專利名稱：一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的方法、檢測(cè)系統(tǒng)及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)診斷學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)血清N糖1og(P9/P4) 的方法、檢測(cè)系統(tǒng)及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是全球第五位常見惡性腫瘤，也是近年來發(fā)病率 上升最快、病死率最高的腫瘤之一。在我國，由于HBV的高感染性而導(dǎo)致慢 性肝病、肝硬化的高發(fā)性。據(jù)研究報(bào)道在這些高危人群一生中有10-25%的機(jī) 率發(fā)展為HCC。 HCC起病多較隱匿，早期一般多無臨床癥狀，或僅有肝炎 的癥狀與體征，很難早期發(fā)現(xiàn)。 一旦出現(xiàn)典型的臨床表現(xiàn)，如肝區(qū)疼痛，消 瘦，黃疸或腹水等，通常已經(jīng)發(fā)展到中晚期，而失去了進(jìn)行根治性手術(shù)的機(jī) 會(huì)。目前常用的高危人群篩查指標(biāo)是血清甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)及超聲檢查。 AFP是目前唯一公認(rèn)的可用于臨床HCC高危人群篩選的肝癌腫瘤標(biāo)志物， 但臨床研究表明其敏感性僅36-64%，特異性為79-91% ，有1/3左右的HCC 可表現(xiàn)為AFP正常，即使AFP升高者,也不能排除慢性肝病、肝硬化等非惡性 肝病。超聲檢查通常難以發(fā)現(xiàn)、確認(rèn)小于3cm的腫塊，且超聲醫(yī)師個(gè)體診斷 水平的差異對(duì)診斷結(jié)果有很大影響，上述現(xiàn)狀導(dǎo)致HCC難以實(shí)現(xiàn)早期發(fā)現(xiàn)和 早期治療，患者預(yù)后差、5年生存率低、病死率高。因此尋找有效的早期篩 查及診斷指標(biāo)對(duì)提高HCC的整體診治水平迫在眉睫。
近年來蛋白組學(xué)及糖組學(xué)研究的快速發(fā)展為研究腫瘤生物學(xué)及相關(guān)腫瘤 標(biāo)志物提供了新的契機(jī)。糖基化是最常見的蛋白翻譯后修飾形式，體內(nèi)所有 蛋白質(zhì)中近50%為糖基化蛋白。細(xì)胞表面糖蛋白的糖基化形式參與介導(dǎo)了細(xì) 胞-細(xì)胞、細(xì)胞-間質(zhì)之間的相互作用。而且在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中常出現(xiàn)寡 糖結(jié)構(gòu)的改變，這種改變?yōu)樘厥馓腔肿映蔀闈撛谠缙谠\斷標(biāo)志物提供了 重要理論依據(jù)。由于血清中除漿細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白外，絕大部分糖蛋白 由肝細(xì)胞合成的，肝臟參與了血漿中近50%的糖蛋白的糖基化修飾，所以HCC 患者血清糖蛋白的糖基化改變可以反應(yīng)病變的發(fā)生發(fā)展。但長期以來，糖基化分析由于存在技術(shù)瓶頸，難以在臨床研究中得以采用。目前主要研究手段
包括FACE (熒光輔助糖電泳)、糖微點(diǎn)矩陣、熒光糖結(jié)合物探針、毛細(xì)管電 泳、X-光衍射(X-ray)、核磁共振(MRI)、高效液相色譜(HPLC)、飛行時(shí)間 質(zhì)譜(MS)、前沿親和層析、凝集素親和純化等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)血清N糖1og(P9/P4)的方法，及其檢測(cè)系 統(tǒng)，并將該檢測(cè)方法與檢測(cè)系統(tǒng)用于HCC的早期篩査及診斷，特別是與HBV 感染相關(guān)的原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)傾向的早期篩查及診斷。
本發(fā)明提供一種檢測(cè)血清N糖1og(P9/P4)的方法，該方法是基于DNA測(cè) 序儀的熒光毛細(xì)管電泳技術(shù)(DSA-FACE， DNA Sequencer Adapted -Fluorophore Assisted Carbohydrate Electrophoresis )，主要步驟是樣品血清中 糖蛋白中與天冬酰胺連接(N2連接)的寡糖的釋放；用靈敏的熒光標(biāo)記試劑 標(biāo)記釋放的N糖；去除N-糖鏈末端唾液酸；檢測(cè)臨床血清中N-糖組圖譜， 并對(duì)其進(jìn)行分析比較。
檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)，具體是指，檢測(cè)樣品血清中糖蛋白上以N-糖 苷鍵相連的糖鏈成分分布，計(jì)算log(P9/P4)值，其中P9是糖鏈成分分布中第 9個(gè)峰的高度，P4是糖鏈成分分布中第4個(gè)峰的高度。
本發(fā)明的方法具體包括以下步驟
(1) 用酰胺酶水解樣品血清；
(2) 用熒光標(biāo)記物標(biāo)記水解出的糖鏈；
(3) 用唾液酸酶水解；
(4) 對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，檢測(cè)N-糖鏈成分分布，計(jì)算log (P9/P4)值。
上述的酰胺酶，優(yōu)選N-糖苷酶F (iWG^eF入 上述的熒光標(biāo)記物，優(yōu)選是8-氨基萘酚-1,3,6-亞磺酸(APTS)。 本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果
① 在原有11峰值的基礎(chǔ)上，HCC組常常會(huì)出現(xiàn)峰(peak) 12， peakl3 (見

圖1);
② 與陰性對(duì)照組比較，在HCC組中peak4所占比例減低，而peak9所占比例 升高，與疾病對(duì)照組(肝纖維化組，CL)正好相反(見表1)， 1og(P9/P4)可以很好的鑒別HCC與CL，其受試者工作曲線(ROC, receiver operator characteristic)下面積為AUO0. 873 (見圖2)。
(D將HCC組病例根據(jù)有無血管浸潤，分為無浸潤(stage I )和有浸潤(stage II)兩組。Stage II組1og(P9/P4)相對(duì)stage I組增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(見 表2); 1og(P9/P4)可用于鑒別HCC有無血管浸潤，其受試者工作曲線(R0C， receiver operator characteristic)下面禾只為AUC=0. 706 (見圖3)。 (Dlog(P9/P4)與臨床常規(guī)指標(biāo)AFU， AFP， GGT和T麗分級(jí)具有顯著相關(guān)性 (P<0. 05)。相對(duì)AFP以200ng/rnl為臨界值，log(P9/P4)用于診斷HCC不同分 級(jí)的特異性提高16%，正確率提高8% ，敏感度相近(見表3)。
用本發(fā)明的方法，計(jì)算得到的1og(P9/P4)大于-0.56，則表明有患與HBV 感染相關(guān)的原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)的傾向；1og(P9/P4)小于-0.56，則表明有 患肝纖維化的傾向。
特別是1og(P9/P4)大于-0.25，則表明有患與HBV感染相關(guān)的原發(fā)性肝細(xì) 胞癌(HCC)第II期或更嚴(yán)重的傾向；1og(P9/P4)小于-0.25，則表明有患與 HBV感染相關(guān)的原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)第I期的傾向。
本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)血清N糖1og(P9/P4)的檢測(cè)系統(tǒng)，包括毛細(xì)管 電泳設(shè)備、糖鏈成分分布檢測(cè)軟件、計(jì)算機(jī)和輸出設(shè)備，將上述方法中步驟 (3)得到的水解產(chǎn)物用毛細(xì)管電泳設(shè)備——ABI3130測(cè)序儀進(jìn)行片段分析， 得到的糖鏈成分分布圖譜輸入計(jì)算機(jī)，經(jīng)糖鏈成分分布檢測(cè)軟件一一 PeakScan軟件分析，計(jì)算1og(P9/P4)值，最后由輸出設(shè)備輸出1og(P9/P4)值。
上述的輸出設(shè)備是打印機(jī)。
另外，計(jì)算機(jī)還可以進(jìn)一步將log(P9/P4)與-0.56和/或-0.25比較； 輸出設(shè)備輸出1og(P9/P4)，還可以進(jìn)一步輸出1og(P9/P4)與-0.56和/或-0.25
的比較結(jié)果。
本發(fā)明的檢測(cè)方法，相對(duì)于目前唯一公認(rèn)的用于臨床原發(fā)性肝細(xì)胞癌高 危人群篩選的腫瘤指標(biāo)AFP而言，本發(fā)明中的指標(biāo)1og(P9/P4)對(duì)于原發(fā)性肝 細(xì)胞癌與肝硬化的鑒別診斷效力相近，但log (P9/P4)和peak 9在監(jiān)測(cè)HCC 進(jìn)程方面似乎較AFP更有效，1og(P9/P4)用于診斷HCC不同分級(jí)的特異性提 高16%，正確率提高8% ，敏感度相近。本發(fā)明還涉及所述指標(biāo)1og(P9/P4) 的檢測(cè)方法。圖l三組血清N-糖組圖譜，圖中顯示的是正常對(duì)照組，肝纖維化組和HCC 患者組的N-糖組圖譜。
圖2用于鑒別診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌與肝硬化的ROC曲線，紅色為AFP，綠 色為Log(P9/P4)。
圖3:用于鑒別診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌有無血管浸潤的ROC曲線，藍(lán)色為 Log(P9/P4)，綠色為AFP。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。 實(shí)施例l:正常對(duì)照組、肝纖維化組和HCC患者組的N-糖組圖譜分析
收集2007年1月一2008年4月間第二軍醫(yī)大學(xué)附屬東方肝膽外科醫(yī)院住院 原發(fā)性肝細(xì)胞癌145例患者血清。收集同期上海交通大學(xué)仁濟(jì)醫(yī)院住院肝纖維 化128例患者血清患者。以上患者均符合以下入選標(biāo)準(zhǔn)①均為HBV感染的HCC 患者②患者術(shù)后病理標(biāo)本均經(jīng)病理科專家確診為HCC患者或肝纖維化患者；③ 排除人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、丙型 (h印atitis C virus, HCV)、丁型(h印atitis D virus,麗)、戊型(h印atitis E virus HEV)肝炎病毒和梅毒(syphilis)等除乙型肝炎病毒感染之外的其 他病毒感染；④排除自身免疫性肝病、酒精性肝病，藥物性肝病和Wilson?。?每例患者臨床血常規(guī)、生化、腫瘤標(biāo)志物、乙肝肝炎病毒標(biāo)志物、DNA載量等 數(shù)據(jù)的采集與血清收集同期，血清采集均在患者未接受任何治療之前。對(duì)照 組血清120例來自第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院體檢人員。
試劑或儀器p印tide-N-glycosidase F (PNGaseF) 、 10 % NP40購自New England Biolabs公司；標(biāo)記染料APTS與寡糖標(biāo)準(zhǔn)品購自Beckman Coulter 公司；唾液酸酶(Arthrobacter ureafaciens sialidase)貝勾自Roche公司； 氰基硼氫化鈉(NaBH3CN)購自Sigma公司(美國)；99. 99 %十二烷基 硫酸鈉(SDS )由Boehringer Ingelheim公司提供(德國)；碳酸氫銨、 乙酸鈉、檸檬酸化學(xué)純選用上海試劑四廠試劑。儀器采用美國生物應(yīng)用公司 (ABI) 3130測(cè)序儀，應(yīng)用PeakScan軟件分析結(jié)果。
1)以上人員均抽提空腹全血，靜置30分鐘，3000rpm， lOmin.吸取上層血清，
-8(TC冰箱保存?zhèn)溆谩?) 寡糖的釋放
214血清+2|4緩沖液(10 mM NH4HC03， 5°/。SDS) 水， 95。C加熱5分鐘，4。C放置15分鐘，
然后加入314 PNGaseF(2. 2 UM) ， 37。C孵育3小時(shí)，4'C冷卻， 加入10Cmi水，標(biāo)記為D管。
3) 標(biāo)記N-糖
取20W (D管溶液)，6CTC烘干3小時(shí)， 加入2W標(biāo)記溶液(20 mM APTS: 1M NaCNBH3 =1:1)， 37 。C孵育16小時(shí)， 加200W水終止反應(yīng)，標(biāo)記為L管。
4) 去唾液酸
2W(L管溶液)+3W去唾液酸酶(2 mU)， 37。C孵育過夜，
35W水振蕩混勻，標(biāo)記為DE管。
5) 檢測(cè)分析
取(DE管溶液)用ABI3130測(cè)序儀進(jìn)行片段分析，圖譜經(jīng)PeakScan 軟件分析。
經(jīng)由上述過程處理，每份血清標(biāo)本均可測(cè)得至少11個(gè)峰的糖組圖譜(見 圖l),我們將其標(biāo)記為peakl至peakll。 HCC組常常會(huì)出現(xiàn)peakl2， peakl3。 峰值量化，求的log(P9/P4)值。
應(yīng)用DSA-FACE方法分析，與疾病對(duì)照組(肝纖維化組)和陰性對(duì)照組(健 康正常組)比較分析。
本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果
① 在原有11峰值的基礎(chǔ)上，HCC組常常會(huì)出現(xiàn)peak12， peakl3(見圖1)， 在HCC組中，我們可以發(fā)現(xiàn)peak9相對(duì)于正常對(duì)照組和肝纖維化組均有顯著 的升高；
② 與陰性對(duì)照組比較，在HCC組中peak4所占比例減低，而peak9所占 比例升高，與疾病對(duì)照組(肝纖維化組，CL)正好相反(見表l)， 1og(P9/P4) 可以很好的鑒別HCC與CL，其受試者工作曲線(R0C， receiver operator characteristic)下面積為AUC=0.873 ， AFP的曲線下面積為0.888， 1og(P9/P4)的曲線下面積接近于AFP，因此二者診斷效力相近(見圖2)。表l:三組血清N-糖組圖譜峰值
peaksControl(n=120)Fibrosis(n=128)HCC(n=145)
HeightHeightHeight
peak17.41±2.558.6±2.8310.16±3.56
pesk21.24±0.531.23±0.461.78±0.73
peak36.56±1.217.25±1.346.88±1.67
pe3k47.13±1.087.51±1.336.62±0.99
peak539.23±3.6438.12±4.7037.57±5.75
peak621.63±3.2121.63±2.8120.23±3.31
peak75.86±1,306.03±1.446.29±1.48
peak87.07±1.515.83±1.735.12±1.75
peak92.21±1.101.98±0.993.83±1.48
pe3k100.17±0.190.26±0.210.38±0.36
peak"1.48±0.401.55±1.241.13±0.48
log(P9/P4)-0.56±0.26-0.63±0.24-0.27±0.21
表1顯示了三組血清N-糖組圖譜峰值(mean土SD)。其中正常對(duì)照組 (Control) 120例，肝纖維化組(Fibrosis) 128例，HCC患者組145例。表 中分別顯示三組樣本peakl至peakll的峰高。由表中可以看出，peak9和 log(P9/P4)在HCC組中顯著升高。
③將HCC組病例根據(jù)有無血管浸潤，分為無浸潤(stage I )和有浸潤 (stagell)兩組。StageII組log(P9/P4)相對(duì)stage I組增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義，(見表2);藍(lán)色為Log(P9/P4)，綠色為AFP。 二者的曲線下面積分別為 0. 706和0.605， 1og(P9/P4)可用于鑒別HCC有無血管浸潤，其受試者工作曲 線(R0C， receiver operator characteristic)下面積為AUO0. 706改圖是 顯示鑒別診斷原發(fā)性肝癌Stage I和stagell的ROC曲線。1og(P9/P4)的曲 線下面積顯著大于AFP，因此說明1og(P9/P4)的診斷效力有顯著性提高，該 指標(biāo)可以更好的鑒別診斷HCC的不同分級(jí)。(見圖3)。
表2: HCC患者按有無血管浸潤分組各峰豐度比較
Peak
Stage I (n=67)stagell (n=69)P
peak110.33±3.6810.01±3.400.602
peak21.83±0.771.72±0.630.344
peak37.15±1.766.60±1.570.057
peak46.82±0.936,43±1.050.024
peak537.27±5.8437.99±5.660.466
pe3k620.54±3.4819.76±3.110.171
8peak76.23±1.486.38±1.530.569
peak84.98±1,705.21±1.830.440
peak93.41±1.384.30±1.500.000
pe3k100.36±0.380.41±0.330.435
peak111.07±0.501.19±0.450.166
log(P9/P4)-0.34±0.20-0.20±0.200扁
表2顯示兩組原發(fā)性肝癌，Stage I和stage II的N-糖組圖譜峰值比較。 其中Stage I組67例，stage II組69例。Peak9和log (P9/P4)在stage II組 中顯著升高(P〈0.001)。
④1og(P9/P4)與臨床常規(guī)指標(biāo)AFU, AFP， GGT和T薩分級(jí)具有顯著相關(guān) 性(P<0. 05)。相對(duì)AFP以200ng/ml為臨界值，log(P9/P4)用于診斷HCC不 同分級(jí)的特異性提高16%，正確率提高8% ，敏感度相近(見表3)。
表3: AFP與1og(P9/P4)在HCC不同級(jí)期中診斷效力
Cutoff valueTest resultActU3l St3tUS Stage H ，Ssnsitivity (%)Specificity (%)PPV (%)NPV (%)Accuracy (100%)
AFPStage II473162.07
68,1253.7360.2661.03
(200)Stage 12236
log(p寧)Stage II472068.1270.1568.1269.12
2270.15(-0.250)Stage 147
PPV:陽性預(yù)測(cè)值(positive predictive value), NPV:陰性預(yù)測(cè)值(negative predictive value).
表3顯示了 AFP和log(P9/P4)在cut off值分別為200和-O. 250的情況 下，用于鑒別診斷HCC不同分級(jí)的靈敏度，特異度，陽性預(yù)測(cè)值，陰性預(yù)測(cè) 值和準(zhǔn)確度。表中我們可以看出1og(P9/P4)用于診斷HCC不同分級(jí)的特異性 提高16%，正確率提高8%，靈敏度相似。
實(shí)施例2:檢測(cè)患者血清N糖1og(P9/P4)
具體實(shí)驗(yàn)步驟
1) 患者l、 2、 3和4抽血，留取血清。
2) 寡糖釋放緩沖液(10 rnM NH4HC03， 5%SDS) 水；95 。C加熱5分鐘，4。C放置15分鐘；加入3)4 PNGaseF(2. 2 UM); 37。C孵育3 小時(shí)，4。C冷卻；加入100W水，標(biāo)記為D管。
3) 寡糖的標(biāo)記取20W (D管溶液)，60°C烘干3小時(shí)；加入2W標(biāo)記溶液 (20mMAPTS: 1M NaCNBH3 二l: 1); 37 。C孵育16小時(shí)；加200W水終止反應(yīng)，標(biāo)記為L管。
4) 寡糖去唾液酸2Pl(L管溶液)+3W去唾液酸酶(2 mil); 37。C孵育過夜； 35W水振蕩混勻，標(biāo)記為DE管。
5) 檢測(cè)分析取l(Hil (DE管溶液)用ABI3130測(cè)序儀進(jìn)行片段分析，圖譜 經(jīng)PeakScan軟件分析。
6) 依次讀取peakl至peakll的峰高，并計(jì)算1og(P9/P4)。
根據(jù)1og(P9/P4)對(duì)患者進(jìn)行分級(jí)，即log(P9/P4)<-0.250的為I級(jí)，
iog(P9/P4) >-o. 250的為n級(jí)及n級(jí)以上。
表4: 4位患者各豐度及l(fā)og(P9/P4)值
豐度患者l患者2患者3患者4
peakl176118222206
peak245143022
peak39987174159
peak49582161122
peak5600377849588
peak6270256524423
peak714371153107
peak8127449491
pesk9275514343
peak10611810
peak1125133224
log(P9/P4)-0. 546-0. 173-0. 051-0. 453
7) 根據(jù)cut off值-0.250，我們可以推斷患者1和患者4，其 log(P9/P4)<-0.250，因此HCC分級(jí)仍處于I級(jí)，而患者2和3，其 log(P9/P4)<-0.250，因此HCC分級(jí)則高于I級(jí)。
8) 隨后對(duì)患者進(jìn)行超聲，CT等體格檢查，結(jié)果證實(shí)患者1和患者4處于I 級(jí)，而患者2和患者3分別處于II級(jí)和nia級(jí)。
可見本發(fā)明檢測(cè)方法在四例患者中均正確。
10
權(quán)利要求
1、一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的方法，該方法是基于DNA測(cè)序儀的熒光毛細(xì)管電泳技術(shù)，其特征在于該方法具體包括以下步驟(A)用酰胺酶水解樣品血清；(B)用熒光標(biāo)記物標(biāo)記水解出的糖鏈；(C)用唾液酸酶水解；和(D)對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行熒光毛細(xì)管電泳，檢測(cè)糖鏈成分分布，計(jì)算log(P9/P4)值，其中P9是糖鏈成分分布中第9個(gè)峰的高度，P4是糖鏈成分分布中第4個(gè)峰的高度。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的方法，其特征在于 所述的酰胺酶是N-糖苷酶F。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的方法，其特征在于 所述的熒光標(biāo)記物是APTS。
4、 如權(quán)利要求l所述的一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在 于該系統(tǒng)包括毛細(xì)管電泳設(shè)備、糖鏈成分分布檢測(cè)軟件、計(jì)算機(jī)和輸出設(shè)備， 該系統(tǒng)將上述方法中步驟(C)得到的水解產(chǎn)物用毛細(xì)管電泳設(shè)備進(jìn)行片段分 析，得到的糖鏈成分分布圖譜輸入計(jì)算機(jī)，經(jīng)糖鏈成分分布檢測(cè)軟件分析， 計(jì)算1og(P9/P4)值，最后由輸出設(shè)備輸出1og(P9/P4)值。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征 在于所述的輸出設(shè)備是打印機(jī)。
6、 如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的方法在原發(fā)性肝細(xì)胞 癌的早期篩査及診斷中的應(yīng)用。
7、 如權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)血清N糖1og(P9/P4)的檢測(cè)系統(tǒng)在原發(fā)性 肝細(xì)胞癌的早期篩查及診斷中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)診斷學(xué)領(lǐng)域，原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是全球第五位常見惡性腫瘤，目前常用的高危人群篩查指標(biāo)是血清甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)及超聲檢查，但敏感性較低，特異性不高，導(dǎo)致HCC難以早期發(fā)現(xiàn)早期治療。本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)血清N糖log(P9/P4)的方法，該方法是基于DNA測(cè)序儀的熒光輔助毛細(xì)管電泳糖分析技術(shù)(DSA-FACE)來檢測(cè)血清中糖蛋白上以N-糖苷鍵相連的糖鏈成分分布，計(jì)算log(P9/P4)值；本發(fā)明還提供了相應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)，并將該檢測(cè)方法與檢測(cè)系統(tǒng)用于HCC的早期篩查及診斷，特別是與HBV感染相關(guān)的原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)傾向和肝纖維化傾向的早期篩查及診斷。相對(duì)于AFP而言，特異性提高16％，正確率提高8％，敏感度相近。
文檔編號(hào)G01N27/447GK101576495SQ200910052698
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2009年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月9日
發(fā)明者周飛國, 君 季, 萌 房, 皓 王, 趙云鵬, 趙金艷, 星 顧, 高春芳 申請(qǐng)人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)