專利名稱：卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是采用高效液相色譜法對(duì)卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的檢測(cè)。
背景技術(shù)：
本發(fā)明中所述卡莫司汀的藥品名稱為通用名卡莫司汀化學(xué)名1，3-雙(α-氯乙基)-1-亞硝基脲。
1，3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea英文名Carmustine漢語(yǔ)拼音名Kamositing化學(xué)結(jié)構(gòu)式 分子式C5H9Cl2N3O2分子量214.05隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，一般性傳染病的逐漸被控制，惡性腫瘤—癌癥成為常見且嚴(yán)重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一。
腦腫瘤又稱顱內(nèi)腫瘤，是一種緩慢起病逐漸加重的腦部疾病。原發(fā)于顱內(nèi)者稱原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤；由全身其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至顱內(nèi)者稱轉(zhuǎn)移性顱內(nèi)腫瘤。常見的顱內(nèi)腫瘤有膠質(zhì)瘤、腦膜瘤及神經(jīng)鞘瘤。原發(fā)性腦腫瘤的發(fā)病率為2～19/10萬(wàn)，約2/3為惡性。腦腫瘤無(wú)論是良性或惡性，因瘤體會(huì)占位壓迫腦組織，其后果都是相似的。與全身各系統(tǒng)腫瘤相比，其生存期短、死亡率高，治療困難。
卡莫司汀(Carmustine，BCNU)為亞硝脲類烷化劑。現(xiàn)認(rèn)為本品進(jìn)入體內(nèi)后，在生理?xiàng)l件下經(jīng)過(guò)OH離子的作用形成異氰酸鹽和重氮?dú)溲趸铩．惽杷猁}使蛋白質(zhì)氨甲?；?，重氮?dú)溲趸锷烧茧x子使生物大分子烷化。異氰酸鹽可抑制DNA聚合酶，抑制DNA修復(fù)和RNA合成。產(chǎn)生DNA交叉鏈的第一步反應(yīng)是使G-O6部位烷化，再在C-N1和G-N3之間以2碳鍵聯(lián)生成鏈間交聯(lián)。BCNU脂溶性好，能夠通過(guò)血腦屏障，故對(duì)腦瘤(惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、室管膜瘤)、腦轉(zhuǎn)移瘤和腦膜白血病有效。二十多年，在眾多的II期臨床研究中，使得大家對(duì)部分化療藥物，特別是卡莫司汀的潛在療效有了充分的了解。BCNU用量為150～200mg/m2，加入到5％葡萄糖或生理鹽水中快速靜脈滴注，6～8周后可重復(fù)治療。臨床有效率約為50％。BCUN加上手術(shù)和放療，可使多行性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性星形細(xì)胞瘤的中位生存期，分別提高8～12月及2～3年，其他亞硝脲類，如環(huán)己亞硝脲(CCNU)、甲環(huán)亞硝脲(MeCCNU)、嘧啶亞硝脲(ACNU)、PCNU、PCZ、二溴衛(wèi)矛醇等單一化療療效均不及BCNU。盡管從理論上講，合并用藥可提高療效；但I(xiàn)I期臨床研究顯示，亞硝脲類與PCZ、氮烯咪胺(DTIC)、鬼臼噻吩甙(VM26)、長(zhǎng)春新堿、5-FU合并應(yīng)用時(shí)，與BCNU單一應(yīng)用相比，不但不能提高療效，反而增加毒副作用。
有關(guān)物質(zhì)檢查是藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要組成部分，對(duì)一些特殊有關(guān)物質(zhì)的控制，既能保證用藥的安全有效，又能考核藥物的生產(chǎn)工藝和貯存條件。
高效液相色譜法HPLC是近20年來(lái)發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)新技術(shù)，具有分離效果好，靈敏度高，分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，且能與多種類型的檢測(cè)器聯(lián)合應(yīng)用，能滿足大多數(shù)化合物種類的檢測(cè)需要。
經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)查詢，目前還沒有用高效液相色譜法檢測(cè)卡莫司汀原料及其制劑的有關(guān)物質(zhì)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種可加強(qiáng)卡莫司汀原料或其制劑的質(zhì)量控制、分離效果好、靈敏度高、分析速度快的卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法。
本發(fā)明方法是，取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相配成每1ml中含卡莫司汀0.1～20mg的供試品溶液和每1ml中含1.5～300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄V D)試驗(yàn)，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑柱為分析柱，以水、甲醇、醋酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液或乙腈任意兩種或以上混合溶劑為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm±2nm或230nm±2nm。理論板數(shù)按卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液5～100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分的峰高約為記錄儀滿量程的5～30％；再取上述兩種溶液各5～100ul分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2～5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，即可得出各有關(guān)物質(zhì)的含量。
具體包括下述操作步驟A、取卡莫司汀原料或其制劑，加流動(dòng)相配成每1ml中含卡莫司汀0.1～20mg的供試品溶液和每1ml中含卡莫司汀1.5～300ug的對(duì)照溶液，所述流動(dòng)相為乙腈和水按40∶60混合的溶液；B、按照高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈和水的混合溶液為流動(dòng)相，乙腈和水的混合比為40∶60，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm-230nm±2nm，理論板數(shù)按卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5；C、取對(duì)照液5～100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分的峰高約為記錄儀滿量程的5～30％；D、再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5～100ul分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2～5倍；E、供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，即可得出各雜質(zhì)的含量。
所述流動(dòng)相為甲醇和水的混合溶液，混合比為55∶45。
所述流動(dòng)相為濃度為0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和乙腈的混合溶液，混合比為60∶40。
所述流動(dòng)相為濃度濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液和乙腈的混合溶液，混合比為60∶40。
所述流動(dòng)相為濃度為0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和甲醇的混合溶液，混合比為45∶55。
所述流動(dòng)相為濃度濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液和甲醇的混合溶液，混合比為45∶55。
本發(fā)明方法的試驗(yàn)過(guò)程如下1、儀器與試劑儀器島津SPD-10Avp檢測(cè)器，島津LC-10ATvp泵。
FA1104型電子天平PHS-3C型精密pH計(jì)(上海雷磁儀器有限公司)
色譜柱Discovery C18柱，規(guī)格250×4.6mm，粒度5um試劑乙腈為MR，蒸餾水自制。
2、有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法的建立(1)波長(zhǎng)的選擇取卡莫司汀樣品及各中間體適量，加流動(dòng)相(流動(dòng)相為乙腈和水按40∶60混合的溶液)使溶解，并稀釋成約10μg/ml，在200～400nm范圍內(nèi)對(duì)本品進(jìn)行掃描，由掃描結(jié)果可見，本品在230nm波長(zhǎng)處有最大吸收，結(jié)合中間體的掃描圖譜，我們選擇使用230nm波長(zhǎng)作為本品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的波長(zhǎng)。
(2)流動(dòng)相的選擇以乙腈—水為基本配比，調(diào)節(jié)乙腈與水的比例使得到理想狀態(tài)。

由上表結(jié)果可見，以乙腈和水(40∶60)作為流動(dòng)相，主峰保留時(shí)間適宜，峰形好，分離完全。故選擇乙腈-水(40∶60)作為本品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的流動(dòng)相。
(3)分離度試驗(yàn)取卡莫司汀合成過(guò)程中的中間體及卡莫司汀樣品，加流動(dòng)相溶解并稀釋，制成一定濃度的溶液，作為樣品溶液。分別取上述各溶液進(jìn)樣，記錄各自的保留時(shí)間。再分別取上述各溶液適量混合，搖勻后取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察分離度。結(jié)果各中間體的保留時(shí)間與卡莫司汀的保留時(shí)間有明顯的區(qū)別，分離度符合要求(4)系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性試驗(yàn)①破壞性試驗(yàn)分別稱取卡莫司汀樣品約25mg及其制劑適量(約含卡莫司汀25mg)，分別置50ml量瓶中，按下述各條件配制供試品。
未破壞加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，低溫(4℃)避光放置4小時(shí)備用；酸破壞加0.1mol/L的鹽酸溶液2ml，混勻后低溫(4℃)避光放置4小時(shí)，4小時(shí)后加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液2ml中和，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，備用；堿破壞加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液2ml，混勻后低溫(4℃)避光放置4小時(shí)，4小時(shí)后加0.1mol/L的鹽酸溶液2ml中和，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，備用；光照破壞加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，置強(qiáng)光下(4500Lx)照射4小時(shí)，備用；高溫破壞加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，置沸水浴中加熱回流4小時(shí)，4小時(shí)后放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，備用；氧化破壞加30％雙氧水2ml，混勻后低溫(4℃)遮光放置4小時(shí)，4小時(shí)后加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。
分別取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，與未破壞樣品比較。
結(jié)果表明，卡莫司汀在酸、氧化破壞條件下較穩(wěn)定；在光照、高溫、堿破壞條件下極不穩(wěn)定，在主峰前出現(xiàn)數(shù)個(gè)降解產(chǎn)物峰，且各降解產(chǎn)物峰與主峰分離較好。破壞性試驗(yàn)結(jié)果表明，本色譜系統(tǒng)能夠檢出本品可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。
②檢測(cè)限、定量限的測(cè)定取對(duì)照品適量，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋后進(jìn)行測(cè)定，按10∶1信噪比作為定量限，結(jié)果為1.5ng；按3∶1信噪比為檢測(cè)限，結(jié)果為0.5ng。
通過(guò)上述方法的建立過(guò)程，本品的有關(guān)物質(zhì)檢查采用HPLC法，通過(guò)中間體測(cè)定及破壞性試驗(yàn)，結(jié)果表明本品的中間體及破壞后的降解產(chǎn)物峰可被檢出，并與主峰有較好的分離度。證明本法可作為本品雜質(zhì)測(cè)定方法。根據(jù)本品檢查結(jié)果，并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。


圖1卡莫司汀原料雜質(zhì)檢測(cè)對(duì)照溶液HPLC圖譜，圖2卡莫司汀原料雜質(zhì)檢測(cè)樣品溶液HPLC圖譜，圖3卡莫司汀制劑雜質(zhì)檢測(cè)對(duì)照溶液HPLC圖譜，圖4卡莫司汀制劑雜質(zhì)檢測(cè)樣品溶液HPLC圖譜。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說(shuō)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定實(shí)施例1取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.1mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含1.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(40∶60)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表1，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表1原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例2按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含7.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(40∶60)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表2，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表2原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果


實(shí)施例3按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含20mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5um；以乙腈—水(40∶60)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表3，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表3原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例4取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.1mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含1.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇—水(55∶45)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表4，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表4原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例5按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含7.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇—水(55∶45)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表5，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表5原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例6按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含20mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5um；以甲醇—水(55∶45)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表6，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表6原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例7
取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.1mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含1.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的醋酸銨緩沖液—乙腈(60∶40)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表7，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表7原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例8按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含7.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的醋酸銨緩沖液—乙腈(60∶40)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表8，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表8原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例9按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含20mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5um；以0.01mol/L的醋酸銨緩沖液—乙腈(60∶40)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表9，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表9原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例10取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.1mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含1.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的醋酸銨緩沖液—甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表10，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表10原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例11按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含7.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的醋酸銨緩沖液—甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表11，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表11原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例12按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含20mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5um；以0.01mol/L的醋酸銨緩沖液—甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表12，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表12原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果


實(shí)施例13取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.1mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含1.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液—乙腈(60∶40)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表13，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表13原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例14按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含7.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液—乙腈(60∶40)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表14，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表14原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例15按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含20mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5um；以0.01mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液—乙腈(60∶40)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表15，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表15原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果


實(shí)施例16取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.1mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含1.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液—甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》(2005年版二部)中高效液相色譜法的有關(guān)規(guī)定。取對(duì)照液100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表16，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表16原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例17按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含7.5ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液—甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表17，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表17原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例18按以下檢測(cè)方法對(duì)卡莫司汀原料及其制劑各三批進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定取卡莫司汀原料及其制劑，加流動(dòng)相制成每1ml中含20mg卡莫司汀的供試品溶液和每1ml中含300ug的對(duì)照溶液；照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版II部附錄V D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒度5um；以0.01mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液—甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，分別以205nm和230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，理論板數(shù)以卡莫司汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取對(duì)照液20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20～25％；再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的5倍；供試品如顯有關(guān)物質(zhì)峰，量取各有關(guān)物質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，得出各有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表18，見圖1、圖2、圖3、圖4。確定本品雜質(zhì)總量應(yīng)小于1.5％，單個(gè)最大雜質(zhì)量應(yīng)小于0.5％。
表18原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果


上述方法方便快捷，能夠準(zhǔn)確測(cè)定氯法拉濱原料或其制劑的雜質(zhì)和含量。但本發(fā)明專利的保護(hù)內(nèi)容并不僅僅局限于上述具體實(shí)施實(shí)例中所闡述的方法，任何在本發(fā)明所述方法的基礎(chǔ)上所做的改進(jìn)及提高均屬于本發(fā)明專利的保護(hù)內(nèi)容。
權(quán)利要求
1.卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法，其特征在于包括下述操作步驟A、取卡莫司汀原料或其制劑，加流動(dòng)相配成每1ml中含卡莫司汀0.1～20mg的供試品溶液和每1ml中含卡莫司汀1.5～300ug的對(duì)照溶液，所述流動(dòng)相為乙腈和水按40∶60混合的溶液；B、按照高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈和水的混合溶液為流動(dòng)相，乙腈和水的混合比為40∶60，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm-230nm±2nm，理論板數(shù)按卡莫司汀峰計(jì)算不低于3000，卡莫司汀峰與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度大于1.5；C、取對(duì)照液5～100ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分的峰高約為記錄儀滿量程的5～30％；D、再取上述供試品溶液和對(duì)照溶液各5～100ul分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2～5倍；E、供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積之和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，即可得出各雜質(zhì)的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相為甲醇和水的混合溶液，混合比為55∶45。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相為濃度為0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和乙腈的混合溶液，混合比為60∶40。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相為濃度濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液和乙腈的混合溶液，混合比為60∶40。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相為濃度為0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和甲醇的混合溶液，混合比為45∶55。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相為濃度濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液和甲醇的混合溶液，混合比為45∶55。
全文摘要
卡莫司汀原料或其制劑中雜質(zhì)的高效液相色譜法檢測(cè)方法。該方法的色譜條件中固定相用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相采用乙腈和水體系；采用紫外檢測(cè)器，測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm－230nm±2nm；該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)，能很好地檢測(cè)氯法拉濱原料及其制劑的雜質(zhì)。為生產(chǎn)進(jìn)程中的質(zhì)量控制分析提供了簡(jiǎn)單可靠的方法。
文檔編號(hào)B01J20/281GK1920551SQ20061009605
公開日2007年2月28日 申請(qǐng)日期2006年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月12日
發(fā)明者崔愛軍, 石慶平, 郭輝 申請(qǐng)人:崔愛軍