用于降解乙草胺的細菌、篩選方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物領域，具體而言，涉及一種用于降解乙草胺的細菌、篩選方法及其應用。該用于降解乙草胺的細菌，該細菌為YCA-1(Cupriavidus oxalaticus)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏編號為CGMCC No.9127。本發(fā)明提供的這種YCA-1，其可以乙草胺作為氮源并進行增殖，因此，其可以作為降解乙草胺的微生物并進行利用，通過實驗證明，在相應的培養(yǎng)條件下，YCA-1可以使乙草胺濃度為50-150mg/L基礎鹽培養(yǎng)基中的乙草胺在5天之內(nèi)完全降解。在具體使用的過程中，可將大量擴培的YCA-1制成以其為活性成分的降解劑并修復含有乙草胺農(nóng)藥的土壤。
CGMCC No.9127
2014.05.06
【專利說明】用于降解乙草胺的細菌、篩選方法及其應用

【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物領域，具體而言，涉及一種用于降解乙草胺的細菌、篩選方法及 其應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 乙草胺，英文通用名為Acetochlor，由美國Monsanto公司1971年首先開發(fā)成功， 分子式為C 14H2(IC1N02，其分子量為269. 5。乙草胺純品為無色液體，原藥為淡黃色、棕色或者 紫色透明液體，50%乙草胺乳油為藍紫色油狀物，不易光解，不易揮發(fā)，沸點大于200°C，密 度為1. llg/mL(30°C )，在強酸強堿下分解，溶于甲醇、丙酮等多種有機溶劑。
[0003] 研究表明，乙草胺可以作為芽前除草劑，其作用機制主要是通過干擾植物體內(nèi)核 酸代謝及蛋白質(zhì)合成，使幼芽和幼根停止生長；因此，乙草胺是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物。所 謂"環(huán)境內(nèi)分泌干擾物"是指能通過干擾激素功能，引起個體可逆性或不可逆性生物學效應 的環(huán)境激素，因此通常又被稱作"干擾內(nèi)分泌化合物"。
[0004] 另外，相關研究表明，乙草胺可引起爪蟾腹部水腫，面部畸形，脊柱、尾巴彎曲等； 因此，Monsanto公司在剛開始推出乙草胺作為農(nóng)藥時，由于被懷疑有致癌作用，美國環(huán)保局 擔心其會通過地下水進入飲水系統(tǒng)并對人類造成安全隱患，因此，其應用一直被受到限制， 直到1994年才予以登記進入市場。我國是從20世紀90年代初才開始將乙草胺產(chǎn)業(yè)化，現(xiàn) 在已有多家企業(yè)進行生產(chǎn)，年生產(chǎn)能力達到5萬噸。
[0005] 在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，除草劑等化學農(nóng)藥的施用一直是保證糧食作物增產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)有效的手 段之一。尤其是隨著乙草胺除草劑的大量使用，使得土壤中殘存的乙草胺逐漸累積，進而造 成嚴重的土壤污染；另外，乙草胺農(nóng)藥生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢水廢氣也通過排放以及流失等 方式積累到土壤中，進一步的加劇了土壤的污染。但是，乙草胺的自然降解耗時較長，顯然 不能有效解決土壤中乙草胺逐漸累積的現(xiàn)狀。
[0006] 目前，微生物為農(nóng)田中農(nóng)藥殘留（包括乙草胺）的主要降解者，逐漸成為農(nóng)藥污染 土壤生物修復的熱點。因此，提供一種能夠降解乙草胺的微生物，并將其應用到乙草胺農(nóng)藥 土壤的修復中是本領域技術(shù)人員亟待解決的一個技術(shù)問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于降解乙草胺的細菌，以解決上述的技術(shù)問題。本 發(fā)明的另一個目的在于提供一種上述用于降解乙草胺的細菌的篩選方法。
[0008] 在本發(fā)明的實施例中提供了用于降解乙草胺的細菌，該細菌為 YCA-1 (Cupriavidus oxalaticus)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心；保藏編號為CGMCC No. 9127。此外，細菌的保藏時間為：2014年05月06日，保藏地址 為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，YCA-1為該細菌的簡稱， Cupriavidus oxalaticus 為其拉丁名。
[0009] 該菌為革蘭氏陽性，菌落圓形、乳白色，可利用的碳源包括葡萄糖、淀粉、果糖、阿 拉伯糖、蘋果酸和檸檬酸。本發(fā)明提供的這種YCA-1，其可以乙草胺作為氮源并進行增殖， 因此，其可以作為降解乙草胺的微生物并進行利用，通過實驗證明，在相應的培養(yǎng)條件下， YCA-1可以使乙草胺濃度為50-150mg/L基礎鹽培養(yǎng)基中的乙草胺在5天之內(nèi)完全降解。在 具體使用的過程中，可將大量擴培的YCA-1制成以其為活性成分的降解劑并修復含有乙草 胺農(nóng)藥的土壤。
[0010] 本發(fā)明實施例還提供了一種上述用于降解乙草胺的細菌的篩選方法，包括以下步 驟：
[0011] 1)、將供試泥樣置于含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)后得到第一混 合菌液；
[0012] 2)、將所述第一混合菌液接種到另一含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，進行傳 代培養(yǎng)，得到第二混合菌液；
[0013] 3)、將所述第二混合菌液涂布在含有乙草胺的無機鹽固體培養(yǎng)基中，進行暗培養(yǎng) 至平板上長出單菌落后分別收集，并利用LB培養(yǎng)基劃線純化，得到多個純化后的單菌落；
[0014] 4)、將多個所述純化后的單菌落接種到含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，得到 多個單菌菌液；
[0015] 5)、將多個所述單菌菌液分別利用含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)后， 分別測定基礎鹽液體培養(yǎng)基中乙草胺的殘留濃度，并篩選出使得乙草胺濃度降低的單菌菌 液，得到細菌YCA-1。
[0016] 可選的，在步驟1)、步驟2)、步驟4)和步驟5)中：
[0017] 所述基礎鹽液體培養(yǎng)基，按照重量份數(shù)計，包括：
[0018] 氯化鈉0. 8-1. 2份、磷酸二氫鈉1. 2-1. 8份、磷酸氫二鈉0. 3-0. 7份、硫酸鎂 0. 1-0. 3份、硫酸亞鐵0. 01-0. 03份、氯化鈣0. 02-0. 06份、檸檬酸鈉0. 3-0. 7份、水1000 份；
[0019] 且在所述含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，乙草胺含量為48-52mg/L。
[0020] 可選的，在步驟1)中：
[0021] 所述供試泥樣取自乙草胺生產(chǎn)廠的廢水排水道；且所述供試泥樣與所述含有乙草 胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基質(zhì)量比為1:20。
[0022] 可選的，在步驟1)中：所述搖床培養(yǎng)的溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘、時間為 7天。
[0023] 可選的，在步驟2)中：所述接種的接種量為5%。
[0024] 可選的，在步驟3)中：所述暗培養(yǎng)的溫度為30°C，時間為2天。
[0025] 可選的，在步驟3)中：所述LB培養(yǎng)基，按照重量份數(shù)計，包括：蛋白胨8-12份、酵 母膏4-6份、氯化鈉8-12份、瓊脂18-22份、水1000份。
[0026] 可選的，在步驟5)中：所述搖床培養(yǎng)的溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘、時間為 5-7 天。
[0027] 上述的用于降解乙草胺的細菌在作為乙草胺降解劑的活性成分，并在降解乙草胺 中的應用。
[0028] 由于YCA-1可以乙草胺為氮源進行繁殖，因此，以其為活性成分并制成相應的降 解劑后可修復含有大量乙草胺的土壤。
[0029] 本發(fā)明提供的這種篩選方法，采用了富集分離的培養(yǎng)方式從供試泥樣中篩選了出 能以乙草胺為唯一氮源生長的菌群，具有針對性強，篩選結(jié)果理想的效果，以期為周期短、 見效快的含乙草胺的土壤修復提供保障。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0030] 為了更清楚地說明本發(fā)明【具體實施方式】或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體 實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的 附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前 提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
[0031] 圖1為本發(fā)明實施例1提供的用于降解乙草胺的細菌的篩選流程示意圖；
[0032] 圖2為本發(fā)明實施例2中不同的培養(yǎng)溫度下，細菌YCA-1的測定結(jié)果圖；
[0033] 圖3為本發(fā)明實施例2中不同pH的培養(yǎng)基下，細菌YCA-1的測定結(jié)果圖。

【具體實施方式】
[0034] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明的技術(shù)方案進行 清楚、完整的描述，基于本發(fā)明中的【具體實施方式】，本領域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性 勞動的前提下所得到的所有其它實施方式，都屬于本發(fā)明所保護的范圍。
[0035] 在本發(fā)明的實施例中提供了用于降解乙草胺的細菌，該細菌為 YCA-1 (Cupriavidus oxalaticus)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心；保藏編號為CGMCC No. 9127。該菌為革蘭氏陽性，菌落圓形、乳白色，可利用的碳源包括 葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、蘋果酸和檸檬酸。本發(fā)明提供的這種YCA-1，其可以乙草胺作 為氮源并進行增殖，因此，其可以作為降解乙草胺的微生物并進行利用，通過實驗證明，在 相應的培養(yǎng)條件下，YCA-1可以使乙草胺濃度為50-150mg/L基礎鹽培養(yǎng)基中的乙草胺在5 天之內(nèi)完全降解。在具體使用的過程中，可將大量擴培的YCA-1制成以其為活性成分的降 解劑并修復含有乙草胺農(nóng)藥的土壤。
[0036] 接下來，本發(fā)明舉出了上述用于降解乙草胺的細菌的篩選方法的具體實施例：
[0037] 實施例1
[0038] 本實施例提供的用于降解乙草胺的細菌的篩選方法以下步驟：
[0039] 步驟101 :將供試泥樣置于含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)后得到 第一混合菌液；
[0040] 該步驟為將供試泥樣與含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基混合的步驟，由于在該培 養(yǎng)基中，其僅僅包含了乙草胺作為微生物的氮源（或碳源），所以，在培養(yǎng)的過程中，一切能 夠分解并利用乙草胺的微生物則可以進行正常的增殖，而不能利用乙草胺的為生活則會死 亡，進而初步篩選出了第一混合菌液。
[0041] 步驟102 :將所述第一混合菌液接種到另一含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中， 進行傳代培養(yǎng)，得到第二混合菌液；
[0042] 第一混合菌液在增殖的過程中，其可能會大量的消耗培養(yǎng)基的養(yǎng)分（乙草胺或各 種無機鹽），因此，得到第一混合菌液之后，需要將其再次接種，并進行傳代培養(yǎng)，獲得進一 步篩選的第二混合菌液。
[0043] 步驟103 :將所述第二混合菌液涂布在含有乙草胺的無機鹽固體培養(yǎng)基中，進行 暗培養(yǎng)至平板上長出單菌落后分別收集，并利用LB培養(yǎng)基劃線純化，得到多個純化后的單 菌落；
[0044] 基于上述同樣的理由，獲得第二混合菌液之后，為了獲得純的單菌落，需對其利用 固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)的過程中，使用含有乙草胺的無機鹽固體培養(yǎng)基暗培養(yǎng)，這 樣，不同的微生物會長出不同的菌落，然后分別挑選多個單菌落，將其利用LB培養(yǎng)基劃線 純化，得到多個純化后的單菌落。
[0045] 步驟104 :將多個所述純化后的單菌落接種到含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基 中，得到多個單菌菌液；
[0046] 純化后的單菌落接種到含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，保證其正常繁殖，并 且可得到多個單菌菌液，得到的多個單菌菌液通過后續(xù)的培養(yǎng)以及測定其對含有乙草胺的 基礎鹽液體培養(yǎng)基的降解效果進而可分離出所需的細菌。
[0047] 步驟105 :將多個所述單菌菌液分別利用含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基搖床培 養(yǎng)后，分別測定基礎鹽液體培養(yǎng)基中乙草胺的殘留濃度，并篩選出使得乙草胺濃度降低的 單菌菌液，得到細菌YCA-1。
[0048] 在步驟105中，將單菌菌液分別搖床培養(yǎng)的過程中，可能會消耗培養(yǎng)基中的乙草 胺，因此，通過分別測定基礎鹽液體培養(yǎng)基中乙草胺的殘留濃度，并篩選出使得乙草胺濃度 降低的單菌菌液，進而獲得目標細菌。在培養(yǎng)的過程中也會獲得一些降解效果不理想的微 生物，一般而言，其可能是實驗誤差或者微生物本身耐性較強等原因?qū)е?，因此，排出篩選 范圍，而獲得細菌YCA-1其可以使乙草胺濃度為50-150mg/L基礎鹽培養(yǎng)基中的乙草胺在5 天之內(nèi)完全降解，降解效果非常顯著。
[0049] 為了使得本發(fā)明上述實施例的用于降解乙草胺的細菌得到更好的應用，更加有效 應用到生物修復的領域中，本發(fā)明還在上述實施例的基礎之上提供了實施例2,實施例2在 上述實施例1的基礎之上進行了進一步的限定和增加，現(xiàn)做詳細的闡述和解釋：
[0050] 實施例2
[0051] 在本實施例中，用于降解乙草胺的細菌的篩選方法包括以下步驟：
[0052] S1 :將供試泥樣置于含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)后得到第一混 合菌液；
[0053] 具體的，為了能夠找到能夠耐受乙草胺，并含有大量被篩選的細菌的供試樣本，進 而獲得較高的篩選效果；在本實施例中，選用了草胺生產(chǎn)廠的廢水排水道作為取樣地點，由 于該地點乙草胺的濃度很大，所以能夠存活的微生物其可能會較大程度地利用乙草胺，因 此，取自乙草胺生產(chǎn)廠的廢水排水道使得供試樣本的目的性更強，進一步的助于分離篩選 的順利進行。
[0054] 另外，通過對基礎鹽液體培養(yǎng)基的組份進行優(yōu)選配比，保證微生物的正常繁殖， 優(yōu)選的，所述基礎鹽液體培養(yǎng)基，按照重量份數(shù)計，包括：氯化鈉〇. 8-1. 2份、磷酸二氫鈉 1. 2-1. 8份、磷酸氫二鈉0. 3-0. 7份、硫酸鎂0. 1-0. 3份、硫酸亞鐵0. 01-0. 03份、氯化鈣 0. 02-0. 06份、檸檬酸鈉0. 3-0. 7份、水1000份。更優(yōu)選的，氯化鈉1份、磷酸二氫鈉1. 5 份、磷酸氫二鈉〇. 5份、硫酸鎂0. 2份、硫酸亞鐵0. 01份、氯化鈣0. 04份、檸檬酸鈉0. 4份、 水1000份。更具體的，氯化鈉1. 0g，磷酸二氫鈉1. 5g，磷酸氫二鈉0. 5g，硫酸鎂0. 2g，硫酸 亞鐵0. Olg，氯化鈣0. 04g，檸檬酸鈉0. 5g，水1L。
[0055] 而且，所述含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，乙草胺含量為48_52mg/L，優(yōu)選 50mg/L。將供試泥樣與含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基混合時，所述含有乙草胺的基礎鹽 液體培養(yǎng)基質(zhì)量比為1:20。
[0056] 此外，在搖床培養(yǎng)的過程中，為了通過優(yōu)化實驗設計，獲得最佳的培養(yǎng)條件：所述 搖床培養(yǎng)的溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘、時間為7天；在該條件下，細菌繁殖迅速，大 量的微生物可呈現(xiàn)對數(shù)期生長，為后續(xù)的傳代培養(yǎng)提供了保障。
[0057] S2 :將所述第一混合菌液接種到另一含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，進行傳 代培養(yǎng)，得到第二混合菌液；
[0058] 第一混合菌液中的微生物其生理活性旺盛，因此，需要對其接種量進行有效控制， 接種量太大則會導致后續(xù)的營養(yǎng)不能保證其繁殖所需，而接種量太小則會影響其篩選效 果。由于目前還未見該菌的報道，因此，對其接種量的控制（5%)是通過大量的探索和研究 獲得的；另外，該步驟中所用的含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基與S1中的一致。
[0059] S3:將所述第二混合菌液涂布在含有乙草胺的無機鹽固體培養(yǎng)基中，進行暗培養(yǎng) 至平板上長出單菌落后分別收集，并利用LB培養(yǎng)基劃線純化，得到多個純化后的單菌落；
[0060] 具體的，在該步驟中，為了實現(xiàn)較好的純化效果，對在涂布之前，對第二混合菌液 進行梯度稀釋。另外，在該步驟中，按培養(yǎng)的溫度為30°c，時間為2天。溫度稍高或稍低以 及培養(yǎng)時間超過兩天則會出現(xiàn)微生物死亡的現(xiàn)象。因此，培養(yǎng)的溫度嚴格控制在30°C，時間 為2天。
[0061] 此外，為了保證單菌落的快速繁殖，獲得活性較高的單菌落，優(yōu)選的，所述LB培養(yǎng) 基，按照重量份數(shù)計，包括：蛋白胨8-12份、酵母膏4-6份、氯化鈉8-12份、瓊脂18-22份、 水1000份；更優(yōu)選的，蛋白胨10份、酵母膏5份、氯化鈉10份、瓊脂20份、水1000份；具體 的，蛋白胨l〇.〇g，酵母膏5.0g，氯化鈉 lO.Og，瓊脂20.0g，水1L。
[0062] S4:將多個所述純化后的單菌落接種到含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，得到 多個單菌菌液；
[0063] 該步驟與步驟104 -致，在此不作贅述。
[0064] S5 :將多個所述單菌菌液分別利用含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)后， 分別測定基礎鹽液體培養(yǎng)基中乙草胺的殘留濃度，并篩選出使得乙草胺濃度降低的單菌菌 液，得到細菌YCA-1。
[0065] 每個單菌菌液（純菌菌液）用含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)后，測定 基礎鹽液體培養(yǎng)基中乙草胺的殘留濃度，并篩選出使得乙草胺濃度降低的單菌菌液，以期 獲得細菌YCA-1。
[0066] 另外，為了保證測量的準確性，每個單菌菌液（純菌菌液）用含有乙草胺的基礎鹽 液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)后，獲得一次待測菌液，將一次待測菌液接種（接種量與步驟S2 -致， 均為5% )到另一新的含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)，并測定其降解效果。 [0067]另外，在該步驟中，為了獲得優(yōu)選的培養(yǎng)條件，本發(fā)明對單菌菌液（純菌菌液）利 用含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)過程中的條件進行了優(yōu)選。
[0068] 具體的，通過將該步驟中獲得的細菌YCA-1設定不同的溫度，并對含有乙草胺的 基礎鹽液體培養(yǎng)基的pH設定不同梯度，測定相應條件下，細菌YCA-1的0D600,進而優(yōu)選出 其培養(yǎng)參數(shù)。
[0069] 通過圖2可以看出，細菌YCA-1在不同培養(yǎng)溫度生長情況不同，溫度為25°C時， 0D600可以達到0. 153左右；溫度為35°C時，0D600可以達到0. 214,但其在30°C條件下的 0D600可以達到0. 301，生長最好，因此，該步驟中的搖床培養(yǎng)過程中的溫度優(yōu)選30°C。
[0070] 通過圖3示出了細菌YCA-1在不同的pH條件（具體的含有乙草胺的基礎鹽液體 培養(yǎng)基）下生長情況，由圖3可知，菌株的最適pH明顯為7,但其可耐受pH范圍是6-8。
[0071] 因此，在該步驟中，搖床培養(yǎng)的溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘、時間為5-7天； 而且，含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基的pH為7 (本實施例上述步驟中對基礎鹽液體培養(yǎng) 基配方的設定以及乙草胺的濃度即可保證其pH為7)。
[0072] 另外，本實施例還對獲得的細菌YCA-1的降解效果進行了驗證，通過將含有乙草 胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基設定不同的濃度，檢測培養(yǎng)基中的乙草胺的殘留量，進而證實其具 有高效降解乙草胺的功效。具體數(shù)據(jù)請參考表1 :
[0073] 表1細菌YCA-1對不同濃度乙草胺培養(yǎng)液的降解效果
[0074]

【權(quán)利要求】
1. 用于降解乙草胺的細菌，其特征在于，該細菌為丫04-1((3即1^￥丨(1118(^131：；[(3118)， 保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏編號為CGMCC No. 9127。
2. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于降解乙草胺的細菌的篩選方法，其特征在于，包括 以下步驟： 1) 、將供試泥樣置于含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)后得到第一混合菌 液； 2) 、將所述第一混合菌液接種到另一含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，進行傳代培 養(yǎng)，得到第二混合菌液； 3) 、將所述第二混合菌液涂布在含有乙草胺的無機鹽固體培養(yǎng)基中，進行暗培養(yǎng)至平 板上長出單菌落后分別收集，并利用LB培養(yǎng)基劃線純化，得到多個純化后的單菌落； 4) 、將多個所述純化后的單菌落接種到含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，得到多個 單菌菌液； 5) 、將多個所述單菌菌液分別利用含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)后，分別 測定基礎鹽液體培養(yǎng)基中乙草胺的殘留濃度，并篩選出使得乙草胺濃度降低的單菌菌液， 得到細菌YCA-1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選方法，其特征在于，在步驟1)、步驟2)、步驟4)和步驟 5)中： 所述基礎鹽液體培養(yǎng)基，按照重量份數(shù)計，包括： 氯化鈉0. 8-1. 2份、磷酸二氫鈉1. 2-1. 8份、磷酸氫二鈉0. 3-0. 7份、硫酸鎂0. 1-0. 3 份、硫酸亞鐵0. 01-0. 03份、氯化鈣0. 02-0. 06份、檸檬酸鈉0. 3-0. 7份、水1000份； 且在所述含有乙草胺的基礎鹽液體培養(yǎng)基中，乙草胺含量為48-52mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的篩選方法，其特征在于，在步驟1)中： 所述供試泥樣取自乙草胺生產(chǎn)廠的廢水排水道；且所述供試泥樣與所述含有乙草胺的 基礎鹽液體培養(yǎng)基質(zhì)量比為1:20。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項所述的篩選方法，其特征在于，在步驟1)中： 所述搖床培養(yǎng)的溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘、時間為7天。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于，在步驟2)中： 所述接種的接種量為5%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的篩選方法，其特征在于，在步驟3)中： 所述暗培養(yǎng)的溫度為30°C，時間為2天。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的篩選方法，其特征在于，在步驟3)中： 所述LB培養(yǎng)基，按照重量份數(shù)計，包括： 蛋白胨8-12份、酵母膏4-6份、氯化鈉8-12份、瓊脂18-22份、水1000份。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的篩選方法，其特征在于，在步驟5)中： 所述搖床培養(yǎng)的溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘、時間為5-7天。
10. 權(quán)利要求1所述的用于降解乙草胺的細菌在作為乙草胺降解劑的活性成分，并在 降解乙草胺中的應用。
【文檔編號】C02F3/34GK104232521SQ201410431225
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月27日
【發(fā)明者】趙建莊, 李體文, 魏朝俊, 賈臨芳, 吳昆明, 鄭燕英, 梁丹 申請人:北京農(nóng)學院