專利名稱：參龍養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及參龍養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
參龍養(yǎng)血膏是由人參、黃芪、黨參、白術(shù)、黃精(制)、仙鶴草、龍眼肉、熟地黃、制何首烏、丹參、白芍、枸杞子、麥冬、石斛、菟絲子、鎖陽、淫羊藿、桑枝、劉寄奴、山楂、茯苓、橘子油等二十二味藥組成，具有益氣溫陽，滋陰養(yǎng)血的功效。用于氣血陰陽不足引起的神疲乏力，頭暈眼花，腰膝酸軟等癥。方中以制何首烏為臣藥，具有補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨的功效。
原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只對其中丹參、黃芪、人參、淫羊藿四味藥進(jìn)行了定性鑒別，但沒有反映藥物內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)成分的含量測定項，無法在生產(chǎn)中有效的保證產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，因而藥品療效得不到保證。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于改進(jìn)原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加其中制何首烏、山楂、白芍等三味藥的定性鑒別，建產(chǎn)了制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定。
本發(fā)明提供了參龍養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法，該方法包括對其中制何首烏、山楂和白芍的定性鑒別及制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定。
1、制何首烏的薄層鑒別制何首烏含有大黃素，因此采用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取，經(jīng)試驗，能得到清晰的薄層色譜圖。取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃素對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺制何首烏的“參龍養(yǎng)血膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，對照品溶液3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(25～10∶9～3∶0.2～2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色，陰性無干擾。
2、山楂的薄層鑒別取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺山楂的“參龍養(yǎng)血膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(35～10∶9～3∶0.1～2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。陰性樣品無干擾。
3、白芍的薄層鑒別取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，棄去溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液用水飽和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗滌二次，每次50ml，棄去溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，加在中性氧化鋁柱(3g，100-200目)上，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺白芍的“參龍養(yǎng)血膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品各10μl，對照品溶液5μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(55～30∶9～3∶15～5∶0.1～0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。
4、制何首烏含量測定(1)儀器與試藥儀器Agilent——1100液相色譜儀；對照品來源于中國藥品生物制品檢定所(批號0844-200003，供含量測定用)；樣品批號(1)030901 (2)030902 (3)030903試劑甲醇為色譜醇。
(2)色譜條件經(jīng)過摸索，采用檢測波長320nm，流速2.5～0.5ml/min，經(jīng)試驗，確定采用流動相乙腈-水(1～35∶99～65)。色譜柱C18(15cm×5μm)，柱溫45～20℃。
(3)供試品制備方法取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
④提取時間的選擇取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，分別(a)振搖、(b)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)5分鐘、(c)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘、(d)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)15分鐘、(f)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測定，結(jié)果見下表選擇提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘可將所測成分完全提出。
提取時間

(5)標(biāo)準(zhǔn)曲線取不同濃度的2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X，做回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)樣量18.3～915.0ng范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見下表。
標(biāo)準(zhǔn)曲線

(6)精密度試驗精密量取對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，進(jìn)樣分析，重復(fù)測定5次，記錄峰面積，結(jié)果見下表。
精密度試驗

(7)穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液分別在制備好后0小時、4小時、8小時、12小時、16小時注入液相色譜儀，進(jìn)樣測定結(jié)果，其峰面積均未見明顯變化，說明供試品溶液較穩(wěn)定，結(jié)果見下表。
穩(wěn)定性試驗

(8)重復(fù)性試驗取樣品(批號030901)25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結(jié)果見下表。
重每性試驗

(9)加樣回收率測定取樣品(批號030901)12.5g，置燒杯中，精密稱定，精密加入2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品一定量，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結(jié)果見下表。
加樣回收率

(10)樣品測定取樣品(批號(1)030901 (2)030902 (3)030903)25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結(jié)果見下表樣品測定

(11)陰性樣品測定取不含制何首烏的樣品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，進(jìn)樣10μl進(jìn)行分析。結(jié)果對樣品測定無干擾。(見圖5、6、7)為了考察《參龍養(yǎng)血膏》的穩(wěn)定性情況，進(jìn)行了長期穩(wěn)定性試驗，情況如下1、試驗條件將市售包裝《參龍養(yǎng)血膏》置于室溫條件下(25℃±2℃)，相對濕度60％±10％，放置一定時間后進(jìn)行觀察，取樣檢測，重點考察性狀，鑒別，含量，檢查，衛(wèi)生學(xué)檢查項目。
2、測試結(jié)論《參龍養(yǎng)血膏》經(jīng)一年多來產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗表明，產(chǎn)品的理化性質(zhì)和衛(wèi)生學(xué)檢查等重點考察項目均符合《參龍養(yǎng)血膏》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，產(chǎn)品質(zhì)量較為穩(wěn)定。
長期穩(wěn)定性試驗批號030101 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)

長期穩(wěn)定性試驗批號030102 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)

長期穩(wěn)定性試驗批號030201 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)



圖1 制何首烏薄層色譜圖(日光下)1、陰性樣品 2、樣品 3、大黃素對照品圖2 制何首烏薄層氣色譜圖(氨蒸氣熏)1、陰性樣品 2、樣品 3、大黃素對照品圖3 山楂薄層色譜圖1、陰性樣品 2、樣品 3、熊果酸對照品圖4 白芍薄層色譜圖1、陰性樣品 2、樣品 3、芍藥苷對照品圖5 制何烏首含量測定對照品色譜6 制何烏首含量測定樣品色譜7 制何烏首含量測定陰性樣品色譜圖
具體實施例方式三批樣品檢驗實例一 批號030901(1)制何首烏薄層鑒別取100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液另有備用，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液，另取大黃素對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸(25～10∶9～3∶0.2～2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色。
(2)山楂薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液，另取熊果酸對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(35～10∶9～3∶0.1～2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)芍藥薄層鑒別取鑒別(1)項下的備用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，用水飽和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗滌二次，每次50ml，棄去溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，加在中性氧化鋁柱3g，100-200目上，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液5μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(55～30∶9～3∶15～5∶0.1～0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)制何首烏含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，用乙腈-水(1～35∶99～65)為流動相；檢測波長為320nm，理論塔板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于6500～2000。
對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品96.2609μg，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)定容至10ml，制成濃度為9.6261μg/ml的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
結(jié)果 每g含制何首烏(以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計)37μg。
實例二 批號030902按030901批檢測，檢測結(jié)果(1)三項鑒別均呈陽性，(2)每g含制何首烏(以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計)36.25μg。
實例三 批號030903按030901批檢測，檢測結(jié)果(1)三項鑒別均呈陽性，(2)每g含制何首烏(以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計)37.01μg。
權(quán)利要求
1.一種參龍養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法，其特征在于該檢測方法增加了其中制何首烏、山楂和白芍三味藥的定性鑒別，建立了制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種參龍養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法，其特征在于其中所述的制何首烏、山楂和白芍三味藥的定性鑒別包括下列步驟(1)制何首烏薄層取參龍養(yǎng)血膏100g，置錐形瓶中，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿80ml使溶解，用溶劑醋酸乙酯、氯仿或乙醚提取二次，每次50ml，合并溶劑醋酸乙酯、氯仿或乙醚液，溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液另有備用，用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿50ml洗滌，溶劑醋酸乙酯、氯仿或乙醚液蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液，另取大黃素對照品，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸25～10∶9～3∶0.2～2.5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色；(2)山楂薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液，另取熊果酸對照品，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸35～10∶9～3∶0.1～2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)白芍薄層鑒別取鑒別(1)項下的備用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液，用水飽和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿洗滌二次，每次50ml，棄去溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，加在中性氧化鋁柱3g，100-200目上，用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對照品，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液5μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸55～30∶9～3∶15～5∶0.1～0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種參龍養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法，其特征在于其中所述的制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定包括下列步驟照高效液相色譜法測定(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，用乙腈-水1～35∶99～65為流動相；檢測波長為320nm，理論塔板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于6500～2000；(2)對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含10μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿少量多次反復(fù)洗滌燒杯，洗液并入同-量瓶中，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿4ml，搖勻，提取超聲處理或熱回流或冷浸10分鐘，放冷后，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；(4)測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每g含制何首烏以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷C20H22O9計，不得少于28μg。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了參龍養(yǎng)血膏中的制何首烏、山楂、白芍等三味藥的定性鑒別，建立了制何首烏中2、3、5、4’－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的含量測定。通過本發(fā)明增加的質(zhì)量檢測，使產(chǎn)品的穩(wěn)定性有較大的提高，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/94GK1737568SQ20041008932
公開日2006年2月22日 申請日期2004年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月9日
發(fā)明者徐福鶯, 邵寶平, 謝松, 沈繡紅 申請人:上海雷允上藥業(yè)有限公司