本發(fā)明屬于納米材料和生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種核仁靶向熒光碳點及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù):
核仁是真核細(xì)胞核中最顯著的結(jié)構(gòu),其組成成分主要包括核糖體rna(rrna),核糖體dna(rdna)和核糖核蛋白。核仁參與了細(xì)胞內(nèi)部許多關(guān)鍵的生命過程,包括核糖體rna(rrna)的合成、除rrna以外其它rna的代謝以及細(xì)胞功能的調(diào)控等許多關(guān)鍵過程。核仁是細(xì)胞核內(nèi)的生產(chǎn)核糖體前體的機器,其過程是由rdna轉(zhuǎn)錄成rrna,rrna再與來自細(xì)胞質(zhì)的蛋白質(zhì)結(jié)合,進(jìn)而加工、改造成核糖體的前體,然后輸出到細(xì)胞質(zhì)。細(xì)胞代謝所需要的蛋白質(zhì)都是在核糖體中完成合成過程的,這些蛋白質(zhì)導(dǎo)致了核仁的高度功能復(fù)雜性。因此,核仁對于維持細(xì)胞正常的結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要,而開發(fā)相應(yīng)的核仁探針用于檢測核仁的數(shù)量、形貌和變化情況等對于了解細(xì)胞的狀態(tài)和行為具有重要意義。
在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,熒光檢測法發(fā)展迅速,其檢測方法具有對細(xì)胞生理形態(tài)影響小、檢測速度快、靈敏度高等優(yōu)點,已成為研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的首選檢測方法之一。在種類眾多的核仁熒光染料中,根據(jù)它們細(xì)胞膜通透性,可分為活細(xì)胞染料和死細(xì)胞染料兩類。在活細(xì)胞核仁的染色檢測中,要求染料具有活細(xì)胞通透性、核仁結(jié)合性及低毒性等優(yōu)點。許多有機化合物類核仁染料在染細(xì)胞過程中常出現(xiàn)光穩(wěn)定性較差(在氧氣的存在下,很容易發(fā)生光氧化反應(yīng))、單一發(fā)射波長、較小斯托克斯位、較低熒光量子產(chǎn)率和熒光壽命長度等缺點,這些都限制了其應(yīng)用。到目前為止,可用于核仁染色的商業(yè)化熒光染料只有一種綠色花菁類染料—“sytorna-select”,但是這種商業(yè)染料在應(yīng)用中受價格昂貴、染色條件難以用于活細(xì)胞檢測、水溶性不佳、單一的發(fā)射波長、光穩(wěn)定性差以及化學(xué)結(jié)構(gòu)未知等局限性所限制。因此在活細(xì)胞核仁熒光成像領(lǐng)域,迫切需要開發(fā)出性能優(yōu)異的新型活細(xì)胞熒光核仁染料。
與此同時,提高藥物的癌癥治療療效通常具有兩種思路,一是提高藥物的細(xì)胞內(nèi)吞效率,二是定向輸送藥物至細(xì)胞中對癌癥治療措施更為敏感有效的區(qū)域?;诘诙N思路,線粒體和細(xì)胞核因其生理功能的重要性和對藥物的敏感性,成為藥物載體的靶向輸運的關(guān)鍵目的地。發(fā)展細(xì)胞核靶向藥物,常用的方法是利用細(xì)胞核靶向配體如細(xì)胞核定位多肽(序列為pkkkrkv)對藥物進(jìn)行共價修飾,從而賦予藥物細(xì)胞核靶向的能力。但是,由于該配體本身不具備熒光性質(zhì),因此在修飾的過程通常還需引入其他的熒光分子才能實現(xiàn)對藥物的熒光示蹤,而引入的熒光分子又會降低修飾后藥物的細(xì)胞核靶向性能。另一方面,核定位多肽由于富含大量正電荷氨基酸(即賴氨酸,k),容易被血液中的帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)吸附從而影響藥物被細(xì)胞攝取的效率。這些缺點也成為了該配體用于實現(xiàn)藥物細(xì)胞核靶向輸運的瓶頸。此外,目前被報道開發(fā)出來的新型核仁靶向染料分子,大都不具備可修飾的功能基團,這也限制了其作為細(xì)胞核靶向藥物載體的應(yīng)用。綜上所述,開發(fā)出一種同時具備熒光探針和藥物載體雙重功能的細(xì)胞核靶向分子或納米顆粒的重要性不言而喻。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種核仁靶向熒光碳點,以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的在作為細(xì)胞核靶向藥物載體時的限制性等問題。
為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種制備核仁靶向熒光碳點的方法,它是由以下摩爾份數(shù)的原料制成:
間苯二胺10份;
半胱氨酸1~100份。
其中,優(yōu)選如下摩爾份數(shù)的原料:
間苯二胺10份;
半胱氨酸15份。
上述的制備方法包括如下步驟:
將半胱氨酸溶解于堿溶液中,再與間苯二胺水溶液混合后得到混合液;混合液經(jīng)加熱反應(yīng)后,降至室溫,經(jīng)透析即得核仁靶向熒光碳點的水溶液。
其中,所述的堿溶液為氫氧化鈉水溶液或氫氧化鉀水溶液,其中氫氧化鈉或氫氧化鉀與半胱氨酸的摩爾比為1:1。
其中,所述的加熱反應(yīng)的溫度為120~200℃,優(yōu)選160℃;時間為3~24h,優(yōu)選10h。
其中,所述的透析是指將降至室溫的反應(yīng)液加入到透析袋中,并將透析袋置于超純水中透析2~3天,整個過程換水3-4次;其中,所述的透析袋的截留分子量為300。
上述任意一項制備方法制備得到的核仁靶向熒光碳點也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
上述核仁靶向熒光碳點在作為核仁熒光探針中的應(yīng)用也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
上述核仁靶向熒光碳點在作為細(xì)胞核靶向抗癌藥物載體中的應(yīng)用也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
上述核仁靶向熒光碳點在同時作為核仁熒光探針和細(xì)胞核靶向抗癌藥物載體中的應(yīng)用也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
碳點由于其制備簡單、具有熒光發(fā)光能力、尺寸小、水溶性好以及生物毒性低的性質(zhì)而被廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域,如生物成像、生物監(jiān)測和藥物載體等。本發(fā)明利用一步水熱法制備得到的碳點,首次實現(xiàn)了對哺乳動物細(xì)胞的細(xì)胞核核仁成像的能力,且其抗光漂白的能力遠(yuǎn)高于常規(guī)的有機分子染料。相較于商品化的核仁成像試劑,我們合成的碳點由于制備簡單、成本低廉、水溶性好、生物安全性好及染色條件簡單應(yīng)用性更廣,且能用于活細(xì)胞的核仁成像及跟蹤,更加能夠推廣使用,并有望取代商品化的核仁熒光探針。同時,由于碳點表面存在著包括氨基、羧基以及巰基等功能基團,可通過物理或化學(xué)作用有效負(fù)載抗癌藥物,利用碳點可快速并大量被細(xì)胞內(nèi)吞的性質(zhì),極大提高藥物的細(xì)胞內(nèi)吞效率,同時又可實現(xiàn)基于細(xì)胞核靶向的藥物輸運,從而提高藥物對癌細(xì)胞的治療效果,這將進(jìn)一步拓寬碳點在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。
有益效果:
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)勢:
(1)優(yōu)異的核仁靶向成像性能:其對哺乳動物細(xì)胞核仁的靶向成像具有普適性,在5μg/ml的低濃度下便可實現(xiàn)對包括以肺細(xì)胞(atii)與肝細(xì)胞(l02)為代表的正常組織細(xì)胞和以巨噬細(xì)胞(raw264.7)為代表的人體免疫細(xì)胞以及以肺癌細(xì)胞(a549)、肝癌細(xì)胞(hepg2)和宮頸癌細(xì)胞(hela)為代表的癌細(xì)胞的核仁成像,同時其成像同時適用于死細(xì)胞和活細(xì)胞,甚至能在細(xì)胞固定的條件下仍保持良好的核仁靶向能力,且可實現(xiàn)免清洗,為熒光成像帶來應(yīng)用范圍的極大拓寬和操作上巨大的簡便;
(2)優(yōu)異的核仁靶向載藥功能:通過共價作用,可連接抗癌藥物,所得到的碳點-藥物復(fù)合體仍然保持碳點本身的大量內(nèi)吞性質(zhì),且長時間后可慢慢滲透進(jìn)入細(xì)胞核,從而可以實現(xiàn)部分定位于細(xì)胞核的癌癥治療并因此可極大地提高藥物的抗癌療效;
(3)優(yōu)異的熒光性質(zhì):所制得的碳點熒光強度大,熒光激發(fā)光譜很廣,從而極大地拓寬了其對哺乳動物細(xì)胞核仁成像檢測的應(yīng)用范圍。在作為藥物載體時,碳點本身的熒光可賦予藥物分子熒光示蹤的特性,為研究藥物的定位機制提供了可能;
(4)優(yōu)異的抗光漂白能力:該碳點在激光照射下不易被光漂白,其光穩(wěn)定性遠(yuǎn)高于常規(guī)的核仁靶向有機染料分子如sytorna-select染料等,因此可以實現(xiàn)長時間連續(xù)成像觀察;
(5)較高的生物相容性:經(jīng)細(xì)胞毒性評價實驗,該熒光碳點在100g/ml的濃度時,對正常肺細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞的毒性依舊很低,均保持著90%及以上的存活率,即碳點本身的性質(zhì)并不會對細(xì)胞造成很強的毒害,證明其具有很好的生物相容性;
(6)良好的水分散性和穩(wěn)定性。所制得的熒光碳點具有很好的水分散性和穩(wěn)定性,適合在生理環(huán)境下的核仁成像以及細(xì)胞核靶向載藥的應(yīng)用。;
(7)本發(fā)明制備方法簡單、原料價廉易得、可實現(xiàn)大量制備。
附圖說明
圖1為利用間苯二胺和半胱氨酸制備熒光碳點的示意圖;
圖2為本發(fā)明制得的熒光碳點的透射電子顯微鏡(tem)圖;
圖3為本發(fā)明制得的熒光碳點的紫外–可見吸收光譜圖;
圖4為本發(fā)明制得的熒光碳點的熒光發(fā)射光譜圖;
圖5為本發(fā)明制得的熒光碳點和商品化染料對經(jīng)固定的和未經(jīng)固定的hela細(xì)胞的共聚焦成像圖;
圖6為本發(fā)明制得的熒光碳點對不同種類細(xì)胞的細(xì)胞核仁成像效果圖;
圖7為本發(fā)明制得的熒光碳點對hela細(xì)胞的毒性評價結(jié)果圖;
圖8為本發(fā)明制得的熒光碳點在連接光敏劑原卟啉后所得材料(cds-ppix)的透射電子顯微鏡(tem)圖;
圖9為本發(fā)明制得的熒光碳點在連接光敏劑原卟啉后所得材料(cds-ppix)與碳點、游離原卟啉的紫外–可見吸收光譜圖;
圖10為本發(fā)明制得的熒光碳點在連接光敏劑原卟啉后所得材料(cds-ppix)與碳點、游離原卟啉的熒光發(fā)射光譜圖;
圖11為本發(fā)明制得的熒光碳點在連接光敏劑原卟啉后所得材料(cds-ppix)與游離原卟啉分別與hela細(xì)胞孵育24h的共聚焦成像效果圖;
圖12為本發(fā)明制得的熒光碳點在連接光敏劑原卟啉后所得材料(cds-ppix)對hela細(xì)胞的光療效果圖。
具體實施方式
根據(jù)下述實施例,可以更好地理解本發(fā)明。然而,本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解,實施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明,而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
實施例1
本實施例熒光碳點的制備,包括以下步驟:
(1)原料的準(zhǔn)備:稱取間苯二胺與半胱氨酸,使其摩爾比為2:3,其中半胱氨酸先通過超聲將其溶解于0.1m氫氧化鈉溶液(氫氧化鈉和半胱氨酸的摩爾比為1:1),再將所得溶液與間苯二胺水溶液混合,之后將混合液轉(zhuǎn)移至水熱反應(yīng)釜中;
(2)反應(yīng):在水熱反應(yīng)釜中以160℃反應(yīng)10h,形成碳點溶液;
(3)純化:透析即得目標(biāo)熒光碳點溶液。
該反應(yīng)的示意圖見圖1,制備所得熒光碳點的透射電子顯微鏡結(jié)果見圖2,制備所得熒光碳點的紫外–可見吸收光譜見圖3,制備所得熒光碳點在不同波長激發(fā)下的熒光發(fā)射光譜見圖4。由圖2可知碳點的粒徑分布在2.7nm左右,且分散性良好。同時其高分辨電鏡結(jié)果證明其晶格的存在,說明該碳點的結(jié)晶性良好。圖3的紫外–可見吸收光譜中出現(xiàn)了269和405nm處的兩個特征吸收峰。圖4表明碳點的熒光發(fā)射峰處于450–600nm。
實施例2到6
實施例2熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(1)中間苯二胺與半胱氨酸的摩爾比為10:1。
實施例3熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(1)中間苯二胺與半胱氨酸的摩爾比為3:1。
實施例4熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(1)中間苯二胺與半胱氨酸的摩爾比為1:1。
實施例5熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(1)中間苯二胺與半胱氨酸的摩爾比為1:3。
實施例6熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(1)中間苯二胺與半胱氨酸的摩爾比為1:10。
實施例7到10
實施例7熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(2)中,反應(yīng)條件為:在120℃下反應(yīng)24h。
實施例8熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(2)中,反應(yīng)條件為:在140℃下反應(yīng)16h。
實施例9熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(2)中,反應(yīng)條件為:在180℃下反應(yīng)6h
實施例10熒光碳點的制備步驟與實施例1相同,只是步驟(2)中,反應(yīng)條件為:在200℃下反應(yīng)3h
實施例11
測試實施例1所制得的熒光碳點對hela細(xì)胞的成像效果,方法如下:
(1)細(xì)胞培養(yǎng):復(fù)蘇hela細(xì)胞,在dmem完全培養(yǎng)基中于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng),待細(xì)胞密度長至80%左右時,用胰酶消化并通過流式細(xì)胞儀計數(shù),使最終每個孔中細(xì)胞數(shù)量為5×104個/ml,仍于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng)24h;
(2)細(xì)胞固定:于8孔板中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),待細(xì)胞密度長至80%左右時用磷酸緩沖液(pbs)洗2–3次,再加入200l預(yù)冷的甲醇,于–20℃放置10–20min,然后用pbs洗2–3次;
(3)細(xì)胞染色:分別配制工作濃度的rna染料(sytorna-select)溶液、dna染料(hoechst)溶液和濃度為5g/ml的碳點溶液,而后用pbs清洗已培養(yǎng)好的細(xì)胞(包括經(jīng)甲醇固定組與未固定組)2–3次,分別加入200μl已配好的成像染液,于37℃、5%co2環(huán)境中共孵育。其中rna染料組和dna染料組染色20min并用pbs清洗2–3次以除去溶液中多余的染料分子。碳點染色孵育30min且無須清洗便可用于成像觀察;
(4)共聚焦熒光顯微鏡成像觀測:用波長為405nm和488nm激光作為激發(fā)光,其中dna染料在405nm激發(fā)光激發(fā)下發(fā)射藍(lán)色熒光,而碳點與rna染料在488nm激發(fā)光激發(fā)下均發(fā)出綠色熒光。
熒光成像結(jié)果見圖5。由圖可見,對比三種染料的成像結(jié)果可發(fā)現(xiàn)在未固定的細(xì)胞(即活細(xì)胞)組中,碳點可選擇性地使核仁成像,rna染料分布在細(xì)胞質(zhì)中未能進(jìn)入細(xì)胞核使核仁染色(可見其對活細(xì)胞的染色存在很大的限制),dna染料進(jìn)入細(xì)胞核卻未能靶向至核仁區(qū)域;在固定的細(xì)胞組中,碳點、rna和dna染料均靶向定位在核仁中,實現(xiàn)了對細(xì)胞核核仁的特異性成像。上述結(jié)果表明商品化rna染料對細(xì)胞染色的條件較為局限(其只能用于固定細(xì)胞的染色而無法用于活細(xì)胞的成像),而碳點很好地克服了這種缺陷,這大大拓寬了其在細(xì)胞核核仁染色上的應(yīng)用前景。
實施例12
測試實施例1所制得的熒光碳點對a549、hepg2、atii、l02以及raw264.7細(xì)胞的核仁成像效果,其方法與實施例11相似,其中只進(jìn)行碳點的染色。結(jié)果如圖6。由圖可見,實施例1所制得碳點對上述五種細(xì)胞均具有優(yōu)異核仁靶向成像的性能。
實施例13
測試實施例1所制得的熒光碳點的細(xì)胞毒性,步驟如下:選擇正常肺細(xì)胞(atii),配制成5×104個/ml的細(xì)胞懸液,將其分別與濃度為0、5、10、20、40、60、80和100μg/ml的熒光碳點孵育24h后,利用酶標(biāo)儀采用噻唑藍(lán)(mtt)檢測法測熒光碳點對atii細(xì)胞的毒性。結(jié)果見圖7。實驗結(jié)果表明經(jīng)過濃度高達(dá)100μg/ml的熒光碳點處理24h后,atii細(xì)胞依然有90%以上的存活率,說明該熒光碳點具有良好的生物相容性。
實施例14
測試實施例1所制得的熒光碳點(cds)與原卟啉(ppix)的化學(xué)連接,即制備cds-ppix,方法如下。
(1)ppix溶于n,n-二甲基甲酰胺(dmf),與二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)和1-羥基苯并三唑(hobt)按照1:6:6的摩爾比在室溫活化4h。
(2)將經(jīng)活化后的ppix與cds按照1:10的質(zhì)量比室溫反應(yīng)12h。
(3)用截留分子量為1000的透析袋在二甲基亞砜(dmso)和水的混合物中透析2天。
該反應(yīng)所得cds-ppix的透射電子顯微鏡圖見圖8,紫外–可見吸收光譜見圖9,熒光發(fā)射光譜(379nm為碳點的最大激發(fā)波長;419nm和505nm為ppix的最大激發(fā)波長)見圖10。由圖可見,所制得的cds-ppix粒徑為25.2nm(比單獨的碳點粒徑大),紫外–可見光光譜中cd-ppix分別出現(xiàn)了cds和ppix各自的吸收峰,證明了該兩種物質(zhì)的共同存在。另外在熒光發(fā)射光譜中,cd-ppix亦在510nm以及627nm處出現(xiàn)了與單獨的碳點和單獨的ppix相接近的熒光發(fā)射峰,上述三種表征結(jié)果均證明了cd-ppix的成功合成。
實施例15
測試實施例14所制得的cds-ppix對hela細(xì)胞的細(xì)胞核靶向特性,其方法如下:
(1)細(xì)胞培養(yǎng):復(fù)蘇hela細(xì)胞,在dmem完全培養(yǎng)基中于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng),待細(xì)胞密度長至80%左右時,用胰酶消化并通過流式細(xì)胞儀計數(shù),使最終每個孔中細(xì)胞數(shù)量為5×104個/ml,仍于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng)24h;
(2)細(xì)胞染色:配制游離ppix或cds-ppix與核染料(hoechst)的混合染液,其中ppix濃度均為5μg/ml,而后用pbs清洗細(xì)胞2–3次,加入200μl已配好的混合染液,于37℃、5%co2環(huán)境中共孵育24h。最后用dmem完全培養(yǎng)基清洗細(xì)胞,除去溶液中游離的染料分子;
(3)共聚焦熒光顯微鏡成像觀測:用波長為405nm和552nm的激光作為激發(fā)光,其中核染料經(jīng)488nm激光激發(fā)發(fā)射藍(lán)色熒光,而游離ppix與cds-ppix經(jīng)552nm激光激發(fā)發(fā)射紅色熒光??紤]到上述染料與碳點本身的熒光發(fā)射存在一定的重疊,故每次的共染通過控制單一染色時的拍攝條件,保證在相應(yīng)的拍攝條件下碳點與不同細(xì)胞器染料不會發(fā)生串色現(xiàn)象,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果見圖11。
由圖11可見,根據(jù)熒光圖和熒光信號的分析圖可發(fā)現(xiàn)cds-ppix在552nm處激發(fā)所發(fā)射的紅光與核染料在405nm激發(fā)光下所發(fā)射的藍(lán)色熒光有所重合,說明cds-ppix能特異性靶向在細(xì)胞核中,成功保持了碳點本身的靶向性質(zhì);于此同時,游離ppix所發(fā)射的紅色熒光信號與核染料在405nm激發(fā)光下所發(fā)射的藍(lán)色熒光完全不重合,且熒光強度也明顯弱于cds-ppix所發(fā)射的熒光強度,說明游離的ppix不僅無法擴散進(jìn)入細(xì)胞核,且其內(nèi)吞效率也遠(yuǎn)小于cds-ppix。
實施例16
測試實施例14所制得的cds-ppix與游離ppix對hela細(xì)胞的光療效果,其方法如下。
(1)細(xì)胞培養(yǎng):復(fù)蘇hela細(xì)胞,在dmem完全培養(yǎng)基中于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng),待細(xì)胞密度長至80%左右時,用胰酶消化并通過流式細(xì)胞儀計數(shù),使最終種96孔板時細(xì)胞數(shù)量為5×104個/ml,仍于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng)24h;
(2)細(xì)胞光療:在dmem完全培養(yǎng)基中配制游離ppix溶液與cds-ppix溶液,使兩者最終含有的ppix濃度為0、0.5、1、2、3、4和5μg/ml。而后再用pbs清洗細(xì)胞,分別加入100μl上述配制的游離ppix和cds-ppix溶液于相應(yīng)的孔中,于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng)24h。而后用dmem完全培養(yǎng)基清洗2–3次。以635nm激光在20mw/cm2的功率密度下分別照射5min,而后轉(zhuǎn)移至37℃、5%co2環(huán)境中繼續(xù)培養(yǎng)4h;
(3)細(xì)胞存活率檢測:配制濃度為5mg/ml的mtt溶液,并于每個細(xì)胞孔中加入10μl上述mtt溶液,于37℃、5%co2環(huán)境中培養(yǎng)4h。而后倒出每個孔中的培養(yǎng)液,各加入150μldmso,最后用酶標(biāo)儀測量在492nm處的吸光度。結(jié)果見圖12。如圖12所示,在20mw/cm2的光照強度下,隨著cds-ppix組中ppix的濃度從0升高至2g/ml時,細(xì)胞存活率逐步降低至5%以下,這說明絕大部分細(xì)胞在ppix的光動力治療效果下死亡。與之相反,即使游離ppix濃度升高至5g/ml,游離ppix組的細(xì)胞存活率仍高達(dá)50%以上,說明游離ppix本身對細(xì)胞的光動力療效很差。以上實驗證明了該種碳點可以通過提高藥物的細(xì)胞內(nèi)吞量以及賦予藥物部分靶向細(xì)胞核的性質(zhì),顯著提高ppix對細(xì)胞的光動力抗癌療效。