專(zhuān)利名稱(chēng)：一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物腦組織磷脂提取薄層分析方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)有關(guān)植物磷脂提取、分離的研究較多，如鮑風(fēng)等(大豆磷脂組分的研究I磷脂組成的薄層色譜分析.生物化學(xué)和生物物理學(xué)報(bào).1981，4(13)373～377)、李立(大豆磷脂的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用.飼料工業(yè).1999，20，(12)33～36)、馬辰等(大豆磷脂中磷脂類(lèi)成分含量的測(cè)定.中國(guó)中藥雜志，1999，20(12)33～36)。而涉及動(dòng)物腦組織磷脂復(fù)合物方面研究的有周建忠等(高效液相色譜法測(cè)定大鼠肺及腦組織細(xì)胞膜磷脂.色譜.1994，6(12)，44 1～442)、李世莉等(大鼠腦組織磷脂色譜隨齡性變化的研究.佳木斯醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).1992，15(1)1～2)。其中大部分是以高效液相色譜進(jìn)行分析，而且是以獲取其中的某個(gè)成分為目的的。最終的產(chǎn)業(yè)實(shí)施需投資大，操作麻煩，時(shí)間長(zhǎng)，溶劑用量大，磷脂復(fù)合物各成分的分離效果較差，成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種操作簡(jiǎn)單，成本低廉，斑點(diǎn)與背景對(duì)比明顯的動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法。
本發(fā)明的目的可通過(guò)如下技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn)
該方法按如下步驟進(jìn)行(均按重量份)a.動(dòng)物腦組織磷脂提取濾液經(jīng)蒸發(fā)得固狀磷脂復(fù)合物，然后用氯仿溶解、再定容；b.將硅膠∶羧甲基纖維素鈉＝1∶2-4混合均勻，用鋪板器鋪0.2-0.6mm薄層層析板，晾干后于90-120℃烘箱中活化20-60分鐘；c.將氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝1∶1-1.5∶1-1.5∶2-3.5混合為展開(kāi)劑，對(duì)磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，而后晾干；d.再將薄層層析板放入用中性去離子水配制的0.3-0.4％的溴百里香酚藍(lán)染液中浸板，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
本發(fā)明的目的還可通過(guò)如下技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn)所述的中性去離子水的pH＝6-8；所述的浸板時(shí)間為5-30秒；所述的蒸發(fā)溫度為不高于80℃；所述的硅膠∶羧甲基纖維素鈉＝1∶2.5-3。
本發(fā)明利用膽固醇和油溶于丙酮而磷脂不溶的性質(zhì)，攪拌萃取去除動(dòng)物腦中的膽固醇和油。然后利用磷脂溶于甲苯等一些有機(jī)溶劑的性質(zhì)，進(jìn)行磷脂復(fù)合物的提取，所得的磷脂復(fù)合物經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)獲得黃色固體狀磷脂復(fù)合物，將之用氯仿溶解、定容，利用堿性展開(kāi)劑對(duì)磷脂復(fù)合物氯仿液進(jìn)行展開(kāi)，展開(kāi)完畢后，晾干，放入用中性去離子水配制的顯色劑中浸漬顯色，取出后晾干，通過(guò)斑點(diǎn)與背景對(duì)比，達(dá)到各磷脂組分分離的目的。本發(fā)明還可繼續(xù)進(jìn)行薄層掃描定量測(cè)定，或薄層法各分離成分的小樣制備，或作為柱層析效果的判斷。
此方法操作簡(jiǎn)單，成本低廉，斑點(diǎn)與背景對(duì)比明顯，且磷脂組分分離效果明顯。所用的原料為鮮牛腦，也可采用魚(yú)、兔、雞、蟾蜍等不同動(dòng)物的腦組織，經(jīng)干燥和組織破碎器破碎即可。
溴百里香酚藍(lán)溶液，可采用多種存在質(zhì)量差異的溴百里香酚藍(lán)指示劑，只要采用pH為中性的去離子水配制顯色劑即可。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1鮮牛腦經(jīng)55℃干燥，干牛腦用破碎器破碎，取干牛腦10公斤、丙酮30公斤，在80r/min攪拌下提取1h，過(guò)濾，得濾渣，重復(fù)提取3次，去除膽固醇和油。將濾渣在55℃烘干，加入30公斤的甲苯，在80r/min攪拌下提取1h，過(guò)濾得濾液，重復(fù)提取3次，濾液在40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得干的黃色固體狀磷脂復(fù)合物，然后稱(chēng)取5mg，加氯仿溶解、定容為5mg/ml。將硅膠(GF254)與0.5％的羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液以1∶2的重量比混合均勻，用自動(dòng)鋪板器鋪板，薄層板厚度為0.4mm，晾干，110℃條件下活化40min，置干燥器內(nèi)備用。以氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶11.3∶11.7∶2.0為展開(kāi)劑，對(duì)氯仿溶解的磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，展距110cm。待層析完畢后，取出薄板，自然晾干，然后將之放入用pH＝6.5的去離子水配制的0.3％的溴百里香酚藍(lán)溶液中，染色15秒，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
實(shí)施例2鮮兔腦經(jīng)50℃干燥，干兔腦用破碎器破碎，取干兔腦10公斤、丙酮20公斤，在60r/min攪拌下提取1.5h，過(guò)濾，得濾渣，重復(fù)提取4次，去除膽固醇和油。將濾渣在室溫下晾干，加入30公斤的乙醚，在100r/min攪拌下提取0.5h，過(guò)濾得濾液，重復(fù)提取2次，濾液在65℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得干的黃色固體狀磷脂復(fù)合物，然后稱(chēng)取5mg，加氯仿溶解、定容為5mg/ml。將硅膠(GF254)與0.5％的羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液以1∶3的重量比混合均勻，用自動(dòng)鋪板器鋪板，薄層板厚度為0.2mm，晾干，90℃條件下活化60min，置干燥器內(nèi)備用。以氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶10∶11∶3為展開(kāi)劑，對(duì)氯仿溶解的磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，展距105cm。待層析完畢后，取出薄板，自然晾干，然后將之放入用pH＝7.5的去離子水配制的0.4％的溴百里香酚藍(lán)溶液中，染色20秒，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
實(shí)施例3鮮雞腦經(jīng)55℃干燥，干牛腦用破碎器破碎，取干牛腦10公斤、丙酮30公斤，在100r/min攪拌下提取0.5h，過(guò)濾，得濾渣，重復(fù)提取2次，去除膽固醇和油。將濾渣在55℃烘干，加入30公斤的正己烷，在60r/min攪拌下提取1.5h，過(guò)濾得濾液，重復(fù)提取4次，濾液在25℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得干的黃色固體狀磷脂復(fù)合物，然后稱(chēng)取5mg，加氯仿溶解、定容為5mg/ml。將硅膠(GF254)與0.5％的羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液以1∶4的重量比混合均勻，用自動(dòng)鋪板器鋪板，薄層板厚度為0.6mm，晾干，120℃條件下活化20min，置干燥器內(nèi)備用。以氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶15∶14∶3.5為展開(kāi)劑，對(duì)氯仿溶解的磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，展距100cm。待層析完畢后，取出薄板，自然晾干，然后將之放入用pH＝7的去離子水配制的0.3％的溴百里香酚藍(lán)溶液中，染色15秒，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
實(shí)施例4鮮蟾蜍腦經(jīng)55℃干燥，干牛腦用破碎器破碎，取干牛腦10公斤、丙酮30公斤，在90r/min攪拌下提取1.2h，過(guò)濾，得濾渣，重復(fù)提取3次，去除膽固醇和油。將濾渣自然晾干，加入30公斤的氯仿，在70r/min攪拌下提取1h，過(guò)濾得濾液，重復(fù)提取2次，濾液在45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得干的黃色固體狀磷脂復(fù)合物，然后稱(chēng)取5mg，加氯仿溶解、定容為5mg/ml。將硅膠(GF254)與0.5％的羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液以1∶3的重量比混合均勻，用自動(dòng)鋪板器鋪板，薄層板厚度為0.4mm，晾干，100℃條件下活化30min，置干燥器內(nèi)備用。以氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶10∶15∶2.5為展開(kāi)劑，對(duì)氯仿溶解的磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，展距110cm。待層析完畢后，取出薄板，自然晾干，然后將之放入用pH＝7.2的去離子水配制的0.35％的溴百里香酚藍(lán)溶液中，染色10秒，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
權(quán)利要求
1.一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法，其特征在于該方法按如下步驟進(jìn)行(均按重量份)a.動(dòng)物腦組織磷脂提取濾液經(jīng)蒸發(fā)得固狀磷脂復(fù)合物，然后用氯仿溶解、再定容；b.將硅膠∶羧甲基纖維素鈉＝1∶2-4混合均勻，用鋪板器鋪0.2-0.6mm薄層層析板，晾干后于90-120℃烘箱中活化20-60分鐘；c.將氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝1∶1-1.5∶1-1.5∶2-3.5混合為展開(kāi)劑，對(duì)磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，而后晾干；d.再將薄層層析板放入用中性去離子水配制的0.3-0.4％的溴百里香酚藍(lán)染液中浸板，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
2.按照權(quán)利要求書(shū)1所述的一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法，其特征在于所述的中性去離子水的pH＝6-8。
3.按照權(quán)利要求書(shū)1所述的一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法，其特征在于所述的浸板時(shí)間為5-30秒。
4.按照權(quán)利要求書(shū)1所述的一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法，其特征在于所述的蒸發(fā)溫度為不高于80℃。
5.按照權(quán)利要求書(shū)1所述的一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法，其特征在于所述的硅膠∶羧甲基纖維素鈉＝1∶2.5-3。
全文摘要
本發(fā)明提供一種動(dòng)物腦組織磷脂提取分析方法，該方法按如下步驟進(jìn)行(均按重量份)a.動(dòng)物腦組織磷脂提取濾液經(jīng)蒸發(fā)得固狀磷脂復(fù)合物，然后用氯仿溶解、再定容；b.將硅膠∶羧甲基纖維素鈉＝1∶2－4混合均勻，用鋪板器鋪0.2－0.6mm薄層層析板，晾干后于90－120℃烘箱中活化20－60分鐘；c.將氯仿∶無(wú)水乙醇∶三乙胺∶水＝1∶1－1.5∶1－1.5∶2－3.5混合為展開(kāi)劑，對(duì)磷脂復(fù)合物進(jìn)行展開(kāi)，而后晾干；d.再將薄層層析板放入用中性去離子水配制的0.3－0.4％的溴百里香酚藍(lán)染液中浸板，取出后，放在通風(fēng)處直至斑點(diǎn)與背景對(duì)比達(dá)到最佳。
文檔編號(hào)G01N33/558GK1664586SQ20051004320
公開(kāi)日2005年9月7日 申請(qǐng)日期2005年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月30日
發(fā)明者楊雅婷, 劉代成 申請(qǐng)人:山東師范大學(xué)