專利名稱：一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法。
背景技術(shù)：
Tau蛋白存在于正常腦組織神經(jīng)元軸突中，具有合成和穩(wěn)定神經(jīng)元細(xì)胞骨骼的作用，又稱微管結(jié)合蛋白(Microtubulue Association Protein，MAP)。Tau蛋白是一種細(xì)胞內(nèi)成分，故在血液或血清中找不到Tau蛋白，在腦脊液中的濃度極低。癡呆患者(AD)腦脊液中Tau蛋白水平顯著升高，Tau蛋白可能來自死亡的或退化變性的神經(jīng)細(xì)胞。1998年Galasko等定量檢測82例早期AD和60例非癡呆對照者腦脊液中Tau蛋白，結(jié)果顯示，早期AD組(663±481pg/ml)顯著高于對照組(387±167pg/ml)，約為健康對照組及其它神經(jīng)系統(tǒng)疾病對照組的2倍。Arai等的研究表明檢測腦脊液中Tau蛋白對AD的診斷特異性為95％，靈敏度為91.2％。因此關(guān)于Tau蛋白在AD早期診斷中的作用研究倍受關(guān)注。
更令人感興趣的是，對那些認(rèn)知功能輕微有損害，但程度又達不到AD診斷標(biāo)準(zhǔn)的老年人，測定并追蹤觀察他們腦脊液中Tau蛋白水平，可幫助人們判斷是否為AD，或可預(yù)示以后會不會發(fā)展成AD。這在目前AD還沒有特效預(yù)防與治療方法的情況下，盡早診斷，盡早采取措施，減緩病情的發(fā)展，以獲得最大療效，至關(guān)重要。
已報道的腦脊液Tau蛋白水平，臨界值范圍從1pg/ml到600pg/ml不等，Tau蛋白在正常人(即使在AD病人)腦脊液中的含量極低。這樣低的含量水平，為腦脊液中Tau蛋白的檢測帶來困難。目前報道的有關(guān)腦脊液中Tau蛋白含量的數(shù)據(jù)，均采用酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，Elisa)檢測的結(jié)果。
酶聯(lián)免疫法是一種選擇性好、靈敏度極高的生化檢測方法，始見于1971年，瑞典學(xué)者Engvall和Perlmann，荷蘭學(xué)者Van Weeman和Schuurs分別報道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗。1993年，Vandemeeren等首先將ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)，用于測定AD患者CSF(腦脊液)中Tau蛋白的含量。近年來在國際上普遍采用該方法測定腦脊液中Tau蛋白，已有比利時Innogenetics公司生產(chǎn)的INNOTEST hTau-Antigen sandwich ELISA試劑盒，美國Biosource International公司生產(chǎn)的Tau(Total)ELISA(KHB0042)試劑盒，上市銷售。國內(nèi)已有許多實驗室采用前述市售試劑盒，進行了一些Tau蛋白含量水平與臨床AD病癥相關(guān)性的實驗，但Tau蛋白檢測的結(jié)果差異較大。除酶聯(lián)免疫法以外，用于檢測腦脊液中Tau蛋白的其他方法，在國內(nèi)外未見有關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用Tau蛋白本身物理化學(xué)性質(zhì)進行樣品前處理、實現(xiàn)人腦脊液中其它蛋白成分的有效去除，超濾法對Tau蛋白成分進行有效富集，并在電泳膠上實現(xiàn)蛋白質(zhì)分離，銀染法蛋白質(zhì)高靈敏檢出的新途徑。
由于酶聯(lián)免疫法使用抗體作為識別分析Tau蛋白的生化試劑，因此其試劑盒必須低溫保存或運輸，對實驗室的要求高。本發(fā)明檢測Tau蛋白的方法，基于物理化學(xué)的原理，所用試劑，不含抗體等生化產(chǎn)品，化學(xué)物理性質(zhì)穩(wěn)定，運輸儲存方便。本發(fā)明能用于臨床的人腦脊液Tau蛋白含量的簡便快速的檢測。
本發(fā)明提出的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其具體步驟如下(1)腦脊液的預(yù)處理取腦脊液1.5～2.0ml，置于2ml離心管中，與摩爾濃度為480～520mmol/dm3的磷酸鹽樣品緩沖液混合，得混合液，緩沖液與腦脊液樣品體積比為(0.09～0.1)∶1，緩沖液pH值為7.0～7.5；混合液在溫控混勻器中振蕩加熱8～10分鐘，得熱解液，振蕩速度為500～600轉(zhuǎn)/分，加熱溫度為90～99℃；將熱解液冷卻至室溫，離心管置于離心機內(nèi)，以轉(zhuǎn)速為4000～5000轉(zhuǎn)/分的速度離心分離15-20分鐘，取上清液；所得上清液移至超濾管離心分離50～60分鐘，離心力為4000～5000g，其中的水溶液透過超濾膜，蛋白質(zhì)樣品溶液停留于膜上，蛋白質(zhì)樣品溶液濃縮40～80倍，至濃縮液體積為30-50μl；濃縮液移置離心管中，與電泳樣品緩沖液混合，在溫控混勻器上90～100℃溫度下，振蕩加熱3～5分鐘，電泳樣品緩沖液與濃縮液體積比為1∶4～1∶5，所得混合溶液移至凝膠膠板進行電泳分離；(2)凝膠電泳分離將步驟(1)中所制成的凝膠膠板置于電泳槽中，電泳槽內(nèi)加入pH值為8.0～8.5的電泳緩沖液，上槽加滿，下槽加至浸沒凝膠底部，開啟電泳儀電源，調(diào)整電流或電壓，保持凝膠溫度低于40℃，對凝膠進行電泳分離，電泳分離時間為2～3小時；(3)銀染色將經(jīng)過電泳的凝膠膠板移至含質(zhì)量百分比為50％的甲醇和質(zhì)量百分比為10％醋酸的水溶液中，浸泡，清水漂洗，漂洗后的凝膠膠板移入容器內(nèi)，用銀氨溶液染色15-20分鐘；然后用去離子水漂洗，用檸檬酸/甲醛顯色液洗滌，顯色，10～20分鐘內(nèi)出現(xiàn)銀染的電泳帶，否則更換顯色液，顯色完成后，將凝膠浸入質(zhì)量百分比為1-1.5％醋酸終止反應(yīng)，在蒸餾水中漂洗凝膠1-3小時，保存；(4)定量分析將所得的凝膠膠板置于掃描儀，進行圖像掃描，得到各蛋白條帶圖像，通過圖像分析，確定樣品蛋白條帶的黑度值；(5)推算Tau蛋白含量數(shù)值配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)Tau蛋白溶液。用標(biāo)準(zhǔn)Tau蛋白溶液代替腦脊液，重復(fù)步驟(1)至步驟(4)的方法，根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)Tau蛋白溶液的濃度及其對應(yīng)位置的Tau蛋白條帶的黑度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品Tau蛋白條帶的黑度值，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算，即可推算出樣品中Tau蛋白含量數(shù)值。
本發(fā)明中，所述步驟(1)中樣品緩沖液為由500mmol/dm3，pH7.0～7.5的磷酸鹽緩沖體系、10.0mmol/dm3二硫蘇糖醇DTT(dithiothreitol)和5.0mmol/dm3乙二胺四乙酸(EDTA)組成的水溶液。
本發(fā)明中，所述步驟(1)中超濾膜的截留分子量為10000-15000道爾頓。
本發(fā)明中，所述步驟(1)中電泳樣品緩沖液為由60mmol/dm3，pH6.8～7.0三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系、質(zhì)量百分比為25％甘油、質(zhì)量百分比為2％十二烷基磺酸鈉、5mol/dm3巰基乙醇、質(zhì)量百分比為1％溴酚蘭組成的溶液。
本發(fā)明中，所述步驟(2)中電泳緩沖液為由25mol/dm3，pH8.0～8.5三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系、190mmol/dm3甘氨酸和0.1％十二烷基磺酸鈉組成的溶液。
本發(fā)明中，所述步驟(2)中電泳分離采用恒流電泳或恒壓電泳，恒流電泳電流恒定為10～15mA，最大電壓200V，最大功率50W；恒壓電泳電壓恒定為100～150V，最大電流20mA，最大功率50W。
本發(fā)明中，所述步驟(3)中銀氨染色溶液為由質(zhì)量百分比為3％的硝酸銀、質(zhì)量百分比為0.3％的NaOH和質(zhì)量百分比為0.78％的氨組成的水溶液。
本發(fā)明中，所述步驟(3)中顯色溶液為由質(zhì)量百分比為0.005％檸檬酸和質(zhì)量百分比為0.019％的甲醛組成的溶液。
本發(fā)明中，所述步驟(1)或步驟(2)中凝膠膠板采用10％丙烯酰胺線性薄片膠。
本發(fā)明中，通過熱休克(heat shock)方法實現(xiàn)腦脊液樣品預(yù)處理，利用了Tau蛋白所特有的熱穩(wěn)定性，通過在溫控混勻器中攪拌加熱，使腦脊液中其他蛋白成分變性并沉淀，并通過離心沉降其他被熱休克法變性的蛋白不溶物，實現(xiàn)其他蛋白組分的預(yù)去除。對Tau蛋白成分進行有效富集，并在電泳膠上實現(xiàn)蛋白質(zhì)分離，銀染法蛋白質(zhì)高靈敏檢出的新途徑。
本發(fā)明所采用的是化學(xué)與物理的方法，試劑中不包括任何抗體等生化產(chǎn)品，性能穩(wěn)定，便于運輸、儲存，對實驗室條件要求低，過程簡便，快速，具有適用于臨床使用的優(yōu)點。


圖1為本發(fā)明的銀染色黑度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體的實施方式進一步說明本發(fā)明。
A.Tau蛋白標(biāo)準(zhǔn)測量曲線的繪制以純化人類全長Tau蛋白(購自CALBIOCHEM生化試劑公司)作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制濃度范圍在1.0×10-9～1.0×10-10g/ml的Tau蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。取已知濃度的Tau標(biāo)準(zhǔn)溶液20μl，與5μl電泳樣品緩沖液混合，在溫控混勻器上99℃震蕩加熱3～5分鐘。然后，按腦脊液樣品分析相同的步驟，進行電泳、銀染色分析，所得電泳膠，經(jīng)圖像掃描，用圖像分析軟件(如Photoshop)進行蛋白條帶的黑度分析。以黑度對濃度作圖，獲得Tau蛋白標(biāo)準(zhǔn)測量曲線(圖1所示)。
B.樣品分析實施例1(1)腦脊液樣品1取自某醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科病房。安靜狀態(tài)下按常規(guī)行腰穿，采取腦脊液約1.8ml，立即置于-40℃冰箱保存。兩天后從冰箱中取出解凍。將腦脊液樣品轉(zhuǎn)于2mlEppendorf離心管中，加入0.18ml樣品緩沖液(pH7.0，內(nèi)含10.0mmol/dm3二硫蘇糖醇，5.0mmol/dm3乙二胺四乙酸和500mmol/dm3的磷酸鹽)。在Eppendorf溫控混勻器上90℃，500轉(zhuǎn)/分振蕩加熱10分鐘，冷卻至室溫。離心管置于離心機內(nèi)，以轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)/分離心分離15分鐘，以沉降不溶物。取上層清液，轉(zhuǎn)入Millipore超濾管(Centricon YM-10)中，3000轉(zhuǎn)/分(離心力約5000g)離心超濾，將溶液的體積濃縮40倍，至樣品溶液的體積約50μl。轉(zhuǎn)至2ml離心管中。與16μl電泳樣品緩沖液混合，在溫控混勻器上99℃振蕩加熱3分鐘，轉(zhuǎn)至凝膠膠板進行電泳分離。
(2)電泳分離按常規(guī)方法制備10％丙烯酰胺線性薄片膠。采用北京六一儀器廠DYCZ-21型多用途電泳槽裝配灌膠膜具。待凝膠聚合后移至電泳槽裝配使用。在電泳槽中加入pH8.0電泳緩沖液(成分為25mmol/dm3pH8.0～8.5三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系，190mmol/dm3甘氨酸，0.1％十二烷基磺酸鈉)，上槽加滿，下槽加至浸沒凝膠底部。采用北京六一儀器廠DYY-11型電腦三恒多用電泳儀進行電泳。打開電泳儀電源，選擇恒流電泳，調(diào)整電參數(shù)恒定電流15mA，最大電壓200V，最大功率50W。
(3)銀染色定量分析電泳完成后，戴上手套將凝膠從玻璃膜具移至一個盛有50％甲醇和10％醋酸的水溶液的小容器內(nèi).至少浸泡一小時，換液3次；用清水漂洗30分鐘.期間至少換水3次；將凝膠膠板移入一個干凈的容器內(nèi).置于搖床溫和振蕩下用新鮮配制的銀氨染色溶液(3％硝酸銀，0.3％NaOH，0.78％氨)染色15分鐘。染色完成后用去離子水漂洗凝膠，在輕輕振蕩下浸泡2分鐘；再將凝膠膠板移至一個干凈容器內(nèi)，使用新鮮配制的顯色溶液(0.005％檸檬酸和0.019％甲醛)洗滌，顯色。銀染的電泳帶一般15分鐘內(nèi)出現(xiàn)。顯色完成后將凝膠浸入質(zhì)量百分比為1.5％的醋酸終止反應(yīng)，在蒸餾水中漂洗凝膠1.5小時后保存，然后可進行掃描。通過圖像處理，分析Tau蛋白條帶的黑度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，推算出Tau蛋白含量數(shù)值。
測得的Tau蛋白條帶黑度38.7按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的Tau蛋白含量0.484ng/ml。
實施例2(1)腦脊液樣品2取自某醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科病房。安靜狀態(tài)下按常規(guī)行腰穿，采取腦脊液約2ml，立即置于-20℃冰箱保存。兩天后從冰箱中取出解凍。將腦脊液樣品置于Eppendorf離心管中，加入0.20ml樣品緩沖液(pH7.4，內(nèi)含10.0mmol/dm3二硫蘇糖醇，5.0mmol/dm3乙二胺四乙酸和500mmol/dm3的磷酸鹽)。在Eppendorf溫控混勻器上99℃，600轉(zhuǎn)/分振蕩加熱10分鐘，冷卻至室溫。離心管置于離心機內(nèi)，以轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分離心分離15分鐘，以沉降不溶物。取上層清液，轉(zhuǎn)入Millipore超濾管(Centricon YM-10)中，3000轉(zhuǎn)/分(離心力約5000g)離心超濾，將溶液的體積濃縮80倍，至樣品溶液的體積約30μl，轉(zhuǎn)至2ml離心管中。與10μl電泳樣品緩沖液混合，在溫控混勻器上90℃振蕩加熱5分鐘。轉(zhuǎn)至凝膠膠板進行電泳分離。
(2)電泳分離按常規(guī)方法制備10％丙烯酰胺線性薄片膠。采用北京六一儀器廠DYCZ-21型多用途電泳槽裝配灌膠膜具。待凝膠聚合后移至電泳槽裝配使用。在電泳槽中加入pH8.0電泳緩沖液(成分為25mmol/dm3pH8.0～8.5三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系，190mmol/dm3甘氨酸，0.1％十二烷基磺酸鈉SDS)，上槽加滿，下槽加至浸沒凝膠底部。采用北京六一儀器廠DYY-11型電腦三恒多用電泳儀進行電泳。打開電泳儀電源，選擇恒流電泳，調(diào)整電參數(shù)電壓120V，最大功率50W。
(3)銀染色定量分析電泳完成后，戴上手套將凝膠從玻璃膜具移至一個盛有50％甲醇和10％醋酸的水溶液的小容器內(nèi).至少浸泡一小時，換液3次；用清水漂洗30分鐘.期間至少換水3次；將凝膠膠板移入一個干凈的容器內(nèi).置于搖床溫和振蕩下用新鮮配制的銀氨染色溶液(3％硝酸銀，0.3％NaOH，0.78％氨)染色20分鐘。染色完成后用去離子水漂洗凝膠，在輕輕振蕩下浸泡2分鐘；再將凝膠膠板移至一個干凈容器內(nèi)，使用新鮮配制的顯色溶液(0.005％檸檬酸和0.019％甲醛)洗滌，顯色。銀染的電泳帶在20分鐘內(nèi)出現(xiàn)。顯色完成后將凝膠浸入質(zhì)量百分比為1％的醋酸終止反應(yīng)，在蒸餾水中漂洗凝膠3小時后保存，然后可進行掃描。通過圖像處理，分析Tau蛋白條帶的黑度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，推算出Tau蛋白含量數(shù)值。
測得的Tau蛋白條帶黑度41.2按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的Tau蛋白含量0.613ng/ml。
權(quán)利要求
1.一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于具體步驟如下(1)腦脊液的預(yù)處理取腦脊液1.5～2.0ml，置于2ml離心管中，與摩爾濃度為480-520mmol/dm3的磷酸鹽樣品緩沖液混合，得混合液，緩沖液與腦脊液樣品體積比為(0.09～0.1)∶1，緩沖液pH值為7.0～7.5；混合液在溫控混勻器中振蕩加熱8～10分鐘，得熱解液，振蕩速度為500～600轉(zhuǎn)/分，加熱溫度為90～99℃；將熱解液冷卻至室溫，離心管置于離心機內(nèi)，以轉(zhuǎn)速為4000～5000轉(zhuǎn)/分的速度離心分離15-20分鐘，取上清液；所得上清液移至超濾管離心分離50～60分鐘，離心力為4000～5000g，其中的水溶液透過超濾膜，蛋白質(zhì)樣品溶液停留于膜上，蛋白質(zhì)樣品溶液濃縮40～80倍，至濃縮液體積為30～50μl；濃縮液移置離心管中，與電泳樣品緩沖液混合，在溫控混勻器上90～100℃溫度下，振蕩加熱3～5分鐘，電泳樣品緩沖液與濃縮液體積比為1∶4～1∶5，所得混合溶液移至凝膠膠板進行電泳分離；(2)凝膠電泳分離將步驟(1)中所制成的凝膠膠板置于電泳槽中，電泳槽內(nèi)加入pH值為8.0～8.5的電泳緩沖液，上槽加滿，下槽加至浸沒凝膠底部，開啟電泳儀電源，調(diào)整電流或電壓，保持凝膠溫度低于40℃，對凝膠進行電泳分離，電泳分離時間為2～3小時；(3)銀染色將經(jīng)過電泳的凝膠膠板移至含質(zhì)量百分比為50％的甲醇和質(zhì)量百分比為10％醋酸的水溶液中，浸泡，清水漂洗，漂洗后的凝膠膠板移入容器內(nèi)，用銀氨溶液染色15～20分鐘；然后用去離子水漂洗，用檸檬酸/甲醛顯色液洗滌，顯色，10～20分鐘內(nèi)出現(xiàn)銀染的電泳帶，否則更換顯色液，顯色完成后，將凝膠浸入質(zhì)量百分比為1～1.5％醋酸終止反應(yīng)，在蒸餾水中漂洗凝膠1～3小時，保存；(4)定量分析將所得的凝膠膠板置于掃描儀，進行圖像掃描，得到各蛋白條帶圖像，通過圖像分析，確定樣品蛋白條帶的黑度值；(5)推算Tau蛋白含量數(shù)值配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)Tau蛋白溶液。用標(biāo)準(zhǔn)Tau蛋白溶液代替腦脊液，重復(fù)步驟(1)至步驟(4)的方法，根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)Tau蛋白溶液的濃度及其對應(yīng)位置的Tau蛋白條帶的黑度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品Tau蛋白條帶的黑度值，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算，即可推算出樣品中Tau蛋白含量數(shù)值。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于所述步驟(1)中樣品緩沖液為由500mmol/dm3、pH值為7.0～7.5的磷酸鹽緩沖體系、10.0mmol/dm3二硫蘇糖醇和5.0mmol/dm3乙二胺四乙酸組成的水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于所述步驟(1)中超濾膜的截留分子量為10000-15000道爾頓。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的新方法，其特征在于所述步驟(1)中電泳樣品緩沖液為由60mmol/dm3、pH值為6.8～7.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系、質(zhì)量百分比為25％甘油、質(zhì)量百分比為2％十二烷基磺酸鈉、5mol/dm3巰基乙醇和質(zhì)量百分比為1％溴酚蘭組成的溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的新方法，其特征在于所述步驟(2)中電泳緩沖液為由25mol/dm3、pH值為8.0～8.5的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖體系、190mmol/dm3甘氨酸和0.1％十二烷基磺酸鈉組成的溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于步驟(2)中電泳分離采用恒流電泳或恒壓電泳，恒流電泳電流恒定為10～15mA，最大電壓200V，最大功率50W；恒壓電泳電壓恒定為100～150V，最大電流20mA，最大功率50W。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于所述步驟(3)中銀氨染色溶液為由質(zhì)量百分比為3％的硝酸銀、質(zhì)量百分比為0.3％的NaOH和質(zhì)量百分比為0.78％的氨組成的水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于所述步驟(3)中顯色溶液為由質(zhì)量百分比為0.005％檸檬酸和質(zhì)量百分比為0.019％的甲醛組成的溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法，其特征在于所述步驟(2)中凝膠膠板采用10％丙烯酰胺線性薄片膠。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測人腦脊液中Tau蛋白含量水平的方法。本發(fā)明通過熱休克(heat shock)方法實現(xiàn)腦脊液樣品預(yù)處理，利用了Tau蛋白所特有的熱穩(wěn)定性，通過在溫控混勻器中攪拌加熱，使腦脊液中其他蛋白成分變性并沉淀，并通過離心沉降其他被熱休克法變性的蛋白不溶物，實現(xiàn)其他蛋白組分的預(yù)去除。對Tau蛋白成分進行有效富集，并在電泳膠上實現(xiàn)蛋白質(zhì)分離，銀染法蛋白質(zhì)高靈敏檢出。本發(fā)明所采用的是化學(xué)與物理的方法，試劑中不包括任何抗體等生化產(chǎn)品，性能穩(wěn)定，便于運輸、儲存，對實驗室條件要求低，過程簡便，快速，具有適用于臨床使用的優(yōu)點。
文檔編號G01N1/28GK1995984SQ200510112168
公開日2007年7月11日 申請日期2005年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月28日
發(fā)明者姚天明, 朱志良, 黃冬雅 申請人:同濟大學(xué)