藥超標(biāo)現(xiàn)象嚴(yán)重。在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，洋蔥、大蒜和韭菜等含硫蔬菜是一類(lèi)較為特殊的復(fù)雜樣品。這類(lèi)蔬菜在樣品制備過(guò)程中被攪碎時(shí)，其中的活性酶會(huì)使蔬菜中的硫化物釋放，產(chǎn)生特殊氣味。這些硫化物不易除去，在氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器(GC/ECD)、氣相色譜火焰光度檢測(cè)器(GC/FPD)和氣相色譜質(zhì)譜檢測(cè)器(GC/MS)上會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的響應(yīng)，影響待測(cè)物的定性與定量。因此解決樣品中硫化物的干擾是氣相色譜法測(cè)定含硫蔬菜中農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵。
大蒜里一般含有大蒜素，在新鮮的大蒜中大蒜素是以大蒜氨酸的形式存在的，當(dāng)大蒜受到?jīng)_擊時(shí)，大蒜酶接觸到空氣中的氧被活化，大蒜氨酸發(fā)生酶促反應(yīng)轉(zhuǎn)化成大蒜素，由于大蒜素與某些農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似，因此在進(jìn)行農(nóng)藥多殘留分析時(shí)會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的干擾，因此蒜氨酸酶的失活是消除這類(lèi)干擾的關(guān)鍵。
一般常用微波處理和磷酸處理，微波和磷酸的作用是使含硫蔬菜中活性酶失活，這樣在切碎時(shí)，就不會(huì)產(chǎn)生硫化物，大大減少了測(cè)定干擾。此外，還有采用硝酸銀分散到氧化鋁和氟羅里硅土上去除蔬菜中硫化物的報(bào)道，但硝酸銀對(duì)含硫農(nóng)藥有很強(qiáng)的吸附，使回收率不能達(dá)到要求。用高錳酸鉀-硫酸氧化法也可去除蔬菜中的硫化物，但不適用于性質(zhì)不穩(wěn)定的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥。但采用加硫酸銅勻漿方法測(cè)定油菜、油菜籽和甜菜樣品時(shí)，對(duì)除去硫化物也有很好的效果。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明選擇了微波處理作為大蒜的前處理手段，并對(duì)微波處理時(shí)間對(duì)農(nóng)藥穩(wěn)定性的影響進(jìn)行了試驗(yàn)。將整瓣大蒜直接微波處理，在大蒜素產(chǎn)生之前，使大蒜樣品中的酶失活，也就不會(huì)產(chǎn)生大蒜素，從而達(dá)到去除硫化物的干擾，又使待測(cè)分析物回收率達(dá)到要求。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下的技術(shù)方案 大蒜樣品中農(nóng)藥多殘留測(cè)定的前處理方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行 (1)大蒜去皮，整瓣稱100-200g用500W微波加熱90-120秒，樣品勻漿處理； (2)精確稱取樣品10g(精確到0.1g)加入40-60mL乙腈和10-20mL水，以20000-30000轉(zhuǎn)/min勻漿攪拌2-5min；5mL乙腈洗刀頭，抽濾，15-30mL乙腈分三次清洗殘?jiān)?，添加?-5mL后，待凈化； (3)用10-20mL乙腈和10-30mL純水分別預(yù)淋C18柱(1000mg代表柱子規(guī)格)，將上述濾液過(guò)PSA柱凈化，直接將上述提取液過(guò)柱，不需要淋洗液(其中的PSA是一種固相萃取柱通用名稱，具體填料為N-丙基乙二胺的固相萃取柱，C18為填料是三宮能十八烷基的固相萃取柱)，用9-15mL乙腈，3-5mL水洗殘液； (4)洗脫液，加5mL食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液和6-10g食鹽，振蕩3-5min，靜止10-15min； (5)取上層溶液，在38℃下減壓濃縮；將濃縮液進(jìn)行第2次凈化，用洗脫液A 5mL預(yù)淋，PSA柱(500mg代表柱子規(guī)格)，然后用30mL洗脫液B洗脫，再用30mL洗脫液A洗脫，收集洗脫液；其中洗脫液A丙酮+正己烷(50mL+50mL)；洗脫液B丙酮+正己烷(20mL+80mL)。
(6)洗脫液中加入正十烷50μL，在38℃下減壓濃縮近干，用氮吹儀吹干，2mL定容液{丙酮+正己烷(50mL+50mL)}定容，收集于樣品小瓶?jī)?nèi)，供GC/MS測(cè)定。
本發(fā)明大蒜樣品中農(nóng)藥多殘留測(cè)定的前處理方法的具體步驟如下 1、試驗(yàn)材料和儀器設(shè)備 試劑除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為蒸餾水乙腈、丙酮(色譜純)、正己烷(色譜純)；洗脫液A丙酮+正己烷(50+50)、洗脫液B丙酮+正己烷(20+80)、定容液丙酮+正己烷(50+50)；氯化鈉；正十烷；預(yù)處理小柱C18柱(500mg，3mL)、PSA柱；食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液(pH＝7.5)；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品(純度均≥95％，購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司)；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液200mg/L；工作標(biāo)準(zhǔn)溶液A1000μg/L；B500μg/L；C50μg/L。
儀器設(shè)備Agilent6890/5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀配有電子轟擊源(EI)、電子天平(十萬(wàn)分之一，瑞士梅特勒公司)、微波爐(格蘭仕)、固相萃取儀(日本GLSciences)、樣品勻漿機(jī)(IKA-WERKE)、分液漏斗振蕩器(MMV-1000W)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(Laborota4000efficient，德國(guó)Heidolph)、自動(dòng)快速濃縮儀(DSY-II型，北京金科精華苑技術(shù)研究所)等。
2、前處理方法 稱取大蒜去皮，整瓣稱100g用微波爐(500W)加熱90秒，樣品勻漿機(jī)處理。精確稱取樣品10g(精確到0.1g)于250mL燒杯中，加入40mL乙腈和10mL水，均一攪拌器勻漿(20000轉(zhuǎn)/min)2min；5mL乙腈洗刀頭，抽濾，15mL乙腈分三次清洗殘?jiān)?，添加?mL后，待凈化。
凈化用10mL乙腈和10mL純水分別預(yù)淋C18柱(1000mg)，將上述濾液過(guò)柱凈化，用9mL乙腈，3mL水洗殘液。將洗脫液倒入500mL分液漏斗中，加5mL食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液和6.5g食鹽，振蕩3min，靜止10min。取上層乙腈層，在38℃下減壓濃縮。
將濃縮液進(jìn)行2次凈化，用洗脫液A 5mL預(yù)淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脫液B洗脫，再用30mL洗脫液A洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加入正十烷50μL，在38℃下減壓濃縮近干，用氮吹儀吹干，2mL定容液定容。收集于樣品小瓶?jī)?nèi)，供GC/MS測(cè)定。
3、儀器分析條件 3.1氣相色譜條件 進(jìn)樣口溫度 60℃，保持0.1分鐘，每分鐘150℃升至260℃，保持3分鐘，再以每分鐘40℃升至300℃，保持5分鐘； 進(jìn)樣方式 脈沖不分流；進(jìn)樣體積2μL； 色譜柱 HP-5ms(30m×0.25mm×0.251μm)。
柱溫60℃，保持3分鐘，每分鐘5℃升至120℃，保持2分鐘，再以每分鐘1.5℃升至225℃，保持2分鐘，每分鐘20℃升至300℃，保持10分鐘，共運(yùn)行102.75分鐘。
載氣He；柱流量1mL/min。
3.2質(zhì)譜條件 EI源；電子能量70ev；反應(yīng)氣氦氣； MS Source230℃；MS Quad150℃；Scan50-500； 3.3離子分組情況 表1SIM法農(nóng)藥離子通道分組表 4、方法的回收率(見(jiàn)表2附在說(shuō)明書(shū)最后)
具體實(shí)施例方式 為了更充分的解釋本發(fā)明的實(shí)施方法，提供了大蒜中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的制備實(shí)施實(shí)例。這些實(shí)施實(shí)例僅僅是解釋、而不是限制本發(fā)明的范圍。其中所用的原料均有市售。
實(shí)施例1 (1)大蒜去皮，整瓣稱100g用500W微波加熱90秒，樣品勻漿處理； (2)精確稱取樣品10g加入40mL乙腈和mL水，以20000轉(zhuǎn)/min勻漿攪拌2min；5mL乙腈洗刀頭，抽濾，15mL乙腈分三次清洗殘?jiān)砑铀?mL后，待凈化； (3)用10mL乙腈和10mL純水分別預(yù)淋C18柱(1000mg)，將上述濾液過(guò)PSA柱凈化，用9mL乙腈，3mL水洗殘液； (4)洗脫液，加5mL食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液和6.5g食鹽，振蕩3min，靜止15min； (5)取上層溶液，在38℃下減壓濃縮；將濃縮液進(jìn)行第2次凈化，用洗脫液A5mL預(yù)淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脫液B洗脫，再用30mL洗脫液A洗脫，收集洗脫液； (6)洗脫液中加入正十烷50μL，在38℃下減壓濃縮近干，用氮吹儀吹干，2mL定容液定容，收集于樣品小瓶?jī)?nèi)，供GC/MS測(cè)定。
實(shí)施例2 (1)大蒜去皮，整瓣稱200g用500W微波加熱120秒，樣品勻漿處理； (2)精確稱取樣品10.1g加入60mL乙腈和20mL水，以30000轉(zhuǎn)/min勻漿攪拌5min；5mL乙腈洗刀頭，抽濾，30mL乙腈分三次清洗殘?jiān)?，添加?mL后，待凈化； (3)用20mL乙腈和30mL純水分別預(yù)淋C18柱(1000mg)，將上述濾液過(guò)PSA柱凈化，用15mL乙腈，5mL水洗殘液； (4)洗脫液，加5mL食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液和7g食鹽，振蕩3min，靜止10min； (5)取上層溶液，在38℃下減壓濃縮；將濃縮液進(jìn)行第2次凈化，用洗脫液A 5mL預(yù)淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脫液B洗脫，再用30mL洗脫液A洗脫，收集洗脫液； (6)洗脫液中加入正十烷50μL，在38℃下減壓濃縮近干，用氮吹儀吹干，2mL定容液定容，收集于樣品小瓶?jī)?nèi)，供GC/MS測(cè)定。
實(shí)施例3 (1)大蒜去皮，整瓣稱150g用500W微波加熱100秒，樣品勻漿處理； (2)精確稱取樣品10g(精確到0.1g)加入50mL乙腈和20mL水，以20000轉(zhuǎn)/min勻漿攪拌5min；5mL乙腈洗刀頭，抽濾30mL乙腈分三次清洗殘?jiān)?，添加?mL后，待凈化； (3)用20mL乙腈和30mL純水分別預(yù)淋C18柱(1000mg)，將上述濾液過(guò)PSA柱凈化，用15mL乙腈，5mL水洗殘液； (4)洗脫液，加5mL食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液和8g食鹽，振蕩5min，靜止10min； (5)取上層溶液，在38℃下減壓濃縮；將濃縮液進(jìn)行第2次凈化，用洗脫液A 5mL預(yù)淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脫液B洗脫，再用30mL洗脫液A洗脫，收集洗脫液； (6)洗脫液中加入正十烷50μL，在38℃下減壓濃縮近干，用氮吹儀吹干，2mL定容液定容，收集于樣品小瓶?jī)?nèi)，供GC/MS測(cè)定。
在詳細(xì)說(shuō)明的較佳實(shí)施例之后，熟悉該項(xiàng)技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述申請(qǐng)專(zhuān)利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受說(shuō)明書(shū)中所舉實(shí)例實(shí)施方式的限制。
表2方法的回收率






權(quán)利要求
1.大蒜樣品中農(nóng)藥多殘留測(cè)定的前處理方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行
(1)大蒜去皮，整瓣稱100-200g用500W微波加熱90-120秒，樣品勻漿處理；
(2)精確稱取樣品10g±0.1，加入40-60mL乙腈和10-20mL水，以20000-30000轉(zhuǎn)/min勻漿攪拌2-5min；5mL乙腈洗刀頭，抽濾，15-30mL乙腈分三次清洗殘?jiān)?，添加?-5mL后，待凈化；
(3)用10-20mL乙腈和10-30mL純水分別預(yù)淋C18柱，將上述濾液過(guò)PSA柱凈化，用9-15mL乙腈，3-5mL水洗殘液；
(4)洗脫液，加5mL食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液和6-10g食鹽，振蕩3-5min，靜止10-15min；
(5)取上層溶液，在38℃下減壓濃縮；將濃縮液進(jìn)行第2次凈化，用洗脫液A5mL預(yù)淋PSA柱，然后用30mL洗脫液B洗脫，再用30mL洗脫液A洗脫，收集洗脫液；其中洗脫液A為丙酮+正己烷＝50mL+50mL、洗脫液B為丙酮+正己烷＝20mL+80mL、采用洗脫液A定容液；
(6)洗脫液中加入正十烷50μL，在38℃下減壓濃縮近干，用氮吹儀吹干，采用洗脫液A2mL定容液定容，收集于樣品小瓶?jī)?nèi)，供GC/MS測(cè)定。
全文摘要
本發(fā)明涉及大蒜樣品中農(nóng)藥多殘留測(cè)定的前處理方法，具體是選擇微波處理作為大蒜的前處理手段，并對(duì)微波處理時(shí)間對(duì)農(nóng)藥穩(wěn)定性的影響進(jìn)行了試驗(yàn)。選擇微波爐加熱90-120秒，在大蒜素產(chǎn)生之前，使大蒜樣品中的酶失活，也就不會(huì)產(chǎn)生大蒜素，從而達(dá)到去除硫化物的干擾，又使待測(cè)分析物回收率達(dá)到要求。本發(fā)明的測(cè)定方法具有操作簡(jiǎn)單快捷，回收率高，靈敏度高，去除硫化物干擾完全的特點(diǎn)。為快速準(zhǔn)確的測(cè)定大蒜中農(nóng)藥殘留量，建立簡(jiǎn)便，有效的分析方法提供了可靠的保障。
文檔編號(hào)G01N30/06GK101762663SQ200910228930
公開(kāi)日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月2日
發(fā)明者郭永澤, 張玉婷, 邵輝, 李輝, 李娜, 劉磊, 程奕, 宋淑榮 申請(qǐng)人:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室