一株可降解石油烴的滕黃單胞菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株可降解石油烴的滕黃單胞菌及其應(yīng)用。海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis）OB44-3，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年1月18日，保藏編號(hào)CGMCC N0.7165。本發(fā)明的海連滕黃單胞菌OB44-3是滕黃單胞菌屬的新菌種，分離自石油污染的海洋環(huán)境，能夠有效降解石油烴并利用石油作為生長的唯一碳源。在人工海水培養(yǎng)基中，7天內(nèi)對(duì)石油烴（初始濃度為1000mg/L）的平均降解率為69.08%；同時(shí)該菌株的生長依賴于鹽的存在，屬于海洋細(xì)菌，對(duì)控制海洋環(huán)境中石油烴污染有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明的海連滕黃單胞菌OB44-3可用于石油烴的降解。
CGMCC No7165
20130118
【專利說明】一株可降解石油烴的滕黃單胞菌及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株可降解石油烴的滕黃單胞菌及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 石油是重要的能源物質(zhì)，在開采、運(yùn)輸、加工等過程中均可能產(chǎn)生對(duì)環(huán)境的污染， 石油中含有的烴類物質(zhì)統(tǒng)稱為石油烴，主要包括烷烴、環(huán)烷烴、芳香烴等，有些成分可致癌、 致突變、致畸形，并通過食物鏈在動(dòng)植物及人體內(nèi)富集，被列為重點(diǎn)污染物。由于石油烴屬 于生物難降解性物質(zhì)，因此，石油污染已成為一個(gè)嚴(yán)重的環(huán)境問題，引起許多國家高度重 視。
[0003] 存在于海洋環(huán)境中的天然微生物種群對(duì)石油烴的降解作用是石油烴和其他烴類 污染物從海洋環(huán)境中消除的基本途徑之一。微生物利用生物自我調(diào)節(jié)機(jī)制以及對(duì)污染物的 綜合凈化功能處理海洋中的石油烴類污染物，使它們?cè)谏锏男玛惔x過程中得到較為徹 底的轉(zhuǎn)化和降解，最終生成CO 2和水，不會(huì)產(chǎn)生二次污染，是目前公認(rèn)的處理海洋石油污染 最環(huán)保的方法。
[0004] 近年來，國內(nèi)外有關(guān)微生物降解石油烴的研究逐漸增多。據(jù)統(tǒng)計(jì)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能夠降 解石油的微生物超過了 200多種，在海洋環(huán)境石油烴降解占主導(dǎo)地位的微生物主要包括： 無色桿菌屬（Achromobacter )、不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter )、產(chǎn)喊桿菌屬（Alcaligenes)、 芽抱桿菌屬（Bacillus)、黃桿菌屬（Flavobacterium)、棒桿菌屬（Coryneforms)、微桿 菌屬（Microbacterium)、放線菌屬（Actinomycetes)、諾卡氏菌屬（Nocardia)、假單胞 菌屬（Pseudomonas)、食燒菌屬（Alcanirorax)、解環(huán)菌屬（Cycloclasticus)、海桿菌 屬（Marinobacter)、海細(xì)菌屬（Marinobacterium)、油螺旋菌屬（Oleispira)、海旋菌屬 (Thalassospira)和微球菌屬（Mirococcus)等。海洋中能降解石油經(jīng)的真菌有金色擔(dān)子菌 屬（Aureobasidium)、紅酵母菌（Rhodotorula)等，還有很多霉菌也可降解石油經(jīng)，如青霉 素（Penicillium)、曲霉屬（Apergillus)等。目前對(duì)降解微生物資源的研究已成為一個(gè)新 的重要方向，越來越多的石油降解微生物被發(fā)現(xiàn)，國際上已建成了專門的降解微生物菌群 資源庫。分離篩選對(duì)石油烴具有降解能力的菌株，是研究微生物降解石油機(jī)理及對(duì)石油烴 污染環(huán)境進(jìn)行生物修復(fù)的基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一株可降解石油烴的滕黃單胞菌。
[0006] 本發(fā)明所提供的滕黃單胞菌是從大連灣潮間帶原油污染的海水樣品中篩選到的。 根據(jù)其形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析等證實(shí)屬于滕黃單胞 菌屬（Luteimonas)新種，命名為海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44_3。海連 滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44_3已于2013年1月18日保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北京市朝陽區(qū)北辰 西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號(hào)為CGMCCN0. 7165。
[0007] 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44-3CGMCC NO. 7165為革蘭氏陰性 菌，細(xì)胞呈桿狀，無鞭毛，沒有運(yùn)動(dòng)性，大小為（1.02?1.24) μ mX (0.32?0.47) μ m。在 LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天，該菌株的菌落呈小圓形、光滑、隆起、淡金黃色、半透明、邊緣整齊等 特征。
[0008] 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCC NO. 7165 屬于好氧菌， 可生長的pH范圍為6. 0?8. 0,最適生長pH值為7. 2 ;可生長溫度范圍為15?37°C，最適 生長溫度為30°C ;該菌株屬于海洋微生物，生長需要NaCl的存在，能在2?9%(w/v)鹽度 范圍內(nèi)生長，最適生長鹽度為4%。
[0009] 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44_3CGMCC NO. 7165接觸酶和氧化 酶陽性，β -半乳糖苷酶、精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶、脲酶和色氨酸脫 氨酶陰性；該菌株的檸檬酸鹽利用陽性，七葉靈水解、吲哚產(chǎn)生、V.P.反應(yīng)、明膠液化和硝 酸鹽還原陰性。該菌株能利用糖原、L-阿拉伯糖、D-果糖、D-阿洛酮糖、丙酮酸甲酯、甲酸、 b_羥基丁酸、a-氧代丁酸、a-氧代戊酸、L-丙氨酰胺、D-丙氨酸、L-丙氨酸、L-丙氨酰甘 氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-絲氨酸和肌苷作為唯一碳源和能源。
[0010] 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCC NO. 7165 細(xì)胞中 的脂肪酸主要包括異式十五碳飽和脂肪酸（27. 99%)、c〇9c異式一十七碳單不飽和脂 肪酸（14. 86%)、反異式十五碳飽和脂肪酸（12. 41%)、異式十六碳飽和脂肪酸（10. 01%)、 異式十七碳飽和脂肪酸（8. 30%)、異式^ 碳飽和脂肪酸（5. 99%)、十六碳飽和脂肪酸 (4. 36%)、3_羥基異式十三碳飽和脂肪酸（3. 05%)、3_羥基異式i^一碳飽和脂肪酸（2. 77%)、 ω 7c-十六碳單不飽和脂肪酸/ ω 6c-十六碳單不飽和脂肪酸（2. 01%)、3_羥基十六碳飽和 脂肪酸（1. 08%)、反異式十一碳飽和脂肪酸（1. 06%)和異式十四碳飽和脂肪酸（1. 01%)。
[0011] 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44_3CGMCC NO. 7165 的 G+C 摩爾百 分含量為64. 65% ;該菌株的16S rRNA基因序列如序列表中序列1所示，與已發(fā)表的滕黃單 胞菌屬的模式菌 Luteimonas marina KCTC12327T、L. Iutimaris KAccHgsgl^PILuteimonas aestuarii KCTC22048T 的 16S rRNA 基因序列的同源性為 96. 0%。
[0012] 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCC NO. 7165 與上述模式 菌株Luteimonas aestuarii KCTC22048T DNA雜交的同源性比較低，為14%;同時(shí)，該菌株 的生理生化特性、細(xì)胞壁脂肪酸組成也與上述模式菌株有明顯差異，說明海連滕黃單胞菌 (Luteimonas dalianensis) 0B44-3 CGMCC NO. 7165 是滕黃單胞菌屬的一個(gè)新菌種。
[0013] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種降解石油烴的方法。
[0014] 本發(fā)明所提供的降解石油烴的方法，是用所述海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCC NO. 7165對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行處理，使石油烴得到降解。
[0015] 上述方法中，其特征在于所述的應(yīng)用為：以2216E為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，對(duì)海連騰黃單胞 菌0B44-3菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，以培養(yǎng)獲得的菌液為石油降解菌劑，加入到以原油為唯一碳 源和能源的人工海水培養(yǎng)基中，使海水培養(yǎng)基中的原油得到降解。
[0016] 以海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44_3CGMCC NO. 7165為活性成分 制備的生物制劑也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0017] 本發(fā)明的海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCCN0· 7165 是 滕黃單胞菌屬的新菌種，分離自石油污染的海洋環(huán)境，能夠有效降解石油烴并利用石油烴 作為生長的唯一碳源。在人工海水培養(yǎng)基中，7天內(nèi)對(duì)石油烴(初始濃度為lOOOmg/L)的 平均降解率為69. 08% ;同時(shí)該菌株的生長依賴于鹽的存在，屬于海洋細(xì)菌類，對(duì)控制海洋 環(huán)境中石油經(jīng)污染有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明的海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCC NO. 7165可用于石油烴的降解。
[0018] 下面結(jié)合說明書附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，并非對(duì)本發(fā)明的限 制。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖 1 為海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCCN0. 7165 在掃描 電子顯微鏡下的形態(tài)照片
[0020] 圖 2 為海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCCN0· 7165 在透射 電子顯微鏡下的形態(tài)照片
[0021] 圖 3 為海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCCN0. 7165 的 16S rRNA基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹分析圖
[0022] 圖 4 為海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCCN0· 7165 對(duì)石油 烴的降解曲線圖

【具體實(shí)施方式】
[0023] 下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材 料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0024] 實(shí)施例 1 海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis) 0B44-3CGMCCN0· 7165 的分 離及鑒定
[0025] 一、降解石油烴菌株的分離
[0026] 分離培養(yǎng)基：（1)人工海水培養(yǎng)基（ASM) =MgSO4 · 7Η207· Og/L，KC10. 7g/L， ΚΗ2Ρ042· 0g/L，Na2HP043. 0g/L，NH4NO3L 0g/L，NaC130g/L，Crude oillg/L，ΡΗ7· 2 ;微量元素 溶液 10mL。微量元素組成為：CaCl2 20mg/L，F(xiàn)eCl350mg/L，CuSO4O. 5mg/L，MnCl2. 4H200.5mg/ L，ZnSO4. 7H2010mg/L。（2)固體平板分離培養(yǎng)基（ASMl):上述人工海水培養(yǎng)基加18g/L瓊 脂；（3)固體平板純化培養(yǎng)基：2216E (Difco)。
[0027] 將石油溶于石油醚中，配制成濃度為100mg/mL的石油溶液。
[0028] 將采自大連灣石油污染海域海水樣品5mL，加入到滅菌的含IOOmL人工海水培養(yǎng) 基ASM的500mL搖瓶中，以石油（濃度0. 5?lg/L)為唯一碳源進(jìn)行富集培養(yǎng)，置于28°C， 200r/min搖床中培養(yǎng)，做為第一次富集培養(yǎng)液，7天后，取5mL的第一次富集培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接入 新鮮的人工海水培養(yǎng)基中，再進(jìn)行富集培養(yǎng)，做為第二次富集培養(yǎng)液，7天后，取第二次富集 培養(yǎng)液5mL，轉(zhuǎn)接入新鮮的人工海水培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)接3次。將最終的富集培養(yǎng)液進(jìn)行ΚΓ 1、 10_2、10_3梯度稀釋，涂布固體平板分離培養(yǎng)基ASMl上；以不加原油的人工海水培養(yǎng)基為 空白對(duì)照平板，28°C培養(yǎng)7?10天，挑取單菌落于2216E純化平板，劃線分離單菌，得到純 化的單菌落。挑取純化后的單菌落接種在裝有5mL液體培養(yǎng)基的2216E試管中，將試管置 于200r/min振蕩培養(yǎng)箱中，28°C振蕩培養(yǎng)72h左右，取200 μ L菌液加入含I. 8mL20%甘油 水溶液的凍存管中，_70°C放置保存?zhèn)溆谩?br> [0029] 結(jié)果表明，空白對(duì)照平板上沒有任何菌落生長，說明沒有外加石油作為碳源的平 板上，海水樣本中的微生物無法生長；相應(yīng)的，在加有石油的平板上有菌株能夠生長，說明 這些單菌落對(duì)應(yīng)的菌株能夠降解石油烴并以石油烴為唯一碳源生長。挑取能夠降解石油烴 的單菌落0B44-3作進(jìn)一步研究。
[0030] 二、菌株的形態(tài)特征
[0031] 將上述步驟一分離得到的菌株0B44-3接種到2216E培養(yǎng)基中，當(dāng)細(xì)胞生長至對(duì)數(shù) 生長后期，菌落大小穩(wěn)定后，進(jìn)行單菌落平均狀態(tài)的描述。主要包括菌落的大小、顏色、透明 度、濕潤度、菌落表面狀態(tài)(是否平坦、突起、褶皺、凹陷等)、菌落邊緣狀態(tài)(是否整齊、不規(guī) 貝IJ、放射狀等)。
[0032] 將處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，采用掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞形 態(tài)，結(jié)果如圖1和圖2所示；同時(shí)進(jìn)行革蘭氏染色，于40X 100倍的光學(xué)顯微鏡下觀察菌體 細(xì)胞的形態(tài)。
[0033] 結(jié)果表明，上述步驟一篩選到的菌株菌落直徑為1. 5?2mm，呈小圓形、光滑、隆 起、黃色、有光澤、半透明、邊緣整齊；在電子顯微鏡下觀察，菌體細(xì)胞呈桿狀、無鞭毛，沒有 運(yùn)動(dòng)性，大小為（1. 02 ?1. 24) μ mX (0· 32 ?0· 47) μ m。
[0034] 二、菌株的生長特性
[0035] 上述步驟一篩選到的菌株屬于革蘭氏陰性、好氧細(xì)菌。該菌株最適生長pH值是 7. 2,可生長pH范圍是6. 0?8. 0 ;最適生長溫度為30°C，可生長的溫度范圍為15?37°C。 該菌株屬于海洋細(xì)菌，生長依賴于鹽的存在，能在2. 0?9. 0 (w/v)鹽度范圍內(nèi)生長繁殖， 最適生長鹽度4%。
[0036] 四、菌株的生化特征
[0037] 1、碳源利用
[0038] 利用Biolog微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)測(cè)試菌株對(duì)95種碳源的利用情況。先將待測(cè)菌 株的純培養(yǎng)菌落制成細(xì)胞懸液，然后接種于GN2鑒定板上培養(yǎng)，再用Biolog Microstation 軟件讀取數(shù)據(jù)，確定碳源利用情況。
[0039] 2、其它生化特征
[0040] 該菌株的接觸酶、氧化酶、β -半乳糖苷酶、精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧酶、鳥氨 酸脫羧酶、脲酶和色氨酸脫氨酶活性利用ΑΡΙ20Ε生化試劑盒檢測(cè)；菌株的檸檬酸鹽利用、 七葉靈水解、吲哚產(chǎn)生、V. Ρ.反應(yīng)、明膠液化和硝酸鹽還原反應(yīng)利用ΑΡΙ20ΝΕ生化試劑盒檢 測(cè)。
[0041] 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，上述步驟一篩選到的菌株能利用95種碳源中的L-阿拉伯糖、 D-果糖、D-阿洛酮糖、糖原、丙酮酸甲酯、甲酸、b-羥基丁酸、a-氧代丁酸、a-氧代戊酸、 L-丙氨酰胺、D-丙氨酸、L-丙氨酸、L-丙氨酰甘氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-絲氨酸和 肌苷作為唯一碳源和能源。該菌株的接觸酶和氧化酶陽性，β_半乳糖苷酶、精氨酸雙水解 酶、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶、脲酶和色氨酸脫氨酶陰性；該菌株的檸檬酸鹽利用陽性， 七葉靈水解、吲哚產(chǎn)生、V.P.反應(yīng)、明膠液化和硝酸鹽還原陰性。
[0042] 五、與滕黃單胞菌屬模式菌株生理生化特征比較
[0043] 將上述步驟一篩選到的菌株生理生化特征與滕黃單胞菌屬模式菌株 (L.aestuarii KCTC22048T、L. marina KCTC12327T、L. Iutimaris KACC14929T)的生理生化 特征相比較，結(jié)果見表1所示。
[0044] 表1篩選到的菌株與滕黃單胞菌屬模式菌株的生理生化特征比較
[0045]

【權(quán)利要求】
1?海連滕黃單胞菌（Luteimonas dalianensis)0B44-3,保藏于中國微生物菌種保藏管 理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年1月18日，保藏登記號(hào)為CGMCC NO. 7165。
2. 如權(quán)利要求1所述的海連滕黃單胞菌0B44-3,其特征在于所述海連滕黃單胞菌 0B44-3菌落特征和生理生化特性為：桿狀，大小為0. 3?0. 4 ii mX 1. 0?1. 2 ii m，革蘭氏染 色為陰性，在LB固體培養(yǎng)基30°C培養(yǎng)2?3天后，菌落呈淡金黃色，小圓形，邊緣整齊，表面 光滑，易挑起；接觸酶和氧化酶陽性，V.P.反應(yīng)陰性，淀粉水解陰性，檸檬酸鹽利用陽性，硝 酸鹽還原陰性，七葉靈水解陰性，明膠液化陰性。
3. 如權(quán)利要求1所述的海連滕黃單胞菌0B44-3,其特征在于所述海連滕黃單胞菌 0B44-3 的 16S rRNA 序列為： TGGCGGCAGGCCTACACATGCAAGTCGAACGGCAGCGCGGGGAGCTTGCTCCCTGGCGGCGAGTGGCGGACG GGTGAGGAATGCATCGGAATCTGCCCATTTGTGGGGGATAACCTCGGGAAACCGGGACTAATACCGCATACGACCTT CGGGTGAAAGCAGGGGATCTTCGGACCTTGCGCAGATGGATGAGCCGATGCCGGATTAGCTAGTTGGCGGGGTAAAG GCCCACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCC TACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGGGTGAAGAAGGCC TTCGGGTTGTAAAGCCCTTTTGTTGGGAAAGAAAACTTTCCGGTTAATACCCGGAGAGAATGACGGTACCCAAAGAA TAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTACTCGGAATTACTGGGCGTAA AGGGTGCGTAGGTGGTTCGTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTGGGCTCAACCTGGGAATTGCATTGGATACTGGCGGG CTAGAGTGCGGTAGAGGGTAGTGGAATTCCCGGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGATATCGGGAGGAACATCCGTGGCG AAGGCGACTGCCTGGACCAGCACTGACACTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGT CCACGCCCTAAACGATGCGAACTGGATGTTGGGTGCAACTAGGCACTCAGTATCGAAGCTAACGCGTTAAGTTCGCC GCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTT AATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATGTCGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGG AACTCGAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAA CCCTTGTCCTTAGTTGCCAGCACGTAATGGTGGGAACTCTAAGGAGACCGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGG ATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTACTACAATGGGGAGGACAGAGGGCTGCGAACC CGCGAGGGCAAGCCAATCCCAGAAACCTCCTCCCAGTCCGGATCGGAGTCTGCAACTCGACTCCGTGAAGTCGGAAT CGCTAGTAATCGCAGAT CAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGG GAGTGGGTTGCACCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGGACGGTACCACGGTGATTC 〇
4. 如權(quán)利要求1?3所述的海連騰黃單胞菌0B44-3在降解海洋環(huán)境石油烴污染中的 應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：以2216E為種子培養(yǎng)基，對(duì) 海連騰黃單胞菌0B44-3菌種進(jìn)行培養(yǎng)，將菌種接種到種子培養(yǎng)基2216E中培養(yǎng)獲得菌懸 液，菌懸液以〇. 5?2 X 106個(gè)細(xì)胞/mL培養(yǎng)基的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，30°C、轉(zhuǎn)速為 200r/min培養(yǎng)48h，得菌液，以培養(yǎng)獲得的菌液為石油降解菌劑，加入到含原油0. 5?lg/L 的海水樣品或以原油為唯一碳源的人工海水培養(yǎng)基(ASM)中，使海水培養(yǎng)基中的原油得到 降解。
6. 如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述人工海水培養(yǎng)基（ASM)各組分終濃度為： MgS04 ? 7H207. Og/L, KC10. 7g/L, KH2P042. Og/L, Na2HP043. Og/L, NH4N031. Og/L, NaC130g/L, Crude oillg/L，PH7. 2 ;微量元素溶液 10mL。微量元素組成為：CaCl220mg/L，F(xiàn)eCl350mg/L， CuS040. 5mg/L, MnCl2. 4H200. 5mg/L, ZnS04. 7H2010mg/L〇
7.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用按如下步驟進(jìn)行： (1) 將5?10g原油溶于5?10mL石油醚中，過濾除菌，加入到含lOOmL人工海水培養(yǎng) 基(ASM) 500mL搖瓶中，使原油在培養(yǎng)基中的終濃度為0. 5?lg/L。 (2) 將海連騰黃單胞菌0B44-3種子接種到2216E培養(yǎng)基，30°C、轉(zhuǎn)速為200r/min培養(yǎng) 24h，得菌液，將獲得的菌液按接種量為5%體積比，加入到上述人工海水培養(yǎng)基(ASM)中，在 30°C、轉(zhuǎn)速為200r/min的好氧避光條件下培養(yǎng)7天。同時(shí)，以不加石油的人工海水培養(yǎng)基 作為對(duì)照，以不接種海連騰黃單胞菌0B44-3的人工海水作為空白對(duì)照，用于扣除石油揮發(fā) 的影響。
【文檔編號(hào)】C02F3/34GK104371941SQ201310357439
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月15日
【發(fā)明者】薛松, 信艷娟, 曹旭鵬, 吳佩春 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所