專利名稱：中藥瓊玉膏中梓醇含量檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥技術領域。具體涉及中藥瓊玉膏中梓醇的含量檢測方法。
背景技術：
中藥瓊玉膏的功能為補虛健脾，用于氣陰不足，肺虛干咳，津枯形瘦，勞損失血。該藥的處方成份為地黃640g、黨參60g、茯苓120g、蜂蜜280g。中藥瓊玉膏的處方成分中的地黃為君藥黨參，茯苓和蜂蜜共為臣藥。關對中藥瓊玉膏的質量標準，現行的檢測僅對膏劑的“密度”作了規(guī)定，這是不科學的、不合理的，因為在中藥提取過程中，隨著時間的推移，中藥當中的無效成分也隨之被提取出來了，如淀粉類等。如果被提取出來無效成分越多，其密度值也會越高，這顯然是不合理的；因此，對中藥復方制劑中主要藥物指標成分的測定，就顯得十分重要。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，設計合理的檢測中藥瓊玉膏質量標準的方法。
本發(fā)明從中藥瓊玉膏的處方著手，因君藥為地黃，故以檢測地黃作為目標，用地黃的主要成分梓醇作為標準，建產梓醇含量的檢測方法。
本發(fā)明經過試驗，建產了用高效液相色譜法測定中藥瓊玉膏中梓醇的含量測定方法。
1、色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗(1)Agilent1100液相色譜儀，色譜柱Inertsil ODS-3 C18(長×內徑150mm×4.6mm)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(99.5～90.0∶0.5～10.0)為流動相，流速為0.1～1.0ml/min；采用DAD(VWD)檢測器，檢測波長為210nm；理論塔板數按梓醇峰計不低于3000～7000。
(2)流動相及檢測波長的選擇據文獻資料報道，地黃中的梓醇以水-乙腈(99.5～90.0∶0.5～10.0)為流動相，流速為0.1～1.0ml/min時能與其他成份有效分離，在210nm處有最大吸收，(見表1、圖1、圖2)。然而在試驗中，我們發(fā)現流速為0.1～1.0ml/min時，梓醇出峰時間較短，并不能與其他成份有效分離，而改流速為0.1～1.0ml/min時才達到了有效分離，(圖5)。
表1 梓醇檢測波長的試驗結果

(3)標準對照品及樣品以甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿作溶劑比用甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿為溶劑，其溶劑峰更小，基線更穩(wěn)定。
2、對照品溶液的制備 取梓醇對照品適量，精密稱定，制備成每1ml含0.4mg的溶液作為對照品溶液。
3、供試品溶液的制備 取本品約0.6g，精密稱定，置錐形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿100ml、硅藻土、滑石粉或硅膠5g，超聲、熱回流或冷浸1小時；濾過，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，轉移至5ml的容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
3、提取條件的選擇用正交試驗L8(27)考察比較了不同水平的溶劑、提取方法、提取時間及輔料用量對樣品中梓醇的提取影響。
(1)表頭設計確定因素為A溶媒(甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿)、B提取方法(超聲、熱回流或冷浸)、C提取時間、D輔料(硅藻土、滑石粉或硅膠)；各因素水平如下A150∶1(ml/g)；A2100∶1(ml/g)；B1超聲、熱回流或冷浸； B2超聲、熱回流或冷浸；C11小時； C22小時；D15∶1(g/g)； D110∶1(g/g)；L8 (27)表2

(2)數據與結果表2 樣品提取的正交試驗L8(27)

結果表明A2B1C2D1為最佳提取方法，即本實驗6為最佳方案。
其中甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿用量為主要因素、提取時間和硅藻土、滑石粉或硅膠用量為次要因素、提取方法為最次因素。
經方差分析表明，除A因素水平變化對試驗有一定影響外，其余因素水平變化對試驗均沒有影響。
考慮到實驗省時、簡便、節(jié)約的原則，故我們選定A2B1C1D1，即甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿100ml/g，超聲、熱回流或冷浸，1小時，硅藻土、滑石粉或硅膠5g/g。
4、測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
5、方法學考查(1)空白試驗 取缺地黃藥材的供試品，依法測定，結果表明空白無干擾，見圖4。
(2)線性范圍 精密稱取梓醇對照品20mg，置25ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品儲備液。
分別精密吸取上述對照品儲備液1ml、2ml、3ml置5ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得線性溶液②、④、⑥；另精密吸取上述對照品儲備液1ml置2ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得線性溶液⑤；另精密吸取上述對照品儲備液1ml、3ml置10ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得線性溶液①和③。
分別精密吸取線性溶液①、②、③、④、⑤、⑥和對照品儲備液(即線性溶液⑦)各5μl進樣，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標作標準曲線。結果見表3。
表3 線性范圍

(3)精密度試驗日內精密度試驗精密吸取對照品溶液一式6份進樣，計算平均峰面積及RSD，結果見表4。
表4日內精密度試驗結果

日間精密度試驗精密吸取對照品溶液于2日內進樣，計算平均峰面積及RSD，結果見表5。
表5 日間精密度試驗結果

(4)穩(wěn)定性試驗取本品(批號030403)依法測定，分別于0小時、24小時進樣，結果見表6。
表6 穩(wěn)定性試驗結果

(5)重現性試驗取本品(批號030403)6份，依法測定，結果見表7。
表7 重現性試驗結果

(6)回收率試驗取本品(批號030402)3份，分別加入濃度為0.24mg/ml、0.48mg/ml、0.80mg/ml的對照品溶液各1ml，依法測定，結果見表8。
表8 回收率試驗結果

(7)樣品測定取本品3批，依法測定，結果見表9。
表9 樣品測定結果

根據穩(wěn)定性考查試驗，含量限度宜定為本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
6、對分離度的說明由于地黃藥材中的梓醇峰和它前面的峰緊緊靠在一起，不易將其徹底分開，分離度大多在1.0～1.3之間，很少達到1.5；而理論塔板數則可達3000～7000。
本發(fā)明提供了中藥瓊玉膏中梓醇的含量檢測方法，該方法包括下列步驟(1)高效液相色譜條件與系統(tǒng)適應性選擇以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈99.5～90.0∶0.5～10.0為流動相，流速為0.1～1.0ml/min；采用DAD或VWD檢測器，檢測波長為210nm；理論塔板數按梓醇峰計不低于3000～7000；(2)對照品溶液的制備取梓醇對照品適量，精密稱定，制備成每ml含0.4mg的溶液作為對照品溶液；(3)供試品溶液的制備取瓊玉膏樣品約0.6g，精密稱定，置錐形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿60ml、硅藻土、滑石粉或硅膠3g，超聲、熱回流或冷浸1小時；濾過，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，轉移至5ml的容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
(4)測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定；(5)標準本品每克含梓醇不得少于1.50mg。


圖1梓醇峰(zc-1、QYG00039.D)；圖2、圖3梓醇(zc)在不同波長處(210nm、254nm)的吸收比較(QYG00090.D～QYG00091.D)；圖4缺地黃藥材的空白樣品(kby、QYG00047.D)；圖5樣品中的梓醇峰(zc、QYG00054.D)；本發(fā)明的方法對制備中藥瓊玉膏提供了檢測其中君藥“地黃”的指標成分，使產品的質量控制得到保障。
實例采用高效液相色譜，用本發(fā)明方法檢測的21批中藥瓊玉膏中梓醇含量結果如下(1)色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈99.5～90.0∶0.5～10.0為流動相；流速為0.1～1.0ml/min；采用DAD或VWD檢測器；檢測波長210nm；理論塔板數按梓醇峰計不低于3000～7000；(2)供試品溶液的制備精蜜稱取瓊玉膏樣品0.6g，置椎形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿60ml、硅藻土、滑石粉或硅膠3g，超聲、熱回流或冷浸1小時；濾過，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，轉移至5ml的容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(3)對照品溶液的制備取梓醇對照品適量，精密稱定，制備成每ml含0.4mg的溶液作為照品溶液；分別精密吸收取對照品溶液和從試品溶液各5ul，注入液相色譜儀。
進行測定，檢測數據見下表

權利要求
1.一種中藥瓊玉膏中梓醇含量檢測方法，其特征在于該檢測方法包括下列步驟(1)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈99.5～90.0∶0.5～10.0為流動相，流速為0.1～1.0ml/min；采用DAD或VWD檢測器，檢測波長為210nm；理論塔板數按梓醇峰計不低于3000～7000；(2)對照品溶液的制備取梓醇對照品適量，精密稱定，制備成每ml含0.4mg的溶液作為對照品溶液；(3)供試品溶液的制備取瓊玉膏樣品約0.6g，精密稱定，置錐形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿60ml、硅藻土、滑石粉或硅膠3g，超聲、熱回流或冷浸1小時；濾過，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，轉移至5ml的容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(4)測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定；(5)標準本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥技術領域。本發(fā)明提供了中藥瓊玉膏中梓醇含量的檢測方法。本發(fā)明以君藥地黃為基礎，通過正交設計方法，建產了地黃的主要成分梓醇含量的高效液相色譜測定方法。含量標準為每克含梓醇不得少于1.50mg。
文檔編號G01N30/88GK1743841SQ20041008933
公開日2006年3月8日 申請日期2004年12月9日 優(yōu)先權日2004年12月9日
發(fā)明者徐福鶯, 邵寶平, 陳競青, 李敏 申請人:上海雷允上藥業(yè)有限公司