本發(fā)明屬于微流控細胞檢測芯片技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種細胞脂肪顆粒檢測芯片，還涉及一種用于上述檢測芯片的檢測試劑。
背景技術(shù)：
細胞檢測芯片是以細胞作為研究對象的一種生物芯片技術(shù)，它是為適應(yīng)基因、分子時代對于探索生命科學(xué)需求還產(chǎn)生的新興技術(shù)。細胞檢測芯片技術(shù)既保持了傳統(tǒng)研究細胞方法的優(yōu)點，又滿足了高通量、大樣本及快速獲取細胞信息等特點?？捎糜谘芯刻囟ɑ蚣氨磉_蛋白質(zhì)與疾病之間的相互關(guān)系，對于疾病的診斷、藥物治療靶點篩選、細胞定位、抗體藥物篩選等方面有廣泛的應(yīng)用價值。
造血細胞中包含粒細胞系統(tǒng)、紅細胞系統(tǒng)、巨核細胞系統(tǒng)等多種類型細胞，血液疾病診斷需要對細胞類型進行鑒定。利用細胞脂肪顆粒染色用于輔助造血細胞類型鑒別，粒細胞系統(tǒng)，原始粒細胞一般為陰性反應(yīng)，有的可以出現(xiàn)少量陽性顆粒，早幼粒細胞以及以下各階段細胞呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，并隨著細胞的成熟陽性反應(yīng)逐漸加強，顆粒增加，中性粒細胞的顆粒較均勻，嗜酸性粒細胞顆粒粗大，著色偏棕色，顆粒中心著色淺而邊緣著色深，嗜堿性粒細胞跑呈現(xiàn)陰性或陽性反應(yīng)，陽性顆粒大小不一。單核細胞系統(tǒng)，原始單核細胞一般為陰性反應(yīng)，幼稚細胞核和單核細胞呈現(xiàn)弱陽性反應(yīng)，顆粒細小彌散分布；其它細胞，淋巴細胞、紅細胞、幼稚紅細胞、巨核細胞、血小板呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，網(wǎng)狀細胞、巨噬細胞可呈現(xiàn)弱陽性反應(yīng)。
傳統(tǒng)的粒細胞脂肪顆粒測定采用首先指標細胞涂片，對細胞進行固定以后，利用脂肪染料對細胞脂肪顆粒進行染色，最后借助顯微鏡觀察判斷細胞內(nèi)脂肪顆粒。由于骨髓、血液中紅細胞與白細胞數(shù)量的比例大約2000：1，測定過程中傳統(tǒng)方法紅細胞容易干擾測定結(jié)果，導(dǎo)致檢測結(jié)果誤差較大。因此需要研發(fā)一種能夠減少測定干擾的檢測芯片及相應(yīng)的檢測方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題而提供一種細胞脂肪顆粒檢測芯片。
本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是：一種細胞脂肪顆粒檢測芯片包括片狀的芯片基體，芯片基體內(nèi)部設(shè)置有主通道，主通道的一端設(shè)置有進樣口，所述進樣口延伸至芯片基體的外部；主通道的一側(cè)連通設(shè)置有檢測試劑通道，檢測試劑通道的端部設(shè)置有試劑注入口，所述試劑注入口延伸至芯片基體的外部；主通道的另一側(cè)依次連通設(shè)置有三組微通道集管，以及分別與三組微通道集管相對應(yīng)的圓錐形連接管、混合樣品通道、細胞檢測通道以及細胞收集通道；每組微通道集管內(nèi)并列設(shè)置有多條內(nèi)徑相同的微通道；所述圓錐形連接管的底面與微通道集管連通，圓錐形連接管的頂角與混合樣品通道連通；所述細胞收集通道的端部延伸至芯片基體的外部。
本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：本芯片體積小，樣品用量少、快速、檢測效率高，可減少測定中的干擾，適用于智能化檢測造血細胞。
優(yōu)選地：所述三組微通道集管分別為第一微通道集管、第二微通道集管和第三微通道集管；第一微通道集管內(nèi)的微通道數(shù)量為20-60個，微通道的內(nèi)徑為16-40μm；第二微通道集管內(nèi)的微通道數(shù)量為40-80個，微通道的內(nèi)徑為12-14μm；第三微通道集管內(nèi)的微通道數(shù)量為60-100個，微通道的內(nèi)徑為6-10μm。
優(yōu)選地：所述主通道為圓柱形管狀通道或方柱形管狀通道。
優(yōu)選地：所述檢測試劑通道為圓柱形管狀通道或方柱形管狀通道。
優(yōu)選地：所述細胞檢測通道為四方體結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于上述細胞脂肪顆粒檢測芯片的檢測試劑。
本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是：一種用于上述細胞脂肪顆粒檢測芯片的檢測試劑包括A溶液、B溶液、C溶液和D溶液；其中A溶液的制備方法是：取0.5mg-1mg的蘇丹B試劑，溶于100ml無水乙醇中，然后80℃加熱并同時攪拌48小時至溶解；B溶液的制備方法為：取7.5mg甲基丙烯酸聚乙二醇甲醚酯溶于10ml-100ml二氯甲烷中，然后在加熱和震蕩的情況下，攪拌10-180分鐘，至全部溶解；C溶液的制備方法為：將上述A溶液和B溶液等體積混合，然后在加熱和震蕩的情況下，混合兩種溶液，把混合溶液加入等體積的溫度為80℃的、pH值為7.4的10mmol/L磷酸鹽緩沖溶液中，繼續(xù)加熱攪拌0.5-4小時，使其中無機物分子比例發(fā)生改變，最后離心0.5-5小時，除去沉淀部分；D溶液為pH值為7.4的10mmol/L磷酸鹽緩沖液。
附圖說明
圖1是本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖中：1、主通道；2、檢測試劑通道；3、微通道集管；31、第一微通道集管；32、第二微通道集管；33、第三微通道集管；4、圓錐形連接管；5、混合樣品通道；6、細胞檢測通道；7、細胞收集通道；8、芯片基體。
具體實施方式
為能進一步了解本發(fā)明的發(fā)明內(nèi)容、特點及功效，茲例舉以下實施例詳細說明如下：
請參見圖1，本發(fā)明包括包括片狀的芯片基體8，芯片基體8內(nèi)部設(shè)置有主通道1，主通道1的一端設(shè)置有進樣口，所述進樣口延伸至芯片基體8的外部；主通道1的一側(cè)連通設(shè)置有檢測試劑通道2，檢測試劑通道2的端部設(shè)置有試劑注入口，所述試劑注入口延伸至芯片基體8的外部；主通道1的另一側(cè)依次連通設(shè)置有三組微通道集管3，以及分別與三組微通道集管3相對應(yīng)的圓錐形連接管4、混合樣品通道5、細胞檢測通道6以及細胞收集通道7；每組微通道集管3內(nèi)并列設(shè)置有多條內(nèi)徑相同的微通道；所述圓錐形連接管4的底面與微通道集管3連通，圓錐形連接管4的頂角與混合樣品通道5連通；所述細胞收集通道7的端部延伸至芯片基體8的外部。
所述三組微通道集管3分別為第一微通道集管31、第二微通道集管32和第三微通道集管33；第一微通道集管31內(nèi)的微通道數(shù)量為20-60個，微通道的內(nèi)徑為16-40μm；第二微通道集管32內(nèi)的微通道數(shù)量為40-80個，微通道的內(nèi)徑為12-14μm；第三微通道集管33內(nèi)的微通道數(shù)量為60-100個，微通道的內(nèi)徑為6-10μm。
本實施例中，所述主通道1為圓柱形管狀通道或方柱形管狀通道。
本實施例中，所述檢測試劑通道2為圓柱形管狀通道或方柱形管狀通道。
本實施例中，所述細胞檢測通道6為四方體結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明還包括一種用于上述檢測芯片的檢測試劑，該檢測試劑包括A溶液、B溶液、C溶液和D溶液。
其中A溶液的制備方法是：取0.5mg-1mg的蘇丹B試劑，溶于100ml無水乙醇中，然后80℃加熱并同時攪拌48小時至溶解。
B溶液的制備方法為：取7.5mg甲基丙烯酸聚乙二醇甲醚酯(Poly(ethylene glycol)methyl ether methacrylate)溶于10ml-100ml二氯甲烷中，然后在加熱和震蕩的情況下，攪拌10-180分鐘，至全部溶解。
C溶液的制備方法為：將上述A溶液和B溶液等體積混合，然后在加熱和震蕩的情況下，混合兩種溶液，把混合溶液加入等體積的溫度為80℃的、pH值為7.4的10mmol/L磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中，繼續(xù)加熱攪拌0.5-4小時，使其中無機物分子比例發(fā)生改變，最后離心0.5-5小時，除去沉淀部分。
D溶液為pH值為7.4的10mmol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)。
采用上述檢測芯片及檢測試劑進行檢測的方法包括以下步驟:
1、取待檢測細胞懸液與溶液C以體積比為1：(5-500)比例混合，充分混均，27℃下攪拌混合10-30分鐘，將此混合液定為E溶液。
2、將D溶液首先通過芯片上的檢測試劑通道2注入芯片，流速為1ml-100ml/h。
3、打開芯片主通道1的進樣口，使E溶液進入主通道1，注入流速為0.1ml-10ml/h。
4、收集細胞檢測通道6細胞儲存池內(nèi)的細胞，CCD采集細胞圖像，觀察包含有藍黑色顆粒的細胞為細胞內(nèi)的脂肪顆粒陽性細胞。
5、通過細胞內(nèi)是否出現(xiàn)藍黑色顆粒、顆粒的數(shù)量、大小可輔助檢查細胞類型和細胞的生物狀態(tài)。