專利名稱：可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針。
本發(fā)明還涉及該化學(xué)發(fā)光探針的制備方法。
背景技術(shù)：
化學(xué)發(fā)光探針主要應(yīng)用于檢測(cè)自由基，兩者之間的反應(yīng)是瞬時(shí)的，劇烈的，所以目前現(xiàn)有的化學(xué)發(fā)光探針在體探測(cè)生物組織化學(xué)發(fā)光時(shí)，很難做到在體的實(shí)時(shí)檢測(cè)，因而導(dǎo)致一些反應(yīng)現(xiàn)象不能觀察到，造成了實(shí)驗(yàn)假象。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針，解決單純的化學(xué)發(fā)光試劑MCLA與氧自由基(1O2，O2-)之間的反應(yīng)是瞬時(shí)的、短暫的，很難做到實(shí)時(shí)的長(zhǎng)時(shí)間觀測(cè)的問(wèn)題。
本發(fā)明的目的還在于提供上述可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針的制備方法。
本發(fā)明可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針是在化學(xué)發(fā)光試劑表面包被可溶性蛋白，其粒徑小于150nm。這樣，可以延緩化學(xué)發(fā)光試劑MCLA的釋放速度，可以做到較長(zhǎng)時(shí)間的在體實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。同時(shí)，制作過(guò)程中所采用的包被MCLA的試劑為可溶性蛋白，它在生物體內(nèi)可被自然降解。
所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一種或一種以上混合物。
所述化學(xué)發(fā)光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精。
可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針的制備方法所需原料包括可溶性蛋白、化學(xué)發(fā)光試劑、植物油、水、非離子型表面活性劑；部分原料用量比例如下可溶性蛋白化學(xué)發(fā)光試劑植物油水＝5-50(單位mg)10-100(單位umol/L)2-8(單位ml)1-4(單位ml)；非離子型表面活性劑濃度為0.2-2％重量。
其中，V水∶V油≤26∶74所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一種或一種以上混合物。
所述化學(xué)發(fā)光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精。
所述植物油包括花生油和/或棉籽油。
所述非離子型表面活性劑可以是Tween 80、司本80、蔗糖酯、或單甘酯。
其制備方法包括以下步驟(1)避光條件下，將可溶性蛋白溶液與化學(xué)發(fā)光試劑溶液混和，再向其中加入植物油，在0-4℃的條件下，用超聲波處理，超聲強(qiáng)度介于80-220W之間，處理時(shí)間為2-5min，并向其中加入非離子型表面活性劑，混合物呈現(xiàn)均勻的乳白色。
(2)將所制得的乳狀液分裝，離心，將乳狀液析出的油除去。
(3)把離心后所制得的白色乳液加熱固化，加熱溫度為50-80℃，固化時(shí)間為6-20min，在低于4℃的溫度條件下保存。
制作過(guò)程中，超聲處理可使人血清白蛋白分散形成微小顆粒，并使MCLA水溶液，人血清白蛋白溶液與植物油均勻混和；向其中加入非離子型表面活性劑主要是為了降低界面張力，促進(jìn)乳化并維持乳液的穩(wěn)定。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1、依據(jù)本發(fā)明中所提出方法而制備的化學(xué)發(fā)光探針，粒徑小于150nm，該尺寸大小保證探針可在毛細(xì)血管內(nèi)均勻輸運(yùn)，從而形成組織中探針的均勻分布；2、依據(jù)本發(fā)明中所提出方法而制備的化學(xué)發(fā)光探針，可根據(jù)探針在體內(nèi)輸運(yùn)時(shí)間來(lái)調(diào)整探針尺寸，從而調(diào)整探針的最佳延時(shí)反應(yīng)時(shí)間，最終達(dá)到提高檢測(cè)靈敏度的目的；3、依據(jù)本發(fā)明中所提出方法而制備的化學(xué)發(fā)光探針，探針包被物在生物體內(nèi)可自然將降解；經(jīng)裸鼠在體實(shí)驗(yàn)使用，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未發(fā)生過(guò)敏及栓塞現(xiàn)象，證明了該制作方法的安全，無(wú)毒性；4、依據(jù)本發(fā)明中所提出方法而制備的化學(xué)發(fā)光探針，具有制作方法簡(jiǎn)便，實(shí)驗(yàn)效果明顯等特點(diǎn)。


圖1是依據(jù)本發(fā)明中所提出方法制作的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針用透射電鏡所拍攝的照片。
圖2是體外實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針(B)和未被蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針(A)在反應(yīng)延時(shí)方面比較的檢測(cè)結(jié)果圖。
圖3是圖2中經(jīng)蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針(B)和未被蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針(A)發(fā)光強(qiáng)度衰減的對(duì)比圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)人血清白蛋白10mg，化學(xué)發(fā)光探針MCLA濃度為20umol/L，菜籽油4m1，三蒸水2ml，非離子型表面活性劑Tween 80的濃度為1％。
(2)避光的條件下，將人血清白蛋白溶液與已稀釋到使用濃度的化學(xué)發(fā)光試劑MCLA溶液混和，再向其中加入菜籽油，在0℃的條件下，用150W的超聲處理1min；向其中加入濃度為1％的非離子型表面活性劑Tween 80后，繼續(xù)用超聲處理2min，混合物呈現(xiàn)均勻的乳白色。
(3)將所制得的乳狀液分裝，4℃的條件下，2000g/min，離心10min。離心后，輕輕將乳狀液析出的油除去。此步驟重復(fù)幾次，直至離心所析出的油被基本除凈。
(4)把離心后所制得的白色乳液在80℃的環(huán)境中加熱固化10min，避光保存于4℃冰箱待用。
實(shí)施例2人血清白蛋白5mg，化學(xué)發(fā)光探針MCLA濃度為10umol/L，菜籽油2ml，三蒸水1ml，均勻混和；0℃的條件下，80W超聲處理2min，加入濃度為0.2％的非離子型表面活性劑Tween 80后，繼續(xù)用超聲處理3min。將所制得的乳液分裝，離心，吸去多余的油分，50℃的條件下，加熱固化20min，然后，避光保存于4℃冰箱。
實(shí)施例3牛血清白蛋白50mg，化學(xué)發(fā)光探針MCLA濃度為20umol/L，菜籽油4ml，三蒸水2ml，均勻混和；0℃的條件下，220W超聲處理1min，加入濃度為0.2％的非離子型表面活性劑Tween 80后，繼續(xù)用超聲處理1min。將所制得的乳液分裝，離心，吸去多余的油分，80℃的條件下，加熱固化10min，然后，避光保存于4℃冰箱。
其中，實(shí)施例1所采用的原料、用量及條件是3個(gè)實(shí)例中最佳的。
如圖所示，圖1是依據(jù)本發(fā)明中所提出方法制作的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針在用日本H-300透射電鏡觀察時(shí)拍攝的照片。為實(shí)施例1所對(duì)應(yīng)的結(jié)果，顆粒粒徑大小為50-150nm。放大倍數(shù)50k。
圖2是體外實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)人血清白蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針(B)和未被包裹的化學(xué)發(fā)光探針(A)在反應(yīng)延時(shí)方面的檢測(cè)結(jié)果圖。該實(shí)驗(yàn)中，納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針的制作采用的是發(fā)明內(nèi)容例1中所介紹的方法。
圖3是圖2中經(jīng)人血清白蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針(B)和未被包裹的化學(xué)發(fā)光探針(A)發(fā)光強(qiáng)度衰減對(duì)比圖?？梢钥闯?，未被包裹的化學(xué)發(fā)光探針發(fā)光衰減快，13min就基本衰減到本底；而經(jīng)人血清白蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針?biāo)p緩慢，測(cè)量20min仍有微弱的發(fā)光。根據(jù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可見經(jīng)蛋白包裹的化學(xué)發(fā)光探針比未被包裹的探針有較明顯的發(fā)光延時(shí)。
權(quán)利要求
1.一種可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針，其特征在于在化學(xué)發(fā)光試劑表面包被可溶性蛋白，其粒徑小于150nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針，其特征在于所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一種或一種以上混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針，其特征在于述化學(xué)發(fā)光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精。
4.權(quán)利要求1所述的可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針的制備方法，其特征在于所需原料包括可溶性蛋白、化學(xué)發(fā)光試劑、植物油、水、非離子型表面活性劑；部分原料用量比例如下可溶性蛋白化學(xué)發(fā)光試劑植物油水＝5-50(單位mg)10-100(單位umol/L)2-8(單位ml)1-4(單位ml)；非離子型表面活性劑濃度為0.2-2％重量；所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白，其中一種或一種以上混合物；所述化學(xué)發(fā)光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精；其中，V水∶V油≤26∶74，其制備方法包括以下步驟(1)避光條件下，將可溶性蛋白溶液與化學(xué)發(fā)光試劑溶液混和，再向其中加入植物油，在0-4℃的條件下，用超聲波處理，超聲強(qiáng)度介于80-220W之間，處理時(shí)間為2-5min，并向其中加入非離子型表面活性劑，混合物呈現(xiàn)均勻的乳白色；(2)將所制得的乳狀液分裝，離心，將乳狀液析出的油除去；(3)把離心后所制得的白色乳液加熱固化，加熱溫度為50-80℃，固化時(shí)間為6-20min，在低于4℃的溫度條件下保存。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針的制備方法，其特征在于所述植物油包括花生油和/或棉籽油。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針的制備方法，其特征在于所述非離子型表面活性劑是Tween 80、司本80、蔗糖酯、或單甘酯。
全文摘要
一種可在生物體內(nèi)自然降解的納米級(jí)化學(xué)發(fā)光探針,其特征在于在化學(xué)發(fā)光試劑表面包被可溶性蛋白,其粒徑小于150nm；其制備方法包括避光條件下,將可溶性蛋白溶液與化學(xué)發(fā)光試劑溶液混和,再向其中加入植物油,在0－4℃的條件下,用超聲波處理,超聲強(qiáng)度介于80－220W之間,處理時(shí)間為2－5min,并向其中加入非離子型表面活性劑,混合物呈現(xiàn)均勻的乳白色；(2)將所制得的乳狀液分裝,離心,將乳狀液析出的油除去；(3)把離心后所制得的白色乳液加熱固化,加熱溫度為50－80℃,固化時(shí)間為6－20min,在低于4℃的溫度條件下保存；本發(fā)明解決單純的化學(xué)發(fā)光試劑MCLA與氧自由基(
文檔編號(hào)G01N21/76GK1423119SQ02149799
公開日2003年6月11日 申請(qǐng)日期2002年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者邢達(dá), 郝敏 申請(qǐng)人:華南師范大學(xué)