專利名稱：一種大豆脂肪酸的微量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。是一種大豆脂肪酸含量微量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
大豆油脂中含有人體必需的脂肪酸，具有重要的營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值。大 豆油脂品質(zhì)的優(yōu)劣，取決于主要脂肪酸的組成及其配比。大豆中不飽和脂 肪酸的亞油酸和亞麻酸是生物膜的重要組分，其含量的高低是油脂品質(zhì)好 壞的重要尺度，而亞麻酸易于氧化致使豆油變劣，降低大豆油的使用性和 減少保存期限。因此，從營(yíng)養(yǎng)和貯藏角度考慮，提高不飽和脂肪酸中油酸 和亞油酸含量，適當(dāng)降低棕櫚酸和亞麻酸含量，使脂肪酸組分配比合理是 非常重要的。
在大豆脂肪酸的研究中，如何實(shí)現(xiàn)主要脂肪酸組分的提取和檢測(cè)是至 關(guān)重要的。目前，許多學(xué)者在脂肪酸提取和檢測(cè)方法上進(jìn)行了大量的探討 和研究，并取得了一定階段性的成果。然而，多數(shù)研究?jī)H僅進(jìn)行了脂肪酸 的相對(duì)含量的測(cè)定，不能實(shí)現(xiàn)其絕對(duì)含量的檢測(cè)。有些研究雖然能夠進(jìn)行 脂肪酸的定量檢測(cè)，但大都采用外標(biāo)法，使得測(cè)定值與真實(shí)值之間還有一 定的偏差，而且需要樣品的量很多，不能有效進(jìn)行各組分含量的微量檢測(cè)。
為此，我們針對(duì)上述缺陷，對(duì)大豆脂肪酸提取方法、色譜檢測(cè)條件進(jìn) 行改進(jìn)，同時(shí)結(jié)合大豆籽粒的微量取樣方法，研究出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從以上技術(shù)背景出發(fā)，采用甘油三酯對(duì)大豆籽粒中的脂肪酸總 量進(jìn)行萃取，.然后加入氫氧化鉀的甲醇溶液在水浴中進(jìn)行甲酯化，把得到 的甲酯化的脂肪酸混合物離心后，取上清液在氣相色譜上進(jìn)行微量檢測(cè)。 具體提取和檢測(cè)程序如下-
a. 前期準(zhǔn)備
藥品準(zhǔn)備甲醇；390mg/500ml的己烷甘油三酯溶液；2mol/l的氫氧化 鉀甲醇溶液；
樣品準(zhǔn)備單個(gè)籽粒編號(hào)后，用壁紙刀片在豆粒的遠(yuǎn)臍端多次切取薄 薄的碎片(注意不要超過籽粒的1/3)，用天平稱取10-12毫克,放入編好號(hào) 的帶蓋塑料試管中；
b. 脂肪酸的提取和甲酯化 每個(gè)樣品中加入2ml己垸甘油三酯溶液—立即加入2mol/l的氫氧
化鉀甲醇溶液200u 1，并蓋上蓋~ 勻質(zhì)器混勻10秒~^輕輕震蕩100次 ~~ 5。C水浴15分鐘^ 加入35u l甲醇和2ml超純水終止反應(yīng)~ 25°C 用離心機(jī)以2000-2500轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘~~ 吸取500 u l上清液于2ml頂
空瓶中，準(zhǔn)備分析；
c. 脂肪酸的氣相色譜檢測(cè)條件
氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)，量程3，衰減2，擔(dān)體GAS: CHROMSORB-Q， 80 100目，固定液DEGS，擔(dān)體與固定液配比IOO : 4;色譜柱為不銹鋼柱 1000mmX3.2mm(內(nèi)徑)，柱溫180。C，氣化室240。C，檢測(cè)室240。C;氣體載 氣N260ml/min，燃?xì)釮250ml/min，助燃?xì)怏w空氣500ml/min，紙速2. 5cm/min， 每樣品重復(fù)3次，進(jìn)樣量0.5ul;
本發(fā)明采用內(nèi)標(biāo)法對(duì)各脂肪酸組分進(jìn)行定量檢測(cè)。大豆籽粒中各脂肪 酸組分含量由對(duì)應(yīng)的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積的比值求得。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是采用內(nèi)標(biāo)法可以實(shí)現(xiàn)脂肪酸的精確定量檢測(cè)；采用半
粒法取樣實(shí)現(xiàn)微量分析，同時(shí)不影響大豆籽粒的繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育，在大豆育
種上具有更重要的現(xiàn)實(shí)意義。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明在中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所的"大豆功能營(yíng)養(yǎng)資 源拓寬與改良"課題中得到了應(yīng)用。在課題實(shí)施過程中采用本發(fā)明對(duì)200多 份東北大豆資源進(jìn)行了分析和評(píng)價(jià)，得到了亞油酸含量高和亞麻酸含量低 的大豆材料各兩份，對(duì)于本課題的完成和優(yōu)質(zhì)油份大豆育種都起到了有效 的技術(shù)支撐。下面列出了部分大豆資源籽粒中脂肪酸含量的檢測(cè)結(jié)果
部分大豆資源籽粒中脂肪酸含量的檢測(cè)結(jié)果(U g/100g)
資源序號(hào)棕櫚酸硬脂酸油酸亞油酸a -亞麻酸
(C16:0)(C18:0)(C18:l)(C18:2)(C18:3)
13.56±0. 213.66±0. 3315.81 ±0. 2523.42±0.314.16±0. 16
28.32±0. 331.04±0. 3012.73±0. 2131.93±0. 352.48±0. 13
311.67±0. 440.98±0. 2514.30±0. 2742.21 ±0. 384.99 ±0. 29
44.12±0. 203.04±0. 417.35±0. 1233.34±0. 283.54土0. 21
56.46 ±0. 382.02 ±0. 2215.98±0. 1429.24 ±0. 297.20 ±0. 24
67.79±0. 331.28±0. 2614.24土0, 1624.73±0. 266.73±0. 25
74.93 ±0. 213.73±0. 1910.47±0. 1925.35±0. 294.49 ±0. 22
87.22±0. 351.22±0. 2820.55 ±0. 2243.67±0. 425.56±0. 21
92.69±0. 164.56±0. 4322.65 ±0. 1552.02±0. 416.11±0. 28
106.51 ±0. 261.24±0. 3416.21 ±0. 2134.68 ±0. 224.21 ±0. 24
根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以看出，東北大豆資源在脂肪酸組分含量存在很大的 遺傳變異。在各組分的相對(duì)含量，亞油酸〉油酸〉棕櫚酸〉亞麻酸〉硬脂 酸。這些檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的基本上是一致的，可見本方法不僅可行， 而且還在大豆優(yōu)質(zhì)油份育種和改良上具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
權(quán)利要求
1. 一種大豆脂肪酸的檢測(cè)方法，其特征在于采用半粒法進(jìn)行取樣，以己烷為內(nèi)標(biāo)物，結(jié)合甘油三酯對(duì)大豆籽粒中的脂肪酸總量進(jìn)行萃取，然后加入氫氧化鉀的甲醇溶液在水浴中進(jìn)行甲酯化，把得到的甲酯化的脂肪酸混合物離心后，取上清液在氣相色譜上進(jìn)行精確定量檢測(cè)，提取和檢測(cè)程序如下a.前期樣品準(zhǔn)備單個(gè)籽粒編號(hào)后，用壁紙刀片在豆粒的遠(yuǎn)臍端多次切取薄薄的碎片(注意不要超過籽粒的1/3)，用天平稱取10-12毫克，放入編好號(hào)的帶蓋塑料試管中；b.脂肪酸的提取和甲酯化每個(gè)樣品中加入2ml己烷甘油三酯溶液→立即加入2mol/l的氫氧化鉀甲醇溶液200μl，并蓋上蓋→勻質(zhì)器混勻10秒→輕輕震蕩100次→5℃水浴15分鐘→加入35μl甲醇和2ml超純水終止反應(yīng)→25℃用離心機(jī)以2000-2500轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘→吸取500μl上清液準(zhǔn)備分析；c.脂肪酸的氣相色譜檢測(cè)條件氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)，量程3，衰減2，擔(dān)體GASCHROMSORB-Q，80～100目，固定液DEGS，擔(dān)體與固定液配比100∶4；色譜柱為不銹鋼柱1000mm×3.2mm(內(nèi)徑)，柱溫180℃，氣化室240℃，檢測(cè)室240℃；氣體載氣N260ml/min，燃?xì)釮250ml/min，助燃?xì)怏w空氣500ml/min，紙速2.5cm/min，每樣品重復(fù)3次，進(jìn)樣量0.5μl；各脂肪酸組分含量由對(duì)應(yīng)的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積的比值求得。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。是一種大豆脂肪酸含量微量檢測(cè)方法。本發(fā)明在傳統(tǒng)大豆脂肪酸檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，采用半粒法進(jìn)行取樣，以己烷為內(nèi)標(biāo)物，結(jié)合甘油三酯對(duì)大豆籽粒中的脂肪酸總量進(jìn)行萃取，然后加入氫氧化鉀的甲醇溶液在水浴中進(jìn)行甲酯化，把得到的甲酯化的脂肪酸混合物離心后，取上清液在氣相色譜上進(jìn)行精確定量檢測(cè)，對(duì)于大豆優(yōu)質(zhì)油份育種和改良具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
文檔編號(hào)G01N30/00GK101206199SQ20061016327
公開日2008年6月25日 申請(qǐng)日期2006年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月18日
發(fā)明者蘭志華, 智小明, 李艷華, 梁桂榮, 潘相文, 王國(guó)棟, 邢海軍 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所