專利名稱：一種化橘紅復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以胖大海、烏梅、化橘紅、菊花中藥為主要原料制成的制劑，內(nèi)含十多種黃酮化合物，其中柚皮苷具有特征吸收光譜，可用紫外分光光度法測(cè)定含量，以有效控制本品質(zhì)量。
背景技術(shù)：
中藥胖大海、烏梅、化橘紅、菊花中已知含有十多種黃酮化合物、多種有機(jī)酸、糖類與其它大量未知中藥成分，故需尋找快捷，操作簡(jiǎn)便，能有效控制本品質(zhì)量的含量測(cè)定方法。因其中化橘紅中柚皮苷具有特征性的紫外吸收光譜，可通過(guò)它測(cè)定黃酮來(lái)控制產(chǎn)品質(zhì)量；另外，由于該成分含量較低，故我們采用聚酰胺柱層析法來(lái)分離與富集被測(cè)成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種能夠有效地控制由胖大海、烏梅、化橘紅、菊花制成的復(fù)方制劑質(zhì)量的檢測(cè)方法，利用紫外分光光度法確定柚皮苷的含量，保證了質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和先進(jìn)性。
本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明以柚皮苷為指標(biāo)測(cè)定黃酮含量，以控制質(zhì)量，因柚皮苷具有特征性吸收光譜，可用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定，可以按下列測(cè)定步驟進(jìn)行(1)、供試品溶液的制備稱取由中藥材胖大海0.2-50重量份、烏梅0.2--20重量份、菊花0.2--20重量份、化橘紅0.2-20重量份制成復(fù)方制劑5--15g，加蒸餾水10--30ml溶解，通過(guò)1-5g，30——60目，內(nèi)經(jīng)1-2cm的聚酰胺層析柱，以水80--120ml洗滌，水洗脫液棄去，再用20--50％乙醇50-200ml洗脫，收集醇洗脫液并定容搖勻，作為黃酮含量測(cè)定用樣品。
(2)對(duì)照品溶液制備精密稱取經(jīng)干燥的柚皮苷10mg，，置10ml量瓶中，加30％乙醇，溶解并稀釋至刻度，搖勻；再?gòu)闹芯芪?ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，配成每1ml中含柚皮苷20ug。
(3)、黃酮含量測(cè)定方法用紫外分光光度法測(cè)定對(duì)照品溶液與供試品溶液的吸收度，利用對(duì)照品比較法計(jì)算樣品中黃酮含量以控制本品質(zhì)量。
(4)、波長(zhǎng)選擇供試品和柚皮苷對(duì)照品，在上述方法條件下，于波長(zhǎng)260-310nm波長(zhǎng)處有吸收峰，選定該波長(zhǎng)范圍為測(cè)定波長(zhǎng)范圍。
(5)、上述主要由中藥原料胖大海、烏梅、菊花、化橘紅組成的復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，柚皮苷對(duì)照品溶液濃度范圍選擇為2--60ug/ml。
本發(fā)明的復(fù)方制劑可以是常規(guī)的各種劑型。
本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案是對(duì)照品溶液制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時(shí)的柚皮苷10mg，置10ml量瓶中，加30％乙醇(用醋酸調(diào)至約PH＝4，下同)，溶解并稀釋至刻度，搖勻；再?gòu)闹芯芪?ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，搖勻，即(每1ml中含柚皮苷20ug)。
供試品溶液的制備稱取由中藥材胖大海、烏梅、菊花、化橘紅制成的復(fù)方制劑10.5g，精密稱定，加蒸餾水20ml，置水浴中溶解，放冷，通過(guò)聚酰胺層析柱(2g，30——60目，內(nèi)經(jīng)1cm)，以水100ml洗滌，水洗脫液棄去，再用30％乙醇100ml洗脫，收集醇洗脫液并定容至100ml搖勻，作為供試品溶液。
黃酮含量測(cè)定方法照紫外分光光度法(2000年中國(guó)藥典一部附錄VA)測(cè)定，以30％乙醇作為空白，于286±2nm波長(zhǎng)處，分別測(cè)定對(duì)照品溶液與供試品溶液的吸收度，柚皮苷對(duì)照品溶液最佳濃度范圍為.13-41.04ug/ml。
本發(fā)明通過(guò)以下方法學(xué)考察試驗(yàn)可行1、波長(zhǎng)選擇本品和柚皮苷對(duì)照品，在正文方法條件下，于波長(zhǎng)286nm附近均有最大吸收峰，故選定該波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)(

圖1、2)。
圖1亮嗓胖大海清咽糖的紫外光譜圖。
圖2柚皮苷對(duì)照品紫外光譜圖。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取柚皮苷對(duì)照品溶液(0.1026mg/ml)0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml(序號(hào)為1、2、3、4、5)分別置于10ml量瓶中，各加30％乙醇至刻度，搖勻。以30％乙醇為空白對(duì)照，在286nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，結(jié)果見(jiàn)表1表1.對(duì)照品測(cè)定結(jié)果序號(hào) 12345濃度ug/ml 5.13 10.2620.5230.7841.04吸收度 0.1420.2860.5860.8781.160以吸收度為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)，計(jì)算回歸方程為A＝002845290733C-0.002646341.r＝0.9999。
圖3柚皮苷對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線3、精密度試驗(yàn)取某已知濃度的柚皮苷對(duì)照品溶液，按正文方法，在286nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果見(jiàn)表2
表2精密度試驗(yàn)結(jié)果序號(hào) 吸收度平均值 RSD％(n＝5)1 0.6152 0.6163 0.615 0.615 0.1154 0.6155 0.614上表結(jié)果表明，本方法精密度良好。
4、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果取批號(hào)為030120樣品，按正文方法制備樣品，每隔一定時(shí)間測(cè)定吸收度，測(cè)定結(jié)果如表3表3穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果測(cè)定時(shí)間(分鐘) 吸收度平均值 RSD％(n＝5)0 0.521300.520600.522 0.521 1.35900.521120 0.521上表結(jié)果表明在2小時(shí)內(nèi)，本品穩(wěn)定性良好。
5、重現(xiàn)性試驗(yàn)取批號(hào)為020120樣品，按正文方法測(cè)定6次，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果平均含量序號(hào) 吸收度 含量(mg) RSD％(n＝6)(mg)1 0.596 2.062 0.599 2.073 0.578 2.01 2.072.714 0.608 2.115 0.626 2.166 0.583 2.02上表結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性良好。
6、回收率試驗(yàn)精密吸取樣品溶液50ml，加入柚皮苷對(duì)照品溶液，按正文方法進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)得平均回收率為98.4％，RSD＝1.12％。結(jié)果見(jiàn)表5、表5回收率測(cè)定結(jié)果序 吸收度樣品已 加入柚 測(cè)得量 回收率 平均值 RSD ％號(hào)知 量 皮 苷(mg)(％)(％) (n＝4)(mg) (mg)10.5920.5650.5161.07598.920.5940.5650.5161.07999.798.41.1230.5890.5650.5161.07097.940.5650.5650.5161.06697.2結(jié)果表明，本方法回收率良好。
7、樣品的含量測(cè)定取三批本品，按正文測(cè)定方法，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6三批樣品含量測(cè)定結(jié)果含量批內(nèi)平均含量批間平均含量序號(hào) 批號(hào) 吸收度(ug/g) (ug/g) (ug/g)10211010.31180.080.720211010.31881.430211020.35992.790.290.740211020.34287.750211030.38699.1101.260211030.404103.3綜上所述，暫定本品每克含黃酮以柚皮苷計(jì)算不低于80ug。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的實(shí)施例如下實(shí)施例1；對(duì)照品溶液制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時(shí)的柚皮苷10mg，置10ml量瓶中，加30％乙醇(用醋酸調(diào)至約PH＝4，下同)，溶解并稀釋至刻度，搖勻；再?gòu)闹芯芪?ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含柚皮苷20ug)。
供試品溶液的制備取本品10g，精密稱定，加蒸餾水20ml，置水浴中溶解，放冷，通過(guò)聚酰胺層析柱(1g，30——60目，內(nèi)經(jīng)1cm)，以水100ml洗滌，水洗脫液棄去，再用20％乙醇50ml洗脫，收集醇洗脫液并定容至100ml搖勻，作為黃酮含量測(cè)定用樣品。
黃酮含量測(cè)定供試品和柚皮苷對(duì)照品，在上述方法條件下，選定在286±2nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，測(cè)定樣品中黃酮含量90.0ug/g。
實(shí)施例2對(duì)照品溶液制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時(shí)的柚皮苷10mg，置10ml量瓶中，加30％乙醇(用醋酸調(diào)至約PH＝4，下同)，溶解并稀釋至刻度，搖勻；再?gòu)闹芯芪?ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含柚皮苷20ug)。
供試品溶液的制備取本品14g，精密稱定，加蒸餾水20ml，置水浴中溶解，放冷，通過(guò)聚酰胺層析柱(2g，30——60目，內(nèi)經(jīng)1cm)，以水100ml洗滌，水洗脫液棄去，再用30％乙醇100ml洗脫，收集醇洗脫液并定容至100ml搖勻，作為黃酮含量測(cè)定用樣品。黃酮含量測(cè)定供試品和柚皮苷對(duì)照品，在上述方法條件下，選定在286±2nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，測(cè)定樣品中黃酮含量95ug/g。
實(shí)施例3對(duì)照品溶液制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時(shí)的柚皮苷10mg，置10ml量瓶中，加30％乙醇(用醋酸調(diào)至約PH＝4，下同)，溶解并稀釋至刻度，搖勻；再?gòu)闹芯芪?ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含柚皮苷20ug)。
供試品溶液的制備取本品20g，精密稱定，加蒸餾水20ml，置水浴中溶解，放冷，通過(guò)聚酰胺層析柱(4g，30——60目，內(nèi)經(jīng)2cm)，以水100ml洗滌，水洗脫液棄去，再用50％乙醇200ml洗脫，收集醇洗脫液并定容至100ml搖勻，作為黃酮含量測(cè)定用樣品。黃酮含量測(cè)定供試品和柚皮苷對(duì)照品，在上述方法條件下，選定在286±2nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，測(cè)定樣品中黃酮含量99.1ug/g。
權(quán)利要求
1.一種由中藥原料胖大海0.2-50重量份、烏梅0.2--20重量份、菊花0.2-20重量份、化橘紅0.2-20重量份制成的復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于包括下列步驟(1)對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)干燥的柚皮苷10mg，，置10ml量瓶中，加30％乙醇，溶解并稀釋至刻度，搖勻；再?gòu)闹芯芪?ml，置100ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，配成每1ml中含柚皮苷20ug；(2)供試品溶液的制備稱取本復(fù)方制劑10--20g，加蒸餾水10--30ml溶解，通過(guò)1-5g，，30-60目，內(nèi)經(jīng)1-2cm的聚酰胺層析柱，以水80--120ml洗滌，水洗脫液棄去，再用20--50％乙醇50-200ml洗脫，收集醇洗脫液并定容搖勻，作為黃酮含量測(cè)定用樣品；(3)黃酮含量測(cè)定方法用紫外分光光度法測(cè)定對(duì)照品溶液與供試品溶液的吸收度，利用對(duì)照品比較法計(jì)算樣品中黃酮含量以控制本品質(zhì)量；(4)波長(zhǎng)選擇供試品和柚皮苷對(duì)照品，在上述方法條件下，于波長(zhǎng)260-310nm波長(zhǎng)處有吸收峰，選定該波長(zhǎng)范圍為測(cè)定波長(zhǎng)范圍；(5)以柚皮苷為指標(biāo)測(cè)定黃酮含量不低于80ug。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于選定波長(zhǎng)286±2nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于柚皮苷對(duì)照品溶液濃度范圍為2--60ug/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于柚皮苷對(duì)照品溶液濃度范圍為5.13-41.04ug/ml。
全文摘要
本發(fā)明提供一種能夠有效地控制由胖大海、烏梅、化橘紅、菊花制成的復(fù)方制劑質(zhì)量的檢測(cè)方法，本復(fù)方制劑加蒸餾水溶解，通過(guò)聚酰胺層析柱，以水洗滌，水洗脫液棄去，再用乙醇洗脫，收集醇洗脫液并定容搖勻，作為黃酮含量測(cè)定用樣品；用紫外分光光度法測(cè)定對(duì)照品溶液與供試品溶液的吸收度，利用對(duì)照品比較法計(jì)算樣品中黃酮含量以控制本復(fù)方制劑質(zhì)量，保證了質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和先進(jìn)性。
文檔編號(hào)G01N21/31GK1487279SQ0312897
公開(kāi)日2004年4月7日 申請(qǐng)日期2003年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月29日
發(fā)明者盧建中, 徐昌瑞 申請(qǐng)人:江西江中藥業(yè)股份有限公司