專利名稱：：反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，尤其涉及一種反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法。
背景技術(shù)：
：目前世界市場(chǎng)上三分之二左右的合成染料是以偶氮化學(xué)為基礎(chǔ)制成的，即約三分之二的合成染料是偶氮染料，估計(jì)有約2000個(gè)品種近60萬(wàn)噸年產(chǎn)量。若照染料的應(yīng)用類別，它們分屬酸性染料、冰染染料、直接染料、活性染料、分散染料、陽(yáng)離子染料、堿性染料和溶劑性染料等。1偶氮染料的重要性與危害偶氮染料制造中兩個(gè)基本反應(yīng)是重氮化反應(yīng)和偶合反應(yīng)。芳香族伯胺(又稱重氮組分)與亞硝酸作用生成重氮鹽的反應(yīng)稱為重氮化反應(yīng)，影響重氮化反應(yīng)的因素有無(wú)機(jī)酸、亞硝酸鈉用量、反應(yīng)溫度和芳香胺的堿性強(qiáng)弱等；重氮鹽和酚類或芳香胺(又稱偶合組分)作用生成偶氮化合物的反應(yīng)叫偶合反應(yīng)。影響偶合反應(yīng)的因素有重氮組分和偶合組分的性質(zhì)、介質(zhì)的pH值、反應(yīng)溫度和鹽效應(yīng)等。鑒于其制造中需使用芳香胺作重氮組分，而且制造時(shí)一般是將芳香胺重氮化后與偶合組分直接偶合，偶合后再進(jìn)行鹽析或直接干燥制成，這里面存在著三種帶入致癌芳香胺的可能性①使用的原料中帶入了致癌芳香胺，如以同分異構(gòu)體的形式帶入，它們會(huì)發(fā)生下列②和③的可能性；②由于采用致癌芳香胺作原料，而大多數(shù)偶合反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率不定量，使最終成品中夾帶了這些致癌芳香胺；③由致癌芳香胺作為重氮組分組成的偶氮染料，在人體排出的具有還原性的物質(zhì)作用下會(huì)發(fā)生裂解，釋放出這些致癌芳香胺。即使在制造中采取了種種措施，使上述的第一種和第二種可能性得以避免和克服，但第三種可能性依舊存在。偶氮染料在特定條件下會(huì)裂解產(chǎn)生23種致癌芳香胺。此23種致癌芳香胺的毒性和名稱為(1)屬M(fèi)AKIIIAl的芳香胺4-胺基聯(lián)苯、聯(lián)苯胺、4氯-甲苯胺(或?qū)?氯-甲苯胺)、2-萘胺。(2)屬M(fèi)AKIIIA2的芳香胺4-氨基-3，2-二甲基偶氮苯、2-氨基-4-硝基甲苯、4-氯苯胺、2，4-二氨基苯甲醚、4，4'-二氨基二苯甲烷、3，3'-二氯聯(lián)苯胺、3，3'-二甲氧基聯(lián)苯胺、3，3'2二甲基聯(lián)苯胺、3，3'_二甲基-4，4'-二氨基二苯甲烷、對(duì)-克里西丁(或2-甲氧基-5-甲基苯胺)、4，4'-亞甲基-二(2-氯苯胺)、4，4'-二氨基二苯醚、4，4'-二氨基二苯硫醚、鄰甲苯胺、2，4-二氨基甲苯、2，4，5-三甲基苯胺、鄰氨基苯甲醚(或2-甲氧基苯胺)、2，4-二甲基苯胺、2，6-二甲基苯胺。偶氮染料是染料生產(chǎn)中所占比例最大的一類染料，它基本上包括了用于各種用途的幾乎全部色譜，經(jīng)還原可裂解出一種或多種致癌芳香胺。此外偶氮染料在生產(chǎn)過(guò)程中還會(huì)帶入一部分重金屬，重金屬對(duì)人體的累積毒性相當(dāng)嚴(yán)重。隨著化工實(shí)踐的不斷豐富，人們逐漸感受到某些防止染料和所用的一些原料對(duì)人體的直接危害性，為此，一些國(guó)家制定了限制使用偶氮染料的政策以保護(hù)環(huán)境和人體健康，而對(duì)于偶氮染料的限制己經(jīng)成為我國(guó)紡織品和皮革制品出口的重要技術(shù)性貿(mào)易壁壘。2偶氮染料檢測(cè)方法的發(fā)展從紡織品商檢出微量甚至是痕量的芳香胺不是一件容易的事，就一般而言，按環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)對(duì)紡織品進(jìn)行檢測(cè)屬微量分析范疇，被分析物的濃度通常巳經(jīng)十分接近甚至低于分析方法本身的極限，因此在保證分析系統(tǒng)的靈敏度和準(zhǔn)確度的前提下確定樣品的制備方法、定性定量分析方法和分析儀器的選用等就顯得至關(guān)重要，尤其是在對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理后的得到的是一個(gè)混合體系，在如何選擇分析手段是保證分析成功的關(guān)鍵。偶氮染料的檢測(cè)自七十年代以來(lái)圍繞著下列兩方面進(jìn)行了大量的研究樣品的制備包括直接在紡織品上進(jìn)行還原然后用有機(jī)溶劑萃取或是先將染料從紡織品上剝離下來(lái)再還原，以及采用的還原條件、萃取溶劑的選擇等。以往，比較通用的制備方法是染料從紡織品上提取后用保險(xiǎn)粉(連二亞硫酸鈉Na2SA)還原已產(chǎn)生可能存在的致癌芳香胺再經(jīng)提取后進(jìn)行定性分析。定性分析的方法，曾采用以下五種(1)氧化顯色法，即使用氧化劑使芳香胺產(chǎn)生有色的溶液或沉淀，再用紫外光譜儀進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)特征吸收峰進(jìn)行定性。(2)重氮偶合法，即將芳香胺進(jìn)行重氮化與偶合，形成可溶性的偶氮染料，再用分光光度法測(cè)定。同時(shí)運(yùn)用多種偶合劑進(jìn)行測(cè)定比較。包括穩(wěn)定性和克分子消光系數(shù)等，可以得出定性的結(jié)論。(3)其他顯色反應(yīng)，即使用特定的顯色劑和分光光度法對(duì)未知芳香胺進(jìn)行定性分析。(4)紙色譜法和點(diǎn)滴試驗(yàn)，即運(yùn)用經(jīng)典的紙色譜技術(shù)對(duì)還原所得的混合物進(jìn)行分離，然后用上述各種顯色方法進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)或用適當(dāng)溶劑洗滌提取后再按上述方法進(jìn)行定性。在紙色譜分離分析方面已能分離分析出大部分致癌芳香胺，在某些標(biāo)準(zhǔn)的條件下也可以通過(guò)Rf進(jìn)行定性分析。(5)薄層色譜法，其基本原理與紙色譜法相同，不過(guò)由于在薄層色譜中作為固定相的薄層可采用多種配方或經(jīng)多種特殊處理，因此就其分離能力及選擇性與紙色譜法相比，其回旋余地大大地?cái)U(kuò)展了，從而使薄層色譜法成為芳香胺分離和定性分析的一種比較成熟的方法，已經(jīng)研究確定的各種芳香胺在不同分離條件下的Rf值可以作為一種標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)。上述的分離方法都已取得一定的進(jìn)展，最低檢測(cè)限量可達(dá)0.Ol—O.04毫克/升，但是他們實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜，對(duì)分析人員的技術(shù)要求比較高，各種芳香胺分離和檢出的特異性強(qiáng)，分離分析條件差異較大，而且前三種方法還常受到樣品量太小的限制而難以奏效，因此隨著禁用染料問(wèn)題的進(jìn)一步突出和法制化，德國(guó)一些組織進(jìn)行聯(lián)合或單獨(dú)研究，開(kāi)發(fā)禁用偶氮染料檢測(cè)的新技術(shù)和新方法。1997年3月中旬德國(guó)政府把采用日用品法第35款開(kāi)發(fā)的紡織品中禁用偶氮染料檢測(cè)方法規(guī)定為法定禁用染料測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)，此標(biāo)準(zhǔn)的主要步驟如下(1)把1.0克紡織品樣品分成幾小份；(2)用保險(xiǎn)粉在含檸檬酸鹽緩沖液(pH=6)的密閉容器中于7(TC對(duì)紡織品進(jìn)行還原；(3)完全還原后用甲基叔丁基醚在萃取器中萃?。?4)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中緩慢濃縮；(5)把蒸掉溶劑的殘?jiān)芙庠?毫升甲醇中；(6)用薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜或毛細(xì)管電泳法進(jìn)行定性分析；(7)用帶二極管陣列式監(jiān)測(cè)器的高效液相色譜進(jìn)行定量分析；(8)用至少兩種各自獨(dú)立的色譜分離技術(shù)得出定性結(jié)果。其他國(guó)家配合頒布的禁用染料法律所采用的檢測(cè)方法基本上是基于德國(guó)法定的紡織品中禁用染料監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，不過(guò)德國(guó)的方法標(biāo)準(zhǔn)仍存在一些不足之處，表現(xiàn)在(1)適用范圍窄；(2)還原條件對(duì)被檢測(cè)偶氮染料的還原程度隨其性質(zhì)而異；(3)抽提和濃縮的條件對(duì)致癌芳香胺特別是易氧化的芳香胺的適用性有差異；(4)需考慮紡織品對(duì)芳香胺的吸附因素；(5)方法的精密度和重復(fù)性較差。因此，德國(guó)紡織品中禁用偶氮染料監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)尚需在實(shí)踐中進(jìn)一步完善和發(fā)展。3藍(lán)色素的化學(xué)成分及危害藍(lán)色素，或者稱為藍(lán)色染料、藍(lán)色著色劑，屬于偶氮染料的范疇。藍(lán)色素是一種混合物，沒(méi)有單獨(dú)的CAS編號(hào)，主要成分有兩種分子式分別為C39H23ClCrN7012S2Na(CASNo.:118685-33-9)和C46H30CrN10O20S2-3Na(無(wú)CASNo,)藍(lán)色素的索引號(hào)為"611-070-00-2"，EC編號(hào)為"405-665-4"。據(jù)歐洲委員會(huì)有關(guān)官員介紹，該"藍(lán)色素"的商品名稱為"海軍藍(lán)018112(NavyBlue018112)"或"藏青018112(Navy018112)"。歐盟1993年7月20日通過(guò)的93/67/EEC號(hào)指令中已對(duì)藍(lán)色素的人體和環(huán)境的危害作了評(píng)估，經(jīng)檢測(cè)認(rèn)定藍(lán)色素具有很高的水生毒性，且不易降解，隨廢水進(jìn)入環(huán)境后，可持久存在，因此需要迫切降低藍(lán)色素對(duì)環(huán)境的危害。而歐共體官方公報(bào)于2003年1月9日發(fā)布?xì)W盟委員會(huì)指令規(guī)定禁止在紡織品和皮革制品上使用"藍(lán)色素"，并禁止在市場(chǎng)上銷售含"藍(lán)色素"的紡織品和皮革制品。隨著國(guó)際社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，可持續(xù)發(fā)展已經(jīng)成為世界各國(guó)越來(lái)越重視的重大問(wèn)題，而環(huán)境保護(hù)則是各國(guó)實(shí)施可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的重要組成部分。而國(guó)際上的綠色消費(fèi)潮流已經(jīng)開(kāi)始影響我國(guó)的紡織品服裝出口。隨著綠色、生態(tài)等觀念逐漸被消費(fèi)者所廣泛認(rèn)同，對(duì)紡織品服裝的生態(tài)要求正在迅速成為阻礙我國(guó)紡織品服裝出口擴(kuò)大國(guó)際市場(chǎng)份額的主要障礙。而由于德國(guó)紡織品中禁用偶氮染料監(jiān)測(cè)方法是通過(guò)還原偶氮染料，測(cè)定還原產(chǎn)物來(lái)確定偶氮染料的含量，使用該方法測(cè)定藍(lán)色素，提取后溶液中物質(zhì)十分復(fù)雜(參見(jiàn)圖1)，在未知藍(lán)色素結(jié)構(gòu)式的前提下，難于判斷色譜圖中那些峰與藍(lán)色素有關(guān)，不能準(zhǔn)確可靠地檢測(cè)紡織品中的藍(lán)色素及其含量。而且目前我國(guó)尚未公開(kāi)發(fā)布一種可行的檢測(cè)藍(lán)色素的方法，使該項(xiàng)目的檢驗(yàn)工作無(wú)法進(jìn)行，因此亟需研究一種準(zhǔn)確、可靠，靈敏的檢驗(yàn)方法和相關(guān)技術(shù)，滿足綠色紡織品發(fā)展的需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種采用反相高效液相色譜快速測(cè)定紡織品藍(lán)色素的方法，該方法能準(zhǔn)確、可靠、靈敏地測(cè)定出紡織品中的藍(lán)色素及其含量。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其包括以下步驟(1)制備待測(cè)樣品溶液；(2)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液；(3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀，進(jìn)行反相高效液相色譜法測(cè)定，并用液質(zhì)聯(lián)用儀確定藍(lán)色素的出峰位置，記錄出峰面積r以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；(4)按步驟(3)方法測(cè)定待測(cè)樣品溶液中的藍(lán)色素及其峰面積，使用所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品中的藍(lán)色素含量。所述步驟(3)方法中的色譜條件為ds色譜柱；柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流動(dòng)相A:乙腈；流動(dòng)相B:磷酸鹽緩沖鹽溶液；梯度洗脫開(kāi)始時(shí)A相:B相為20%:80%35%:65%，3545min后，A相B相變化為80%:20%65%:35%;流速0.81.2mL/min;自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣體積1020|iL。所述的Qs色譜柱的規(guī)格是5y，250mmX4.6mm或5"，150mmX4.6mm。待測(cè)樣品溶液可用現(xiàn)有技術(shù)中的方法進(jìn)行制備，但是為減少在測(cè)定時(shí)出現(xiàn)的雜質(zhì)峰，且藍(lán)色素得到較好的分離提取效果，所述的步驟(l)可作以下改進(jìn)①將待測(cè)染色紡織樣品剪成小塊；②將染色紡織樣品與甲醇和水的混合溶液按1:201:30的重量體積比放入比色管中，比色管置于功率為350450W的超聲波中在5070'C溫度下振蕩萃??；③所得的萃取液室溫冷卻過(guò)濾后，置于樣品瓶中，密封保存。所述的甲醇和水混合溶液中，甲醇:水為70~90:30~10。所述的甲醇和水混合溶液中甲醇所占比例越高，藍(lán)色素的提取效果越好，在測(cè)定中雜質(zhì)峰不多，有利于準(zhǔn)確判斷藍(lán)色素的吸收峰。所述的超聲振蕩萃取時(shí)間為2535min，以確保良好的提取效果。藍(lán)色素具有較強(qiáng)的吸附能力尤其在塑料上的吸附現(xiàn)象更為明顯，在過(guò)濾時(shí)應(yīng)注意避免與其他塑料聚合物過(guò)多接觸。所述的磷酸鹽緩沖溶液的濃度為4.96.2g/1,其pH值為7.37.5。而所述的磷酸鹽緩沖鹽溶液為磷酸二氫鉀鹽溶液、磷酸與磷酸鉀混合溶液、磷酸與磷酸氫鉀混合溶液、磷酸二氫鉀與磷酸鉀混合溶液和磷酸二氫鉀與磷酸氫鉀混合溶液中的一種。所述步驟(2)的具體方法為稱量"藍(lán)色素"標(biāo)準(zhǔn)樣品5.4mg，用超純水定容到10ml，由于藍(lán)色素的純度為93%，所以計(jì)算得到濃度為5.4X93%/10=0.502mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液4ml、3ml、2ml到10ml容量瓶中定容，分別得到濃度為0.201mg/ml，0.151mg/ml，0.100mg/ml的溶液；分別取以上濃度的溶液4ml到10ml容量瓶中定容，得到濃度分別為0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml的溶褲；分別取濃度為0.201mg/ml和0.100mg/ml溶液lml到10ml容量瓶中定容，得到濃度為0.020mg/ml和0.010mg/ml的溶液；各取濃度為0.080mg/ml，0.060mg/ml和0.040mg/ml溶液lml置于10ml容量瓶中定容，得到濃度分別為0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml的溶液。本發(fā)明還包括回收率測(cè)定步驟取5份等量紡織樣品溶液，分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液Oml、0.5ml、lml、1.5ml和2ml，在10ml容量瓶中定容，充分混合后，使用高效液相色譜儀測(cè)定各溶液的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線作標(biāo)準(zhǔn)把峰面積轉(zhuǎn)換為濃度，計(jì)算以上0.5ml、lml、1.5ml和2ml的4個(gè)溶液的回收率，得出平均回收率。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下顯著效果(1)本發(fā)明通過(guò)直接提取藍(lán)色素進(jìn)行反相高效液相色譜法測(cè)定，并用液質(zhì)聯(lián)用儀確定藍(lán)色素的出峰位置，并得到藍(lán)色素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于直接提取藍(lán)色素進(jìn)行測(cè)定，無(wú)需還原，避免因藍(lán)色素還原后的溶液中復(fù)雜的物質(zhì)成分使得難于判斷與藍(lán)色素有關(guān)的色譜峰造成測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確的情況，因此該方法不僅能準(zhǔn)確、可靠、靈敏地定性測(cè)定紡織品中的藍(lán)色素而且測(cè)定出紡織品中的藍(lán)色素及其濃度。(2)本發(fā)明公開(kāi)的測(cè)定方法在0.006mg/ml~0.04mg/ml和0.02mg/ml0.201mg/ml這兩個(gè)范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。其最低檢出限為0.006mg/ml，能夠準(zhǔn)確、可靠、靈敏地測(cè)定出紡織品中的藍(lán)色素及其含量。(3)采用甲醇和水的混合溶液作為提取藍(lán)色素的溶劑，其中甲醇所占的比例較高，使藍(lán)色素得到較好的提取分離效果，減少了在高效液相色譜測(cè)定中出現(xiàn)的雜質(zhì)峰，利于判斷藍(lán)色素的吸收峰的出峰位置。(4)采用超聲波振蕩提取，并選擇功率350~450W、50~70°C，25~35min的提取條件，在不改變藍(lán)色素的性質(zhì)、不引入新物質(zhì)和不造成損失的情況下，得到較高的提取分離效果，確保了測(cè)定的準(zhǔn)確性。(5)使用梯度洗脫，開(kāi)始時(shí)使用乙腈磷酸鹽緩沖鹽溶液20%:80%35%:65%為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，40分鐘后用乙腈磷酸鹽緩沖鹽溶液80%:20%65%:35%作流動(dòng)相梯度洗脫，最終得到的色譜圖的基線平直，目標(biāo)峰分離效果好，純度高。圖1是使用德國(guó)日用品法禁用偶氮染料檢測(cè)方法提取布樣中藍(lán)色素的色譜圖；圖2是本發(fā)明實(shí)例一中用甲醇:水=70:30作為提取溶劑的色譜圖；圖3是本發(fā)明實(shí)例一中進(jìn)行梯度洗脫所得色譜圖，梯度洗脫的具體程序?yàn)殚_(kāi)始時(shí)用乙腈磷酸二氫鉀緩沖鹽溶液比例為30%:70%，40分鐘后乙腈磷酸二氫鉀緩沖鹽溶液比例為70%:30%;圖4是本發(fā)明實(shí)例一中藍(lán)色素0.006mg/ml-0.04mg/ml濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖5是本發(fā)明實(shí)例一中紡織品樣品檢測(cè)得到的色譜圖6是本發(fā)明實(shí)例二中藍(lán)色素0.02mg/ml-0.201mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例和對(duì)比例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行闡述，然而本發(fā)明的保護(hù)范圍并非僅僅局限于以下實(shí)施例。所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員依據(jù)本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容，均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。實(shí)施例一1實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1.1實(shí)驗(yàn)儀器日本島津LC-10AT高效液相色譜儀，KromsilODS-lC18，5u，250mmX4.6mm色譜柱；SPD-10A紫外檢測(cè)儀，SCL-10A記錄儀，KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器，電熱鼓風(fēng)干燥箱。FINNIGANLCQDECAXPMAX液質(zhì)聯(lián)用儀。1.2藥品與試劑乙腈色譜純甲醇色譜純乙醇色譜純磷酸二氫鉀分析純天津北聯(lián)精細(xì)化工品開(kāi)發(fā)有限公司氫氧化鈉分析純廣州化學(xué)試劑廠三乙胺分析純磷酸分析純C39H23ClCrN7012S2Na標(biāo)準(zhǔn)樣品(純度為93%)。2樣品制備2.1提取樣品制備將單一的染色紡織樣品剪成3.5cmX3.5cm的小塊狀。稱量重為0.5421g。將試樣置于50mL比色管內(nèi)，加入15mL甲醇:水=70:30的混合溶液，置于頻率為400W超聲波浴中，在(60士2)。C下萃取30min。萃取液于室溫冷卻，用孔徑為0.45pm的聚四氟乙烯膜過(guò)濾器過(guò)濾。過(guò)濾時(shí)應(yīng)避免與其他塑料聚合物過(guò)多接觸。萃取物倒入lmL樣品瓶中，旋緊特氟綸蓋，保存?zhèn)溆谩?.2標(biāo)準(zhǔn)樣品制備使用電子天平稱量"藍(lán)色素"標(biāo)準(zhǔn)樣品5.4mg，用超純水定容到iOml，由于藍(lán)色素的純度為93%，所以計(jì)算得到濃度為5.4X93%/10=0.502mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液4ml、3ml、2ml到10ml容量瓶中定容，分別得到濃度為0.201mg/ml，0.151mg/ml，0.100mg/ml的溶液；分別取以上濃度的溶液4ml到10ml容量瓶中定容，得到濃度分別為0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml的溶液；分別取濃度為0.201mg/ml和0.100mg/ml溶液lml到10ml容量瓶中定容，得到濃度為0.020mg/ml和0.010mg/ml的溶液；各取濃度為0.080mg/ml，0.060mg/ml和0.040mg/ml溶液lml置于10ml容量瓶中定容，得到濃度分別為0.008mg/ml,0.006mg/ml和0.004mg/ml的溶液。2.3流動(dòng)相配備磷酸鹽緩沖鹽溶液稱取磷酸二氫鉀5克，用800毫升純水溶解，用2mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值到7.5，最后定容到1000毫升。3測(cè)定方法3.1色譜條件KromsilODS-lC18，5w，250mmX4.6mm色譜柱；柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流動(dòng)相A:乙腈；流動(dòng)相B:磷酸二氫鉀緩沖鹽溶液(pH=7.5);梯度洗脫開(kāi)始使用A相B相二30。/。70。/。，40min后使用A相B相70%:30%;流速l.OmL/分鐘；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣體積20yL。得到圖2、圖3所示的色譜圖。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線分別量取2.2中制備的0.040mg/ml，0.020mg/ml，0.010mg/ml，0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液各20U1注入液相色譜儀，按上述方法配置標(biāo)準(zhǔn)品溶液用反相高效液相色譜法測(cè)定，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)定出峰面積。記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(圖4)。得到回歸方程為(1)Y=aX+b，(a=3.802214e-008，b=2.975898e-003)，R=0.99947313.4精密度按上述方法制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取0.008mg/ml濃度的溶液連續(xù)測(cè)5次，按峰面積對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的濃度計(jì)(表l)，藍(lán)色素的吸收度的RSD為X(n=5),表明儀器精密度良好。表1藍(lán)色素精密度考察<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3.5待測(cè)樣品中的藍(lán)色素的回收率取5份等量的含"藍(lán)色素"紡織品的提取樣品溶液(3ml)，分別加入濃度為0.080mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液0ml、0.5ml、lml、1.5ml和2ml，在10ml容量瓶中定容，充分混合后，使用高效液相色譜儀測(cè)定各溶液的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線(l)作標(biāo)準(zhǔn)把峰面積轉(zhuǎn)換為濃度，計(jì)算以上后面4個(gè)溶液(不含加入Oml)的回收率，得出平均回收率為，結(jié)果見(jiàn)表2:表2藍(lán)色素回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)考察<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3.6待測(cè)樣品中藍(lán)色素含量的測(cè)定取2.1制備的待測(cè)樣品溶液，以3.1的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖5:峰面積為483532，選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線(l)，所得樣品溶液中藍(lán)色素的濃度為0.02149mg/ml。實(shí)施例二與實(shí)施例一不同的是標(biāo)準(zhǔn)曲線分別量取實(shí)施例一2.2中制備的0.201mg/ml，0.100mg/ml，0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml和0.020mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液各20u1注入液相色譜儀，按上述方法配置標(biāo)準(zhǔn)品溶液用反相高效液相色譜法測(cè)定，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)定出峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(圖6)。得到的回歸方程為(2)Y=aX+b，(a=3.703613e-008，b=2.870155e-003)，R=0.9996135待測(cè)樣品中藍(lán)色素含量的測(cè)定取2.1制備的實(shí)際樣品，以3.1的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定峰面積為1405145，選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線(2)，所得樣品測(cè)量濃度為0.06245mg/ml。實(shí)施例三1實(shí)驗(yàn)儀器與試劑同實(shí)施例一2樣品制備2.1提取樣品制備將單一的染色紡織樣品剪成3.5cmX3.5cm的小塊狀。稱量重為0.5562g。將試樣置于50mL比色管內(nèi)，加入15mL甲醇:水二80:20的混合溶液，置于頻率為450W超聲波浴中，在(70土2)。C下萃取30min。萃取液于室溫冷卻，用孔徑為0.45pm的聚四氟乙烯膜過(guò)濾器過(guò)濾。過(guò)濾時(shí)應(yīng)避免與其他塑料聚合物過(guò)多接觸。萃取物倒入lmL樣品瓶中，旋緊特氟綸蓋，保存?zhèn)溆谩?.2標(biāo)準(zhǔn)樣品制備同實(shí)施例一2.3流動(dòng)相配備磷酸二氫鉀與磷酸鉀混合溶液稱取磷酸二氫鉀2.60克和磷酸鉀3.53克，用800毫升純水溶解，用10W的磷酸溶液調(diào)pH值到7.4，最后定容到1000毫升。3測(cè)定方法3.1色譜條件KromsilODS-lC18，5u，250mmX4.6mm色譜柱;柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流動(dòng)相A:乙腈；流動(dòng)相B:磷酸二氫鉀與磷酸鉀混合溶液(PH=7.4);梯度洗脫開(kāi)始使用A相B相=20%:80%，35min后使用A相B相80%:20%;流速1.2mL/分鐘；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣體積20"L。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線分別量取2.2中制備的0.040mg/ml，0.020mg/ml,0.010mg/ml，0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液各20n1注入液相色譜儀，按上述方法配置標(biāo)準(zhǔn)品溶液用反相高效液相色譜法測(cè)定，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)定出峰面積。記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。得到回歸方程為(3)Y=aX+b，(a=3.792316e-008，b=2.967865e-003)，R=0.9995674待測(cè)樣品中藍(lán)色素含量的測(cè)定取2.1制備的待測(cè)樣品溶液，以3.1的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，峰面積為410406，選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線(3),所得樣品溶液中藍(lán)色素的濃度為0.01824mg/ml。實(shí)施例四1實(shí)驗(yàn)儀器與試劑同實(shí)施例一2樣品制備2.1提取樣品制備將單一的染色紡織樣品剪成3.5cmX3.5cm的小塊狀。稱量重為0.5878g。將試樣置于50mL比色管內(nèi)，加入15mL的甲醇:水一0:10的混合溶液，置于頻率為350W超聲波浴中，在(50土2)'C下萃取35min。萃取液于室溫冷卻，用孔徑為0.45Mm的聚四氟乙烯膜過(guò)濾器過(guò)濾。過(guò)濾時(shí)應(yīng)避免與其他塑料聚合物過(guò)多接觸。萃取物倒入lmL樣品瓶中，旋緊特氟綸蓋，保存?zhèn)溆谩?.2標(biāo)準(zhǔn)樣品制備同實(shí)施例一2.3流動(dòng)相配備磷酸二氫鉀與磷酸氫鉀混合溶液稱取磷酸二氫鉀0.41克和磷酸氫鉀5.59克，用800毫升純水溶解，用10%的磷酸溶液調(diào)pH值到7.3，最后定容到1000毫升。3測(cè)定方法3.1色譜條件KromsilODS-lC18，，250mmX4.6mm色譜柱；柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流動(dòng)相A:乙腈；流動(dòng)相B:磷酸二氫鉀與磷酸氫鉀混合溶液(PH=7.3);梯度洗脫開(kāi)始使用A相B相=35%:65%，45min使用A相B相65%:35%;流速0.8mL/分鐘；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣體積20iiL。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線分別量取2.2中制備的0.040mg/ml，0.020mg/ml，0.010mg/ml，0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液各20u1注入液相色譜儀，按上述方法配置標(biāo)準(zhǔn)品溶液用反相高效液相色譜法測(cè)定，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)定出峰面積。記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。得到回歸方程為(4)Y=aX+b，(a=3.714675e-008，b=2.876254e-003)，R=0.9998446待測(cè)樣品中藍(lán)色素含量的測(cè)定取2.1制備的待測(cè)樣品溶液，以3.1的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，峰面積為2108731，選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線(4)，所得樣品溶液中藍(lán)色素的濃度為0.09372mg/ml。權(quán)利要求1、一種反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其包括以下步驟(1)制備待測(cè)樣品溶液；(2)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液；(3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀，進(jìn)行反相高效液相色譜法測(cè)定，并用液質(zhì)聯(lián)用儀確定藍(lán)色素的出峰位置，記錄出峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；(4)按步驟(3)方法測(cè)定待測(cè)樣品溶液中的藍(lán)色素及其峰面積，使用所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品中的藍(lán)色素含量。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述步驟(3)方法中的色譜條件為Cw色譜柱；柱溫室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流動(dòng)相A:乙腈；流動(dòng)相B:磷酸鹽緩沖鹽溶液；梯度洗脫開(kāi)始時(shí)A相:B相為20%:80%35%:65%，3545min后，A相B相變化為80%:20%65%:35%;流速0.81.2mL/min;自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣體積1020nL。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述的C!s色譜柱的規(guī)格是5u，250mmX4.6mm或5P，150mmX4.6mm。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述的步驟(l)為①將待測(cè)染色紡織樣品剪成小塊；②將染色紡織樣品與甲醇和水的混合溶液按1:201:30的重量體積比放入比色管中，比色管置于功率為350450W的超聲波中在5070。C溫度下振蕩萃??；③所得的萃取液室溫冷卻過(guò)濾后，置于樣品瓶中，密封保存。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述的甲醇和水混合溶液中，甲醇水為70-90:30~10。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述的超聲振蕩萃取時(shí)間為2535min。7、根據(jù)權(quán)利要求l所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述的磷酸鹽緩沖溶液的濃度為4.95.1g/1,其pH值為7.37.5。8、根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述的磷酸鹽緩沖鹽溶液為磷酸二氫鉀鹽溶液、磷酸與磷酸鉀混合溶液、磷酸與磷酸氫鉀混合溶液、磷酸二氫鉀與磷酸鉀混合溶液和磷酸二氫鉀與磷酸氫鉀混合溶液中的一種。9、根據(jù)權(quán)利要求l所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是所述步驟(2)的具體方法為稱量藍(lán)色素標(biāo)準(zhǔn)樣品5.4mg，用超純水定容到10ml，得到濃度為0.502mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液4ml、3ml、2ml到10ml容量瓶中定容，分別得到濃度為0.201mg/ml，0.151mg/ml，0.100mg/ml的溶液；再分別取以上濃度的溶液4ml到10ml容量瓶中定容，得到濃度分別為0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml的溶液；另外分別取濃度為0.201mg/ml和0.100mg/ml的溶液lml到10ml容量瓶中定容，得到濃度為0.020mg/ml和0.010mg/ml的溶液；分別取濃度為0.080mg/ml，0.060mg/ml和0.040mg/ml的溶液lml置于10ml容量瓶中定容，得到濃度分別為0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml的溶液。10、根據(jù)權(quán)利要求l所述的反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其特征是其還包括回收率測(cè)定步驟取5份等量紡織樣品溶液，分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液Oml、0.5ml、lml、1.5ml和2ml，在10ml容量瓶中定容，充分混合后，使用高效液相色譜儀測(cè)定各溶液的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線作標(biāo)準(zhǔn)把峰面積轉(zhuǎn)換為濃度，計(jì)算以上0.5ml、lml、L5ml和2ml的4個(gè)溶液的回收率，得出平均回收率。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種反相高效液相色譜檢測(cè)紡織品中藍(lán)色素的方法，其包括以下步驟(1)制備待測(cè)樣品溶液；(2)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液；(3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀，進(jìn)行反相高效液相色譜法測(cè)定，并用液質(zhì)聯(lián)用儀確定藍(lán)色素的出峰位置，記錄出峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；(4)按步驟(3)方法測(cè)定待測(cè)樣品溶液中的藍(lán)色素及其峰面積，使用所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品中的藍(lán)色素含量。該方法能準(zhǔn)確、可靠、靈敏地測(cè)定出紡織品中的藍(lán)色素及其含量。文檔編號(hào)G01N30/02GK101393179SQ20081019909公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2008年10月13日優(yōu)先權(quán)日2008年10月13日發(fā)明者蘭麗麗,劉崇華,葉湖水,張曉利,敏徐,慧李,李光毅,勇梁,鄧志光,黃伯熹申請(qǐng)人:廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心