專(zhuān)利名稱(chēng)：一種超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膜包的完整性檢測(cè)方法，尤其是一種超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
膜分離技術(shù)依據(jù)藥效活性與其分子結(jié)構(gòu)及分子量水平密切相關(guān)的特性，通過(guò)選用不同截留特性的膜組件構(gòu)成膜分離系統(tǒng)對(duì)有效成分進(jìn)行分離、濃縮、純化。操作通常以壓力為推動(dòng)力，可在常溫下完成，無(wú)需添加其它物質(zhì)，具有高選擇性的優(yōu)點(diǎn)。膜分離包括微濾，超濾與納濾，都是以壓強(qiáng)差為推動(dòng)力的過(guò)程，其分離機(jī)理是膜孔對(duì)流體中微粒進(jìn)行篩分。微濾膜是(MF)指孔徑在0. I-IOum間，超濾膜(UF)孔徑 0. 01-0. Ium間，納濾膜(NF)孔徑一般在0. 001-0. 05um間。通常病毒的粒徑一般介于 0. 01-0. 08um,菌液、病毒具有較小的相對(duì)分子量，因此使用超濾膜濃縮抗原，效果好，穩(wěn)定性強(qiáng)，適于一定規(guī)模的生產(chǎn)使用。超濾膜篩分過(guò)程，以膜兩側(cè)的壓力差為驅(qū)動(dòng)力，以超濾膜為過(guò)濾介質(zhì)，在一定的壓力下，當(dāng)原液流過(guò)膜表面時(shí)，超濾膜表面密布的許多細(xì)小的微孔只允許水及小分子物質(zhì)通過(guò)而成為透過(guò)液，而原液中體積大于膜表面微孔徑的物質(zhì)則被截留在膜的進(jìn)液側(cè)，成為濃縮液，因而實(shí)現(xiàn)對(duì)原液的凈化、分離和濃縮的目的。在使用超濾膜膜包對(duì)抗原進(jìn)行濃縮時(shí)，完整的膜包能將水分子滲透出去，富集抗原微粒達(dá)到濃縮目的。超濾膜分離技術(shù)有著產(chǎn)品收率高、效率高、能耗低、操作簡(jiǎn)單、環(huán)境友好等優(yōu)勢(shì)，在傳統(tǒng)藥品生產(chǎn)中呈現(xiàn)顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，但是由于膜特殊的高分子結(jié)構(gòu)，再生、清洗、利用頻率較高，會(huì)出現(xiàn)膜滲漏現(xiàn)象。事實(shí)上，由于構(gòu)成膜分離系統(tǒng)的膜組件安裝管路復(fù)雜，連接點(diǎn)較多，因此為膜工作過(guò)程中出現(xiàn)異常時(shí)，對(duì)分離系統(tǒng)的查漏工作比較困難。膜包的完整性是保證分離效果的前提，而膜包纖維的完整性檢測(cè)大都依賴于膜包廠家的檢測(cè)方法，而實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)廠家檢測(cè)方法檢測(cè)合格的膜包，對(duì)病毒分離效果仍然不好。事實(shí)上用于病毒分離，對(duì)膜包的要求較高，膜纖維細(xì)微的破損會(huì)造成病毒泄露，從而造成抗原損失和對(duì)環(huán)境的污染。目前膜完整性檢測(cè)，一般按照設(shè)備廠家提供的方法進(jìn)行泡點(diǎn)試驗(yàn)法檢測(cè)。打開(kāi)完整性測(cè)試裝置的氣源，對(duì)系統(tǒng)加壓。在系統(tǒng)加壓過(guò)程中，完整性測(cè)試裝置上顯示的空氣流速首先將提高，然后下降至一個(gè)穩(wěn)定的流速。測(cè)量到的這個(gè)穩(wěn)定的流速就是空氣前進(jìn)流(擴(kuò)散流)，如果這個(gè)穩(wěn)定的流速，降低到了可接受規(guī)范之下，并且與先前的量值一致，那么說(shuō)明通過(guò)了膜完整性測(cè)試。設(shè)備廠家提供的具體檢測(cè)方法如下在對(duì)膜堆進(jìn)行完整性檢測(cè)之前，系統(tǒng)應(yīng)該經(jīng)過(guò)充分的清洗和沖洗，殘留的清潔劑會(huì)對(duì)結(jié)果有很大的影響。確定系統(tǒng)清洗好，膜已經(jīng)完全濕透后，將系統(tǒng)內(nèi)的水排空，將壓力可調(diào)的氣源接在膜堆的進(jìn)口或回流口，將沒(méi)有接氣源的進(jìn)口或回流口封閉，透過(guò)液口是開(kāi)放的。慢慢加壓到指定氣壓，然后穩(wěn)定5分鐘讓殘留水排出。測(cè)量并記錄氣壓、溫度和從透過(guò)口出來(lái)的氣體流量，氣體流量可用氣體流量劑測(cè)量，比較檢測(cè)的流量和規(guī)定的指標(biāo)，如果超濾膜不完整，其所測(cè)得空氣流量將大大超過(guò)表中流速指標(biāo)的上限。也有的報(bào)道用噪音檢測(cè)法，但由于切向流過(guò)濾的壓力和流速較大，噪音檢測(cè)的方法不可取。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種在線檢測(cè)方法，能檢測(cè)膜包是否破損的超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法，包括以下步驟(1)首先對(duì)新膜包按照廠家標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，進(jìn)行檢測(cè)；(2)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將含有作為標(biāo)示抗原的新城疫病毒和需要分離的抗原的抗原液經(jīng)過(guò)超濾膜膜包，取膜包滲出液，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)(紅細(xì)胞凝集試驗(yàn))，測(cè)血凝價(jià) HA,如果HA > 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果HA彡31og2,繼續(xù)進(jìn)行下面步驟⑶檢測(cè)；(3)取十日齡無(wú)特定抗體的雞胚10個(gè)，其中8個(gè)胚每胚尿囊內(nèi)接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對(duì)照，接種后37°C培養(yǎng)120小時(shí)，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過(guò)1個(gè)，期間發(fā)現(xiàn)死亡的胚立刻置于2-8°C保存，120小時(shí)后進(jìn)行下面步驟(4)檢測(cè)；(4)對(duì)所有雞胚取胚液測(cè)定血凝價(jià)HA，如果HA ( 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包的完整， 如果HA > 31og2，說(shuō)明超濾膜膜包的不完整。所述抗原液中新城疫病毒抗原液按體積比計(jì)占0. 5_1%。所述需要分離的抗原為禽流感病毒或雞新城疫病毒。本發(fā)明的有益效果是利用病毒的敏感性，以及病毒對(duì)紅細(xì)胞的凝集作用，通過(guò)檢測(cè)凝集價(jià)，判定膜包的完整性，方法簡(jiǎn)單易行，相比廠家的方法更精確，可用于單個(gè)膜包的檢測(cè)，多個(gè)膜包以及系統(tǒng)的檢測(cè)。用病毒的效價(jià)檢測(cè)膜的完整性，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行，并且不用停止生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法，包括以下步驟(1)首先對(duì)新膜包按照廠家標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，進(jìn)行檢測(cè)；(2)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將含有作為標(biāo)示抗原的新城疫病毒和需要分離的抗原的抗原液經(jīng)過(guò)超濾膜膜包，取膜包滲出液，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)(紅細(xì)胞凝集試驗(yàn))，測(cè)血凝價(jià) HA,如果HA > 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果HA彡31og2,繼續(xù)進(jìn)行下面步驟⑶檢測(cè)；
(3)取十日齡無(wú)特定抗體的雞胚10個(gè)，其中8個(gè)胚每胚尿囊內(nèi)接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對(duì)照，接種后37°C培養(yǎng)120小時(shí)，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過(guò)1個(gè)，期間發(fā)現(xiàn)死亡的胚立刻置于2-8°C保存，120小時(shí)后進(jìn)行下面步驟(4)檢測(cè)；(4)對(duì)所有雞胚取胚液測(cè)定血凝價(jià)HA，如果HA ( 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包的完整， 如果HA > 31og2，說(shuō)明超濾膜膜包的不完整。所述抗原液中新城疫病毒抗原液按體積比計(jì)占0. 5_1%。所述需要分離的抗原為禽流感病毒或雞新城疫病毒。雞新城疫病毒病毒(NDV)屬于副粘病毒科，副粘病毒屬，核酸為單鏈RNA。成熟的病毒粒子呈球形，直徑為120-300nm。由螺旋形對(duì)稱(chēng)盤(pán)繞的核衣殼和囊膜組成。囊膜表面有放射狀排列的纖突，其中含有神經(jīng)氨酸酶，因此病毒能吸附在禽類(lèi)的紅血球表面，引起紅血球的凝集。新城疫病毒的半數(shù)感染量EID5tl 每0.1ml病毒含量> IO8EID5tlt5雞新城疫病毒的粒徑較小，據(jù)有凝血性，稀釋較高滴度時(shí)仍有靈敏的凝血現(xiàn)象，同時(shí)由于檢測(cè)方法簡(jiǎn)單易行，可作為靈敏的指示劑。而對(duì)抗原含量測(cè)定時(shí)以通過(guò)紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，檢測(cè)HA效價(jià)為主。并且測(cè)定簡(jiǎn)便、 快捷、易行，在生產(chǎn)中便于實(shí)行。下面具體進(jìn)行說(shuō)明測(cè)定血凝價(jià)HA的方法，又稱(chēng)紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)法，詳見(jiàn)《中華人民共和國(guó)獸用生物制品規(guī)程》2000年版紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)。所采用膜包購(gòu)于頗爾公司，膜包的截留分子量lOOkd，本超濾膜堆，截留分子量10 萬(wàn)分子量，有效過(guò)濾面積為0. 5m2，壓力0. 6MPa。另外，可以對(duì)新膜包按照標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，取下流滲出液，分別測(cè)血凝價(jià)HA，作為完整性的參照值。下述實(shí)施例中的百分比為體積百分比。實(shí)施例1(1)首先對(duì)新膜包按照廠家標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，進(jìn)行檢測(cè)；(2)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將含有0. 5%作為標(biāo)示抗原的新城疫病毒和99. 5%需要分離的禽流感病毒的抗原液經(jīng)過(guò)超濾膜膜包，取膜包滲出液10ml，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)(紅細(xì)胞凝集試驗(yàn))，測(cè)血凝價(jià)HA，如果HA > 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果 HA ( 31og2，繼續(xù)進(jìn)行下面步驟(3)檢測(cè)；(3)取十日齡無(wú)特定抗體的雞胚10個(gè)，其中8個(gè)胚每胚尿囊內(nèi)接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對(duì)照，接種后37°C培養(yǎng)120小時(shí)，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過(guò)1個(gè)，期間發(fā)現(xiàn)死亡的胚立刻置于2-8°C保存，120小時(shí)后進(jìn)行下面步驟(4)檢測(cè)；(4)對(duì)所有雞胚取胚液(尿囊液和羊水)測(cè)定血凝價(jià)HA，如果HA ^ 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包的完整，如果HA > 31og2，說(shuō)明超濾膜膜包的不完整。實(shí)施例2(1)首先對(duì)新膜包按照廠家標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，進(jìn)行檢測(cè)；
(2)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將含有作為標(biāo)示抗原的新城疫病毒和99%需要分離的禽流感病毒的抗原液經(jīng)過(guò)超濾膜膜包，取膜包滲出液10ml，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)(紅細(xì)胞凝集試驗(yàn))，測(cè)血凝價(jià)HA，如果HA > 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果 HA ( 31og2，繼續(xù)進(jìn)行下面步驟(3)檢測(cè)；(3)取十日齡無(wú)特定抗體的雞胚10個(gè)，其中8個(gè)胚每胚尿囊內(nèi)接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對(duì)照，接種后37°C培養(yǎng)120小時(shí)，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過(guò)1個(gè)，期間發(fā)現(xiàn)死亡的胚立刻置于2-8°C保存，120小時(shí)后進(jìn)行下面步驟(4)檢測(cè)；(4)對(duì)所有雞胚取胚液(尿囊液和羊水)測(cè)定血凝價(jià)HA，如果HA ^ 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包的完整，如果HA > 31og2，說(shuō)明超濾膜膜包的不完整。實(shí)施例3(1)首先對(duì)新膜包按照廠家標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，進(jìn)行檢測(cè)；(2)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將新城疫病毒的抗原液經(jīng)過(guò)超濾膜膜包，取膜包滲出液10ml，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)(紅細(xì)胞凝集試驗(yàn))，測(cè)血凝價(jià)HA，如果HA > 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果HA ( 31og2，繼續(xù)進(jìn)行下面步驟(3)檢測(cè)；(3)取十日齡無(wú)特定抗體的雞胚10個(gè)，其中8個(gè)胚每胚尿囊內(nèi)接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對(duì)照，接種后37°C培養(yǎng)120小時(shí)，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過(guò)1個(gè)，期間發(fā)現(xiàn)死亡的胚立刻置于2-8°C保存，120小時(shí)后進(jìn)行下面步驟(4)檢測(cè)；(4)對(duì)所有雞胚取胚液(尿囊液和羊水)測(cè)定血凝價(jià)HA，如果HA ^ 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包的完整，如果HA > 31og2，說(shuō)明超濾膜膜包的不完整。綜上所述，本發(fā)明的內(nèi)容并不局限在上述的實(shí)施例中，相同領(lǐng)域內(nèi)的有識(shí)之士可以在本發(fā)明的技術(shù)指導(dǎo)思想之內(nèi)可以輕易提出其他的實(shí)施例，但這種實(shí)施例都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟(1)首先對(duì)新膜包按照廠家標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，進(jìn)行檢測(cè)；(2)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將含有作為標(biāo)示抗原的新城疫病毒和需要分離的抗原的抗原液經(jīng)過(guò)超濾膜膜包，取膜包滲出液，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)，測(cè)血凝價(jià)HA，如果HA > 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果HA彡31og2，繼續(xù)進(jìn)行下面步驟(3)檢測(cè)；(3)取十日齡無(wú)特定抗體的雞胚10個(gè)，其中8個(gè)胚每胚尿囊內(nèi)接種膜包滲出液0.2ml, 留2枚作對(duì)照，接種后37°C培養(yǎng)120小時(shí)，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過(guò)1個(gè)，期間發(fā)現(xiàn)死亡的胚立刻置于2-8°C保存，120小時(shí)后進(jìn)行下面步驟(4)檢測(cè)；(4)對(duì)所有雞胚取胚液測(cè)定血凝價(jià)HA，如果HA^ 31og2,說(shuō)明超濾膜膜包的完整，如果 HA > 31og2，說(shuō)明超濾膜膜包的不完整。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法，其特征在于，所述抗原液中新城疫病毒抗原液按體積比計(jì)占0. 5-1%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法，其特征在于，所述需要分離的抗原為禽流感病毒或雞新城疫病毒。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種超濾膜膜包的完整性檢測(cè)方法，首先對(duì)新膜包按照標(biāo)準(zhǔn)操作方法正確安裝，開(kāi)啟機(jī)器，待運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定后，對(duì)取出的滲透液做HA檢測(cè)，測(cè)血凝價(jià)HA，如果HA＞3log2，說(shuō)明超濾膜膜包不完整，檢測(cè)結(jié)束；如果HA≤3log2，繼續(xù)進(jìn)行檢測(cè)；通過(guò)選取敏感病毒、針對(duì)其透出液接種雞胚，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后通過(guò)生物檢測(cè)方法，測(cè)定該病毒是否存在于透出液，說(shuō)明被測(cè)超濾膜膜包是否完整。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行，可在線檢測(cè)，相比廠家的方法更精確，可用于單個(gè)膜包的檢測(cè)，多個(gè)膜包以及系統(tǒng)的檢測(cè)。
文檔編號(hào)B01D65/10GK102430340SQ201110360538
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者劉建, 楊旭, 范營(yíng)國(guó), 陳利紅, 韓春賀 申請(qǐng)人:天津瑞普高科生物藥業(yè)有限公司