專利名稱：：一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
：生物修復(fù)技術(shù)是石油及相關(guān)產(chǎn)品污染土壤的主要修復(fù)技術(shù)。由于石油污染物具有組成復(fù)雜、生物難降解和具有較低的生物可利用度等特點，土著微生物難以有效的、快速的、徹底的降解土壤中的石油烴。生物添加法可通過添加具有高效降解石油烴能力的微生物提高生物修復(fù)的效率，有效的去除石油烴污染物。然而對于大規(guī)模石油污染土壤的治理或者石油污染的突然事故的治理，會帶來高效降解石油烴能力的微生物的大量需求，因此采用高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌的工藝開發(fā)顯得尤為迫切。2006年中科院成都生物所的科研人員承擔(dān)了國家"863"計劃水污染控制技術(shù)與治理工程重大專項中的兩個課題一一高效優(yōu)良菌種選育及處理系統(tǒng)中微生物種群的優(yōu)化調(diào)控和高效厭氧和好氧生物反應(yīng)器研制與應(yīng)用(試劑與精細(xì)化學(xué)品.2006(2),3-3)。只是僅僅提及石油和印染廢水為主的多個品系菌劑及其高密度發(fā)酵，沒有具體發(fā)酵工藝路線，沒有具體產(chǎn)量。國外未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報道。目前對于小規(guī)模的工程實施，試驗過程中施加的細(xì)菌菌劑普遍是在實驗室搖瓶直接培養(yǎng)，然后把菌劑運到試驗現(xiàn)場施加。一方面，無法滿足更大規(guī)模工業(yè)實施的在短時間內(nèi)生產(chǎn)出大量菌劑量的要求；另一方面，增加了生物治理的成本，降低了生物治理的效率。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，該方法是利用高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌的方法，經(jīng)過斜面菌種活化、擴大培養(yǎng)制備種子液、接種前準(zhǔn)備及接種、分批補料發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)控菌體平均生長速率，以高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌。該方法成本低，操作簡單，能在短時間產(chǎn)生大量石油烴降解菌，解決了大規(guī)模石油污染土壤治理和石油污染突然事故的治理的菌種問題。該制備方法包括如下工藝步驟(1)將斜面菌種經(jīng)平板LB培養(yǎng)基培養(yǎng)活化、制備發(fā)酵種子液；(2)將步驟(1)中制備的種子液按發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-6%比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，包括發(fā)酵前準(zhǔn)備和接種。其中分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基包括表l所示的組分(g/U:表1分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基組分成分分批發(fā)酵培養(yǎng)基，g/L補料培養(yǎng)基，g/L葡萄糖30.01000.0酵母粉50.0400.0K2跳8.726.0NaH2P044.212.6(NH4)2S045.516.5MgS(X7H202.520EDTA13微量元素1ml3ml培養(yǎng)溫度為3237。C，將菌體平均生長速率控制在0.2-0.4h—、發(fā)酵過程中pH值控制在6.8，并進(jìn)行補料，控制補料速率與菌體的消耗速率相當(dāng)，發(fā)酵完畢，收集發(fā)酵液，加甘油保存。發(fā)酵周期為12-14小時；(3)采用分批-補料培養(yǎng)方式，對補料前pH、溶氧控制；(4)補料階段①流加葡萄糖溶液在發(fā)酵過程中，C源耗盡時，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然上升，流加葡萄糖溶液，給發(fā)酵罐中補入濃度為1000g/L的葡萄糖溶液使得發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在0.2-0.5g/L范圍內(nèi)；②流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液N源耗盡時，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然下降，流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液；所述發(fā)酵種子液的制備步驟為從平板培養(yǎng)基上挑2-3個經(jīng)活化后的菌落，置于盛有50mL—級種子培養(yǎng)基的300mL搖瓶中，在溫度為3237'C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h，得到培養(yǎng)液；再將上述種子液平分到四個盛有50mL二級種子培養(yǎng)基的300mL搖瓶中，在相同的條件下培養(yǎng)10-12h,即得發(fā)酵種子液。所述發(fā)酵前準(zhǔn)備和接種將除葡萄糖之外的分批發(fā)酵培養(yǎng)基溶解于3.5L去離子水中，倒入發(fā)酵罐中，校正pH儀，滅菌，滅菌過程中校正溶解氧Do為oy。；在火焰圈保護下，將葡萄糖溶液和以發(fā)酵培養(yǎng)基的5-6%的接種量將石油烴降解菌(陰溝腸桿菌，^^ero&"eW朋c^本實驗室從中原油田污染土壤中篩選、并保存)二級種子接種于上述發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度3237T，轉(zhuǎn)速300rpm，校正溶氧達(dá)100%。所述補料前pH、溶氧控制，在前期用氨水控制p朋.5士0.1，pH不能高于6.5太多，否則鎂離子會沉淀，從而不利于菌體生長；也避免了菌體生長產(chǎn)生酸性物質(zhì)使得pH下降，影響菌體生長。進(jìn)入補料時，pH設(shè)定在6.8。溶氧控制在20%以上，通過提高轉(zhuǎn)速的方式提高溶氧水平，直至轉(zhuǎn)速提到1200rpm。本發(fā)明各工藝步驟中具體的工藝條件和工藝參數(shù)是所述步驟(2)的微量元素由下列成份組成(g/L):H3B032.85,MnS04H201.55，F(xiàn)eS047H201.362，酒石酸鉀鈉L77，CuCl22H200.0265，ZnS047H200.044，CoCl46H200.0405，Na2Mo042H200.0251。所述步驟(1)中的平板菌種經(jīng)二級擴大培養(yǎng)制備成種子液，其中第一級擴大培養(yǎng)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖10，胰蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl10。培養(yǎng)溫度為34°C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h。所述的第二級擴大培養(yǎng)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖10，酵母提取物5，KH2P041，K2HP041，NH4N041，MgS047H200.5。培養(yǎng)溫度為34°C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)10-12h。所述步驟(2)中的培養(yǎng)方式為分批補料培養(yǎng)方式，補料方式采用近指數(shù)流加方式，其中分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基包括表2所示的組分(g/L)表2分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基組分成分分批發(fā)酵培養(yǎng)基，g/L補料培養(yǎng)基，g/L葡萄糖30.01000.0<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本發(fā)明的有益效果是利用高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌。從而對石油污染土壤原位或異位生物修復(fù)提供大量降解菌，提高了降解效率，降低了生物修復(fù)成本。采用本發(fā)明的石油烴降解菌高密度發(fā)酵法，使石油烴降解菌的菌體量有大幅度提高。通過高密度發(fā)酵，使得細(xì)胞積累量0D6。。值達(dá)到60左右。減少了生產(chǎn)周期、減低了生產(chǎn)成本。本發(fā)明所述發(fā)酵工藝過程簡單，易于操作，在石油污染土壤的生物修復(fù)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。圖1為攪拌轉(zhuǎn)速和溶氧隨時間變化曲線圖。圖2為底物消耗與細(xì)胞生長曲線圖。具體實施方式本發(fā)明提供一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法。該方法是利用高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌的方法，如下工藝步驟(1)將斜面菌種經(jīng)平板LB培養(yǎng)基培養(yǎng)活化、制備發(fā)酵種子液；(2)將步驟(1)中制備的種子液按發(fā)酵培養(yǎng)基的5-6%比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，包括發(fā)酵前準(zhǔn)備和接種。其中分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基包括表l所示的組分(g/L):表1分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基組分<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>微量元素1ml3ml培養(yǎng)溫度為3237t:，將菌體平均生長速率控制在0.2-0.4h—N~發(fā)酵過程中pH值控制在6.8，并進(jìn)行補料，控制補料速率與菌體的消耗速率相當(dāng)，發(fā)酵完畢，收集發(fā)酵液，加甘油保存。發(fā)酵周期為12-14小時；(3)采用分批-補料培養(yǎng)方式，對補料前pH、溶氧控制；(4)補料階段①流加葡萄糖溶液在發(fā)酵過程中，C源耗盡時，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然上升，流加葡萄糖溶液，給發(fā)酵罐中補入濃度為1000g/L的葡萄糖溶液使得發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在0.2-0.5g/L范圍內(nèi)；②流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液N源耗盡時，即溶氧水平D0徒然上升，pH徒然下降，流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液；所述發(fā)酵種子液的制備步驟為從平板培養(yǎng)基上挑2-3個經(jīng)活化后的菌落，置于盛有50mL—級種子培養(yǎng)基的300mL搖瓶中，在溫度為3237°C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h，得到培養(yǎng)液；再將上述種子液平分到四個盛有50mL二級種子培養(yǎng)基的300mL搖瓶中，在相同的條件下培養(yǎng)10-12h。即得發(fā)酵種子液。所述發(fā)酵前準(zhǔn)備和接種將除葡萄糖之外的分批發(fā)酵培養(yǎng)基溶解于3.5L去離子水中，倒入發(fā)酵罐中，校正pH儀，滅菌，滅菌過程中校正溶解氧DO為0%;在火焰圈保護下，將葡萄糖溶液和以發(fā)酵培養(yǎng)基的5-6%的接種量將石油烴降解菌(陰溝腸桿菌，f/^ero^"ec7朋cae，本實驗室從中原油田污染土壤中篩選、并保存)二級種子接種于上述發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度3237。C，轉(zhuǎn)速300rpm，校正溶氧達(dá)100%。所述補料前pH、溶氧控制，在前期用氨水控制p朋.5±0.1，pH不能高于6.5太多，否則鎂離子會沉淀，從而不利于菌體生長；也避免了菌體生長產(chǎn)生酸性物質(zhì)使得pH下降，影響菌體生長。進(jìn)入補料時，pH設(shè)定在6.8。溶氧控制在20%以上，通過提高轉(zhuǎn)速的方式提高溶氧水平，直至轉(zhuǎn)速提到1200rpm。本發(fā)明各工藝步驟中具體的工藝條件和工藝參數(shù)是所述步驟(2)的微量元素由下列成份組成(g/L):H3B032.85，MnS04H201.55，F(xiàn)eS047H201.362，酒石酸鉀鈉1.77，CuCl22H200.0265，ZnS047H200.044，CoCl46H200.0405，Na2Mo042H200.0251。所述步驟(1)中的平板菌種經(jīng)二級擴大培養(yǎng)制備成種子液，其中第一級擴大培養(yǎng)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖IO，胰蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl10。培養(yǎng)溫度為34°C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h。所述的第二級擴大培養(yǎng)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/U:葡萄糖10，酵母提取物5，KH2P041，K2HP041，訓(xùn)041，MgSCWH200.5。培養(yǎng)溫度為34。C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)10-12h。所述步驟(2)中的培養(yǎng)方式為分批補料培養(yǎng)方式，補料方式采用近指數(shù)流加方式，其中分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基包括表2所示的組分(g/L)表2分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基組分<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>下面列舉實施例予以進(jìn)一步說明。實例一一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法此石油烴高效降解菌是本實驗室從中原油田污染土壤中篩選并保存。①種子培養(yǎng)從平板培養(yǎng)基上挑2-3個經(jīng)活化后的菌落置于一個盛有50mL—級種子培養(yǎng)基的300mL的搖瓶中，溫度為34'C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h，得到一級種子培養(yǎng)液；再將一級種子培養(yǎng)液平分到四個盛有50mL二級種子培養(yǎng)基的300mL的搖瓶中，在相同的條件下培養(yǎng)10-12h。即得發(fā)酵種子液。②種前準(zhǔn)備將除葡萄糖之外的分批發(fā)酵培養(yǎng)基溶解于3.5L去離子水中，倒入洗凈的發(fā)酵罐中，校正pH儀，滅菌，滅菌過程中校正溶解氧DO為0%，接好空氣過濾器和其他附屬設(shè)備。③接種在火焰圈保護下，將葡萄糖溶液和以5-6%的接種量將發(fā)酵種子液接種于5L自動控制發(fā)酵罐中，裝液量3.5L，通風(fēng)量5L/niin，攪拌速度300rpm，培養(yǎng)溫度34。C，校正溶氧達(dá)100%。前期用氨水控制p朋.5土0.1，pH不能高于6.5太多，否則鎂離子會沉淀，從而不利于菌體生長；也避免了菌體生長產(chǎn)生酸性物質(zhì)使得pH下降，影響菌體生長。溶氧控制在20%以上，通過提高轉(zhuǎn)速的方式提高溶氧水平，直至轉(zhuǎn)速提到1200rpm。④補料生長階段當(dāng)轉(zhuǎn)速調(diào)至最大速1200rpm時，DO值下降，并保持。當(dāng)營養(yǎng)物質(zhì)的消耗完畢，DO會迅速上升，由于C源先消耗完，所以隨著DO的上升，pH值會迅速上升，此時需要進(jìn)行補料，給發(fā)酵罐中補入濃度為1000g/L的葡萄糖溶液使得發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在0.2-0.5g/L范圍內(nèi)。pH自動控制流加氨水調(diào)節(jié)pH在6.8。隨著N源的消耗完畢，DO會迅速上升，此時pH值會迅速下降，說明要流加N源。圖l表明了控制溶氧和轉(zhuǎn)速的工藝關(guān)系。前期盡量使00值保持在20%以上。(1)流加葡萄糖溶液在發(fā)酵過程中，C源耗盡時(約接種后6小時)，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然上升，流加葡萄糖溶液，給發(fā)酵罐中補入濃度為1000g/L的葡萄糖溶液使得發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在0.2-0.5g/L范圍內(nèi)；(2)流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液大約接種后6.8小時后，N源耗盡時，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然下降，流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液。圖2表明了底物消耗與細(xì)胞生長的關(guān)系。在發(fā)酵培養(yǎng)的前6小時，細(xì)菌濃度迅速上升，在6hr時生長曲線出現(xiàn)拐點，說明發(fā)酵細(xì)菌生長受到底物消耗完的影響，開始分批補料，使得罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在0.2-0.5g/L細(xì)菌進(jìn)入相對穩(wěn)定的增長期，直到發(fā)酵結(jié)束，溶氧接近耗盡，此時細(xì)菌濃度達(dá)最大值。通過高密度發(fā)酵，使得細(xì)胞積累量0D6。。值達(dá)到60左右。本發(fā)明用于石油污染土壤的生物修復(fù)領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景。通過開發(fā)石油烴降解菌的高密度發(fā)酵的生產(chǎn)工藝，降低修復(fù)成本、提高了修復(fù)周期、并可加快大規(guī)模石油污染土壤的修復(fù)工程實施提供保障。權(quán)利要求1.一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，該方法是利用高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌的方法，經(jīng)過斜面菌種活化、擴大培養(yǎng)制備種子液、接種前準(zhǔn)備及接種、分批補料發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)控菌體平均生長速率，以高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，該制備方法包括如下工藝步驟(1)將斜面菌種經(jīng)平板LB培養(yǎng)基培養(yǎng)活化、制備發(fā)酵種子液；(2)將步驟(1)中制備的種子液按發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-6%比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，包括發(fā)酵前準(zhǔn)備和接種，其中分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基包括表1所示的組分(g/L):表1分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基組分<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>培養(yǎng)溫度為3237。C，將菌體平均生長速率控制在0.2-0.4h—N發(fā)酵過程中pH值控制在6.8，并進(jìn)行補料，控制補料速率與菌體的消耗速率相當(dāng)，發(fā)酵完畢，收集發(fā)酵液，加甘油保存；發(fā)酵周期為12-14小時；(3)采用分批-補料培養(yǎng)方式，對補料前pH、溶氧控制；(4)補料階段①流加葡萄糖溶液在發(fā)酵過程中，C源耗盡時，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然上升，流加葡萄糖溶液，給發(fā)酵罐中補入濃度為1000g/L的葡萄糖溶液使得發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在0.2-0.5g/L范圍內(nèi)；②流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液N源耗盡時，即溶氧水平D0徒然上升，pH徒然下降，流加含有發(fā)酵無機鹽和微量元素的酵母溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，所述發(fā)酵種子液的制備步驟為從平板培養(yǎng)基上挑2-3個經(jīng)活化后的菌落，置于盛有50mL—級種子培養(yǎng)基的300mL搖瓶中，在溫度為3237°C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h，得到培養(yǎng)液；再將上述種子液平分到四個盛有50mL二級種子培養(yǎng)基的300mL搖瓶中，在相同的條件下培養(yǎng)10-12h。即得發(fā)酵種子液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，所述發(fā)酵前的準(zhǔn)備和接種將除葡萄糖之外的分批發(fā)酵培養(yǎng)基溶解于3.5L去離子水中，倒入發(fā)酵罐中，校正pH儀，滅菌，滅菌過程中校正溶解氧DO為0%;在火焰圈保護下，將葡萄糖溶液和以發(fā)酵培養(yǎng)基的5-6%的接種量將石油烴降解菌(陰溝腸桿菌，^2&2Y^a"eW朋c朋，本實驗室從中原油田污染土壤中篩選、并保存)二級種子接種于上述發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度3237T，轉(zhuǎn)速300rpm，校正溶氧達(dá)100%。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，所述補料前pH、溶氧控制，在前期用氨水控制p朋.5土0.1，pH不能高于6.5太多，否則鎂離子會沉淀，從而不利于菌體生長；也避免了菌體生長產(chǎn)生酸性物質(zhì)使得pH下降，影響菌體生長，進(jìn)入補料時，pH設(shè)定在6.8,溶氧控制在20%以上，通過提高轉(zhuǎn)速的方式提高溶氧水平，直至轉(zhuǎn)速提到1200rpm。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟(2)的微量元素由下列成份組成(g/L):H3B032.85,MnS04H201.55，F(xiàn)eS047H201.362，酒石酸鉀鈉1,77，CuCl22H200.0265，ZnS047H200,044，CoCl46H200.0405，Na2Mo042H200.0251。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟(1)中的平板菌種經(jīng)二級擴大培養(yǎng)制備成種子液，其中第一級擴大培養(yǎng)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖IO,胰蛋白胨10，酵母提取物5，NaCllO;培養(yǎng)溫度為34°C,轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)8-10h;所述的第二級擴大培養(yǎng)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/U:葡萄糖10，酵母提取物5，KH2P041，K2HP041，NH4N041，MgS047H200.5;培養(yǎng)溫度為34°C，轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床中培養(yǎng)10-12h。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟(2)中的培養(yǎng)方式為分批補料培養(yǎng)方式，補料方式采用近指數(shù)流加方式，其中分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基包括表2所示的組分(g/L)。表2分批發(fā)酵培養(yǎng)基和補料發(fā)酵培養(yǎng)基組分<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>全文摘要本發(fā)明公開了屬于生物發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域：
的一種石油烴降解菌的高密度發(fā)酵方法。該方法是利用高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌的方法，經(jīng)過斜面菌種活化、擴大培養(yǎng)制備種子液、接種前準(zhǔn)備及接種、分批補料發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)控菌體平均生長速率，以高密度發(fā)酵生產(chǎn)石油烴降解菌。該方法成本低，操作簡單，能在短時間產(chǎn)生大量石油烴降解菌，解決了大規(guī)模石油污染土壤治理和石油污染突然事故的治理的菌種問題。文檔編號B09C1/10GK101130754SQ200710119858公開日2008年2月27日申請日期2007年8月1日優(yōu)先權(quán)日2007年8月1日發(fā)明者錚劉,坤張,張敏蓮,徐圓圓,花秀夫申請人:中國石油化工股份有限公司;清華大學(xué)