鉤藤活性生物堿在制備前列腺藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化合物藥理作用領(lǐng)域，涉及鉤藤活性生物堿的藥理作用，具體涉及鉤 藤活性生物堿在制備前列腺藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH)簡稱前列腺肥大，是一種 常見的男性泌尿系統(tǒng)疾病，多發(fā)生于50歲以上的中老年男性，其特點為前列腺腺體、平滑 肌和纖維組織的增生。BPH患者臨床常見前列腺增大、排尿異常和尿路梗阻。這些癥狀嚴(yán)重 影響這中老年男性的生活質(zhì)量，且隨著老齡人口的增加，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，因此 BPH的治療越來越受到人們的關(guān)注。藥物治療的主要目的是特異性的松弛前列腺平滑肌和 減小增生的前列腺體積。a f腎上腺素受體（a fAR)廣泛分布于下尿道，其中α 1A受體是 調(diào)節(jié)膀胱頸、前列腺等平滑肌的主要亞型，占前列腺a fAR的75%左右。因此，阻斷a IA 受體可以松弛前列腺及尿道平滑肌，改善BPH及下尿路梗阻等癥狀。研究α1Α受體選擇性 拮抗劑是治療BPH的熱點研究內(nèi)容之一，開發(fā)利用具有高選擇性的a 1A-AR阻滯劑或先導(dǎo)化 合物對BPH的候選藥物開發(fā)具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供鉤藤活性生物堿在制備前列腺藥物中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)鉤藤活 性生物堿能夠用于制備前列腺藥物。
[0004] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0005] 鉤藤活性生物堿在制備前列腺藥物中的應(yīng)用。
[0006] 所述的鉤藤活性生物堿為鉤藤堿、異鉤藤堿、異去氫鉤藤堿或去氫鉤藤堿。
[0007] 所述的前列腺藥物為用于治療良性前列腺增生的藥物。
[0008] 所述的前列腺藥物為具有舒張前列腺組織功能的藥物。
[0009] 所述的前列腺藥物為對于由去氧腎上腺素和去甲腎上腺素引起的前列腺組織收 縮具有拮抗作用的藥物。
[0010] 所述的前列腺藥物為作用于a 1A-AR的藥物。
[0011] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：
[0012] 本發(fā)明公開了鉤藤活性生物堿在制備前列腺藥物中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)鉤藤活性生物堿 能夠用于制備前列腺藥物。
[0013] 進(jìn)一步的，本發(fā)明中所說的鉤藤活性生物堿是指從中藥鉤藤根部得到的提取物鉤 藤堿、異鉤藤堿、異去氫鉤藤堿和去氫鉤藤堿，發(fā)現(xiàn)這四種鉤藤活性生物堿對a 1A-AR具有 很好的親和作用，并具有類似坦索羅辛的作用效果。本發(fā)明運用離體藥理學(xué)實驗，用離體家 兔前列腺模型對這四種鉤藤活性生物堿舒張前列腺的作用進(jìn)行了驗證，發(fā)現(xiàn)這四種鉤藤活 性生物堿可以有效的舒張離體前列腺組織，并且拮抗由PE(去氧腎上腺素）和NE(去甲腎 上腺素）引起的離體前列腺組織的收縮。說明這四種鉤藤活性生物堿能夠用于制備具有舒 張前列腺作用的藥物、對于PE(去氧腎上腺素）和NE(去甲腎上腺素）引起的前列腺組織 收縮具有拮抗作用的藥物、作用于a 1A-AR的藥物以及用于治療良性前列腺增生的藥物。
【附圖說明】
[0014] 圖1為鉤藤堿和異鉤藤堿在離體家兔前列腺上的舒張量效曲線圖，以坦索羅辛作 為對照藥物。其中A為鉤藤堿的舒張量效曲線，B為異鉤藤堿的舒張量效曲線。
[0015] 圖2為異去氫鉤藤堿和去氫鉤藤堿在離體家兔前列腺組織上的舒張量效曲線圖， 以坦索羅辛作為對照藥物。其中C為異去氫鉤藤堿的舒張量效曲線，D為去氫鉤藤堿的舒 張量效曲線。
[0016] 圖3為鉤藤堿對PE (去氧腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作用量效 曲線圖，其中A為PE在非競爭性拮抗劑鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的量-效曲線， B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0017] 圖4為異鉤藤堿對PE (去氧腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作用量 效曲線圖，其中A為PE在非競爭性拮抗劑異鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的量-效曲 線，B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0018] 圖5為異去氫鉤藤堿對PE (去氧腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作 用量效曲線圖，其中A為PE在非競爭性拮抗劑異去氫鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的 量-效曲線，B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0019] 圖6為去氫鉤藤堿對PE(去氧腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作 用量效曲線圖，其中A為PE在非競爭性拮抗劑去氫鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的 量-效曲線，B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0020] 圖7為鉤藤堿對NE (去甲腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作用量效 曲線圖，其中A為NE在非競爭性拮抗劑鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的量-效曲線， B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0021 ]圖8為異鉤藤堿對NE (去甲腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作用量 效曲線圖，其中A為NE在非競爭性拮抗劑異鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的量-效曲 線，B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0022] 圖9為異去氫鉤藤堿對NE (去甲腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作 用量效曲線圖，其中A為NE在非競爭性拮抗劑異去氫鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的 量-效曲線，B為Ariens非競爭性拮抗圖。
[0023] 圖10為去氫鉤藤堿對NE (去甲腎上腺素）引起的離體家兔前列腺收縮的拮抗作 用量效曲線圖，其中A為NE在非競爭性拮抗劑去氫鉤藤堿存在下收縮離體家兔前列腺的 量-效曲線，B為Ariens非競爭性拮抗圖。
【具體實施方式】
[0024] 下面結(jié)合實驗和附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。
[0025] 鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿和異去氫鉤藤堿是從中藥鉤藤根部中提取分離的 活性生物堿。通過a 1A-AR高表達(dá)細(xì)胞膜色譜（CMC)篩選發(fā)現(xiàn)，這四種鉤藤活性生物堿與 a 1a_AR有很好的親和力，并具有類似坦索羅辛的作用。因此，根據(jù)其與a 1A-AR的親和作用， 申請人運用離體藥理學(xué)實驗，采用張力描記技術(shù)，用家兔離體前列腺模型考察了它們的舒 張作用及對PE(去氧腎上腺素）和NE(去甲腎上腺素）引起的離體家兔前列腺組織收縮的 拮抗作用，并計算了其PEC5。值（半數(shù)有效濃度），和pA 2'。研究結(jié)果表明：四種活性生物堿 (鉤藤堿、異鉤藤堿、異去氫鉤藤堿和去氫鉤藤堿）可以有效的舒張家兔離體前列腺組織， 并且拮抗由去PE(去氧腎上腺素）和NE(去甲腎上腺素）引起的家兔離體前列腺組織的收 縮，說明這四種鉤藤活性生物堿是潛在的制備治療前列腺增生的藥物。
[0026] 下面對具體的實驗過程進(jìn)行說明。
[0027] 1.實驗材料
[0028] 儀器：DMT 血管張力測量系統(tǒng)（Danish Myograph Technology AIS Inc. 610M) 〇
[0029] 動物：雄性健康新西蘭大白兔（體重2. 5-3. 5kg，西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中 心）
[0030] 主要試劑：Kerb' s 緩沖溶液 Krebs 液（組成（g/L) :6· 954NaCl，0. 343KC1， I. 260NaHC03,0. 187NaH2P04 · 2Η20,0· 166CaCl2,0. 244MgCl2 · 6H20,1. 090 葡萄糖，pH = 7. 2~7. 4)，二甲基亞砜（DMSO,廣州市金華大化學(xué)試劑有限公司），重酒石酸去甲腎上腺素 (Norepinephrine Bitartrate Monohydrate，NE，大連美侖生物技術(shù)有限公司）；鹽酸去氧 腎上腺素（(R)-(-)-Phenylephrine hydrochloride，PE，上海阿拉丁試劑公司）；鹽酸坦索 羅辛（HPLC純度>98%，武漢馳飛化工有限公司）。
[0031] 2.實驗方法
[0032] (1)舒張作用實驗
[0033] 取健康雄性新西蘭大白兔，水合氯醛麻醉后，下腹部切口，順尿道仔細(xì)切取前列腺 左右頁，放入盛有預(yù)冷的Kerb' s緩沖溶液的表面皿中，清除血污，小心剔除多余的脂肪組 織和結(jié)締組織，將分離后的前列腺組織修剪成大約I cm X 2mm X 2mm的前列腺肌條，用細(xì)線 與DMT血管張力測量系統(tǒng)相連，并通過信號轉(zhuǎn)化器在電腦屏幕上顯示前列腺肌條張力的變 化。DMT浴槽中加入Kerb' s緩沖溶液，同時通入含95% 02和5% CO 2的混合氣體，保持溫 度在37°C。調(diào)零至前列腺肌條張力不再有較大變化后，給予前列腺肌條4mN預(yù)張力，20min 內(nèi)調(diào)節(jié)3~4次至預(yù)張力穩(wěn)定。張力穩(wěn)定后，使前列腺肌條在37°C、95% 02、5% CO2飽和的 Kerb' s液中平衡60~90min (整個實驗期間每隔20min更換一次Kerb' s液）。
[0034] 為了檢測前列腺肌條在離體條件下對藥物的反應(yīng)性，在開始正式實驗前，用 60mmol/L的K +-Kerb' s液預(yù)收縮，當(dāng)其收縮達(dá)到穩(wěn)定的平臺后，用Kerb's液沖洗3次，待張 力恢復(fù)至基線水平后，再用60mmol/L的K+-K erb' s液預(yù)收縮，重復(fù)上述過程一次。若肌條 能穩(wěn)定收縮且兩次收縮平臺一致則證明其功能正常，可以進(jìn)行實驗，異常的肌條棄之不用。 前列腺肌條張力穩(wěn)定平衡20min后開始正式實驗。
[0035] 待平衡結(jié)束后，將浴槽中的Kerb' s緩沖液定容至10mL，基線穩(wěn)定后，向浴槽中 分別依次加入NE (去甲腎上腺素）注射液50uM，待獲得穩(wěn)定的收縮反應(yīng)后，再向浴槽中分 別依次加入坦索羅辛、鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿和異去氫鉤藤堿的濃度梯度溶液，每 個濃度加入10uL，使浴槽中的藥物濃度依次為1X10 9、3X 10 9UXlO S、3X