專利名稱：用于癌癥的診斷標(biāo)記物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多種不同的蛋白質(zhì)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途，活性物質(zhì)用于治療癌癥的應(yīng)用，和相關(guān)的藥物學(xué)制品和試劑盒。
通常癌癥疾病以一個(gè)或多個(gè)腫瘤的發(fā)展為特征。腫瘤意味著組織的生長(zhǎng)或組織體積的局部增加。廣義上來(lái)說(shuō)，每個(gè)局部化的腫脹都屬于這個(gè)分類，例如水腫、急性或慢性的炎癥、由動(dòng)脈瘤引起的擴(kuò)張、器官的炎性生長(zhǎng)(例如，所謂的脾腫瘤)。更狹義地說(shuō)，腫瘤意味著通過(guò)機(jī)體組織的自發(fā)、不受控制、不受抑制至不同程度的、自主和不可逆的生長(zhǎng)，連同細(xì)胞和組織特定功能喪失的新組織(贅疣、胚細(xì)胞瘤、成瘤)形成。
為了更好的分類，根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)劃分腫瘤I.其生物學(xué)特性1.具有生長(zhǎng)緩慢的分化細(xì)胞且替代正常組織的良性腫瘤2.顯示多態(tài)性的細(xì)胞核、非典型細(xì)胞、退行性變化、侵入性和破壞性生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤3.顯示惡性腫瘤的組織學(xué)特征和局部浸潤(rùn)生長(zhǎng)但通常缺少轉(zhuǎn)移的半-惡性腫瘤。
II.組織發(fā)生標(biāo)準(zhǔn)就此而言，根據(jù)其發(fā)育起源的胚性組織來(lái)分類腫瘤。有1.起源于外胚層和內(nèi)胚層的上皮腫瘤a)良性腫瘤，類似于腺瘤、乳頭狀瘤或息肉b)惡性腫瘤，例如癌瘤2.起源于中胚層的間質(zhì)腫瘤a)良性腫瘤，類似于脂肪瘤、纖維瘤、骨瘤、肌瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤、軟骨瘤b)惡性腫瘤，例如肉瘤3.發(fā)育自未分化組織的胚性腫瘤。腎胚細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、胚性橫紋肌肉瘤、畸胎瘤屬于這個(gè)部分。
III.根據(jù)臨床和病理學(xué)結(jié)果的分類。在這些當(dāng)中的是TNM-分類、分級(jí)、Laurén-分類、Dukes-分類、Kieler分類、Rappaport-分類等。
這個(gè)腫瘤分類的簡(jiǎn)短縱覽正好顯示了不同類型的腫瘤是多么變化多端、相互交疊甚至對(duì)立。不僅在良性和惡性腫瘤之間存在差異；而且必須考慮到某些腫瘤的致死性以及良性腫瘤可成為惡性的可能性。
一些腫瘤，例如，乳腺癌瘤(乳腺癌)，婦女中最普遍的惡性腫瘤，尤其大量地發(fā)生在45和70歲之間。早期癥狀是癌癥預(yù)防體制中的檢查或乳房的定期自檢期間的可疑結(jié)果。根據(jù)腫瘤發(fā)育和分化的階段，預(yù)后可以是非常積極的至確實(shí)嚴(yán)重的范圍。由于乳腺癌的早期生淋巴和造血轉(zhuǎn)移，盡可能及早地快速診斷對(duì)于啟動(dòng)治療措施是必要的。
前列腺癌(前列腺的癌瘤)是男性中最普遍的腫瘤，大多發(fā)生在50和70歲之間。主要的病例是腺癌。這種類型的惡性腫瘤首先通過(guò)在前列腺中的侵入性生長(zhǎng)而擴(kuò)散，稍后浸潤(rùn)過(guò)渡區(qū)和腎盂結(jié)締組織中的細(xì)胞，以及很少浸潤(rùn)腸、膀胱或尿道中的細(xì)胞。轉(zhuǎn)移通過(guò)生淋巴和/或造血途徑發(fā)生。治療措施取決于分化和臨床階段的組織學(xué)級(jí)別，并且通常意味著根治性手術(shù)，從而完全移除前列腺和淋巴結(jié)區(qū)；在發(fā)展性階段中撤除雄性激素是一種措施。預(yù)后也取決于腫瘤的階段。早期階段中根治性手術(shù)治愈大約90％的前列腺癌，而在發(fā)展性階段中預(yù)后經(jīng)常是很弱的。
前列腺癌必須通過(guò)診斷方式與前列腺增生區(qū)別開(kāi)來(lái)。前列腺增生是前列腺的良性腫瘤；該腺體通過(guò)基質(zhì)細(xì)胞和腺體的數(shù)目增加而變得增大。前列腺增生是上了年紀(jì)的男性中排尿困難的最普遍原因。臨床癥狀通常發(fā)生在40和50歲之間，并且該疾病緩慢和逐步地進(jìn)展。癥狀經(jīng)常在逐步減弱尿的射出和延遲排尿若干年后出現(xiàn)。植物治療的應(yīng)用可能是治療性的使用，并緩和臨床癥狀。
一般，腫瘤的早期診斷對(duì)于快速啟動(dòng)治療措施是必需的。如果腫瘤被早期檢測(cè)到；則預(yù)后得到提高；因此許多所謂的腫瘤標(biāo)記物被用于臨床實(shí)踐。腫瘤標(biāo)記物是可被鑒定或定量的分子或細(xì)胞改變物以獲得關(guān)于(惡性)病癥存在、進(jìn)展和預(yù)后的信息。腫瘤標(biāo)記物被劃分為1.細(xì)胞腫瘤標(biāo)記物這個(gè)組尤其包含細(xì)胞膜的腫瘤抗原、受體(例如，激素受體、白血病中生長(zhǎng)刺激物質(zhì)的受體)，和代表癌基因表達(dá)增加和單克隆細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞標(biāo)記物，以及遺傳改造物，特別是染色體畸變。
2.體液腫瘤標(biāo)記物在生理學(xué)條件下，可在生物樣品，特別是在血清、尿和其他體液中檢測(cè)到增加濃度的這些物質(zhì)(其大多屬于正常的生理學(xué)組成部分)。它們?cè)谀[瘤組織中合成和/或分泌，通過(guò)破壞腫瘤細(xì)胞或在組織對(duì)腫瘤的應(yīng)答中釋放。對(duì)腫瘤標(biāo)記物的生理相關(guān)性只有很少的理解。在人體中，它通常不具有免疫原特性。它們的臨床(診斷)顯著性依賴于特異性和靈敏度。體液腫瘤標(biāo)記物被分為兩類。一組包括由腫瘤產(chǎn)生的標(biāo)記物，例如腫瘤締合的抗原、特定的激素(例如，促胃液素、皮質(zhì)醇等)、酶(例如，神經(jīng)元-特異的烯醇酶，NSE)或蛋白質(zhì)(例如，Bence-Jones-蛋白質(zhì))。通過(guò)腫瘤誘導(dǎo)而不是通過(guò)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)記物屬于第二組。第二組的重要成員是堿性磷酸酶(AP)、LDH(乳酸脫氫酶)、新喋呤等。
最近的出版物公開(kāi)了可在兒童中最常見(jiàn)的腦部腫瘤，成髓細(xì)胞瘤的兩個(gè)代表性細(xì)胞系中檢測(cè)到，并且可能被用作腫瘤標(biāo)記物的蛋白質(zhì)的列表(A.Peyrl等，2003，Proteomics，3，1781-1800)。US6,645,465公開(kāi)了屬于Ca2+結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白A1和A2可用作肺癌、乳腺癌和食管癌的腫瘤標(biāo)記物，并且可通過(guò)檢測(cè)直接指向它們的自身-抗體而加以鑒定。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可能顯示使用針對(duì)膜聯(lián)蛋白A1的放射性標(biāo)記的抗體導(dǎo)致腫瘤質(zhì)量損失，這可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞壞死(P.Oh，Y.Li，J.Yu，E.Durr，K.M.Krasinska，L.A.Carver，J.E.Testa，J.E.Schnitzer，2004，Nature，429，629-35)。
最近已經(jīng)在膜聯(lián)蛋白A3指示作為鑒定蛋白這方面的惡性和非惡性(良性)的胰腺上皮細(xì)胞中進(jìn)行差異豐度分析(A.R.Shekouh等，2003，Proteomics，3，1988-2001)。也已經(jīng)研究了惡性和非惡性前列腺組織中蛋白質(zhì)的豐度?？紤]就這方面所鑒定的蛋白質(zhì)，基本上沒(méi)有給出關(guān)于癌癥組織中列出的蛋白質(zhì)與健康組織中相比較可能過(guò)表達(dá)或表達(dá)不足的進(jìn)一步細(xì)節(jié)(A.A.Alaiya等，2001，Cell.Mol.Life Sci.，58，307-311)。
迄今為止的報(bào)道證明了用于腫瘤檢測(cè)的選擇性和靈敏方法的重要性。此外，非常需要分別用于腫瘤和癌癥治療的新靶物。
因此本發(fā)明涉及開(kāi)發(fā)用于癌癥診斷的新標(biāo)記物以及用于癌癥治療的新靶物和藥物的問(wèn)題。
這個(gè)問(wèn)題將通過(guò)獨(dú)立權(quán)利要求的技術(shù)方案來(lái)解決。優(yōu)選的實(shí)施方案在從屬權(quán)利要求中給出。通過(guò)引用參考，全部權(quán)利要求的措辭成為說(shuō)明書(shū)的完整部分。
通過(guò)惡性退化組織(癌組織)和正常組織之間的集中比較分析，可鑒定出在不同類型的組織中顯示明顯不同豐度和濃度的獨(dú)特的蛋白質(zhì)組。與對(duì)照相比較的某些蛋白質(zhì)的特征性豐度代表了退化細(xì)胞生長(zhǎng)，即癌組織的重要指標(biāo)。根據(jù)本發(fā)明，這些特定的蛋白質(zhì)被用作癌癥的診斷標(biāo)記物。
為了鑒定這些蛋白質(zhì)，制備來(lái)自腫瘤組織(前列腺癌)和健康組織的樣品，兩個(gè)樣品用兩種不同的放射性同位素標(biāo)記。匯集樣品，混合物通過(guò)在雙向聚丙烯酰胺凝膠上電泳來(lái)分離。單獨(dú)檢測(cè)每個(gè)同位素的信號(hào)，進(jìn)一步分析相應(yīng)的蛋白質(zhì)點(diǎn)。這個(gè)方法鑒定和定量在癌癥或健康組織中明顯具有不同豐度的幾個(gè)獨(dú)特蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)中的一些在癌組織中明顯是更豐富的，其被上調(diào)，而另一些以明顯較低的豐度存在，它們被下調(diào)。
本發(fā)明涵蓋蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白，特別是膜聯(lián)蛋白A3作為癌癥的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。本發(fā)明人能夠證明這個(gè)蛋白質(zhì)在來(lái)自明確集合的患者的腫瘤組織中平均被上調(diào)2.4倍，而在某些情況下上調(diào)超過(guò)5倍。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，膜聯(lián)蛋白A3可因此被用作前列腺癌的特定亞型(患者群)的診斷標(biāo)記。因此這個(gè)蛋白質(zhì)相對(duì)于對(duì)照的上調(diào)被優(yōu)選研究作為癌組織的特征性指標(biāo)。膜聯(lián)蛋白是在存在鈣時(shí)結(jié)合磷脂并形成鈣孔的結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白質(zhì)家族的成員。迄今為止膜聯(lián)蛋白的精確功能尚不完全清楚。
有跡象表明膜聯(lián)蛋白參與胞內(nèi)和胞外過(guò)程。但是仍然未知膜聯(lián)蛋白如何被分泌，例如膜交通、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性Ca2+流入和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。例如，它們沒(méi)有用于轉(zhuǎn)移進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔的經(jīng)典前導(dǎo)序列。但是可在小分泌泡，所謂的核外體中發(fā)現(xiàn)膜聯(lián)蛋白，因此推測(cè)膜聯(lián)蛋白借助于核外體的裂解到達(dá)細(xì)胞的外側(cè)。所述囊泡的裂解可導(dǎo)致腫瘤中修飾抗原的呈遞。一般，核外體涉及免疫系統(tǒng)中抗原的呈遞，其涉及MHC類I/T-細(xì)胞系統(tǒng)。
有趣的是，膜聯(lián)蛋白參與骨礦化(Wang W.Xu J.，Kirsch T 2003 J.Biol.Chem.2003，2783762-9)。膜聯(lián)蛋白-介導(dǎo)的Ca2+流入調(diào)節(jié)生長(zhǎng)面軟骨細(xì)胞成熟和細(xì)胞凋亡。這是特別顯著的，因?yàn)榍傲邢侔┑霓D(zhuǎn)移與其他癌癥類型相比通常產(chǎn)生高頻率的成骨細(xì)胞骨病變。大多數(shù)癌癥轉(zhuǎn)移以其溶骨活性為特征，這意味著骨的退化。相比之下，前列腺癌轉(zhuǎn)移顯示破壞骨(破壞性)以及成骨(增殖)活性。在這種情況下，正常的骨結(jié)晶體解構(gòu)，然后再建立為不規(guī)則的骨沉積物。即使對(duì)這個(gè)機(jī)制只有很少的了解，礦質(zhì)化的生理學(xué)過(guò)程扮演重要的角色。礦質(zhì)化由礦質(zhì)化成骨細(xì)胞的質(zhì)膜分泌的小泡，所謂的基質(zhì)小泡引起。在早期階段，磷酸鈣的晶體在基質(zhì)小泡內(nèi)側(cè)出現(xiàn)。這些小泡被膜覆蓋；因此通道蛋白是為轉(zhuǎn)運(yùn)礦物質(zhì)進(jìn)入小泡所必需的。小泡的重要成分是蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A2、A5和A6以及小泡外表面上結(jié)合膜聯(lián)蛋白A5以粘附至小泡外表面的膠原II和X型。膜聯(lián)蛋白通過(guò)基質(zhì)小泡的膜形成通道，其容許Ca2+進(jìn)入小泡內(nèi)部。結(jié)合膜聯(lián)蛋白A5的膠原擴(kuò)增通道活性，并與其他膜聯(lián)蛋白一起介導(dǎo)Ca2+的快速流入以及小泡內(nèi)最初結(jié)晶相的形成。這導(dǎo)致礦質(zhì)化的起始。當(dāng)胞內(nèi)晶體已經(jīng)達(dá)到臨界大小，其破壞膜并裂解小泡。晶體進(jìn)一步生長(zhǎng)(礦質(zhì)化的生長(zhǎng)階段)并促進(jìn)骨的建立。根據(jù)本發(fā)明人的結(jié)果，由前列腺癌轉(zhuǎn)移造成的骨的不規(guī)則礦質(zhì)化中膜聯(lián)蛋白的這個(gè)功能推測(cè)與癌組織中膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)相關(guān)。在本文中，必須考慮無(wú)機(jī)焦磷酸酶，根據(jù)本發(fā)明人的結(jié)果，這個(gè)酶釋放磷酸，并且在癌癥，特別是前列腺癌中被上調(diào)。從癌細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)可得出結(jié)論，膜聯(lián)蛋白A3在前列腺癌細(xì)胞的核外體中具有生物功能。這可能是由于離子通道的關(guān)系。蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3的優(yōu)選應(yīng)用涉及核外體中蛋白質(zhì)的活性。優(yōu)選地，這導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞免疫學(xué)控制的變化。由于膜聯(lián)蛋白A3的細(xì)胞外濃度在腫瘤細(xì)胞附近是更高的，親合試劑-特別是對(duì)膜聯(lián)蛋白A3具有高親合力的抗體-適于指向類似于鄰近腫瘤的毒素或放射性化合物的活性物質(zhì)。這種藥品不會(huì)通過(guò)細(xì)胞膜，以使得只表達(dá)胞內(nèi)膜聯(lián)蛋白A3的健康細(xì)胞不受到影響。有趣的是，也已經(jīng)觀察到基質(zhì)小泡與骨關(guān)節(jié)炎軟骨和動(dòng)脈粥樣硬化損傷相關(guān)。
核外體裂解后發(fā)生的細(xì)胞質(zhì)蛋白釋放進(jìn)入胞外介質(zhì)可誘導(dǎo)與細(xì)胞壞死相似的炎癥反應(yīng)。已知炎癥可減少已知表征許多癌細(xì)胞的適應(yīng)性T-細(xì)胞-導(dǎo)致的免疫應(yīng)答。此外，胞外空間中膜聯(lián)蛋白的存在也可影響這個(gè)模式(A.Bonanza等，2004 J.Exp.Med.200 1157-65)。因此可通過(guò)了解和影響這個(gè)系統(tǒng)確定針對(duì)癌癥的疫苗接種。
應(yīng)用膜聯(lián)蛋白A3的特別優(yōu)選的實(shí)施方案涉及該蛋白質(zhì)的上調(diào)和膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2和/或膜聯(lián)蛋白A5的同時(shí)下調(diào)。優(yōu)選地這與對(duì)照比較進(jìn)行。最近已經(jīng)證實(shí)在癌組織，特別是前列腺癌中膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2和膜聯(lián)蛋白A5被下調(diào)。因此結(jié)合分析一種或多種其他的膜聯(lián)蛋白的下調(diào)和膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)是特別有益的。根據(jù)這些結(jié)果，在前列腺癌發(fā)生期間膜聯(lián)蛋白A3可替代其他的膜聯(lián)蛋白，因此是用于前列腺癌治療的替代標(biāo)記物或靶物。
本發(fā)明也涵蓋蛋白質(zhì)泛素異肽酶T和/或蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。有利的是，與對(duì)照相比較泛素異肽酶T的下調(diào)和/或蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)的上調(diào)應(yīng)被用作癌癥組織的特征性標(biāo)記物。本發(fā)明人證明與健康組織相比較癌癥組織中泛素異肽酶T的豐度平均低了5-6倍，而PDI的豐度高大約2倍。這證明PDI和泛素異肽酶T之間的逆相關(guān)。
泛素異肽酶是連同其他酶一起涉及蛋白質(zhì)的泛素依賴的蛋白水解切割的酶。在向靶蛋白質(zhì)加入聚泛素鏈后，該泛素化的蛋白質(zhì)被由多個(gè)亞基組成的蛋白質(zhì)復(fù)合物，26S蛋白酶體降解。隨后通過(guò)鋅-結(jié)合泛素酶異肽酶T介導(dǎo)聚泛素鏈的去除。因此泛素異肽酶T的下調(diào)可影響前列腺癌中泛素導(dǎo)致的蛋白水解的速度，或特異蛋白質(zhì)的降解速率。而且如泛素異肽酶T PDI涉及蛋白質(zhì)的控制水解，即細(xì)胞凋亡過(guò)程。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)部，PDI在某些條件下與具有泛素樣結(jié)構(gòu)域和泛素締合結(jié)構(gòu)域的泛素相互作用。這種相互作用與獲得對(duì)缺血性應(yīng)力和細(xì)胞凋亡的耐受力功能性相關(guān)(Ko H.S.，等，2002，J.Biol.Chem.27735386-92)。
兩個(gè)酶與細(xì)胞凋亡的關(guān)系使得對(duì)其上調(diào)或下調(diào)的觀察適合作為癌組織的特征性標(biāo)記物。另一方面，只分析一個(gè)蛋白質(zhì)，特別是作為診斷標(biāo)記物的泛素異肽酶T的豐度可能是有利的。很大的優(yōu)點(diǎn)是，癌組織中泛素異肽酶被顯著下調(diào)，并顯示只有健康對(duì)照中豐度的大約1/5至大約1/6。所觀察到的癌組織中泛素-異肽酶T的豐度減少比起被識(shí)別為抗-致癌物的哺乳動(dòng)物脂肪酸-結(jié)合蛋白(M-FABP)來(lái)說(shuō)是更顯著的。
膜聯(lián)蛋白通過(guò)MHC(主要組織相容性復(fù)合物)抗原呈遞借助于泛素-異肽酶T和由于前列腺組織中缺少含有免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的SAP，通過(guò)全身免疫系統(tǒng)的變化活性來(lái)影響T-細(xì)胞活性之間的可能聯(lián)系對(duì)于免疫系統(tǒng)存在時(shí)腫瘤細(xì)胞的存活可能是極為重要的。
本發(fā)明也涵蓋線粒體烯?；?輔酶A-水合酶作為癌癥的診斷標(biāo)記物和/或作為治療靶分子的用途。這個(gè)蛋白也可與脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)和/或表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)和/或膜聯(lián)蛋白A3組合使用。給出的特別優(yōu)選是與對(duì)照相比較進(jìn)行線粒體烯?；?輔酶A-水合酶和/或表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)的上調(diào)和/或脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)和/或膜聯(lián)蛋白A3的下調(diào)，因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明這些蛋白質(zhì)的這種上調(diào)/下調(diào)揭示為癌組織的特征性特點(diǎn)。
本發(fā)明人已經(jīng)能夠顯示癌組織中線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶具有平均增加大約2.8至4倍的豐度。已經(jīng)描述這個(gè)酶與脂肪酸的β-氧化協(xié)同，并且這主要發(fā)生在線粒體中。烯?；?輔酶A-水合酶參與非氧化的代謝作用。長(zhǎng)久以來(lái)已知即使存在氧過(guò)量時(shí)，癌細(xì)胞仍具有增加的、非氧化代謝，并且癌癥患者中脂肪酸的氧化和重新合成都增加。在本文中列出的癌癥伴隨脂肪酸代謝的許多變化。最近負(fù)責(zé)脂肪酸重新合成的脂肪酸合酶已經(jīng)被建議作為治療性的藥物學(xué)靶物。提供的結(jié)果顯示烯酰基-輔酶A-水合酶是相似的適合靶物。以脂肪酸代謝的這個(gè)聯(lián)系代表了烯酰基-輔酶A-水合酶和FABP-3及E-FABP之間的功能性聯(lián)系。癌組織中這些脂肪酸-結(jié)合蛋白的豐度也被特征性地改變。FABP-3大致下調(diào)2.5倍，而E-FABP大致上調(diào)2.3倍。除與脂肪酸的聯(lián)系之外，已經(jīng)描述了FABP-3在與細(xì)胞循環(huán)控制的關(guān)系中的作用(Seidita G.等2000，Carcinogenesis 212203-10)。已經(jīng)描述了E-FABP與不同類型癌癥的關(guān)系，并且已經(jīng)在癌癥患者的尿中被檢測(cè)到(Brouard M.C.等2002，Melanoma-Research 12627-31)。由本發(fā)明人所觀察到的這個(gè)蛋白質(zhì)豐度的增加使得當(dāng)與其他的標(biāo)記物線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶和/或FABP-3和/或膜聯(lián)蛋白A3組合時(shí)，其特別適合作為癌癥的診斷標(biāo)記物，因?yàn)樵谶@些不同的蛋白質(zhì)之間存在功能性聯(lián)系。因此，與對(duì)照相比較，可觀察一個(gè)或特別有利地是觀察兩個(gè)或三個(gè)這些蛋白質(zhì)的豐度，以使得通過(guò)這些蛋白質(zhì)特征性的上/下調(diào)，可得到關(guān)于癌組織存在的結(jié)論。如此后將指明的，與脂肪酸代謝的聯(lián)系也被應(yīng)用于在此描述的更多蛋白質(zhì)。
本發(fā)明也涵蓋蛋白質(zhì)血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)作為癌癥的診斷標(biāo)記物或治療劑的用途。本發(fā)明人能夠顯示癌組織中這個(gè)蛋白平均揭示其發(fā)生率減少大約2.7至5.1倍。SAP主要存在于良性前列腺組織的間質(zhì)細(xì)胞中，使得其在癌組織中相對(duì)較低的發(fā)生率可解釋為癌組織中相對(duì)較少數(shù)量的間質(zhì)細(xì)胞。因此與對(duì)照相比較SAP下調(diào)的研究特別適合作為癌組織的特征性特點(diǎn)。SAP是正五聚蛋白家族的凝集素類似的急性期蛋白質(zhì)(來(lái)自小鼠的結(jié)果)，并且與幾個(gè)淀粉狀蛋白的臨床現(xiàn)象有關(guān)聯(lián)。有時(shí)在男性泌尿系統(tǒng)中觀察到淀粉狀蛋白的沉積，但很少對(duì)其有生物學(xué)的了解。超越淀粉狀蛋白小纖維而正確折疊的天然SAP也借助于酸碳水化合物決定簇、磷酸乙醇胺和磷酸膽堿結(jié)合多糖，包括細(xì)菌多糖和基質(zhì)成分。SAP是簡(jiǎn)單膜的構(gòu)成成分，并且可能引起其與層粘連蛋白和磷脂的相互作用。它參與經(jīng)進(jìn)化的或全身性免疫系統(tǒng)的吞噬細(xì)胞，例如多形核白細(xì)胞的靶識(shí)別，結(jié)合凋亡細(xì)胞上的磷脂，導(dǎo)致經(jīng)巨噬細(xì)胞的其吞噬作用。長(zhǎng)久以來(lái)已知惡性人血清中的SAP水平增加，并且至少在一些癌癥患者的血清中，IL-6似乎對(duì)此負(fù)責(zé)?？偠灾?，可推測(cè)SAP參與非癌細(xì)胞與其環(huán)境相互作用的調(diào)節(jié)和可能的免疫監(jiān)測(cè)，這一功能可能在許多癌細(xì)胞中受到干擾。正五聚蛋白可通過(guò)細(xì)胞因子被誘導(dǎo)，其在血液中的濃度在感染和創(chuàng)傷期間顯著升高，因此它們?cè)诿庖叻烙邪l(fā)揮作用。提供的觀察結(jié)果暗示了膜聯(lián)蛋白A3、泛素異肽酶T和血清-淀粉狀蛋白P-成分之間在前列腺免疫監(jiān)測(cè)中導(dǎo)致通過(guò)核外體而改變免疫監(jiān)測(cè)調(diào)節(jié)的聯(lián)系。
本發(fā)明也涵蓋蛋白質(zhì)14-3-3蛋白τ(tau)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途。已知這個(gè)蛋白質(zhì)參與凋亡過(guò)程。已經(jīng)描述這個(gè)過(guò)程與癌癥相關(guān)，但建立了抗-致癌物的狀態(tài)(He H.1997，Gan-To-Kagaku-Ryoho 241448-53)。然而，本發(fā)明人已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)癌組織中增加水平的14-3-3蛋白質(zhì)τ(1.8倍)。免疫組化學(xué)染色反應(yīng)已經(jīng)揭示14-3-3蛋白質(zhì)τ主要存在于健康的上皮細(xì)胞和前列腺組織的癌細(xì)胞中。然而在間質(zhì)中，蛋白質(zhì)14-3-3τ只存在于淋巴細(xì)胞(只有淋巴細(xì)胞被染色)中。因此根據(jù)本發(fā)明，與對(duì)照相比較研究該蛋白質(zhì)的上調(diào)作為癌組織的表征性特點(diǎn)。
本發(fā)明也涵蓋蛋白質(zhì)核氯離子通道蛋白(CLIC-1)作為癌癥，特別是前列腺癌的診斷標(biāo)記物的用途。本發(fā)明人證實(shí)與對(duì)照相比較在癌組織中，這個(gè)蛋白質(zhì)的豐度增加大約1.5倍。因此優(yōu)選與對(duì)照相比較研究這個(gè)蛋白質(zhì)的上調(diào)作為癌組織的表征性特點(diǎn)。已經(jīng)描述這個(gè)細(xì)胞內(nèi)陰離子通道與細(xì)胞分裂和凋亡相關(guān)(Ashley R.H.，2003，Mol.Membr.Biol.201-11)。
此外，本發(fā)明涵蓋蛋白質(zhì)HES1作為癌癥的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。本發(fā)明人可證明與對(duì)照相比癌組織中這個(gè)蛋白質(zhì)的豐度是大約4倍高。T-檢驗(yàn)中相應(yīng)上調(diào)的概率的p-值＜0.0001。優(yōu)選與對(duì)照相比較的這個(gè)蛋白質(zhì)的上調(diào)被考慮是癌癥疾病的特征性標(biāo)記物。這個(gè)蛋白質(zhì)是具有未知功能的特定拼接變體(HES1/Kpn-la)。它包含DJ1-Pfdl-結(jié)構(gòu)域；推測(cè)其位于線粒體，這可表明與烯?；?輔酶A-水合酶功能的可能聯(lián)系。這個(gè)蛋白質(zhì)在許多人組織中表達(dá)。其與癌癥的關(guān)系已經(jīng)被發(fā)明人首次證明。
此外，本發(fā)明涵蓋蛋白酶體α2-亞基作為癌癥的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。對(duì)于這個(gè)蛋白質(zhì)與癌癥疾病的關(guān)系已經(jīng)被發(fā)明人首次證明。在癌組織中與對(duì)照相比較豐度加倍。這個(gè)蛋白質(zhì)的癌癥-相關(guān)變化的t-檢驗(yàn)是顯著的，p＜0.009。優(yōu)選與對(duì)照相比較檢驗(yàn)這個(gè)蛋白質(zhì)的上調(diào)。已知蛋白酶體在加工用于MHC 1類系統(tǒng)抗原呈遞的肽中發(fā)揮功能，這促進(jìn)了殺傷t細(xì)胞的活性。
此外，本發(fā)明涵蓋蛋白質(zhì)腺嘌呤-磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶作為癌癥，特別是前列腺癌的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。最近已經(jīng)論述了這個(gè)蛋白質(zhì)與癌癥的關(guān)系。例如已經(jīng)描述了乳腺癌患者的淋巴細(xì)胞中這個(gè)蛋白的下調(diào)。此外，已經(jīng)觀察到這個(gè)蛋白質(zhì)在結(jié)腸直腸癌中的過(guò)表達(dá)。本發(fā)明人可證明與對(duì)照相比較，前列腺癌組織中這個(gè)蛋白質(zhì)的豐度是大約2倍高。這些結(jié)果在t-檢驗(yàn)中對(duì)于差異表達(dá)是顯著的，p＜0.007。根據(jù)本發(fā)明，與對(duì)照比較這個(gè)蛋白質(zhì)的上調(diào)被考慮為癌組織的特征性標(biāo)記物。
此外，本發(fā)明涵蓋蛋白質(zhì)無(wú)機(jī)焦磷酸酶作為癌癥，特別是前列腺癌的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用。最近已經(jīng)顯示這個(gè)蛋白質(zhì)在肺癌和結(jié)腸直腸癌中的上調(diào)。本發(fā)明人可證明與正常組織相比較，前列腺癌組織中這個(gè)蛋白質(zhì)的豐度是1.6倍高。這些結(jié)果在t-檢驗(yàn)中對(duì)于差異表達(dá)是顯著的，p＜0.005。無(wú)機(jī)焦磷酸酶1催化釋放無(wú)機(jī)磷酸的反應(yīng)。這涉及其中膜聯(lián)蛋白，特別是膜聯(lián)蛋白A3參與Ca2+流動(dòng)的鈣化過(guò)程。因此特別地在膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)和無(wú)機(jī)焦磷酸酶的上調(diào)之間存在功能性的聯(lián)系。
在此參考的多種蛋白質(zhì)以及下文中進(jìn)一步提及的蛋白質(zhì)可被單獨(dú)用于診斷目的或與其他蛋白質(zhì)組合。
此外，本發(fā)明涵蓋下列蛋白質(zhì)中的至少一種作為癌癥的診斷標(biāo)記物的應(yīng)用泛素-異肽酶T、血清淀粉狀蛋白P成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素-1、熱休克蛋白27(HSP27)、14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ(zeta)、核氯離子通道蛋白1(CLIC-1)、14-3-3蛋白質(zhì)τ、熱休克蛋白90(HSP 90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶、核磷蛋白、膜聯(lián)蛋白、特別是膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶、醛縮酶A HES1、蛋白酶體的α2-亞基、腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶。優(yōu)選與對(duì)照相比較，蛋白質(zhì)異肽酶T、血清淀粉狀蛋白P成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素-1、微精液蛋白(microseminoprotein)β、熱休克蛋白27(HSP27)或轉(zhuǎn)凝蛋白中至少一種的下調(diào)被考慮是癌癥疾病的特征性標(biāo)記物。此外優(yōu)選與對(duì)照相比較，蛋白質(zhì)14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ、核氯離子通道蛋白1(CLIC-1)、14-3-3蛋白質(zhì)τ、熱休克蛋白90(HSP 90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶、核磷蛋白、膜聯(lián)蛋白、特別是膜聯(lián)蛋白3、磷酸丙糖異構(gòu)酶、醛縮酶A、HES1、蛋白酶體的α2-亞基、腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶和無(wú)機(jī)焦磷酸酶1中至少一種附加或選擇的上調(diào)被考慮是癌癥疾病的特征性標(biāo)記物。特別優(yōu)選的方式是，除這些蛋白質(zhì)中的一種或多種外，研究其他膜聯(lián)蛋白下調(diào)。特別優(yōu)選地是研究至少兩種蛋白質(zhì)。
通過(guò)應(yīng)用下列蛋白質(zhì)中的兩種作為診斷標(biāo)記物來(lái)提供特別的益處泛素-異肽酶T、熱休克蛋白27(HSP27)、熱休克蛋白90(HSP90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶和/或核磷蛋白。
根據(jù)本發(fā)明已經(jīng)證實(shí)，一組獨(dú)特蛋白質(zhì)的表達(dá)分別被特征性地下-或上調(diào)。詳細(xì)內(nèi)容顯示在概括鑒定和定量在良性和惡性組織之間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)結(jié)果的下列表1中。蛋白質(zhì)的選擇基于良性(良性部分)或惡性組織(癌部分)中蛋白質(zhì)的統(tǒng)計(jì)顯著差異表達(dá)分析。登錄號(hào)是指NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中各自的編號(hào)。理論分子量(MW)是從數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列計(jì)算的?！胺e分”是指用MASCOT技術(shù)確定的采樣數(shù)。關(guān)于PMF-積分給出的詳細(xì)內(nèi)容是指由MASCOT-服務(wù)器使用的Mouse-積分；一般PMF-積分超過(guò)65代表顯著的同一性。最后兩列概括了在良性和惡性組織樣品中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)點(diǎn)的強(qiáng)度定量。
表1
本文中我們參考圖5和

圖10，其中以表格形式顯示伴隨有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的21個(gè)患者和31個(gè)患者的平均顯著差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)結(jié)果。
不同蛋白的英文同義詞縱覽如下所列。前面所列的號(hào)碼相應(yīng)于表1中的編號(hào)。
1.gi|1732411泛素-異肽酶T；異肽酶T(SioT)；泛素特異的蛋白酶5；泛素羧基-末端水解酶5；泛素硫酯酶5；泛素特異的加工蛋白酶5；脫泛素化酶5；脫泛素酶。
2.gi|576259血清-淀粉狀蛋白P-成分；鏈A；血清淀粉狀蛋白P成分(SAP)。
3.gi|494781脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)；乳腺衍生的生長(zhǎng)抑制劑(MDGI)；脂肪酸結(jié)合蛋白3(FABP-3)；心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)；肌肉型脂肪酸結(jié)合蛋白(M-FABP)。
4.gi|4504981半乳凝素；半乳凝素-1；kDaβ-半乳糖苷-結(jié)合凝集素；β半乳糖苷可溶凝集素；β-半乳糖苷結(jié)合凝集素1-14-1；半乳素；可溶半乳糖苷結(jié)合凝集素；S-Lac凝集素1。
5.gi|225159Microsamine蛋白β；β-microseralnoprotein；微精液蛋白β；免疫球蛋白結(jié)合因子(IGBF)；PN44；前列腺分泌的精清蛋白；94個(gè)氨基酸的前列腺分泌蛋白(PSP-94)；精清β-抑制素；精清蛋白。
6.未鑒定。
7.gi/662841熱休克蛋白27(HSP27)；熱休克蛋白27；27kDa熱休克蛋白1(HSP-27)；應(yīng)力-應(yīng)答蛋白27(SRP237)；雌激素-調(diào)節(jié)的24kDa蛋白；28kDa熱休克蛋白。
8.gi|450794914-3-3蛋白β；14-3-3蛋白β(14-3-3β)；14-3-3蛋白α(14-3-3α)；蛋白激酶C抑制劑蛋白-1；PKC抑制劑蛋白-1(KCIP-1也為14-3-3ζ)；RNH-1。
9.gi|450795314-3-3蛋白ζ；14-3-3ζ；14-3-3σ；KCIP-1(也為14-3-3β)；YWHAZ；線粒體輸入刺激因子S1(MSF S1)；因子活化外酶S；酪氨酸單加氧酶活化蛋白ζ；色氨酸單加氧酶活化蛋白ζ。
10.gi|2073569核氯離子通道蛋白；氯胞內(nèi)通道1(CLIC-1)；核氯離子通道蛋白(p64CLCP)；核氯通道；氯通道ABP；核氯離子通道27(NCC27)；RNCC蛋白；核氯離子通道27(NCC27)。
11.未鑒定。
12.(膜聯(lián)蛋白A3，見(jiàn)23)。
13.gi|580322714-3-3蛋白質(zhì)τ；14-3-3θ；S15076蛋白激酶調(diào)節(jié)子14-3-3；HS1；酪氨酸5-單加氧酶活化蛋白；色氨酸3-單加氧酶活化蛋白。
14.gi|13129150熱休克蛋白90(HSP90)；熱休克蛋白90(HSP0-90)；熱休克蛋白HSP 90-α；熱休克蛋白90-α；90kDa熱休克蛋白；熱休克蛋白86(HSP86)；Hspca；熱休克90kDa蛋白1；熱休克蛋白1；腫瘤特異的移植86kDa抗原(TSTA)。
15.gi|20070125蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)；蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)；脯氨?；?4-羥化酶β；蛋白質(zhì)二硫鍵氧化還原酶；甲狀腺激素結(jié)合蛋白p55；谷胱甘肽(glutathlone)胰島素轉(zhuǎn)氫酶。
16.gi|4557581表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)；脂肪酸結(jié)合蛋白5(FABP-5)；表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)；牛皮癬-相關(guān)的脂肪酸-結(jié)合蛋白(PA-FABP)；皮膚脂肪酸-結(jié)合蛋白(C-FABP)；角化細(xì)胞酸-結(jié)合蛋白(KLBP)；DA11。
17.gi|2707570線粒體烯?；?輔酶-A-水合酶；線粒體烯?；o酶A水合酶；線粒體烯?；?CoA-水合酶；短-鏈烯酰基-CoA水合酶，線粒體；短-鏈烯酰基輔酶A水合酶(SCEH)。
18.gi|6307090核磷蛋白；核磷蛋白；核仁磷蛋白B23；核仁蛋白NO38；核基質(zhì)蛋白；NPM(1)。
19.gi|7768772HES1蛋白，大腸桿菌和斑馬魚(yú)ES1蛋白的同系物；抗-σ交叉-反應(yīng)蛋白同系物Iα前體，KNP-la/Kpn-1α，GT335(類似于大腸桿菌SCRP27A和斑馬魚(yú)ES1[人類]。
20.gi|4506181蛋白酶體α2-亞基；蛋白酶體亞基HC3，蛋白酶體成分C3；macropain亞基C3；多催化內(nèi)肽酶復(fù)合物亞基C3[人類]。
21.gi|4502171腺嘌呤-磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶；AMP焦磷酸化酶；AMP二磷酸化酶；轉(zhuǎn)磷酸核糖苷酶。
22.gi|11056044無(wú)機(jī)焦磷酸酶；cylosolic無(wú)機(jī)焦磷酸酶；無(wú)機(jī)焦磷酸酶1；焦磷酸酶磷酸-水解酶[人類]。
此外，鑒定在某些患者集合中與對(duì)照相比較在癌組織中上-或下調(diào)的四個(gè)以上蛋白質(zhì)(成簇分析)。這些是蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶和醛縮酶A。在癌組織中膜聯(lián)蛋白A3上調(diào)大約5倍，轉(zhuǎn)凝蛋白下調(diào)大約5倍。磷酸丙糖異構(gòu)酶和醛縮酶A在癌組織中分別上調(diào)大約20％和10％。
在這個(gè)方面我們參考顯示成簇分析結(jié)果圖示的圖3。該附圖例證說(shuō)明了各自由圓形代表的某些患者群(或分別成簇)的癌組織中與健康組織中相比較不同蛋白質(zhì)的上-或下調(diào)。
膜聯(lián)蛋白和轉(zhuǎn)凝蛋白的英文同義詞如下23.gi|4826643膜聯(lián)蛋白A3；膜聯(lián)蛋白III；脂皮質(zhì)蛋白III；抗凝血蛋白III；胎盤(pán)抗凝血蛋白III(PAP III)；35α鈣介蛋白。
24.gi|4507359轉(zhuǎn)凝蛋白；SM22-α平滑肌蛋白、22Da肌動(dòng)蛋白-結(jié)合蛋白、平滑肌22蛋白、肌動(dòng)蛋白-締合的蛋白p27、25kDa F-肌動(dòng)蛋白-結(jié)合蛋白。
此外，鑒定在某些患者群的癌組織中與對(duì)照相比較顯示不同豐度水平(下或上調(diào))的更多蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)是ATP合酶、膽氯素還原酶B、葡萄糖-調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)、脯氨?；?4-水解酶β和dnak-樣分子伴侶。ATP合酶下調(diào)，其他蛋白上調(diào)。
有趣的是，我們鑒定的許多蛋白質(zhì)涉及脂類代謝。已經(jīng)報(bào)道了膜聯(lián)蛋白A3和SAP與脂類的直接結(jié)合。兩個(gè)蛋白質(zhì)都涉及吞噬作用。FABP-3和E-FABP是脂肪酸結(jié)合蛋白。線粒體烯?；?輔酶A水合酶涉及脂肪酸的β-氧化。與磷脂相互作用的磷脂酶誘導(dǎo)刺激HSP 27活性的蛋白激酶C。HSP 90也涉及磷脂代謝，因?yàn)镠SP 90的抑制導(dǎo)致磷脂代謝的變化(Chun Y.等，2003，J.Natl.Cancer Inst.951624-33)。此外，推測(cè)PDI也與脂類代謝相關(guān)，因?yàn)樗鳛槎喙δ艿鞍踪|(zhì)發(fā)揮作用，并且除此之外參與甘油三酸酯轉(zhuǎn)移(Horiuchi R.andYamauchi K.，1994，Nippon-Rinsho 52890-5)。而且14-3-3蛋白抑制蛋白激酶C，包含看起來(lái)類似于蛋白激酶C的假-底物結(jié)構(gòu)域和膜聯(lián)蛋白C-末端的保守序列。這表明那些不同蛋白質(zhì)之間的功能關(guān)系。
根據(jù)本發(fā)明診斷標(biāo)記物可用于鑒定不用類型的腫瘤和癌癥疾病。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，將被診斷的癌癥疾病是前列腺癌，特別是前列腺癌瘤。如早先提及的，前列腺體的癌瘤是男性中最普遍的惡性腫瘤。只有在早期階段被檢測(cè)到，前列腺癌才可通過(guò)預(yù)防性的手術(shù)切除前列腺體而被成功治療。如果疾病發(fā)展，并且不再限于一個(gè)器官，預(yù)防性的手術(shù)切除前列腺體是不足夠的。對(duì)于不能通過(guò)手術(shù)除去的前列腺腫瘤，可考慮抑制雄性激素。這種抑制，優(yōu)選伴隨手術(shù)或藥物的去雄有時(shí)可抑制腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移，并容許控制腫瘤特定的時(shí)間。但是不久大多前列腺腫瘤變得對(duì)這種內(nèi)分泌學(xué)治療有抗性。其他治療方式，例如細(xì)胞毒性試劑的應(yīng)用、基因治療或免疫治療仍然處于臨床研究，并且尚未成功。因此必須及早檢測(cè)前列腺體的腫瘤以能夠通過(guò)手術(shù)將其成功除去。根據(jù)本發(fā)明所描述的標(biāo)記蛋白為前列腺癌的早期檢測(cè)提供很大的益處。
在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，某些亞型的癌癥，特別是前列腺癌的亞型可通過(guò)定量?jī)?yōu)選的幾個(gè)上述蛋白質(zhì)而加以診斷。本發(fā)明人可證明通過(guò)所謂的成簇分析，獨(dú)特的蛋白質(zhì)模式反映相應(yīng)于獨(dú)特患者集合的不同蛋白質(zhì)的特征性上-或下調(diào)。屬于特定集合的患者全部都顯示癌癥，特別是前列腺癌的相同獨(dú)特亞型。根據(jù)本發(fā)明，預(yù)期患者將根據(jù)癌癥特定亞型與通過(guò)應(yīng)用本發(fā)明的方法所確定的蛋白質(zhì)模式的關(guān)系而被表征，以選擇性地治療這種亞型的癌癥。優(yōu)選應(yīng)分析規(guī)定的蛋白質(zhì)組合。在此方面，我們參考顯示相應(yīng)于不同患者集合的特征性蛋白模式圖示的圖3。圖4中的表格例證了分別代表不同患者集合和前列腺癌亞型的蛋白模式的概要。
為了診斷不同亞型的前列腺癌，應(yīng)優(yōu)選測(cè)定不同蛋白質(zhì)組合的豐度。因此下列中的至少一個(gè)應(yīng)被測(cè)定作為共同的癌癥標(biāo)記物核磷蛋白、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶、熱休克蛋白90、線粒體輔酶A水合酶的上調(diào)；熱休克蛋白27和/或泛素異肽酶T的下調(diào)。這些可與下列蛋白質(zhì)中的至少一個(gè)一起用于分析三種亞型的前列腺癌。
亞型a轉(zhuǎn)凝蛋白的上調(diào)；半乳凝素和微精液蛋白β的實(shí)質(zhì)性下調(diào)；脂肪酸結(jié)合蛋白3的下調(diào)；表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白沒(méi)有或較少變化，核氯離子通道蛋白、14-3-3蛋白β、ζ和τ、醛縮酶A、血清淀粉狀蛋白P成分、磷酸丙糖異構(gòu)酶和/或膜聯(lián)蛋白A3沒(méi)有或較少變化。
亞型b蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶、熱休克蛋白90的實(shí)質(zhì)性上調(diào)；泛素異肽酶T的實(shí)質(zhì)性下調(diào)；14-3-3蛋白β、ζ和τ、醛縮酶A、磷酸丙糖異構(gòu)酶、膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)；轉(zhuǎn)凝蛋白、半乳凝素、微精液蛋白β、血清淀粉狀蛋白P成分的下調(diào)；脂肪酸結(jié)合蛋白3和/或核氯離子通道蛋白沒(méi)有或較少變化。
亞型c核氯離子通道蛋白的實(shí)質(zhì)性上調(diào)；血清淀粉狀蛋白P成分的下調(diào)；脂肪酸結(jié)合蛋白3、14-3-3蛋白β、ζ和τ、醛縮酶A、磷酸丙糖異構(gòu)酶、膜聯(lián)蛋白A3、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白；微精液蛋白β、半乳凝素、轉(zhuǎn)凝蛋白沒(méi)有或較少變化。
根據(jù)本發(fā)明，為了診斷不同亞型的前列腺癌，可能分析至少與作為進(jìn)一步蛋白質(zhì)的膜聯(lián)蛋白A3組合的至少一個(gè)普通癌癥標(biāo)記物。
在另一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)唯一研究膜聯(lián)蛋白A3和/或線粒體烯?；?輔酶A-水合酶，可能診斷存在于特定患者群中的特異的前列腺癌亞型。
就所描述的蛋白質(zhì)作為診斷標(biāo)記物的本發(fā)明用途來(lái)說(shuō)，為了分析該蛋白質(zhì)在癌組織(或在被研究的組織中)中與對(duì)照組織相比較的發(fā)生率和豐度，其使用可由多種方法構(gòu)成。如果被研究樣品和對(duì)照樣品中的蛋白質(zhì)以凝膠電泳，例如在傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠上分離則是特別有利的。然后比較樣品和對(duì)照中給定蛋白質(zhì)的豐度。由于必要的分解，雙向凝膠是特別優(yōu)選的。然而，也可能在凝膠電泳分離前進(jìn)行預(yù)純化，使得用例如單向聚丙烯酰胺凝膠電泳獲得充分的分離和可分析性。其他的蛋白質(zhì)分離方法也可有利地使用，例如，傳統(tǒng)的色譜方法，特別是柱色譜法。如果待研究的樣品和對(duì)照樣品以不同的方式，例如使用不同的同位素標(biāo)識(shí)或標(biāo)記則是特別有利的。這有助于比較待研究樣品和對(duì)照中關(guān)于給定蛋白質(zhì)的豐度。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，質(zhì)譜檢驗(yàn)待分析的蛋白質(zhì)，以提供對(duì)該蛋白質(zhì)的精確鑒定。因此，例如表面增強(qiáng)的激光解析電離法(SELDI方法)可用于組織或體液制品。然而，可能有利的是使用體內(nèi)成像法，特別是電子發(fā)射斷層掃描(PET)。
待研究的蛋白質(zhì)也可借助于相反指向被研究的蛋白質(zhì)并且被用作診斷標(biāo)記物的分子來(lái)被定性和定量地表征。特別有利的方式是，該分子是抗體、特別是多克隆和/或單克隆抗體。然而，本發(fā)明也涵蓋此方面的全部已知的親合試劑。
為了定性以及特別是定量的鑒定，可使用常規(guī)的免疫測(cè)定，例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)。也可能使用免疫組化方法和/或蛋白芯片，例如SELDI方法。為了鑒定的目的，可例如研究體液或腫瘤組織?？贵w是特別適于鑒定膜聯(lián)蛋白A3、14-3-3蛋白質(zhì)β、τ和ζ和/或SAP。例如，pan抗-14-3-3 β/ζ單克隆抗體(Stressgen目錄號(hào)KAM-CC012C)染色上皮和癌細(xì)胞，以及間質(zhì)中的某些淋巴細(xì)胞。間質(zhì)，但不是上皮或癌細(xì)胞被針對(duì)蛋白質(zhì)血清-淀粉狀蛋白P成分(SAP)的單克隆抗體(Stressgen目錄號(hào)HYB 281-05，工作稀釋度1∶10)染色。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，診斷標(biāo)記物蛋白的定性和定量測(cè)量借助于寡核苷酸，例如在普通的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)期間進(jìn)行。PCR屬于選擇性擴(kuò)增確定的DNA-序列的分子遺傳學(xué)的方法學(xué)技能。該方法給出測(cè)試蛋白質(zhì)分別在DNA-或RNA-水平的定性或定量檢測(cè)。使用合適的寡核苷酸雜交測(cè)定，例如普通的Northern-或Southern印跡是可能的；它們也產(chǎn)生關(guān)于該蛋白質(zhì)在DNA-或RNA-水平的定性或定量信息。用寡核苷酸檢測(cè)的方法可容易地被自動(dòng)化，這是其優(yōu)勢(shì)之一。另一方面它們只遞送關(guān)于某些DNA-或RNA-序列豐度的信息，而不是關(guān)于相應(yīng)蛋白質(zhì)的真正豐度。在此情況下，必須保證在mRNA-水平獲得診斷標(biāo)記物蛋白質(zhì)的特征性上-和下調(diào)或該調(diào)節(jié)是否以轉(zhuǎn)錄后的水平發(fā)生。
根據(jù)本發(fā)明測(cè)定的不同標(biāo)記物蛋白質(zhì)豐度的特征性變化也影響各自蛋白質(zhì)的活性，例如其酶促活性。因此有利的是與對(duì)照相比較備選地或與其豐度平行測(cè)定該蛋白質(zhì)的活性。這也可通過(guò)術(shù)語(yǔ)各種蛋白質(zhì)的上-或下調(diào)來(lái)理解。可通過(guò)技術(shù)人員清楚了解的各自酶的普通酶促測(cè)試來(lái)進(jìn)行分別的測(cè)定。此外，可用脂肪酸-結(jié)合蛋白進(jìn)行結(jié)合測(cè)定或比較測(cè)試，以獲得分別關(guān)于其活性和其上-或下調(diào)的信息。對(duì)其他的蛋白質(zhì)進(jìn)行相同的測(cè)試，例如可測(cè)量核氯離子通道蛋白(CLIC-1)的通道活性。這可用于多種蛋白質(zhì)作為診斷標(biāo)記物的應(yīng)用或用于根據(jù)本發(fā)明下文中所描述的診斷試劑盒。此外，測(cè)量相應(yīng)蛋白質(zhì)的活性可用于測(cè)試本發(fā)明所述癌癥治療的藥物的效果，如下列所描述的在本發(fā)明用于檢驗(yàn)至少一種蛋白質(zhì)的所述應(yīng)用的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，分離例如來(lái)自患者材料的核外體，并分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。特別地測(cè)試相應(yīng)于核外體內(nèi)部至少一個(gè)蛋白質(zhì)的蛋白模式以確定一個(gè)或多個(gè)蛋白質(zhì)的診斷相關(guān)的上-和/或下調(diào)。用于從患者材料制備核外體的合適方法可用技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。
此外，本發(fā)明涵蓋包含用于測(cè)定根據(jù)本說(shuō)明書(shū)上述報(bào)道作為診斷標(biāo)記物的至少一種蛋白質(zhì)的活性和/或表達(dá)的至少一種化合物的診斷試劑盒。這個(gè)診斷試劑盒優(yōu)選用于測(cè)定下列蛋白質(zhì)中至少一個(gè)的活性和/或表達(dá)異肽酶T、血清淀粉狀蛋白P成分(SAP)、核氯離子通道蛋白通道1(CLIC-1)、線粒體烯?；?輔酶A水合酶和/或膜聯(lián)蛋白A3。重要的是，這種診斷試劑盒用于測(cè)定與對(duì)照相比較特征性上-或下調(diào)的這些蛋白質(zhì)中至少一個(gè)的各自豐度。第一和最初的豐度反映蛋白質(zhì)的表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明開(kāi)發(fā)的試劑盒優(yōu)選適合檢測(cè)或篩選癌癥疾病，特別是前列腺癌；它為這些疾病的早期診斷提供特殊的益處。例如這種試劑盒容許區(qū)別良性或健康組織和惡性組織，例如前列腺增生中的良性組織或前列腺癌。優(yōu)選這種試劑盒分別包含與一種或多種所描述的蛋白質(zhì)或相關(guān)核酸相互作用的一種或幾種抗體或一個(gè)或幾個(gè)寡核苷酸或寡核苷酸對(duì)。借助于這些化合物，可獲得關(guān)于該蛋白質(zhì)與對(duì)照相比較的定性以及特別是定量的信息。
待測(cè)試的樣品和對(duì)照取自相同的患者。例如組織樣品，或體液樣品，如血液、淋巴或尿通過(guò)技術(shù)人員熟知的方法取得和制備。優(yōu)選地，可能惡性的組織，即將被測(cè)試的樣品，和對(duì)照組織，即良性組織取自相同的患者并直接加以比較。另一方面可能比較各個(gè)蛋白質(zhì)的豐度和已經(jīng)從大量獨(dú)立對(duì)照樣品統(tǒng)計(jì)確定的其他標(biāo)準(zhǔn)。在前列腺癌的情況下，有利的是從已經(jīng)通過(guò)手術(shù)被除去前列腺的患者取良性和可能惡性的前列腺組織。來(lái)自前列腺增生的良性組織可用作對(duì)照。
此外，本發(fā)明涵蓋通過(guò)分析所描述蛋白質(zhì)中至少一種的豐度來(lái)診斷癌癥的方法。根據(jù)本發(fā)明癌組織中其上-和下調(diào)的分析結(jié)果傳遞了關(guān)于存在癌組織的信息。對(duì)于本發(fā)明方法的其他特征，我們參考上述說(shuō)明。
本發(fā)明也涵蓋與蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3相互作用且尤其影響，優(yōu)選抑制膜聯(lián)蛋白，特別是膜聯(lián)蛋白A3的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)，來(lái)生產(chǎn)治療前列腺癌，優(yōu)選特定的前列腺癌患者群的藥品的用途。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選該活性物質(zhì)與蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3相互直接作用，由此影響，優(yōu)選抑制其活性和/或豐度。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，有利的是該活性物質(zhì)與蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3可相互間接作用，其中該活性物質(zhì)是例如直接指向膜聯(lián)蛋白A3的活化劑、抑制劑、調(diào)節(jié)劑和/或生物前體。
在這個(gè)應(yīng)用的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該活性物質(zhì)是苯并二氮雜類型的至少一種衍生物(Hofmann等，1998，J.Biol.Chem.273(5)2885-94)。特別優(yōu)選的是BDA250(1，3-二氫-1-甲基-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮)、BDA452(3-(R，S)-(L-色氨酰基)-1，3-二氫-1-甲基-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮)和/或BDA753(3-(R，S)-all-L(NH-Trp-Gly-Tyr-Ala-H)-1，3-二氫-1-甲基-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮)。此外，優(yōu)選使用/應(yīng)用苯甲二氮(Diazepam)(7-氯-1，3-二氫-1-甲基-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮)。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選可使用衍生自這些物質(zhì)的其他分子。尤其涉及阻斷膜聯(lián)蛋白A3活性的那些分子。
特別優(yōu)選的方式是，膜聯(lián)蛋白A3-特異的抗體適合作為活性物質(zhì)，特別優(yōu)選的是治療性抗體。這些優(yōu)選阻斷抗體和/或放射性標(biāo)記的和/或毒素-標(biāo)記的抗體。放射性標(biāo)記的抗體可例如攜帶131I。這種抗體有利地使得可能進(jìn)行如技術(shù)人員已知的放射性免疫治療。然而，技術(shù)人員已知的任何其他試劑也適合作為活性物質(zhì)。
特別優(yōu)選的方式是，這種活性物質(zhì)可用于影響核外體中膜聯(lián)蛋白A3的活性和/或豐度。
影響膜聯(lián)蛋白A3的活性和/或表達(dá)的活性物質(zhì)，特別是顯示抑制效果的活性物質(zhì)，可有利地用于生產(chǎn)治療骨關(guān)節(jié)炎退化和/或動(dòng)脈粥樣硬化損傷的藥品。
此外，本發(fā)明涵蓋影響異肽酶T的活性和/或表達(dá)和/或蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)癌癥治療藥品的應(yīng)用。如先前描述的，癌組織中這些蛋白質(zhì)的豐度已經(jīng)特征性地改變。特別地泛素-異肽酶T的豐度是顯著降低的，而蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)的豐度增加。這些蛋白質(zhì)的表達(dá)或活性改變至對(duì)照組織中所示正常水平表示了治愈癌癥疾病的可能方式。因此要求保護(hù)增加泛素-異肽酶T的活性和/或豐度的活性物質(zhì)的用途。此外，要求保護(hù)抑制PDI活性和/或豐度的活性物質(zhì)的用途。通過(guò)這種活性物質(zhì)，所述蛋白的活性被調(diào)節(jié)至正常水平，以使得癌癥疾病可被有效治療。
本發(fā)明也涵蓋影響線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途。優(yōu)選這可與影響脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)和/或表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FAPB)組合進(jìn)行。優(yōu)選該使用由線粒體烯?；?輔酶A-水合酶和/或E-FABP的活性和/或豐度的抑制活性物質(zhì)，分別地FABP-3的活性和/或豐度的增加活性物質(zhì)構(gòu)成。
本發(fā)明也涵蓋影響以及特別是增加血清淀粉狀蛋白P成分(SAP)的活性豐度和/或定位的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途。已經(jīng)顯示，癌組織中SAP的定位可被改變。因此發(fā)明性地優(yōu)選通過(guò)使用至少一種活性物質(zhì)影響SAP的定位。該活性物質(zhì)可例如是包括膜聯(lián)蛋白A3的癌細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域和SAP的免疫反應(yīng)-影響結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。SAP是例如位于前列腺組織中的間質(zhì)細(xì)胞上，但不在健康的上皮細(xì)胞或轉(zhuǎn)化的癌細(xì)胞上。癌組織中膜聯(lián)蛋白A3是豐富的。也已知膜聯(lián)蛋白出現(xiàn)在細(xì)胞表面上。由于SAP作為蛋白成分參與免疫系統(tǒng)而癌細(xì)胞不從免疫系統(tǒng)被消除，癌細(xì)胞表面上SAP的免疫反應(yīng)-影響結(jié)構(gòu)域相對(duì)于癌細(xì)胞產(chǎn)生改變的免疫反應(yīng)。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-14-3-3蛋白質(zhì)τ的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)癌癥治療的藥品的應(yīng)用。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-核氯離子通道蛋白1(CLIC-1)的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)癌癥治療，特別是前列腺癌治療的藥品的應(yīng)用。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-HES1的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)癌癥治療的藥品的應(yīng)用。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-蛋白酶體α2-亞基的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)癌癥治療，特別是前列腺癌治療的藥品的應(yīng)用。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)前列腺癌治療的藥品的應(yīng)用。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-特別是核外體中無(wú)機(jī)焦磷酸酶的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)前列腺癌治療的藥品的應(yīng)用。
此外本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選刺激-下列蛋白質(zhì)中至少一種的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)前列腺癌治療的藥品的應(yīng)用泛素-異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素-1、微精液蛋白β、熱休克蛋白27(HP27)和轉(zhuǎn)凝蛋白。此外，本發(fā)明涵蓋影響-優(yōu)選抑制-下列蛋白質(zhì)中至少一種的活性和/或表達(dá)的至少一種活性物質(zhì)用于開(kāi)發(fā)癌癥治療的藥品的應(yīng)用14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ、核氯離子通道蛋白1(CLIC-1)、14-3-3蛋白質(zhì)τ、熱休克蛋白90(HSP 90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、輔酶A水合酶、核磷蛋白、膜聯(lián)蛋白、特別是膜聯(lián)蛋白A3、磷酸丙糖-異構(gòu)酶、醛縮酶A、蛋白酶體α-2-亞基、腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶和無(wú)機(jī)焦磷酸酶。給出的特別優(yōu)選是相對(duì)于至少兩個(gè)不同蛋白質(zhì)的兩個(gè)或多個(gè)活性物質(zhì)的組合。此外，優(yōu)選該活性物質(zhì)與增加特別是核外體中膜聯(lián)蛋白A1、A2、A4、A7和/或A10活性和/或豐度的一種或一種以上的這些活性物質(zhì)一起使用。
根據(jù)本發(fā)明對(duì)于這些蛋白質(zhì)中的每一個(gè)，證明與對(duì)照相比較它們?cè)诎┙M織中被特征性上-或下調(diào)。因此，根據(jù)本發(fā)明要求保護(hù)通過(guò)各自的活性物質(zhì)相反下-或上調(diào)這些蛋白質(zhì)，以獲得活性，特別是健康組織的酶促活性，或抑制和/或殺死癌細(xì)胞。這使得成功治療各種癌癥成為可能。特別優(yōu)選生產(chǎn)用于治療前列腺癌，優(yōu)選特異的前列腺癌亞型的藥品。
根據(jù)本發(fā)明所使用的活性物質(zhì)可以是肽、蛋白質(zhì)、小分子化合物或多核苷酸。具有影響不同蛋白質(zhì)的活性和/或表達(dá)的已知機(jī)制的已知活性物質(zhì)被考慮作為新的活性物質(zhì)。這些活性物質(zhì)直接尋址所描述的蛋白質(zhì)。另一方面如果這些活性物質(zhì)尋址這些不同蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)劑，特別是活化劑或抑制劑和/或生物前體，則可能是有利的。取決于某些活性物質(zhì)是否發(fā)揮抑制或刺激各自蛋白質(zhì)的活性和/或表達(dá)的作用，它們可以是激動(dòng)劑或拮抗劑。拮抗劑的進(jìn)一步實(shí)例是可通過(guò)遺傳工程構(gòu)建的缺陷或顯性失活突變體。它們顯示沒(méi)有酶促活性，但它們競(jìng)爭(zhēng)將被抑制的蛋白質(zhì)或酶的各自底物，這導(dǎo)致該蛋白質(zhì)活性的降低。拮抗劑的另一個(gè)實(shí)例是可通過(guò)已知的方式降低特定蛋白質(zhì)表達(dá)的反義-分子。激動(dòng)劑可以是促進(jìn)特定基因表達(dá)或促進(jìn)mRNA翻譯成為活性基因產(chǎn)物的物質(zhì)。這可能是特異的轉(zhuǎn)錄因子，或調(diào)節(jié)所提及的蛋白表達(dá)水平的相似化合物。特別地，小分子化合物可有利地用于這個(gè)目的。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，活性物質(zhì)可以是作為抑制抗體可減少或阻斷給定蛋白質(zhì)，優(yōu)選膜聯(lián)蛋白A3的活性的治療性抗體。該治療性抗體的特征還在于例如，攜帶毒性或放射性標(biāo)記，僅僅通過(guò)與例如膜聯(lián)蛋白A3相互作用而將所述標(biāo)記帶至癌細(xì)胞。這可在例如放射性免疫治療期間使用攜帶放射性標(biāo)記，例如131I的抗體。根據(jù)本發(fā)明，活性物質(zhì)可以是分子量(MW)＜1000、抑制膜，優(yōu)選核外體和/或基質(zhì)小泡中離子通道活性的小分子化合物。
為了增加所描述蛋白質(zhì)，特別是異肽酶T、FABP-3、半乳凝素-1、微精液蛋白β、HSP27和轉(zhuǎn)凝蛋白的活性，可使用具有相當(dāng)或相似酶促活性的化合物。此外，所存在的酶分子的活性可通過(guò)各自的化合物誘導(dǎo)或增加。另一方面可能使用適合誘導(dǎo)或增加意味著相應(yīng)酶促分子合成的表達(dá)的活性物質(zhì)。該活性物質(zhì)也可尋址酶或其他蛋白質(zhì)的確定前體分子、調(diào)節(jié)劑、活化劑或抑制劑。
此外，如果激素或具有相似效果的物質(zhì)以所需要的方式影響各自蛋白質(zhì)的活性，則可使用其作為活性物質(zhì)。例如類似于黃體酮的分子可用于抑制烯酰基-輔酶A水合酶。
在本發(fā)明應(yīng)用的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，活性物質(zhì)是至少一種蛋白質(zhì)其本身泛素-異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素-1、微精液蛋白β、熱休克蛋白27(HSP27)和/或轉(zhuǎn)凝蛋白。本發(fā)明人可證明這些蛋白質(zhì)的豐度在癌組織中是更低的，因此根據(jù)本發(fā)明旨在使用該蛋白質(zhì)本身作為活性物質(zhì)用于刺激其活性和/或表達(dá)。為了這個(gè)目的，可使用單個(gè)的蛋白質(zhì)或優(yōu)選幾個(gè)不同蛋白質(zhì)的組合。此外，預(yù)期這些蛋白質(zhì)的部分，例如衍生自該蛋白質(zhì)的肽或分子可用作本發(fā)明所述的活性物質(zhì)。
在本發(fā)明應(yīng)用的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，一種或多種有效物質(zhì)可作為核外體遞送，或該活性物質(zhì)的應(yīng)用可通過(guò)核外體介導(dǎo)。這可優(yōu)選特別通過(guò)調(diào)節(jié)T-細(xì)胞應(yīng)答來(lái)影響患者的免疫應(yīng)答。核外體是優(yōu)選通過(guò)造血細(xì)胞分泌的膜-包被囊泡。已知例如小鼠中，通過(guò)樹(shù)突狀細(xì)胞產(chǎn)生的核外體刺激有效的抗-腫瘤應(yīng)答。
根據(jù)本發(fā)明通過(guò)應(yīng)用活性物質(zhì)來(lái)治療癌癥，可有益地獲得腫瘤發(fā)育或生長(zhǎng)的降低或抑制，和/或腫瘤的轉(zhuǎn)移可部分地減少或完全避免。
此外，本發(fā)明涵蓋包含至少一種上述活性物質(zhì)和至少一種藥物學(xué)上可接受載體的藥物組合物。對(duì)于涉及藥物組合物或活性物質(zhì)的細(xì)節(jié)，我們參考上述說(shuō)明。合適的藥物學(xué)上可接受的載體是技術(shù)人員清楚了解的。
此外，本發(fā)明涵蓋通過(guò)應(yīng)用至少一種所描述的活性物質(zhì)來(lái)治療癌癥疾病，例如前列腺癌的方法。對(duì)于這個(gè)癌癥治療方法的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，我們參考上述說(shuō)明。
對(duì)于所施用的活性物質(zhì)，可使用不同方式的給藥，例如，口服、靜脈內(nèi)、局部或借助吸入給藥。各自的配方是技術(shù)人員已知的。給藥方式依賴于待治療的疾病以及毫無(wú)疑問(wèn)取決于患者的身體素質(zhì)。細(xì)節(jié)是技術(shù)人員熟知的。
最后，本發(fā)明涵蓋尋求用于癌癥治療，特別是前列腺癌治療的活性物質(zhì)的方法。使用這個(gè)方法，將使用可選自下列的至少一種蛋白質(zhì)泛素-異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素、微精液蛋白β、熱休克蛋白27(HSP27)、14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ、核氯離子通道蛋白1(CLIC-1)、14-3-3蛋白質(zhì)τ、熱休克蛋白90(HSP90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶、核磷蛋白、膜聯(lián)蛋白，特別是膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶、醛縮酶A、HES1、蛋白酶體的α2-亞基、腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶和無(wú)機(jī)焦磷酸酶1。優(yōu)選有利的是異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、核氯離子通道蛋白1(CLIC-1)、14-3-3蛋白質(zhì)τ、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶和/或膜聯(lián)蛋白A3。此外可使用這些蛋白質(zhì)的衍生物，特別是已經(jīng)通過(guò)分子生物學(xué)方法產(chǎn)生的該蛋白質(zhì)的同源序列或突變形式。此外可使用這些蛋白質(zhì)各自的部分或亞區(qū)域或多種蛋白質(zhì)和/或其衍生物的組合。該方法的實(shí)施是技術(shù)人員熟知的，例如蛋白質(zhì)或其衍生物可用合適的表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)。借助于這個(gè)系統(tǒng)，可研究與潛在配體，特別是抑制劑或活化劑的相互作用。例如雙雜交系統(tǒng)適合于研究這些相互作用。
本發(fā)明所描述的特征和進(jìn)一步特點(diǎn)從優(yōu)選實(shí)施方案的下列說(shuō)明聯(lián)系以下權(quán)利要求和附圖可清楚了解。單個(gè)的特征可單獨(dú)或相互組合識(shí)別。
實(shí)施例為了鑒定本發(fā)明所述的相關(guān)蛋白質(zhì)，檢查兩個(gè)患者群(組A23個(gè)患者，組B33個(gè)患者)的組織樣品。在各個(gè)情況下制備癌組織和對(duì)照組織，并經(jīng)受雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳(2D-PAGE)。在pH 4-7和pH 6-11進(jìn)行等電聚焦。來(lái)自組A的兩個(gè)患者的凝膠電泳結(jié)果不適于進(jìn)一步的分析。就另兩個(gè)患者來(lái)說(shuō)，在pH 6-11的結(jié)果不是令人滿意的。因此，可能評(píng)估21個(gè)患者在pH范圍4-7，和19個(gè)患者在pH范圍6-11的結(jié)果。來(lái)自組B兩個(gè)患者在pH 4-7的結(jié)果不適于進(jìn)一步的分析。因此，可評(píng)估在pH范圍4-7的31個(gè)患者的全部結(jié)果。
在各個(gè)情況下每個(gè)患者的兩個(gè)不同樣品用混合的不同同位素標(biāo)記，并在單個(gè)的雙向聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離。然后相互獨(dú)立地檢測(cè)各個(gè)同位素的信號(hào)，以使得可直接比較兩種組織樣品的蛋白質(zhì)樣品(ProteoTope-技術(shù))。
對(duì)于放射性標(biāo)記樣品的蛋白質(zhì)分析數(shù)量(＜1μg)的最后鑒定，與相同樣品未標(biāo)記蛋白質(zhì)的制備數(shù)量(＞200μg)一起在制備性凝膠中分離。切下銀染制備性凝膠的相關(guān)蛋白質(zhì)點(diǎn)，用胰蛋白酶酶促消化，通過(guò)Bruker Biflex或Ultra-Flex上基質(zhì)輔助的飛行質(zhì)譜激光解吸電離時(shí)間(MALDI-TOF MS)來(lái)鑒定。部分地進(jìn)行電噴射電離離子陷阱質(zhì)譜(ESI-MS)(Bruker Esquire)。
通過(guò)這個(gè)方法，多種蛋白質(zhì)得以鑒定，其特異地顯示與對(duì)照組織相比較，癌組織中豐度的相應(yīng)上調(diào)或下調(diào)。
對(duì)于這些分析，部分地形成其中研究不同蛋白質(zhì)豐度的特定患者群。在這個(gè)所謂的成簇分析中(Clustan Graphics 6.4)，測(cè)定來(lái)自組A的3個(gè)患者群和來(lái)自組B的2個(gè)患者群，其在各自的情況下，揭示特征性的蛋白質(zhì)表達(dá)/豐度模式。借助于這個(gè)方法，鑒定對(duì)于特異的患者顯示特征性豐度的蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖-異構(gòu)酶和醛縮酶A。
組織樣品在prostectomy后，從患者獲得健康的前列腺組織和惡性的前列腺組織。篩選患者的PSA(前列腺特異的抗原)，并通過(guò)超聲波掃描證實(shí)腫瘤。在手術(shù)前得到每個(gè)患者的首肯。
切除后，前列腺體被立即轉(zhuǎn)移至無(wú)菌盒并冷卻。制備0.5-1cm厚度的組織切片并分為左右兩半。將其嵌入冷凍基質(zhì)并休克冷凍。剩余的前列腺體固定在甲醛溶液中，根據(jù)常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)一步加以處理。為了制備組織樣品，取前列腺體兩側(cè)的薄切片，并用蘇木精曙紅染色。這些切片儲(chǔ)存在-80℃?zhèn)溆?。從無(wú)腫瘤的區(qū)域取對(duì)照組織樣品并相同處理。
樣品制備蛋白質(zhì)用含有2％SDS，0.1M Tris pH8.8的100μl沸騰溶液裂解，用雙金雞寧酸方法測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。
分別用125I或131I碘化，根據(jù)常規(guī)方案(Cahill等，2003 RapidCommunication in Mass Spectrometry 171283-1290)進(jìn)行雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳和數(shù)據(jù)分析。放射性碘購(gòu)買自Amersham Bioscience(Freiburg，德國(guó))。用等濃度的125I或131I分別進(jìn)行碘化反應(yīng)。
聚丙烯酰胺凝膠電泳為了加樣到聚丙烯酰胺凝膠上，混合相同數(shù)量的標(biāo)記樣品(癌組織和對(duì)照組織)蛋白質(zhì)。為了在pH 4-7和6-11的范圍等電聚焦(IEF)，樣品在共同的樣品緩沖液中稀釋，并加載到18cm pH-梯度(IPG)條(Amersham Bioscience)上。蛋白質(zhì)的IEF第一向分離通過(guò)2D-PAGE在Multiphor設(shè)備(Amersham Bioscience)上進(jìn)行。第二向(SDS-PAGE)在ISO-DALT設(shè)備(Hfer)上進(jìn)行。凝膠在80μM塑料膜上干燥、制成薄片，進(jìn)行兩種放射性同位素信號(hào)的最后測(cè)量。
使用分析不同放射性同位素的選擇方法，可獲得來(lái)自不同樣品的蛋白質(zhì)的定量多色差異顯示。因此，在一個(gè)凝膠上分離的蛋白質(zhì)點(diǎn)的積累強(qiáng)度的直接比較可用于進(jìn)一步的分析。單個(gè)凝膠上的分析提供使得兩個(gè)或多個(gè)凝膠當(dāng)中變化的系統(tǒng)誤差不相關(guān)的優(yōu)點(diǎn)。最大可能的誤差來(lái)源是用任一個(gè)同位素標(biāo)記時(shí)的不同化學(xué)當(dāng)量。這可通過(guò)進(jìn)行凝膠的相反標(biāo)記來(lái)排除，即對(duì)照樣品和癌癥樣品用任一個(gè)同位素各自標(biāo)記并相反比較。使相反標(biāo)記步驟的蛋白表達(dá)模式相匹配，因此完成定量標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助的方法，以不同的顏色(藍(lán)色或橙色)可視觀察不同同位素的信號(hào)，從而樣品當(dāng)中豐度的一致差異以相應(yīng)于用于標(biāo)記的同位素的一種或兩種顏色顯示。關(guān)于這個(gè)方法學(xué)的細(xì)節(jié)在Cahill等.，2003 Rapid Communications in Mass Spectrometry 171283-1290中提及。
成像分析蛋白質(zhì)表達(dá)的差異分析是以所描述的聚丙烯酰胺-凝膠中蛋白質(zhì)點(diǎn)的可靠差異定量為基礎(chǔ)的。對(duì)于定量成像分析，使用由本發(fā)明人進(jìn)行特殊改進(jìn)的軟件Phoretix 2D Advanced(Nonlinear Dynamics)。
通過(guò)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)原則上使用質(zhì)譜的兩種不同方法。另一方面，高豐度蛋白質(zhì)的快速和可靠鑒定借助于具有MALDI-TOF MS的肽質(zhì)譜指紋。極低豐度蛋白質(zhì)的鑒定利用耗費(fèi)更多時(shí)間的ESI-Ion-Trap-MS/MS或MALDI-TOF-TOF方法進(jìn)行?？偠灾邢掳x擇蛋白點(diǎn)的凝膠塊，凝膠塊中的蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化。首先通過(guò)具有MALDI-TOF MS的肽質(zhì)譜指紋分析所得到的溶液。對(duì)于不能如此被明確鑒定的蛋白質(zhì)點(diǎn)，進(jìn)行基于MALDI-TOF-TOF或LC-ESI-Ion-Trap-MS/MS的較慢片段化分析。這些方法的詳細(xì)描述可在Vogt等，2003，MolecularCellular Proteomic 2795中找到。
蛋白質(zhì)的鑒定對(duì)于蛋白質(zhì)的鑒定，已經(jīng)通過(guò)質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)的其肽質(zhì)譜利用NCBI-數(shù)據(jù)庫(kù)分析。這用程序MASCOT 1.9版(Matrix Science，London，UK)進(jìn)行。
定量的成像分析定量分析利用已經(jīng)通過(guò)圖像矩陣每個(gè)像素的放射成像光電倍增管記錄的數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行。蛋白質(zhì)點(diǎn)的限制借助于軟件Phoretix 2DAdvanced(Nonlinear Dynamics)限定，在減去合適的背景信號(hào)后，累積點(diǎn)區(qū)域內(nèi)的像素結(jié)果?；谒a(chǎn)生的完整數(shù)據(jù)，進(jìn)行所檢測(cè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的細(xì)致定量。表1概括了這些結(jié)果。
圖1和圖2分別顯示在pH 4-7(圖1)和第二種情況下在pH 6-11(圖2)等電聚焦后所選擇點(diǎn)的位置。
圖例說(shuō)明圖1具有分離蛋白質(zhì)的雙向聚丙烯酰胺凝膠的圖像。在pH 4-7進(jìn)行等電聚焦。通過(guò)數(shù)字標(biāo)記的蛋白質(zhì)點(diǎn)顯示其豐度分別不同于癌性組織和對(duì)照組織的那些蛋白質(zhì)。該數(shù)字引用表格1中的數(shù)字。
圖2具有分離蛋白質(zhì)的雙向聚丙烯酰胺凝膠的呈現(xiàn)。在pH 6-11進(jìn)行等電聚焦。通過(guò)數(shù)字標(biāo)記的蛋白質(zhì)點(diǎn)顯示其豐度分別不同于癌性組織和對(duì)照組織的那些蛋白質(zhì)。該數(shù)字指向表格1中的數(shù)字。
圖3表征獨(dú)特患者集合，即前列腺癌獨(dú)特亞型的蛋白質(zhì)表達(dá)模式的圖表呈現(xiàn)。統(tǒng)計(jì)顯著的p＜0.01結(jié)果以黑色描繪，t-檢驗(yàn)p-值為0.01＜p＜0.1的結(jié)果以灰色描繪。不同簇內(nèi)具有不同表達(dá)的蛋白質(zhì)顯示在框中。
圖4與良性(健康)相比較，患者集合1至3中蛋白質(zhì)表達(dá)不同水平的表格表示。該數(shù)據(jù)是指癌組織中伴隨標(biāo)準(zhǔn)差的蛋白質(zhì)點(diǎn)的大小相對(duì)于總體積的蛋白質(zhì)點(diǎn)(良性+惡性)的百分比。t-檢驗(yàn)概率代表兩種給定集合的點(diǎn)分?jǐn)?shù)分布是顯著差異的可能性。超過(guò)99％概率的t-檢驗(yàn)結(jié)果以粗體印刷。概率低于95％的結(jié)果以淺灰色印刷。
圖5該表格列出基于雙色ProteoTope分析，比較良性(健康)和惡性組織，在所有患者中具有顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)?！癗o.Obs.代表其中可觀察到點(diǎn)的患者的編號(hào)。良性組織(良性部分)和惡性組織(癌癥部分)的具有標(biāo)準(zhǔn)誤差的點(diǎn)-分?jǐn)?shù)是指總體積的蛋白質(zhì)點(diǎn)(良性+惡性)的百分比。t-檢驗(yàn)概率代表當(dāng)考慮全部的患者時(shí)，良性組織中點(diǎn)分?jǐn)?shù)分布顯著不同于癌組織中分布的可能性。在t-檢驗(yàn)概率達(dá)到至少99％的條件下選擇點(diǎn)。
圖6具有來(lái)自組B的14個(gè)患者的分離蛋白質(zhì)的雙向聚丙烯酰胺凝膠的呈現(xiàn)。對(duì)照樣品和癌組織樣品都用131I和125I標(biāo)記并相反比較。不同的同位素信號(hào)在各自情況下以另外的顏色(藍(lán)色/橙色)成為可見(jiàn)的，以使得在各個(gè)顏色的樣品之間如終存在蛋白質(zhì)豐度的差異，作為所選同位素標(biāo)記的功能。
圖7表示利用B組實(shí)施例的Proteo-Tope測(cè)量值的精度和統(tǒng)計(jì)顯著性的圖表a.再現(xiàn)用125I和131I標(biāo)記的凝膠的差異豐度比率M的差異和其算術(shù)平均數(shù)之間的比率的Bland和Altman圖，b.再現(xiàn)用125I和131I標(biāo)記的凝膠的差異豐度比率M的差異和強(qiáng)度A的算術(shù)平均數(shù)之間的比率的圖，c.再現(xiàn)用125I和131I標(biāo)記的凝膠的差異豐度比率M和強(qiáng)度A之間的比率的MA圖，其中M＝log2·(I2/I1)和A＝0.5·log2·(I1·I2)(I＝測(cè)量的強(qiáng)度)。
圖8Volcano曲線圖，顯示來(lái)自癌癥和健康組織相反檢測(cè)標(biāo)記蛋白質(zhì)的平均強(qiáng)度之間的區(qū)別。
圖9Pavlidis模板相配分析的圖表，就來(lái)自B組的癌癥患者來(lái)說(shuō)，其提供兩個(gè)亞組的蛋白質(zhì)豐度比率模式。一個(gè)組由22個(gè)患者組成，同時(shí)另一個(gè)與其顯著不同的組由9個(gè)患者組成。該蛋白質(zhì)的編號(hào)相應(yīng)于圖10表格中的編號(hào)。在22個(gè)患者的亞組中，在膜聯(lián)蛋白A3(蛋白質(zhì)14)的相對(duì)豐度中存在顯著差異。就患者14、11、10、21、3、1、6、22、23、7、4、19和27來(lái)說(shuō)，惡性前列腺組織中該蛋白質(zhì)比患者29、28、32、15、31、24、25、30和33中更豐富。
圖10顯示來(lái)自全部31個(gè)患者(B組)、具有22個(gè)和9個(gè)患者的組的差異分析的蛋白質(zhì)點(diǎn)的表格(通過(guò)Pavlidis模板相配分析獲得)。登錄號(hào)相應(yīng)于來(lái)自NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的編號(hào)。利用MASCOT技術(shù)獲得積分。相應(yīng)于PMF積分的指標(biāo)與MASCOT服務(wù)器所使用的mouse積分相關(guān)，并且一般，超過(guò)65的PMF積分代表明顯的等同。通過(guò)LC/MS/MS確定帶星號(hào)蛋白質(zhì)的身份。給出帶有標(biāo)準(zhǔn)誤差的癌性組織平均點(diǎn)分?jǐn)?shù)作為總點(diǎn)量(健康的+惡性的)的百分比。也給出這個(gè)模型的P值。表格中的標(biāo)桿給出了標(biāo)明的患者組中良性(深藍(lán)色)和癌性(淺橙色)樣品中各個(gè)蛋白質(zhì)的平均豐度百分比。
權(quán)利要求
1.蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3作為前列腺癌的診斷標(biāo)記物的用途。
2.權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于它涉及前列腺癌特異亞型。
3.權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)。
4.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于研究與膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2和/或膜聯(lián)蛋白A5的下調(diào)相結(jié)合的膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)。
5.與蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3相互作用并特別影響，優(yōu)選抑制蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療前列腺癌、優(yōu)選特定前列腺癌患者群的藥品的用途。
6.權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是激動(dòng)劑、拮抗劑、缺陷性突變體、顯性失活突變體和/或反義分子。
7.權(quán)利要求5或6所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是抗體，優(yōu)選是治療性抗體。
8.權(quán)利要求5至7中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是至少一種苯并二氮雜衍生物，優(yōu)選BDA250和/或BDA452。
9.權(quán)利要求5至8中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于核外體中蛋白質(zhì)膜聯(lián)蛋白A3的活性和/或豐度受到影響。
10.權(quán)利要求5至9中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是用于抑制膜、優(yōu)選核外體和/或基質(zhì)小泡中離子通道活性的分子量(MW)＜1000的“小分子化合物”。
11.蛋白質(zhì)線粒體烯?；?輔酶A-水合酶作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途。
12.權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶的上調(diào)。
13.蛋白質(zhì)泛素-異肽酶T和/或蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途。
14.權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的泛素-異肽酶T的下調(diào)和/或蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)的上調(diào)。
15.蛋白質(zhì)血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途。
16.權(quán)利要求15所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)的下調(diào)。
17.蛋白質(zhì)-核氯離子通道蛋白作為前列腺癌的診斷標(biāo)記物的用途。
18.權(quán)利要求17所述的用途，其特征在于當(dāng)與對(duì)照相比較時(shí)研究核氯離子通道蛋白的上調(diào)。
19.蛋白質(zhì)HES1作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途。
20.權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的HES1的上調(diào)。
21.蛋白酶體α2-亞基作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途。
22.權(quán)利要求21所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的蛋白酶體α2-亞基的上調(diào)。
23.蛋白質(zhì)腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶作為前列腺癌的診斷標(biāo)記物的用途。
24.權(quán)利要求23所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶的上調(diào)。
25.蛋白質(zhì)無(wú)機(jī)焦磷酸酶作為前列腺癌的診斷標(biāo)記物的用途。
26.權(quán)利要求25所述的用途，其特征在于研究與對(duì)照相比較的無(wú)機(jī)焦磷酸酶的上調(diào)。
27.蛋白質(zhì)泛素-異肽酶T和血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途，其中優(yōu)選研究與對(duì)照相比較的所述蛋白質(zhì)的下調(diào)。
28.選自泛素-異肽酶T、熱休克蛋白27(HSP27)、熱休克蛋白90(HSP90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶和核磷蛋白的至少兩種蛋白質(zhì)作為癌癥的診斷標(biāo)記物的用途，其中研究與對(duì)照相比較的泛素-異肽酶T和/或熱休克蛋白27(HSP27)的下調(diào)、和/或熱休克蛋白90(HSP90)、蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶和/或核磷蛋白的上調(diào)。
29.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)的用途，其特征在于該癌癥是前列腺癌。
30.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)的用途，其特征在于通過(guò)研究癌癥的一種或多種蛋白質(zhì)亞型，特別是前列腺癌被診斷。
31.權(quán)利要求30所述的用途，其特征在于研究與選自血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素、微精液蛋白β、14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ、核氯離子通道蛋白、14-3-3蛋白質(zhì)τ、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶和醛縮酶A的至少一種蛋白質(zhì)組合的權(quán)利要求28所述的至少一種蛋白質(zhì)，發(fā)生的研究為與對(duì)照相比較SAP的無(wú)或較小改變、FABP-3的下調(diào)、半乳凝素的強(qiáng)烈下調(diào)、微精液蛋白β的強(qiáng)烈下調(diào)、14-3-3蛋白質(zhì)β的無(wú)或較小變化、14-3-3蛋白質(zhì)ζ的無(wú)或較小變化、核氯離子通道蛋白的無(wú)或較小變化、14-3-3蛋白質(zhì)τ的無(wú)或較小變化、E-FABP的無(wú)或較小變化、膜聯(lián)蛋白A3的無(wú)或較小變化、轉(zhuǎn)凝蛋白的上調(diào)、磷酸丙糖異構(gòu)酶的無(wú)或較小變化和/或醛縮酶A的無(wú)或較小變化。
32.權(quán)利要求30所述的用途，其特征在于研究與選自血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素、微精液蛋白β、14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ、核氯離子通道蛋白、14-3-3蛋白質(zhì)τ、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶和醛縮酶A的至少一種蛋白質(zhì)組合的權(quán)利要求28所述的至少一種蛋白質(zhì)，發(fā)生的研究為與對(duì)照相比較PDI的強(qiáng)烈上調(diào)、HSP90的強(qiáng)烈上調(diào)、泛素-異肽酶T的強(qiáng)烈下調(diào)、SAP的下調(diào)、FABP-3的無(wú)或較小變化、半乳凝素的下調(diào)、微精液蛋白β的下調(diào)、14-3-3蛋白質(zhì)β的上調(diào)、14-3-3蛋白質(zhì)ζ的上調(diào)、14-3-3蛋白質(zhì)τ的上調(diào)、核氯離子通道蛋白的無(wú)或較小變化、膜聯(lián)蛋白A3的上調(diào)、轉(zhuǎn)凝蛋白的下調(diào)、磷酸丙糖異構(gòu)酶的上調(diào)和/或醛縮酶A的上調(diào)。
33.權(quán)利要求30所述的用途，其特征在于研究與選自血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、半乳凝素、微精液蛋白β、14-3-3蛋白質(zhì)β、14-3-3蛋白質(zhì)ζ、核氯離子通道蛋白、14-3-3蛋白質(zhì)τ、表皮脂肪酸-結(jié)合蛋白(E-FABP)、膜聯(lián)蛋白A3、轉(zhuǎn)凝蛋白、磷酸丙糖異構(gòu)酶和醛縮酶A的至少一種蛋白質(zhì)組合的權(quán)利要求28所述的至少一種蛋白質(zhì)，發(fā)生的研究為與對(duì)照相比較SAP的下調(diào)、FABP-3的無(wú)或較小變化、半乳凝素的無(wú)或較小變化、微精液蛋白β的無(wú)或較小變化、14-3-3蛋白質(zhì)β的無(wú)或較小變化、14-3-3蛋白質(zhì)ζ的無(wú)或較小變化、核氯離子通道蛋白的強(qiáng)烈上調(diào)、14-3-3蛋白質(zhì)τ的無(wú)或較小變化、E-FABP的無(wú)或較小變化、膜聯(lián)蛋白A3的無(wú)或較小變化、轉(zhuǎn)凝蛋白的無(wú)或較小變化、磷酸丙糖異構(gòu)酶的無(wú)或較小變化和/或醛縮酶A的無(wú)或較小變化。
34.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于借助于聚丙烯酰胺凝膠電泳、特別是雙向凝膠電泳、質(zhì)譜、正電子-輻射斷層攝影術(shù)(PRT)、抗體、ELISA、免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)芯片和/或寡核苷酸，特別是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)來(lái)檢測(cè)至少一種蛋白質(zhì)。
35.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于分離核外體和/或分析研究至少一種蛋白質(zhì)。
36.診斷試劑盒，包括用于檢測(cè)選自泛素-異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、核氯離子通道蛋白、線粒體烯?；?輔酶A-水合酶和膜聯(lián)蛋白A3的至少一種蛋白質(zhì)的活性和/或豐度的至少一種物質(zhì)，來(lái)鑒定癌癥疾病，特別是前列腺癌。
37.影響泛素-異肽酶T和蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途，其中優(yōu)選該活性物質(zhì)增加泛素-異肽酶T的活性和/或豐度和/或該活性物質(zhì)抑制蛋白質(zhì)-二硫鍵-異構(gòu)酶(PDI)的活性和/或豐度。
38.影響蛋白質(zhì)線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途。
39.權(quán)利要求38所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)抑制線粒體烯?；?輔酶A-水合酶的活性和/或豐度。
40.影響以及特別是增加蛋白質(zhì)血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)的活性、豐度和/或定位的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途。
41.影響，特別是抑制蛋白質(zhì)核氯離子通道蛋白的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療前列腺癌的藥品的用途。
42.影響，特別是抑制蛋白質(zhì)HES1的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途。
43.影響，特別是抑制蛋白酶體α2-亞基的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療癌癥的藥品的用途。
44.影響，特別是抑制腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療前列腺癌的藥品的用途。
45.影響，特別是抑制蛋白質(zhì)無(wú)機(jī)焦磷酸酶的活性和/或豐度的至少一種活性物質(zhì)用于生產(chǎn)治療前列腺癌的藥品的用途。
46.權(quán)利要求37至45中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述癌癥是前列腺癌，優(yōu)選是特定的前列腺癌亞型。
47.權(quán)利要求37至46中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述活性物質(zhì)是激動(dòng)劑、拮抗劑、缺陷性突變體、顯性失活突變體和/或反義分子。
48.權(quán)利要求37至47中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是抗體，優(yōu)選是治療性抗體。
49.權(quán)利要求37至48中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是用于抑制膜、優(yōu)選核外體和/或基質(zhì)小泡中離子通道活性的分子量(MW)＜1000的“小分子化合物”。
50.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)是選自泛素-異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、脂肪酸-結(jié)合蛋白3(FABP-3)、膜聯(lián)蛋白A3、半乳凝素、微精液蛋白β、熱休克蛋白27(HSP27)和轉(zhuǎn)凝蛋白的至少一種蛋白質(zhì)。
51.前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)所述的用途，其特征在于該活性物質(zhì)以核外體的形式提供。
52.藥物組合物，包括前述權(quán)利要求中之一項(xiàng)所述的至少一種活性物質(zhì)和至少一種藥物學(xué)上可接受的載體。
53.尋求用于治療癌癥的活性物質(zhì)的方法，其特征在于使用選自泛素-異肽酶T、血清-淀粉狀蛋白P-成分(SAP)、核氯離子通道蛋白、14-3-3蛋白質(zhì)τ、線粒體烯酰基-輔酶A-水合酶、膜聯(lián)蛋白A3、HES1、蛋白酶體α2-亞基、腺嘌呤-磷酸核糖基-轉(zhuǎn)移酶和無(wú)機(jī)焦磷酸酶的至少一種蛋白質(zhì)和/或至少一種其衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及多種蛋白質(zhì)作為癌癥疾病的診斷標(biāo)記物的用途。特別地，膜聯(lián)蛋白A3蛋白質(zhì)的用途是優(yōu)選的。優(yōu)選與對(duì)照比較分析膜聯(lián)蛋白A3的增加調(diào)節(jié)。本發(fā)明也涉及生產(chǎn)用于癌癥治療的藥品的活性物質(zhì)的用途，所述物質(zhì)影響多種特征蛋白質(zhì)的活性和/或豐度。
文檔編號(hào)G01N33/574GK101027099SQ200580011377
公開(kāi)日2007年8月29日 申請(qǐng)日期2005年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月16日
發(fā)明者M·卡希爾, H·克洛克, H·羅加特施 申請(qǐng)人:蛋白質(zhì)系統(tǒng)股份公司