專利名稱：不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種主要用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是指具有一種或多種足夠均勻和很好確定了的特性值，用來(lái)校準(zhǔn)設(shè)備、評(píng)價(jià)測(cè)量方法或給材料賦值的材料和物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制的發(fā)展趨勢(shì)包括兩個(gè)方向其一為傳統(tǒng)領(lǐng)域到生物、臨床等新興領(lǐng)域；其二為高純與復(fù)雜基體的兩極發(fā)展。
蛋白質(zhì)類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是生物、臨床等領(lǐng)域中重要的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心目前沒(méi)有適用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)用蛋白質(zhì)類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。國(guó)內(nèi)臨床檢驗(yàn)中習(xí)慣使用純分析物質(zhì)配制于純?nèi)軇?如水)后形成的標(biāo)準(zhǔn)或參考液，以這樣的標(biāo)準(zhǔn)液為標(biāo)準(zhǔn)，求得各標(biāo)本的分析結(jié)果。這樣的做法忽視了標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)處于完全不同的基體狀態(tài)所產(chǎn)生的基體效應(yīng)(matrixeffect)。
分析樣品中除了目標(biāo)分析物以外的所有其他物質(zhì)和組分稱為該分析物的基體，基體(matrix)亦稱為基質(zhì)?；w效應(yīng)是檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)標(biāo)本中的目標(biāo)分析物時(shí)，處于目標(biāo)分析物周圍的所有非分析物質(zhì)(基體)對(duì)分析物參與反應(yīng)的影響。臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定血液標(biāo)本中各種蛋白質(zhì)含量時(shí)，所用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基體應(yīng)當(dāng)是除目標(biāo)蛋白以外的人血清物質(zhì)，但目前并非如此。制備不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的血清基體物質(zhì)是研制目標(biāo)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基礎(chǔ)。
據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道臨床檢驗(yàn)溯源用蛋白質(zhì)類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法如下得到高純度的目標(biāo)產(chǎn)物后，添加40％左右的牛血清白蛋白或人血清白蛋白以及其他血清類物質(zhì)，總之使目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在基質(zhì)類似于人血清的成分。但是人血清是一種很復(fù)雜的混合物，其成份可能有幾百種之多，目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及作用機(jī)制仍不清楚，尤其對(duì)于多肽類生長(zhǎng)因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí)。因此添加物不能代表真正的血清內(nèi)含物。研制盡可能與人類血清成分一致的基體物質(zhì)，降低臨床用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基體效應(yīng)是臨床檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要保證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于研制用于制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的、與血清成分基本一致的不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法；使目標(biāo)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基體盡量與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本的基體一致，降低由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本基體不一致產(chǎn)生的基體效應(yīng)。
本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)完成的，它是依據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)原理和目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中的含量，使一定量結(jié)合于不同介質(zhì)上的抗目標(biāo)蛋白質(zhì)的多或單克隆抗體與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物后，通過(guò)不同的方法去除含目標(biāo)蛋白質(zhì)及其抗體的免疫復(fù)合物，從而得到不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)。
當(dāng)所述目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中含量大于300mg/L時(shí)，將該目標(biāo)蛋白質(zhì)相應(yīng)的抗體用雙功能試劑交聯(lián)，使之成為可以與目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)的特異性固體免疫介質(zhì)，與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)后除去目標(biāo)蛋白質(zhì)；當(dāng)所述的目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中含量小于300mg/1L的時(shí)候，選取該目標(biāo)蛋白質(zhì)相應(yīng)的抗體與功能化的磁珠偶聯(lián)形成免疫磁珠，再與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)后除去目標(biāo)蛋白質(zhì)。
當(dāng)目標(biāo)蛋白質(zhì)含量大于300mg/L時(shí)，選用該蛋白質(zhì)的特異性固體免疫介質(zhì)以1∶60～1∶10比例加入至正常人混合血清中，置于磁力攪拌器上，4℃反應(yīng)，過(guò)夜，以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心；檢測(cè)離心上清，直至不含目標(biāo)蛋白質(zhì)，并保持白蛋白與球蛋白的正常比例；此離心上清為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。
當(dāng)目標(biāo)蛋白質(zhì)含量為300mg/L以下時(shí)，選用目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體與功能化的磁珠偶聯(lián)，制備含抗目標(biāo)蛋白質(zhì)抗體的免疫磁珠；將以上免疫磁珠以1∶40～1∶100比例投入正常人混合血清中，置于一定轉(zhuǎn)速的搖床上，37℃反應(yīng)1～2小時(shí)，4℃冰箱放置1～4小時(shí)，將反應(yīng)混合物置于磁場(chǎng)中，使含目標(biāo)蛋白質(zhì)及其抗體的免疫磁珠與人血清分離，將血清再以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心，檢測(cè)離心上清，直至不含目標(biāo)蛋白，并保持白蛋白與球蛋白的正常比例；此離心上清為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。
本發(fā)明利用免疫學(xué)原理，根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)在正常人血清中的含量，選用不同的方法，得到不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)；它能使標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備用基體物質(zhì)盡量與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本的基體物質(zhì)一致，降低由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本在測(cè)試中由于基體物質(zhì)不一致產(chǎn)生的基體效應(yīng)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。
具體實(shí)施例方式
下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的介紹1.正常人混合血清分析取若干正常人混合血清，離心后分析血清的理化性質(zhì)如血清黏度、pH值、蛋白含量等。其中蛋白含量分析包括血清總蛋白(雙縮脲法)、白蛋白(溴甲酚綠法)、球蛋白(按照常規(guī)方法，總蛋白與白蛋白的差值)、常見的特種蛋白例如轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、免疫球蛋白A/G/M、補(bǔ)體C3/C4以及目標(biāo)蛋白質(zhì)等(免疫比濁法分析)。分析儀器為全自動(dòng)生化分析儀(日立7080型)。
2.含目標(biāo)蛋白質(zhì)特異性抗體的固體免疫介質(zhì)以及免疫磁珠的制備2.1固體免疫介質(zhì)的制備將一定量的抗目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體與2.5％戊二醛溶液混合，放置于冰箱過(guò)夜，使血清成為膠凍狀，打碎后用生理鹽水洗滌，成為顆粒狀的可以與目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)的固體免疫介質(zhì)。
2.2免疫磁珠的制備主要包括以下步驟用緩沖液對(duì)納米磁珠進(jìn)行預(yù)處理；用碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化磁珠；隨后將磁珠與目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體偶聯(lián)結(jié)合，成為含有目標(biāo)蛋白質(zhì)特異性抗體的免疫磁珠；用硼酸鹽緩沖液純化免疫磁珠。(詳細(xì)的方法本課題組已申請(qǐng)專利，專利申請(qǐng)?zhí)枮?00610053305.4)。
3.不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的血清基體物質(zhì)研制以一定量附于不同免疫介質(zhì)上的目標(biāo)蛋白質(zhì)抗體與人血清中目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物后，通過(guò)去除含有目的蛋白質(zhì)和其特異性抗體的免疫復(fù)合物，達(dá)到去除目標(biāo)蛋白質(zhì)的目的。
3.1目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中含量大于300mg/L時(shí)，血清基體物質(zhì)研制選用含目標(biāo)蛋白質(zhì)抗體的固體免疫介質(zhì)以1∶60～1∶1比例加至正常人混合血清中，置于磁力攪拌器上，4℃反應(yīng)，過(guò)夜，以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心；檢測(cè)離心上清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)，如果仍然含有目標(biāo)蛋白質(zhì)，可以添加免疫介質(zhì)進(jìn)一步反應(yīng)，直至不含目標(biāo)蛋白質(zhì)。
3.2目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中含量小于200mg/L以下時(shí)，血清基體物質(zhì)研制選用含目標(biāo)蛋白質(zhì)抗體的免疫磁珠，將以上免疫磁珠以1∶40～1∶1000比例投入正常人混合血清中，置于一定轉(zhuǎn)速的搖床上，37℃反應(yīng)1～2小時(shí)，4℃冰箱放置1～4小時(shí)，將反應(yīng)混合物置于磁場(chǎng)中，使含目標(biāo)蛋白質(zhì)及其抗體的免疫磁珠與人血清分離，將血清再以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心，檢測(cè)離心上清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)，如果仍然含有目標(biāo)蛋白質(zhì)，可以添加免疫介質(zhì)進(jìn)一步反應(yīng)，直至不含目標(biāo)蛋白質(zhì)。
4.已處理血清成分分析分析以上物質(zhì)的理化性質(zhì)，具體內(nèi)容和方法與正常人混合血清分析一致。
5.已處理血清成分補(bǔ)充根據(jù)以上測(cè)定的結(jié)果添加被減少的蛋白質(zhì)，使之與原血清成分基本一致，并保持白蛋白與球蛋白的正常比例。此物質(zhì)為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。
6.基體物質(zhì)確證試驗(yàn)利用添加回收(recovery)實(shí)驗(yàn)對(duì)不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的血清基體物質(zhì)的研制結(jié)果進(jìn)行確證?；厥章蔬_(dá)到95～105％，說(shuō)明已經(jīng)得到不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。
實(shí)施舉例一不含載脂蛋白B(apoB)的人血清基體物質(zhì)的制備(apoB在血清中含量為500～1100mg/L)1.正常人血清分析取1ml正常人混合血清，離心后分析血清的黏度、pH值、血清總蛋白、白蛋白、球蛋白、常見特種蛋白如轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、免疫球蛋白A/G/M、補(bǔ)體C3/C4以及目標(biāo)蛋白質(zhì)載脂蛋白B等。
2.不含載脂蛋白B(apoB)血清基體物質(zhì)研制選用含有載脂蛋白B抗體的固體免疫介質(zhì)1g，加入至30ml正常人混合血清中，置于磁力攪拌器上，4℃反應(yīng)，過(guò)夜，以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心；檢測(cè)離心上清中的載脂蛋白B，如果仍然含有載脂蛋白B，可以添加免疫介質(zhì)進(jìn)一步反應(yīng)，直至不含載脂蛋白B。
3.已處理血清成分分析分析以上已處理血清物質(zhì)的理化性質(zhì)，具體內(nèi)容和方法與正常人混合血清分析一致。
4.已處理血清成分補(bǔ)充通過(guò)測(cè)定分析發(fā)現(xiàn)血清的黏度、pH值以及所測(cè)特種蛋白如轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、免疫球蛋白A/G/M、補(bǔ)體C3/C4的含量基本保持不變，目標(biāo)蛋白質(zhì)載脂蛋白B含量為零，血清總蛋白、白蛋白含量稍有降低，血清成分和基體物質(zhì)具體測(cè)試結(jié)果見下表。根據(jù)總蛋白含量，以及減少的白蛋白含量，補(bǔ)充加入0.9g白蛋白。保持總蛋白與原來(lái)血清中總蛋白含量一致，同時(shí)也保證了白蛋白/球蛋白的比例在正常范圍內(nèi)。此物質(zhì)為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。完成不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)研制的基本程序。

5.基體物質(zhì)確證試驗(yàn)利用回收(recovery)實(shí)驗(yàn)對(duì)不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的血清基質(zhì)物質(zhì)的研制結(jié)果進(jìn)行確證。將一定濃度純化的載脂蛋白B(apoB)抗原、基體物質(zhì)、以及純化的載脂蛋白B(apoB)抗原與基體物質(zhì)的混合物作為檢測(cè)標(biāo)本；以以載脂蛋白B(apoB)羊抗人多克隆抗體和4％聚乙二醇-磷酸緩沖液配制的單試劑，測(cè)定波長(zhǎng)為340nm，測(cè)試參數(shù)為3ul標(biāo)本/300ul劑。紫外分光光度計(jì)測(cè)定以上樣品的吸光度，每個(gè)樣品測(cè)定5次，并以其平均值計(jì)算回收率。
回收率計(jì)算公式

x1基體物質(zhì)平均吸光度x2添加物與基體物質(zhì)平均吸光度x添加物的平均吸光度本實(shí)驗(yàn)回收率＝98.7％實(shí)施舉例二不含B因子(Factor B)的人血清基體物質(zhì)的制備(Factor B在血清中含量為l40～280mg/L)1.正常人血清分析取1ml正常人混合血清，離心后分析血清的黏度、pH值、血清總蛋白、白蛋白、球蛋白、常見特種蛋白如轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、免疫球蛋白A/G/M、補(bǔ)體C3/C4以及目標(biāo)蛋白質(zhì)B因子等。
2.不含B因子(Factor B)血清基體物質(zhì)研制選用含有B因子抗體的特異性免疫磁珠100ul，加入至20ml正常人混合血清中，置于一定轉(zhuǎn)速的搖床上，37℃反應(yīng)1～2小時(shí)，4℃冰箱放置1～4小時(shí)，將反應(yīng)混合物置于磁場(chǎng)中，使含目標(biāo)蛋白質(zhì)B因子及其抗體的免疫磁珠與人血清分離，將血清再以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心，檢測(cè)離心上清中的B因子，如果仍然含有B因子，可以添加免疫磁珠進(jìn)一步反應(yīng)，直至不含B因子。
3.已處理血清成分分析分析以上已處理血清物質(zhì)的理化性質(zhì)，具體內(nèi)容和方法與正常人混合血清分析一致。
4.已處理血清成分補(bǔ)充通過(guò)測(cè)定分析發(fā)現(xiàn)血清的黏度、pH值以及所測(cè)特種蛋白如轉(zhuǎn)鐵蛋白、前白蛋白、免疫球蛋白A/G/M、補(bǔ)體C3/C4的含量基本保持不變，目標(biāo)蛋白質(zhì)B因子含量為零，血清總蛋白、白蛋白含量稍有降低，血清成分和基體物質(zhì)具體測(cè)試結(jié)果見下表。根據(jù)總蛋白含量，以及減少的白蛋白含量，補(bǔ)充加入0.3g白蛋白。保持總蛋白與原來(lái)血清中總蛋白含量一致，同時(shí)也保證了白蛋白/球蛋白的比例在正常范圍內(nèi)。此物質(zhì)為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)B因子的人血清基體物質(zhì)。完成不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)研制的基本程序。

5.基體物質(zhì)確證試驗(yàn)利用回收(recovery)實(shí)驗(yàn)對(duì)不含目標(biāo)蛋白質(zhì)B因子的血清基質(zhì)物質(zhì)的研制結(jié)果進(jìn)行確證。將一定濃度的純化的B因子(Factor B)抗原、基體物質(zhì)、以及純化的B因子(Factor B)抗原與基體物質(zhì)的混合物作為檢測(cè)標(biāo)本；以B因子(FactorB)羊抗人多克隆抗體和4％聚乙二醇-磷酸緩沖液配制的單試劑，測(cè)定波長(zhǎng)為340nm，測(cè)試參數(shù)為6ul標(biāo)本/300ul試劑。紫外分光光度計(jì)測(cè)定以上樣品的吸光度，每個(gè)樣品測(cè)定5次，并以其平均值計(jì)算回收率。
回收率計(jì)算公式 x1基體物質(zhì)平均吸光度x2添加物與基體物質(zhì)平均吸光度x添加物的平均吸光度本實(shí)驗(yàn)回收率＝97.9％。
權(quán)利要求
1.一種不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法，它是依據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)原理和目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中的含量，使一定量結(jié)合于不同介質(zhì)上的抗目標(biāo)蛋白質(zhì)的多或單克隆抗體與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物后，通過(guò)不同的方法去除含目標(biāo)蛋白質(zhì)及其抗體的免疫復(fù)合物，從而得到不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法，其特征在于當(dāng)所述目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中含量大于300mg/L時(shí)，將該目標(biāo)蛋白質(zhì)相應(yīng)的抗體用雙功能試劑交聯(lián)，使之成為可以與目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)的特異性固體免疫介質(zhì)，與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)后除去目標(biāo)蛋白質(zhì)；當(dāng)所述的目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中含量小于300mg/L的時(shí)候，選取該目標(biāo)蛋白質(zhì)相應(yīng)的抗體與功能化的磁珠偶聯(lián)形成免疫磁珠，再與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)后除去目標(biāo)蛋白質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法，其特征在于當(dāng)目標(biāo)蛋白質(zhì)含量大于300mg/L時(shí)，選用該蛋白質(zhì)的特異性固體免疫介質(zhì)以1∶60～1∶10比例加入至正常人混合血清中，置于磁力攪拌器上，4℃反應(yīng)，過(guò)夜，以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心；檢測(cè)離心上清，直至不含目標(biāo)蛋白質(zhì)，并保持白蛋白與球蛋白的正常比例；此離心上清為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法，其特征在于當(dāng)目標(biāo)蛋白質(zhì)含量為300mg/L以下時(shí)，選用目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體與功能化的磁珠偶聯(lián)，制備含抗目標(biāo)蛋白質(zhì)抗體的免疫磁珠；將以上免疫磁珠以1∶40～1∶100比例投入正常人混合血清中，置于一定轉(zhuǎn)速的搖床上，37℃反應(yīng)1～2小時(shí)，4℃冰箱放置1～4小時(shí)，將反應(yīng)混合物置于磁場(chǎng)中，使含目標(biāo)蛋白質(zhì)及其抗體的免疫磁珠與人血清分離，將血清再以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心，檢測(cè)離心上清，直至不含目標(biāo)蛋白，并保持白蛋白與球蛋白的正常比例；此離心上清為不含目標(biāo)蛋白質(zhì)的人血清基體物質(zhì)。
全文摘要
一種不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)的制備方法，它是依據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)原理和目標(biāo)蛋白質(zhì)在血清中的含量，使一定量結(jié)合于不同介質(zhì)上的抗目標(biāo)蛋白質(zhì)的多或單克隆抗體與人血清中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物后，通過(guò)不同的方法去除含目標(biāo)蛋白質(zhì)及其抗體的免疫復(fù)合物，從而得到不含目標(biāo)蛋白質(zhì)人血清基體物質(zhì)，它能使標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備用基體物質(zhì)盡量與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本的基體物質(zhì)一致，降低由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本在測(cè)試中由于基體物質(zhì)不一致產(chǎn)生的基體效應(yīng)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N33/68GK101046479SQ200710067299
公開日2007年10月3日 申請(qǐng)日期2007年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月25日
發(fā)明者胡衛(wèi)江, 周海夢(mèng), 孟凡國(guó), 李海龍 申請(qǐng)人:清華大學(xué), 浙江清華長(zhǎng)三角研究院