專利名稱：手性分離色譜柱的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種手性分離色譜柱，特別涉及一種分離對映異構(gòu)體的色譜柱，屬于 手性化合物分離技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
立體異構(gòu)體是指分子中的原子在空間定向彼此不同的分子，其中的一類為對映異 構(gòu)體，所謂對映異構(gòu)體即一對彼此互為鏡像的分子。表征特定立體異構(gòu)體的原子的特定排 列稱作其光學(xué)構(gòu)象，特定地由已知的次序規(guī)則來表示，例如+、一(也用D、L)或(R或S)。
盡管只是原子在空間定向彼此不同，但立體異構(gòu)現(xiàn)象的實(shí)際作用是很重要的。例 如許多化合物的生理和藥物活性受到了其所包括的特定構(gòu)象的強(qiáng)烈影響。因此，許多化合 物僅在以給定的立體異構(gòu)體形式使用時(shí)才有廣泛的應(yīng)用。
物體與其鏡像不能疊合的現(xiàn)象叫做手性。碳原子在形成有機(jī)分子的時(shí)候，4個原子 或基團(tuán)可以通過4根共價(jià)鍵形成三維的空間結(jié)構(gòu)，由于相連的原子或基團(tuán)不同，它會形成 兩種分子結(jié)構(gòu)，它們之間象是鏡子里和鏡子外的物體那樣，看上去互為對應(yīng)，但是它們的三 維空間結(jié)構(gòu)不管怎樣旋轉(zhuǎn)都不會重合，就像左手和右手那樣，所以稱這兩種分子叫手性分 子。
手性是人類賴以生存的自然界的本質(zhì)屬性之一。生命現(xiàn)象中的化學(xué)過程都是在高 度不對稱的環(huán)境中進(jìn)行的。生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、核酸等，都有手性，它們在生物體內(nèi) 造成手性環(huán)境。除細(xì)菌等意外的蛋白質(zhì)都是由左旋的L-氨基酸組成；多糖和核酸中的糖則 是右旋的D-構(gòu)型；在機(jī)體的代謝和調(diào)控過程中所涉及的物質(zhì)，如酶和細(xì)胞表面的受體，一 般也都具有手性，它們在生物體內(nèi)造成手性環(huán)境。正是因?yàn)檫@種立體化學(xué)的手性特征，使生 命體系通常對藥物，殺蟲劑或味覺和嗅覺化合物中的一對對映異構(gòu)體(光學(xué)異構(gòu)體)，表現(xiàn) 出不同的生物反應(yīng)。
手性藥物進(jìn)入生物體內(nèi)后，其藥理作用多與它和體內(nèi)靶分子之間的手性匹配和分 子識別能力相關(guān)。因此含手性的藥物，不同的對映異構(gòu)體顯示出不同的藥理作用和毒副作 用。已發(fā)現(xiàn)很多手性化合物的對映異構(gòu)體具有不同的生理活性，例如D-苯異丙胺是一種 十分有效的中樞神經(jīng)興奮劑，而它的異構(gòu)體幾乎沒有藥效，普萘諾爾的L-異構(gòu)體比D-異構(gòu) 體的生物活性高100倍。有些手性藥物的兩種對映體有完全不同的藥理作用，如曲托喹酚 的S異構(gòu)體是支氣管擴(kuò)張劑，R異構(gòu)體則有抑制血小板凝聚的藥理作用。有些對映體還會 引起毒副作用，一個災(zāi)難性的例子是反應(yīng)停(thalidomide，沙利度胺)的使用，其早在1960 年用作鎮(zhèn)靜和安眠藥，用于治療妊娠期的不良反應(yīng)，但是后來發(fā)現(xiàn)，懷孕早期的婦女服用此 藥會引起胎兒嚴(yán)重畸形，使該藥停止使用。1979年發(fā)現(xiàn)，僅R- ( + )對映體沙利度胺具有鎮(zhèn) 靜和安眠作用。而S- (_)對映體對胎兒有致畸作用，而且這種對映體對鎮(zhèn)靜或安眠并不重 要。因此，如果單獨(dú)服用(R)- ( + )對映異構(gòu)體，就不會產(chǎn)生致畸作用，這種藥或許還可能繼 續(xù)使用。
目前，大約有60%以上的處方藥分子中含有一個或多個不對稱中心，而這類手性藥物中的絕大多數(shù)是以外消旋的形式在市場銷售。由于要得到兩種光學(xué)純的對映體十分困 難，所以對映體藥物藥理活性差別沒有經(jīng)過充分的研究。這些藥物中，對映體的一種可能對 病人可能無用或者甚至有害，為了準(zhǔn)確了解藥效和安全用藥，美國食品藥品管理局(FDA)提 出新的法規(guī)，要求申報(bào)手性藥物時(shí)必須要對不同異構(gòu)體的生理作用闡述清楚。
目前，通常由以下三種方法獲得單一對映體的手性化合物1、手性源合成法；2、 不對稱合成法；3、外消旋體拆分法。外消旋體拆分法又可具體分為(1)、化學(xué)拆分法；(2)、 酶或微生物法、(3)、色譜拆分法。色譜拆分法包括高效液相色譜法、氣象色譜法、薄層色譜 法、超臨界色譜法、毛細(xì)管電泳法以及逆流色譜-離心分配色譜法。在這些色譜法中，高效 液相色譜法不會因?yàn)楦邷囟谷苜|(zhì)構(gòu)型發(fā)生變化和失去生物活性，貯容量高，具有發(fā)展成 實(shí)驗(yàn)和工業(yè)規(guī)模對映體制備分離的巨大潛力。液相色譜法手性拆分依據(jù)其原理可分為以下 三種類型1、手性衍生化法；2、手性流動相法；3、手性固定相法。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種手性分離色譜柱。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種手性分離色譜柱，所述色譜柱的 固定相為符合下列通式的化合物載體一(CH2)m- NHCO 一手性氨基酸基團(tuán)一 NH - (CH2)n- NH 一手性氨基酸基團(tuán)一 CONH - (CH2)。一載體；其中，m = 2 12 ;n = 2 12 ;0 = 2 12 ；所述載體為硅膠；所述手性氨基酸基團(tuán)是 手性氨基酸中的氨基失去H、羧基失去OH后剩下的基團(tuán)。
上述技術(shù)方案中的有關(guān)內(nèi)容解釋如下1、上述方案中，所述手性氨基酸是α-氨基酸，且α碳原子為手性碳原子。
2、上述方案中，所述氨基酸為L-異亮氨酸。
本發(fā)明工作原理是本發(fā)明就是利用手性固定相法的手性色譜柱，基于樣品與固 定相表面的手性選擇劑形成暫時(shí)的非對映體配合物的能量差異或穩(wěn)定性不同而達(dá)到手性 分離。
由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果1、本發(fā)明得到的固定相在有機(jī)溶劑中性質(zhì)穩(wěn)定，因此可以較寬范圍地選擇流動相條 件。對于一些待拆分外消旋化合物，本發(fā)明試圖當(dāng)作流動相來拆分時(shí)，也可以實(shí)現(xiàn)有效地分1 O
2、本發(fā)明的手性選擇器與分析物形成了有吸引力的氫鍵、或者是它們與分析物之 間具有有吸引力的極性相互作用。此外，在分析物和手性選擇器之間的空間相互作用也是 重要的。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述
實(shí)施例一一種手性分離色譜柱一、手性分離色譜柱的制備第一步冰水浴下，在盛有1. OL去離子水的2. OL的三頸瓶中加入60g的NaOH，攪拌溶解，再加入196. 5g的L-IleCOOH (L-異亮氨酸)，攪拌全溶后，同時(shí)滴加255. Sg的芐氧酰氯 (芐氧甲酰氯)和60gNa0H的IOOml去離子水溶液(將60gNa0H溶解于IOOml的去離子水)， 滴加完畢后，室溫?cái)嚢?2小時(shí)。用500ml的乙醚分兩次洗滌水相，在冰水浴下往洗滌后的 水相中，快速攪拌下緩慢加入濃鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為酸性，在冰水浴中靜止分層，分出油層， 水相用500ml的乙酸乙酯分次萃取，合并有機(jī)相后用無水Na2SO4干燥，濾去硫酸鈉，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)除去乙酸乙酯，然后趁熱加入500ml的CCl4，溶解，等冷卻后，加入到冰水浴冷卻的1.0L 的石油醚中，靜置分層后，除去上面澄清液體，下面的固體用真空干燥。
第二步稱取沈.Og第一步得到的產(chǎn)物置放于三頸瓶中，加入250ml的乙酸乙酯加 熱攪拌溶解。冰浴下加入23. Og的DCC(Dicyclohexylcarbodiimide，二環(huán)己基碳二亞胺)， 攪拌1小時(shí)，后加入2. Oml的三乙胺，稱取10. Og的十二二胺溶解于200ml氯仿，然后緩慢 加入到混合液中，冰浴攪拌2小時(shí)。然后室溫下攪拌1. 5小時(shí)，45°C下攪拌48小時(shí)，60°C下 攪拌3小時(shí)。加入2. Oml醋酸，攪拌1小時(shí)。熱過濾，冷卻結(jié)晶，抽濾。濾液在水浴鍋中蒸 去部分溶劑濃縮，冷卻結(jié)晶。抽濾。濾液重新再在水浴鍋中蒸去溶劑，冷卻結(jié)晶。抽濾。把 所有得到的晶體用正丙醇溶解，冷卻重結(jié)晶，抽濾。
第三步250ml的三頸瓶中加入10. Og第二步制得的晶體，加熱溶解，冷卻后析出， 加入少量用乙醇稀釋的Pd/c (催化劑)，往瓶中通N2氣趕走瓶中的空氣，改成通入H2氣反 應(yīng)，如有析出，加熱溶解，當(dāng)冷卻后沒有析出時(shí)，停止反應(yīng)，抽濾兩次除去Pd/C，濾液濃縮干 后，加入THF (四氫呋喃)溶解，然后倒入冰水冷卻的石油醚中，析出白色沉淀，抽濾。
第四步在通氮?dú)獾臈l件向反應(yīng)瓶中加入2. Og第三步制得的產(chǎn)物，然后加入 IOOml除過水的四氫呋喃，加熱溶解，冷卻到室溫后沒有析出。從滴液漏斗中慢慢滴加用四 氫呋喃稀釋的2. 6g3-異氰基丙基三乙氧基硅烷。反應(yīng)在室溫下過夜，在氮?dú)獗Ｗo(hù)濾去溶 液。
第五步(1 )、取2. 5g硅膠球，加入圓底燒瓶，再加入適量的濃鹽酸，加熱回流2小 時(shí)。加氫氧化鈉溶液適量以中和酸，然后降溫。
(2)、過濾，水洗固體至pH=7。
(3)、用適量丙酮沖洗固體3次，然后用乙醚沖洗固體2 3次，之后抽干。
(4)、取200mg單體樣品(第四步得到的樣品)于單頸瓶中，加入已經(jīng)處理的硅膠球， 再加入適量甲苯，在單頸瓶上連接分水器，分水器上連接球形冷凝管，加熱回流分水12小 時(shí)左右。
(5)、過濾，之后用丙酮，乙醚依次沖洗固體。
(6)、抽干固體。用標(biāo)準(zhǔn)勻漿填充法將所得到的手性固定相裝入3mmX250mmHPLC柱中。
二、得到的固定相的結(jié)構(gòu)式如下式所示— O “
三、手性分離色譜柱的應(yīng)用使用制得的3mmX 250mmHPLC柱，用高效液相方法分離外消旋化合物苯異丙胺，分離效 率達(dá)到99%。
上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人 士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明 精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種手性分離色譜柱，其特征在于所述色譜柱的固定相為符合下列通式的化合物載體一(CH2)m — NHCO 一手性氨基酸基團(tuán)一 NH - (CH2)n- NH 一手性氨基酸基團(tuán)一 CONH - (CH2)。一載體；其中，m = 2 12 ;n = 2 12 ;0 = 2 12 ；所述載體為硅膠；所述手性氨基酸基團(tuán)是 手性氨基酸中的氨基失去H、羧基失去OH后剩下的基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的手性分離色譜柱，其特征在于所述手性氨基酸是α-氨基 酸，且α碳原子為手性碳原子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的手性分離色譜柱，其特征在于所述手性氨基酸為L-異亮氨酸。
全文摘要
一種手性分離色譜柱，所述色譜柱的固定相為符合下列通式的化合物載體－(CH2)m－NHCO－手性氨基酸基團(tuán)－NH－(CH2)n－NH－手性氨基酸基團(tuán)－CONH－(CH2)o－載體。其中，m＝2～12；n＝2～12；o＝2～12；所述載體為硅膠；所述手性氨基酸基團(tuán)是手性氨基酸中的氨基失去H、羧基失去OH后剩下的基團(tuán)。本發(fā)明得到的固定相在有機(jī)溶劑中性質(zhì)穩(wěn)定。用之分離手性化合物效率高。
文檔編號B01D15/22GK102039060SQ20101053522
公開日2011年5月4日 申請日期2010年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月9日
發(fā)明者李藝, 薛珍 申請人:蘇州清安生物科技有限公司