專利名稱：：一種治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物及其質量控制方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物，尤其涉及一種以粉萆蘚、菟絲子、石菖蒲、甘草、烏藥、益智仁(炒)、茯苓為原料制備而成的治療慢性前列腺炎的丸劑，屬于中藥
技術領域：
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背景技術：
：腎盂腎炎、乳糜尿、前列腺炎、痛風、慢性腎炎、慢性盆腔炎等急慢性泌尿系統(tǒng)疾病的臨床癥狀雖然表現不一，然而中醫(yī)辨證研究發(fā)現這些疾病均存在正虛邪實的病理狀態(tài)，正虛為脾腎不足，邪實為濕熱蘊結，中醫(yī)多采用利濕化濁法治療，療效不夠理想。這與其偏重利濕化濁而不能固本有關。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物；本發(fā)明的另一目的在于提供該藥物組合物的質量控制方法。本發(fā)明所述的治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物是由如下重量比的原料藥制成的粉萆蘇200-400重量份石菖蒲30-90重量份甘草100-200重量份烏藥50-120重量份益智仁(炒)20-80重量份本發(fā)明所述的治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物還可以是由如下重量比的原料藥制成的粉萆蘚325-400重量份石菖蒲30-55重量份甘草100-155重量份烏藥85-120重量份益智仁(炒)45-80重量份本發(fā)明所述的治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物還可以是由如下重量比的原料藥制成的粉萆蘇200-400重量份石菖蒲30-90重量份甘草100-200重量份烏藥50-120重量份益智仁(炒)20-80重量份菟絲子200-300重量份茯苓80-160重量份本發(fā)明所述的治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物還可以是由如下重量比的原料藥制成的粉萆蘇320重量份石菖蒲60重量份甘草160重量份烏藥80重量份益智仁(炒)40重量份本發(fā)明所述的治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物還可以是由如下重量比的原料藥制成的粉萆蘇320重量份石菖蒲60重量份甘草160重量份烏藥80重量份益智仁(炒)40重量份菟絲子240重量份茯苳120重量份方中萆蘚利濕化濁為治白濁之要藥，茯苓滲濕，石菖蒲化濕通竅；烏藥溫腎散寒，益智仁固腎，則菟絲子益腎填精之功益勝；甘草和中解毒，兼引諸藥直趨精室，諸藥和用治濕而不傷陰，補陰而不膩濕，共奏除濕固本之效。本發(fā)明的藥物組合物可以通過本領域的常規(guī)技術制備成各種制劑，如顆粒劑、膠囊劑、片劑、軟膠囊、丸劑。本發(fā)明組合物優(yōu)選丸劑的制備方法粉萆蘇320重量份石菖蒲60重量份甘草160重量份烏藥80重量份益智仁(炒)40重量份以上五味，粉碎成100目細粉，混勻，用水泛丸，506(TC干燥；將滑石粉碎成150目極細粉包衣，打光，5060'C干燥，制成20000丸。本發(fā)明組合物優(yōu)選丸劑的制備方法粉萆蘚320重量份石菖蒲60重量份甘草160重量份烏藥80重量份益智仁(炒)40重量份菟絲子240重量份茯苓120重量份以上七味，粉萆蘇、石菖蒲、益智仁、茯苓碎成80目或IOO目細粉，其余藥味加入逆流提取罐中加4倍量水，60'C連續(xù)逆流提取lh。以提取液為賦形劑泛丸，506(TC干燥；將滑石粉粉碎成150目極細粉包衣，打光，5060'C干燥，即得。本發(fā)明藥物組合物質量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別方法1.粉萆蘇取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材l-3g的細粉，加2mol/L的鹽酸20-60ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理10-40分鐘，濾過，濾液濃縮至0.5-2.Oml,作為供試品溶液；另取粉萆蘚對照藥材0.5-2.0g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5-20ul，點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲垸一丙酮(6-15:0.3)為展開劑，飽和5-15分鐘展開；取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。2.薯蕷皂苷元取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材l-3g的細粉，置100mL具塞錐形瓶中，加乙醇水浴回流提取2-4次，每次20mL，每次20-40min，合并提取液，回收溶劑至干，殘渣加2mol/L鹽酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出，冷卻，移置分液漏斗中，加氯仿萃取2-4次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至約3mL，作為供試品溶液；取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.5-2.0mg的對照品溶液;分別吸取對照品溶液3-8ul，供試品溶液5-15ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090'C)—醋酸乙酯(5-10:3)為展開劑，展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。3.甘草取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材l-3g的細粉，加乙醚20-60mL，加熱回流0.5-2.0h，濾過，藥渣加甲醇10-40mL，超聲10-40min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL使溶解，用水飽和正丁醇提取2-4次，每次20mL，合并正丁醇液，用10-30mL水洗滌，蒸干，殘渣加甲醇3mL使溶解，作為供試品溶液；取甘草對照藥材lg，供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液3-8ul，供試品溶液5-15ul點于同一硅膠G薄層板，以乙酸乙酷一甲酸一冰醋酸一水(10-20:l:l:l-5)為展開劑展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。4.烏藥取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材1-3g的細粉，加氯仿20-60mL，超聲20-40min過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5_2.0mL使溶解，作為供試品溶液；取烏藥對照藥材0.5-2.Og，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液5-15ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)—乙酸乙酷(3-8:l)為展開劑展開，取出晾干后噴以2%香草醛硫酸溶液，105'C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。5.益智仁(炒)取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材l-3g的細粉，加石油醚(6090°C)20-40ml，超聲處理20-60分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；取益智仁對照藥材l-3g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液2-10ul，點于同一硅膠GF254薄層板上以環(huán)己烷一乙酸乙酯(5-12:2)為展開劑，飽和5-15分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。6.石菖蒲取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材l-3g的細粉，加乙醚20-40ml，超聲處理20-60分鐘，濾過，濾液濃縮至約0.5-2.0ml，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材0.5-2.0g，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各3-10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上以石油醚(6090°C)—乙酸乙酯(5-12:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。含量測定1.粉萆蘚的含量測定萆蘇為方中君藥，為薯蕷科植物，具有利濕去濁，袪風除痹之功效，含有多種甾體皂甙及皂甙元，皂甙元為其主要活性成分，本質量控制方法對著蕷皂甙元((:2孔203)進行了含量測定。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙氰(30:40-100)為流動相；檢測波長為150-250nm;理論板數按薯蕷皂甙元峰計算應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒中的薯蕷皂甙元對照品適量，加甲醇制成每lml含O.l-0.5mg的對照品溶液。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密稱取相當于生藥材O.5-2.Og的藥粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次10-30ml，每次20-40min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mo1，L—1鹽酸10-30^,沸水回流2-4h，取出冷卻，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次5-15ml，合并氯仿液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45um為孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含粉萆蘚以薯蕷皂甙元(C27H4A)計，不得少于1.5rag;2.甘草的含量測定甘草為方中佐使藥，具有補脾益氣、清熱解毒、緩急止痛、調和諸藥等功效，甘草酸為甘草中的主要活性成分，為了保證產品質量,選擇測定甘草中甘草酸作為質量控制的一個指標。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.2mol/L醋酸銨一冰醋酸(28:50-90:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約2-6mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單銨鹽對照品0.1-0.3mg，折合甘草酸為0.0980-0.2939mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密稱取相當于生藥材0.5-3g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相10-40ral，稱定重量，超聲處理(250W，20kHz)20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42H62016)計，不得少于2.5mg;本發(fā)明藥物組合物質量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別方法1.粉萆蘚供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加2mol/L的鹽酸40ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取粉萆蘚對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲垸一丙酮(9.7:0.3)為展開劑，飽和10分鐘展開；取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。2.薯蕷皂苷元供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材lg的細粉，置100mL具塞錐形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL，每次30min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mol/L鹽酸20mL，沸水回流3h，取出，冷卻，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至約3mL,作為供試品溶液；取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每lmL含lmg的對照品溶液；分別吸取對照品溶液5ul，供試品溶液10ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090'C)—醋酸乙酯(7:3)為展開劑，展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。3.甘草供試品溶液制備:取本藥物組合物相當于生藥材2g的細粉，加乙醚40mL，加熱回流1h，濾過，藥渣加甲醇30mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL使溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗滌，蒸干，殘渣加甲醇3mL使溶解，作為供試品溶液；取甘草對照藥材lg，供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液5ul，供試品溶液10ul點于同一硅膠G薄層板，以乙酸乙酷一甲酸一冰醋酸一水(15:1:1:2)為展開劑展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。4.烏藥供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，取相當于生藥材2g的細粉，加氯仿40mL，超聲30min過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；取烏藥對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液10ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)—乙酸乙酷(5:1)為展開劑展開，取出晾干后噴以2%香草醛硫酸溶液，105'C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。5.益智仁(炒)供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加石油醚(6090°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；取益智仁對照藥材2g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液5ul，點于同一硅膠GF254薄層板上以環(huán)己烷一乙酸乙酯(8:2)為展開劑，飽和10分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。6.石菖蒲供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加乙醚30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上以石油醚(6090°C)—乙酸乙酯(8:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。含量測定1.粉萆蘇的含量測定萆蘇為方中君藥，為薯蕷科植物，具有利濕去濁，袪風除痹之功效，含有多種甾體皂甙及皂甙元，皂甙元為其主要活性成分，本質量控制方法對薯蕷皂甙元((:2孔203)進行了含量測定。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙氰(30:70)為流動相；檢測波長為206nm;理論板數按薯蕷皂甙元峰計算應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒中的薯蕷皂甙元對照品適量，加甲醇制成每lml含O.3mg的對照品溶液。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mo1L—'鹽酸20mL，沸水回流3h,取出冷卻，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45um為孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含粉萆蘚以薯蕷皂甙元(C27H4203)計，不得少于1.5mg。2.甘草的含量測定甘草為方中佐使藥，具有補脾益氣、清熱解毒、緩急止痛、調和諸藥等功效，甘草酸為甘草中的主要活性成分，為了保證產品質量，選擇測定甘草中甘草酸作為質量控制的一個指標。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.211101化醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約4mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單銨鹽對照品0.2nig，折合甘草酸為0.1959mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W，20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42H62016)計，不得少于2.5mg。具體實施例方式下述實驗例和實施例進一步說明但不下限于本發(fā)明實驗例l.質量檢測方法的篩選鑒別方法的篩選1.粉萆蘚方法一供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，置100mL具塞錐形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL,每次30min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mol/L鹽酸20mL，沸水回流3h，取出，冷卻，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至約3mL，作為供試品溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取除粉萆蘚之外的處方中藥材，按制備工藝制成缺粉萆蘇陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。對照品溶液制備:取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每lmL含lmg的對照品溶液；薄層板:硅膠G;點樣:分別吸取對照品溶液5ul，供試品溶液IOul;展開劑:石油醚(6090。C)一醋酸乙酯(7:3);顯色:取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰；斑點檢視:供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；且陰性無干擾。方法二供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加2mol/L的鹽酸40ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取除粉萆蘚之外的處方中藥材，按制備工藝制成缺粉萆蘇陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。對照品溶液制備:另取粉萆蘇對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；薄層板:硅膠G;點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各IOul;展開劑:三氯甲垸一丙酮(9.7:0.3)為展開劑，飽和10分鐘；顯色:取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰；斑點檢視:供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點，且陰性無干擾。結論從以上結果看出，方法一和方法二均可作為處方中粉萆蘚的可靠鑒別方法。2.石菖蒲方法一供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加乙醚30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。對照藥材溶液制備另取石菖蒲對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取除石菖蒲之外的處方中藥材，按制備工藝制成缺石菖蒲陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板:硅膠G;點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各5ul;展開劑石油醚(6090°C)—乙酸乙酯(8:2);顯色展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；斑點檢視:在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點，且陰性無干擾。方法二供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加入揮發(fā)油測定器中，加水80ml，提取揮發(fā)油，得約0.1ml，作為供試品溶液。對照藥材溶液制備另取石菖蒲對照藥材5g，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取除石菖蒲之外的處方中藥材，按制備工藝制成缺石菖蒲陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板:硅膠G;點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各lul;展開劑石油醚(6090°C)—乙酸乙酯(8:2);顯色展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；斑點檢視供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，未見相同顏色的熒光斑點；再以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，未見相同顏色的斑點。結論:根據以上試驗結果，選擇方法一作為本藥物組合物中石菖蒲的鑒別方法。3.甘草方法一供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加乙醚40mL，加熱回流lh，濾過，藥渣加甲醇30mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL使溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗滌，蒸干，殘渣加甲醇3mL使溶解，作為供試品溶液；對照藥材溶液制備:取甘草對照藥材lg，照供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取處方中除甘草之外的藥材，按制備工藝制成缺甘草陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板:硅膠G;點樣:分別吸取對照品溶液5ul，供試品溶液和陰性對照溶液各10ul;展開劑乙酸乙酷一甲酸一冰醋酸一水(15:1:1:2);顯色:取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰；斑點檢視:置紫外光燈(365nm)下檢視，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性無干擾；方法二供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加加鹽酸lml、三氯甲垸15ml，加熱回流l小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。；對照藥材溶液制備:取甘草對照藥材lg，供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取處方中除甘草之外的藥材，按制備工藝制成缺甘草陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板:硅膠G;點樣:分別吸取對照品溶液3-8ul，供試品溶液和陰性對照溶液各5-15ul;展開劑苯—石油醚(306(TC)—乙酸乙酯一冰醋酸(10:5:4:0.6);顯色取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。斑點檢視:置紫外光燈(365nm)下檢視，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，未見相同顏色的熒光斑點。結論根據以上試驗結果，選擇方法一作為本藥物組合物中甘草的鑒別方法。4.烏藥方法一供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加石油醚G060。C)30ml，振搖，放置30分鐘，超聲處理(保持水溫低于3(TC)IO分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。對照藥材溶液制備取烏藥醚內酯對照品，用乙酸乙酯溶解，制成每lml含0.75mg的溶液，作為對照品溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取處方中除烏藥之外的藥材，按制備工藝制成缺烏藥的陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板硅膠H;點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各5ul;展開劑甲醇-乙酸乙酯(15:1);顯色取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液；斑點檢視供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，未見相同顏色的斑點。方法二供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加氯仿40mL，超聲30min過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；對照藥材溶液制備:取烏藥對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；薄層板:硅膠G;陰性對照溶液制備按處方比例稱取處方中除烏藥之外的藥材，按制備工藝制成缺烏藥的陰性對照樣品，照"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10ul;展開劑:石油醚(6090。C)一乙酸乙酷(5:l);顯色:取出晾干后噴以2%香草醛硫酸溶液，105X:烘至斑點顯色清晰；斑點檢視:供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；且陰性無干擾。結論根據以上試驗結果，選擇方法二作為本藥物組合物中烏藥的鑒別方法。5.益智仁(炒)方法一供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加乙醚40mL，浸漬提取2.5h，并時時振搖，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醚lmL使溶解，作為供試品溶液。對照藥材溶液制備:取益智仁(炒)對照藥材0.3g，加乙醚25mL，按"供試品溶液的制備"同法制得對照藥材溶液。陰性對照溶液制備:按處方比例稱取除益智仁(炒)之外的處方中藥材，按制備工藝制成缺益智仁(炒)陰性對照樣品，按"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板:硅膠G點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各5uL展開劑:環(huán)己烷一丙酮(7:3)顯色:取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰斑點檢視:供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，未見相同顏色的斑點；方法二供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加石油醚(6090°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；對照藥材溶液制備取益智仁對照藥材2g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；陰性對照溶液制備:按處方比例稱取除益智仁(炒)之外的處方中藥材，按制備工藝制成缺益智仁(炒)陰性對照樣品，按"供試品溶液的制備"同法制得陰性對照溶液。薄層板硅膠GF254;點樣:分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各5ul;展開劑環(huán)己垸一乙酸乙酯(8:2)，飽和10分鐘；顯色展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nra)下檢視；斑點檢視:供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；且陰性無干擾。結論根據以上試驗結果，選擇方法二作為本藥物組合物中烏藥的鑒別方法。含量測定方法的篩選粉萆蘚的含量測定采用高效液相色普法測定本發(fā)明藥物中的薯蕷皂甙元(C27H4203)的含量，粉萆蘇含量以薯蕷皂甙元計，以完善本發(fā)明的質量檢測方法，部分試驗結果見下試驗儀器高效液相色譜儀島津，LC-10Atvp(威馬龍色譜站)分析天平梅特勒，AE240色譜柱迪瑪公司(ZorbaxC184.6X150醒，5Mm)對照品薯蕷皂甙元購于中國藥品生物制品檢定所批號132859-200508①色譜條件的優(yōu)化實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈(30:70為流動相；檢測波長為206nm，流速，1.Omlmin—13論板數按薯蕷皂甙元峰計算應不低于3000。分別配制以下比例的流動相，分別按以上色譜條件進樣對照品、樣品溶液，結果見下表表l色譜條件的優(yōu)化<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實驗結果表明，優(yōu)選流動相為甲醇乙腈30:70。②含量檢測的方法學考察對本發(fā)明藥物所采用的含量檢測方法，從線性關系、穩(wěn)定性、精密度、重現性、回收率等方面進行了相關方法學考察，具體方法及結果如下穩(wěn)定性試驗精密吸取同一本藥物組合物供試品溶液5ul，分別于配制后0、2、4、6、8、24小時，依法測定，結果見表2:表2穩(wěn)定性測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>結果表明薯蕷皂苷元在24h內基本穩(wěn)定。線性關系考察取薯蕷皂苷元對照品溶液(1.2mg/ml)搖勻，分別精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5、5.0、7.5、10.Oml注入10ml量瓶中，精密量取注入高效液相色譜儀，測定峰面積，結果見表3，并繪制標準曲線。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>表3薯蕷皂苷元鈉對照品線性關系考察結果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>結果表明，薯蕷皂苷元在0.121.2mg/ml范圍內線性關系良好。精密度試驗精密吸取同一薯蕷皂苷元對照品溶液(54.6Pg/ml)5W，重復進樣6次，結果見表4:表4薯蕷皂苷元對照品精密度試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>結果顯示相對標準偏差小于2%，說明精密度良好。重現性試驗按正文方法，取同一批號本發(fā)明藥物組合物制劑制備5份樣品進行測定，結果見表5:表5樣品重現性試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>結果顯示5份樣品中薯蕷皂苷元的含量平均為2.6485mg/g，其RSD值為1.54%,符合試驗要求，表明該方法重現性好?；厥章试囼灢捎眉訕踊厥?，精密稱取已知含量的同一批號的樣品約0.24g，分別精密加入薯蕷皂苷元對照品溶液(54.6唯/ml)15ml，按正文供試品溶液的制備方法及上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結果見表6?；厥章?=測出薯蕷皂苷元含量-樣品中薯蕷皂苷元加入薯蕷皂苷元對照品<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>表6加樣回收率試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>結果表明薯蕷皂苷元回收率在97%101.2%之間，平均回收率為99.43%，符合規(guī)定。從以上試驗結果可以看出，對本發(fā)明藥物制劑中的有效成份薯蕷皂苷元進行含量檢測控制，以控制處方中丹參的生藥量，方法穩(wěn)定、科學，可以有效保證藥物質量和療效，這也是本發(fā)明藥物療效與同類產品比較更顯著的原因。甘草的含量測定采用高效液相色普法測定本發(fā)明藥物中的甘草酸的含量，甘草含量以甘草酸計，以完善本發(fā)明的質量檢測方法，部分試驗結果見下試驗儀器高效液相色譜儀島津，LC-10Atvp(威馬龍色譜站)分析天平梅特勒，AE240色譜柱迪瑪公司(ZorbaxC184.6X150腿，5Mm)對照品甘草酸單銨鹽購于中國藥品生物制品檢定所批號131435-200405①色譜條件的優(yōu)化實驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.2mol/L醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000。分別配制以下比例的流動相，取甘草酸單銨鹽對照品約4mg,精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液；取本品，研細，精密稱取2g，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W，20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得樣品溶液。分別按以上色普條件進樣對照品、樣品，結果見下表7:表7色譜條件的優(yōu)化<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>色譜峰不能完全分色譜峰不能完全分出現托尾現出現托尾現*^分離良好《*實驗結果表明，優(yōu)選流動相為乙腈一0.2mol/L醋酸銨一冰醋酸28:70:2。②含量檢測的方法學考察對含量檢測方法，從線性關系、穩(wěn)定性、精密度、重現性、回收率等方面進行了相關方法學考察，具體方法及結果如下穩(wěn)定性試驗精密吸取同一本藥物組合物供試品溶液5ul，分別于配制后O、2、4、6、8、24小時，依法測定，結果見表8:表8穩(wěn)定性測定結果時間(h)02461224峰面積588723586324586481583872584792587691RSD(%)1.14%結果表明甘草酸單銨鹽在24小時內基本穩(wěn)定。線性關系考察取甘草酸單銨鹽對照品溶液(0.2039mg/ml)搖勻，分別精密量取O.5，1，2，4，6，8mL置lOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件測定，精密吸取5ul注入高效液相色譜儀，測定峰面積，結果見表9，并繪制標準曲線。Area=5.97X107X-2.50X105(R=0.9999)表9甘草酸單銨鹽對照品線性關系考察結果0.05100.10200.20390.術8(ug)面積2794700583940011922830240956603626849048441320結果表明甘草酸在0.01020.1631mg/ml范圍內線性關系良好。精密度試驗精密吸取同一甘草酸單銨鹽照品溶液(40.78^/ml)5W，重復進樣6次，結果見表10:表IO甘草酸單銨鹽對照品精密度試驗結果次數123456峰面積106943861065856110638546106856481065354210646587RSD(%)0.21結果顯示相對標準偏差小于2%，說明精密度良好。重現性試驗按正文方法，取同一批號本發(fā)明藥物組合物制劑制備5份樣品中甘草酸進行測定，結果見表lh表ll樣品重現性試驗結果樣品12345含量(mg/g)3.15843.01482.98542.962473.0164平均含量(mg/g)3.0275RSD(%)1.2結果顯示5份樣品中甘草酸的含量平均為2.6485mg/g，其RSD值為1.2%，符合試驗要求，表明該方法重現性好?；厥章试囼灢捎眉訕踊厥?，精密稱取已知含量的同一批號的樣品約2.0g，分別精密加入甘草酸單銨鹽對照品溶液(40.78Pg/ml)40ml，再加入流動相10ml，按正文供試品溶液的制備方法及上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結果見表12?；厥章?=測出甘草酸含量-樣品中甘草酸含量加入甘草酸對照品的量表12加樣回收率試驗結果X100%試平均回取樣量樣品中量加入的量測出的量回收率％RSD(%)驗號gmg(mg)(mg)收率(％)12.04855.7612L63121.263097.8522.02585.69741.63121.2765皿.6431.98545.58371.63121.2939100.3899.901.7242.07435.83381.63121.280698.3451.99565.61241.63121.2861101.28結果表明甘草酸回收率在97.85%101.64%之間，平均回收率為99.90%，符合規(guī)定。從以上試驗結果可以看出，對本發(fā)明藥物制劑中的有效成份甘草酸進行含量檢測控制，以控制處方中甘草的生藥量，方法穩(wěn)定、科學，可以有效保證藥物質量和療效，這也是本發(fā)明藥物療效與同類產品比較更顯著的原因。實驗例2.藥效學實驗1.l實驗材料藥物組I(共660g):粉萆蘚320g、石菖蒲60g、甘草160g、烏藥80g、益智仁(炒)40g藥物組II(共660g):粉萆蘇207g、石菖蒲39g、甘草104g、烏藥52g、益智仁(炒)26g、菟絲子155g、茯苓77g丙酸睪丸素注射液，上海第九制藥廠生產；前列康片，浙江云山制藥廠生產。己烯雌酚片，北京向陽制藥廠生產；戊巴比妥鈉，上海醫(yī)藥采購站進口分裝；睪酮、雌二醇、促卵泡生成素、促黃體生成素、催乳素放免測試盒，夭津德普生物技術和醫(yī)學產品有限公司生產；動物Wistar種雄性大鼠，中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所繁育場提供。1.2實驗方法取300士20gWistar大鼠60只，隨機分組，無菌操作下分別^t大鼠ip^戊巴比妥鈉生理鹽水2ml/kg，大鼠麻醉后，摘除雙側睪丸。一周后，隨機取出10只去勢大鼠，斷頭處死后取前列腺各葉稱濕重并測總體積，烘干后稱干重，對剩余50只大鼠隨機分為5組，每組10只，均sc丙酸睪丸素lmg/300g體重，每天1次，連續(xù)30d，同時空白對照組ig同體積自來水;實驗組藥物組I、藥物組II分別ig相應藥液，劑量為6.5g生藥/kg體重;前列康組和己烯雌酚組ig劑量分別為1.7g/kg和1.7mg/kg。各組用藥以水溶解，調成相應濃度。每天1.0ml/100g體重igl次，連續(xù)30d。每周稱量一次體重，以調節(jié)給藥用量，在ig第30天后，于次日晨將所有空腹大鼠斷頭處死。取前列腺各葉及精囊腺，以感量lmg扭力天平稱濕重，容積法測前列腺體積，取一側頭葉稱濕重并在37。C烘干后稱干重，做干/濕重比值測定。取前葉前列腺固定于10%寫福爾馬林液中常規(guī)石蠟制片，HE鏡檢，另側前葉做生理生鮮冰凍切片，做SDH，ACP及ALP三種酶組織化學染色，常規(guī)鏡檢，根據酶活性產物色澤深淺，按四級分計數每只動物前列腺中三種酶活性的高低。2.結果和討論2.1療前前列腺的體積，濕重和干/濕重比值取去勢一周的大鼠10只，斷頭處死后取前列腺測體積并稱濕重，烘干測干/濕重比值。見表13。表13治療前去勢大鼠前列腺的體積、濕重和干/濕比值_<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>2.2治療后大鼠的體重及前列腺的體積、濕重和干/濕重比值30d后，稱重，處死所有大鼠，取前列腺稱濕重、測體積及測干/濕重比值。結果見表1418。表14本發(fā)明藥物組合物對去勢大鼠體重的影響_<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>*與前列康組比較。表15本發(fā)明藥物組合物對去勢大鼠前列腺體積的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表16本發(fā)明藥物組合物對去勢大鼠前列腺濕重的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表17本發(fā)明藥物組合物對去勢大鼠前列腺一側頭葉干重的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>與空白對照組比較*P<0.05;**P<0.01;與藥物組I比較※P〈0.05表18本發(fā)明的藥物組合物對去勢大鼠前列腺/濕重比值的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>從上訴結果表明，藥物組1，藥物組2和乙烯雌酚對實驗大鼠的體重物明顯影響(P>0.05);而前列康組大鼠的體重較各組均顯著降低。結果還表明，藥物組1，藥物組2能明顯減小前列腺的體積。從表17，18可以看出，藥物組1，藥物組2能夠明顯降低前列腺的濕重，氮各組鍵的干/濕重比值差異不顯著。2.3治療前治療后前列腺體積和濕重的變化率以治療前大鼠前列腺的體積和濕重為100％，比較用藥前后的變化率。結果表明藥物組1，藥物組2能夠明顯降低前列腺體積和濕重的變化率。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>2.4治療后大鼠前列腺的病理形態(tài)鏡檢取前列腺做HE鏡檢及SDH,ACP,ALP酶組織化學染色?？梢娝幬锝M1，藥物組2仰止睪酮所誘導的前列腺小葉增值及腺上皮細胞分泌前列腺液，而對前列腺腺上皮細胞高度沒有明顯影響。簡表20<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>組n※0.9※前列91.8士0.8*1.8士0.82.1士0.52.2士0.7**1.9士0.7康組己烯101.6士0.7**1.6士0.5"※2.62.6士0.5*2.1士1.0雌酚※士0.5Jl_與空白又寸照組比較*P<0.05;**P<0.01;與藥物組I比較※PO.053小結通過本次實驗，我們觀察到藥物組i、藥物組n可以明顯抑制大鼠前列腺的增生。表現在明顯減少前列腺的體積，降低前列腺的濕重和干重及大鼠精囊腺的濕重，抑制前列腺小葉增殖及腺上皮細胞分泌前列腺液，具有雌性激素樣作用，對于丙酸睪丸素所誘導的大白鼠前列腺增生具有良好療效；且藥物組I明顯優(yōu)于藥物組n。前列康使大鼠的體重顯著降低，藥物組i、藥物組n對體重無明顯影響。下述實施例均能夠實現上述實驗例所述的效果實施例1.粉萆蘇320g石菖蒲60g甘草160g烏藥80g益智仁(炒)40g菟絲子240g茯零120g以上七味，依照本領域常規(guī)技術制成臨床接受的制劑，如顆粒劑、膠囊劑、片劑、軟膠囊、丸劑。實施例2.片劑粉萆蘚200g石菖蒲90g甘草100g烏藥120g益智仁(炒)20g菟絲子300g茯苓80g以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小時，合并煎液，濃縮至相對密度為1.281.30，加入淀粉500g，羧甲基纖維素納20g，混勻，制成顆粒，干燥，整粒，壓片，包衣，制成IOOO片，即得。粉萆蘇的鑒別方法供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加2mol/L的鹽酸40ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取粉萆蘚對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10nl，點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲垸一丙酮(9.7:0.3)為展開劑，飽和10分鐘展開；取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。甘草的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.2mol/L醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約4mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單銨鹽對照品0.2mg，折合甘草酸為0.1959mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W,20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42H62016)計，不得少于2.5mg。實施例3.膠囊劑粉萆蘚400g石菖蒲30g甘草200g烏藥50g益智仁(炒)80g菟絲子200g茯苳160g以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小時，合并煎液，濃縮至相對密度為1.281.30，加入糊精500g，混勻，制成顆粒，干燥，整粒，制成1000粒即得。鑒別烏藥供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，取相當于生藥材2g的細粉，加氯仿40mL，超聲30min過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；取烏藥對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)—乙酸乙酷(5:1)為展開劑展開，取出晾干后噴以2%香草醛硫酸溶液，105'C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。益智仁(炒)供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加石油醚(6090°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；取益智仁對照藥材2g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，點于同一硅膠GF254薄層板上以環(huán)己烷一乙酸乙酯(8:2)為展開劑，飽和IO分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定1.粉萆蘇的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙氰(30:70)為流動相；檢測波長為206nm;理論板數按薯蕷皂甙元峰計算應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒中的薯蕷皂甙元對照品適量，加甲醇制成每lml含0.3mg的對照品溶液。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mo1L—工鹽酸20mL,沸水回流3h,取出冷卻，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45um為孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含粉萆蘚以薯蕷皂甙元((:27仏203)計，不得少于1.5mg;2.甘草的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈_0.211101凡醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約4mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單銨鹽對照品0.2mg，折合甘草酸為0.1959mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W,20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42H62016)計，不得少于2.5mg;實施例4.軟膠囊粉萆蘚320g石菖蒲60g甘草160g烏藥80g益智仁(炒)40g菟絲子240g茯苓120g以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小時，合并煎液，濃縮至相對密度為1.281.30，減壓干燥，粉碎，加入植物油適量，攪勻，制成軟膠囊600粒，即得。鑒別方法1.粉萆蘇供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，取相當于生藥材2g的制劑，加2mol/L的鹽酸40ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取粉萆蘚對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲垸一丙酮(9.7:0.3)為展開劑，飽和10分鐘展開；取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。2.甘草供試品溶液制備取本藥物組合物相當于生藥材2g的制劑，加乙醚40mL，加熱回流1h，濾過，藥渣加甲醇30mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL使溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗滌，蒸干，殘渣加甲醇3mL使溶解，作為供試品溶液；取甘草對照藥材lg，供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液5ul，供試品溶液各10ul點于同一硅膠G薄層板，以乙酸乙酷一甲酸一冰醋酸一水(15:1:1:2)為展開劑展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。3.烏藥供試品溶液制備:取本藥物組合物相當于生藥材2g的制劑，加氯仿40mL，超聲30min過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；取烏藥對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)—乙酸乙酷(5:1)為展開劑展開，取出晾干后噴以2%香草醛硫酸溶液，105T:烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。4.益智仁(炒)供試品溶液制備取本藥物組合物相當于生藥材2g的制劑，加石油醚(6090°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；取益智仁對照藥材2g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，點于同一硅膠GF254薄層板上以環(huán)己垸一乙酸乙酯(8:2)為展開劑，飽和IO分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。5.石菖蒲供試品溶液制備:取本藥物組相當于生藥材2g的制劑，加乙醚30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上以石油醚(6090°C)—乙酸乙酯(8:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。含量測定1.粉萆蘚的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙氰(30:70)為流動相；檢測波長為206nm;理論板數按薯蕷皂甙元峰計算應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒中的薯蕷皂甙元對照品適量，加甲醇制成每lml含O.3mg的對照品溶液。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mo1L—'鹽酸20mL，沸水回流3h,取出冷卻，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45um為孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含粉萆蘚以薯蕷皂甙元(C27H4203)計，不得少于1.5mg;2.甘草的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.2mol/L醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約4mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單銨鹽對照品0.2mg，折合甘草酸為0.1959mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W,20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42H62016)計，不得少于2.5mg。實施例5.顆粒劑粉萆蘇320g石菖蒲60g甘草160g烏藥80g益智仁(炒)40g菟絲子240g茯苳120g以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小時，合并煎液，濃縮至相對密度為1.281.30，加入蔗糖350g，糊精150g,混勻，制成顆粒，干燥，整粒，制成1000g即得。鑒別方法1.粉萆蘇供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加2mol/L的鹽酸40ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取粉萆蘚對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲垸一丙酮(9.7:0.3)為展開劑，飽和IO分鐘展開；取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。2.薯蕷皂苷元供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑適量，研細，取相當于生藥材lg的細粉，置100mL具塞錐形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL，每次30min,合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mol/L鹽酸20mL，沸水回流3h，取出，冷卻，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至約3mL，作為供試品溶液；取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制成每lmL含lmg的對照品溶液；分別吸取對照品溶液5ul，供試品溶液10ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090。C)一醋酸乙酯(7:3)為展開劑，展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。3.甘草供試品溶液制備:取本藥物組合物相當于生藥材2g的細粉，加乙醚40mL，加熱回流1h，濾過，藥渣加甲醇30mL,超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL使溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗滌，蒸干，殘渣加甲醇3mL使溶解，作為供試品溶液；取甘草對照藥材lg，供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液5ul，供試品溶液各10ul點于同一硅膠G薄層板，以乙酸乙酷一甲酸一冰醋酸一水(15:1:1:2)為展開劑展開，取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。4.烏藥供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑適量，取相當于生藥材2g的細粉，加氯仿40mL，超聲30min過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；取烏藥對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液和各10ul點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6090。C)—乙酸乙酷(5:1)為展開劑展開，取出晾干后噴以2%香草醛硫酸溶液，105'C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。5.益智仁(炒)供試品溶液制備取本藥物組合物制劑適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加石油醚(6090°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；取益智仁對照藥材2g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，點于同一硅膠GF254薄層板上以環(huán)己垸一乙酸乙酯(8:2)為展開劑，飽和10分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nrn)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。6.石菖蒲供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加乙醚30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上以石油醚(609(TC)一乙酸乙酯(8:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。含量測定1.粉萆蘇的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙氰(30:70)為流動相；檢測波長為206nm;理論板數按薯蕷皂甙元峰計算應不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒中的薯蕷皂甙元對照品適量，加甲醇制成每lml含O.3mg的對照品溶液。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶劑至干。殘渣加2mo"L—i鹽酸20mL，沸水回流3h，取出冷卻，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45um為孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含粉萆蘚以薯蕷皂甙元(C27H4203)計，不得少于1.5mg;2.甘草的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.211101幾醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約4mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單銨鹽對照品0.2mg，折合甘草酸為0,1959mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W，20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42H62016)計，不得少于2.5mg;實施例6.丸劑粉萆蘚320g石菖蒲60g甘草160g烏藥80g益智仁(炒)40g以上五味，粉碎成IOO目細粉，混勻，用水泛丸，5060'C干燥；將滑石粉碎成150目極細粉包衣，打光，506(TC干燥，制成20000丸。功能主治分清化濁，溫腎利濕。用于腎不化氣，清濁不分，小便頻數，時下白濁。用法用量口服，一次69g，一日2次。規(guī)格每20粒重lg鑒別方法1.粉萆蘇供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加2mol/L的鹽酸40ml，回流1小時，濾過，藥渣用10%碳酸鈉溶液洗至中性，用20ml乙醚超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取粉萆蘚對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲烷一丙酮(9.7:0.3)為展開劑，飽和10分鐘展開；取出晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。2.益智仁(炒)供試品溶液制備取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加石油醚(6090°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加lml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液；取益智仁對照藥材2g，與供試品溶液制備同法制成對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，點于同一硅膠GF254薄層板上以環(huán)己烷一乙酸乙酯(8:2)為展開劑，飽和10分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。3.石菖蒲供試品溶液制備:取本藥物組合物制劑內容物適量，研細，取相當于生藥材2g的細粉，加乙醚30ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材lg，與供試品溶液的制備同法制得對照藥材溶液；分別吸取對照藥材溶液、供試品溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上以石油醚(6090°C)—乙酸乙酯(8:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。含量測定甘草的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈一0.2mol/L醋酸銨一冰醋酸(28:70:2)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數按甘草酸單銨鹽峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備取甘草酸單銨鹽對照品約4mg，精密稱定，置20ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml含甘草酸單鉸鹽對照品0.2mg，折合甘草酸為0.1959mg);供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑內容物，研細，精密取相當于生藥材2g的藥粉，置具塞三角瓶中，精密加入流動相25ml，稱定重量，超聲處理(250W，20kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每lg含甘草以甘草酸(C42He2016)計，不得少于2.5mg。權利要求1.一種治療泌尿系統(tǒng)疾病的藥物組合物，其特征是該組合物是由如下重量配比的原料藥制成的粉萆薢200-400重量份石菖蒲30-90重量份甘草100-200重量份烏藥50-120重量份益智仁(炒)20-80重量份全文摘要本發(fā)明公開了一種治療泌尿系統(tǒng)疾病的中藥組合物及其質量控制方法。本發(fā)明藥物組合物由粉萆薢200-400重量份、石菖蒲30-90重量份、甘草100-200重量份、烏藥50-120重量份、益智仁(炒)20-80重量份、菟絲子200-300重量份、茯苓80-160重量份等原料藥組成，本發(fā)明組合物質量控制方法中采用高效液相色譜法對薯蕷皂甙元、甘草酸進行含量測定，對粉萆薢、石菖蒲、甘草、益智仁(炒)、烏藥進行定性薄層鑒別。本發(fā)明組合物具有分清化濁，溫腎利濕之功效，用于腎不化氣，清濁不分，小便頻數，時下白濁。文檔編號G01N30/02GK101385834SQ20071012172公開日2009年3月18日申請日期2007年9月13日優(yōu)先權日2007年9月13日發(fā)明者付建家,付立家申請人:北京亞東生物制藥有限公司