本發(fā)明涉及有機(jī)探針?lè)肿蛹夹g(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

硫醇(即，含巰基的化合物)在生命系統(tǒng)中起到非常重要的作用，例如，谷胱甘肽(gsh)可以維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原、細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)換等，半胱氨酸(cys)可以作為細(xì)胞外的還原劑，合成蛋白質(zhì)的決定性底物等。某些硫醇的水平與許多疾病(如牛皮癬、肝臟損傷、艾滋病)和癌癥有直接關(guān)聯(lián)，由于硫醇的作用很重要，開(kāi)發(fā)和研究檢測(cè)硫醇的探針具有重要的意義。

熒光探針是有效檢測(cè)生命體內(nèi)硫醇的手段之一，相對(duì)于其他檢測(cè)方法，使用熒光探針?lè)ㄟM(jìn)行硫醇檢測(cè)具有靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，但目前大部分ph探針波長(zhǎng)較短，不能避開(kāi)組織自吸收和自熒光，背景干擾較強(qiáng)，部分stocks位移小，紫外吸收波譜和熒光光譜重疊較大，信噪比低，毒性較大，不能用于細(xì)胞和活體ph檢測(cè)。而近紅外熒光探針的最大吸收波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)為600～900nm，可避免背景干擾。因此，近紅外熒光檢測(cè)在生物樣品分析中有明顯的優(yōu)越性。

因此，設(shè)計(jì)合成具有大的stokes位移、背景干擾少、能快速檢測(cè)硫醇的近紅外熒光探針?lè)浅Ｓ斜匾?/p>

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。在硫醇存在下，所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的激發(fā)、發(fā)射均在近紅外光區(qū)，stocks位移較大、背景干擾少，對(duì)硫醇有較高的靈敏度、高選擇性，同時(shí)探針的毒性低，對(duì)細(xì)胞和活體傷害較小，很適合用來(lái)進(jìn)行生物體內(nèi)硫醇的檢測(cè)。

本發(fā)明第一方面提供了一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(ⅰ)所示：

式(ⅰ)中，x¹為-s-或-se-，r'為c1-12的亞烷基，x²為-c(ch3)2-、-o-、-s-或-se-，r1和r2分別獨(dú)立地選自h原子、c1-18烷基或如so3r5所示的基團(tuán)，其中，r5為c1-18烷基或芐基，r3和r4分別獨(dú)立地選自c1-18烷基或芐基，y為氟、氯、溴或碘。

優(yōu)選地，所述x¹為-s-。

優(yōu)選地，所述r'為-ch2ch2-。

優(yōu)選地，所述x²為-c(ch3)2-。

優(yōu)選地，所述r1和所述r2均為h原子。

優(yōu)選地，所述r3和所述r4均為乙基。

優(yōu)選地，所述y為碘。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述x¹為-s-，所述r'為-ch2ch2-，所述x²為-c(ch3)2-，所述r1和所述r2均為h原子，所述r3和所述r4均為乙基，所述y為碘。

本發(fā)明中所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針，基于熒光聚集淬滅原理，通過(guò)含二硫鍵或二硒鍵的連接體-nh-r'-x¹-x¹-r'-nh-(x¹為-s-或-se-)將兩個(gè)近紅外花菁類(lèi)熒光染料分子連接形成，由于兩個(gè)熒光分子的距離被拉近，表現(xiàn)出熒光猝滅；該探針中的二硫鍵或二硒鍵作為反應(yīng)位點(diǎn)，當(dāng)在硫醇分子存在下，硫醇會(huì)與之發(fā)生反應(yīng)導(dǎo)致二硫鍵或二硒鍵鍛煉，兩個(gè)熒光基團(tuán)分離，距離被拉遠(yuǎn)，從而使該探針的熒光大大增強(qiáng)。

在硫醇分子存在下，該探針的最大發(fā)射波長(zhǎng)在755nm，能有效避開(kāi)組織自吸收和自熒光，最大激發(fā)為620nm，stocks位移高達(dá)135nm，背景干擾小、信噪比較高；同時(shí)，該探針的毒性低，在檢測(cè)情況下，該探針的激發(fā)波長(zhǎng)較長(zhǎng)，位于近紅外區(qū)域，對(duì)細(xì)胞和活體傷害較小，且穿透力強(qiáng)，由于該探針是基于熒光聚集淬滅原理，在硫醇分子存在下，熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)從無(wú)到有，信號(hào)變化非常明顯，易于對(duì)硫醇進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。

本發(fā)明第一方面提供的所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的stocks位移較大、背景干擾少，對(duì)硫醇有較高的靈敏度、高選擇性，同時(shí)探針的毒性低，對(duì)細(xì)胞和活體傷害較小，很適合用來(lái)進(jìn)行生物體內(nèi)硫醇的檢測(cè)。

本發(fā)明第二方面提供了一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

(1)分別提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(ⅱ)的化合物以及如式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽或其硫酸鹽：

式中，x¹為-s-或-se-，r'為c1-12的亞烷基，x²為-c(ch3)2-、-o-、-s-或-se-，r1和r2分別獨(dú)立地選自h原子、c1-18烷基或如so3r5所示的基團(tuán)，其中，r5為c1-18烷基或芐基，r3和r4分別獨(dú)立地選自c1-18烷基或芐基，y為氟、氯、溴或碘；

(2)將式(ⅱ)所示的化合物與如式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽或其硫酸鹽按照摩爾比為(1.5-4)：1的比例溶解在溶劑中，再加入縛酸劑，保護(hù)氣體氛圍下，在30-75℃下反應(yīng)3-10h，提純后得到信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針，所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(ⅰ)所示：

式(ⅰ)中，x¹為-s-或-se-，r'為c1-12的亞烷基，x²為-c(ch3)2-、-o-、-s-或-se-，r1和r2分別獨(dú)立地選自h原子、c1-18烷基或如so3r5所示的基團(tuán)，其中，r5為c1-18烷基或芐基，r3和r4分別獨(dú)立地選自c1-18烷基或芐基，y為氟、氯、溴或碘。

優(yōu)選地，所述x¹為-s-。

優(yōu)選地，所述r'為-ch2ch2-。

優(yōu)選地，所述x²為-c(ch3)2-。

優(yōu)選地，所述r1和所述r2均為h原子。

優(yōu)選地，所述r3和所述r4均為乙基。

優(yōu)選地，所述y為碘。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述x¹為-s-，所述r'為-ch2ch2-，所述x²為-c(ch3)2-，所述r1和所述r2均為h原子，所述r3和所述r4均為乙基，所述y為碘。

本發(fā)明中，所述如式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽或其硫酸鹽，為如式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽形式，或如式(ⅲ)所示化合物的硫酸鹽形式。舉例來(lái)說(shuō)，當(dāng)式(ⅲ)中，所述x¹為-s-，所述r'為-ch2ch2-時(shí)，式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽形式為(cas號(hào)為：56-17-17，又稱(chēng)為胱銨二鹽酸鹽)；式(ⅲ)所示化合物的硫酸鹽形式為

優(yōu)選地，所述將式(ⅱ)所示的化合物與如式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽或其硫酸鹽按照摩爾比為(1.5-4)：1的比例溶解在溶劑中，再加入縛酸劑，具體為：

將所述式(ⅲ)所示化合物的鹽酸鹽或其硫酸鹽和縛酸劑溶解在溶劑中，得到第一混合溶液，將所述式(ⅱ)所示的化合物溶解在溶劑中，得到第二混合溶液，然后將所述第二混合溶液逐滴加入到第一混合溶液中。

優(yōu)選地，所述溶劑為n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、乙腈和甲醇的一種或多種。

優(yōu)選地，所述縛酸劑為三乙胺、n，n-二異丙基乙胺(dipea)或吡啶。

優(yōu)選地，所述縛酸劑與所述化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(ⅲ)的化合物的摩爾比為(1.2-2)：1。

優(yōu)選地，所述保護(hù)氣體為氮?dú)?、氬氣或氦氣?/p>

優(yōu)選地，所述提純的方法為：反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，并再加入二氯甲烷，采用濕法過(guò)硅膠柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，除去溶劑，即得所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針。

本發(fā)明第二方面提供的一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法，該制備方法簡(jiǎn)單易操作。

本發(fā)明第三方面提供了第一方面所述的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針在檢測(cè)硫醇中的應(yīng)用。即，所述探針可以應(yīng)用于制備硫醇檢測(cè)、診斷或治療的藥物中。

本發(fā)明中，所述硫醇包括含巰基的化合物，如谷胱甘肽，半胱氨酸，二硫蘇糖醇和苯硫酚中的一種或多種，但不限于此。

在硫醇分子存在下，該探針的最大發(fā)射波長(zhǎng)在755nm，最大激發(fā)為620nm，stocks位移高達(dá)135nm，能有效避開(kāi)組織自吸收和自熒光、背景干擾小、信噪比較高；同時(shí)，該探針的毒性低，在檢測(cè)情況下，該探針的激發(fā)波長(zhǎng)較長(zhǎng)，位于近紅外區(qū)域，對(duì)細(xì)胞和活體傷害較小，且穿透力強(qiáng)，由于該探針是基于熒光聚集淬滅原理，在硫醇分子存在下，熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)從無(wú)到有，信號(hào)變化非常明顯，易于對(duì)硫醇進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。

綜上，本發(fā)明提供的一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針及其制備方法和應(yīng)用的有益效果包括以下幾個(gè)方面：

(1)所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的激發(fā)、發(fā)射波長(zhǎng)均在近紅外區(qū)，對(duì)細(xì)胞或組織的穿透力強(qiáng)，樣本損傷小，該探針的stocks位移大，背景干擾小，信噪比較高；

(2)所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法簡(jiǎn)單易操作；

(3)所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針基于熒光聚集淬滅原理而形成，在對(duì)硫醇檢測(cè)時(shí)，熒光信號(hào)從無(wú)到有，變化明顯，且該探針對(duì)硫醇線(xiàn)性相關(guān)性較好，易于對(duì)硫醇進(jìn)行定性、定量檢測(cè)；

(4)所述信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的毒性低，帶正電，在細(xì)胞膜負(fù)電的作用下能很快進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞或組織內(nèi)的硫醇。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1制得的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的高分辨質(zhì)譜圖；

圖2為實(shí)施例1制得的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針(cysscy)的熒光強(qiáng)度隨谷胱甘肽(gsh)濃度的變化曲線(xiàn)圖；

圖3為實(shí)施例1制得的探針cysscy在不同濃度的gsh下的熒光強(qiáng)度圖；

圖4為實(shí)施例1制得的探針cysscy的熒光強(qiáng)度與不同濃度的gsh的線(xiàn)性關(guān)系圖；

圖5為實(shí)施例1制得的探針cysscy的細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果圖；

圖6為實(shí)施例1制得的探針cysscy對(duì)hela細(xì)胞內(nèi)硫醇的熒光成像圖；

圖7為實(shí)施例1制得的探針cysscy對(duì)荷瘤老鼠的熒光成像圖。

具體實(shí)施方式

以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1：

一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

室溫下，在25ml圓底燒瓶中加入胱胺二鹽酸鹽(81mg,0.36mmol)、1.5ml甲醇、60μl三乙胺，再加入2ml乙腈，快速攪拌約0.5小時(shí)后，溶液變透明，胱胺二鹽酸鹽全部溶解，得到第一混合溶液；

然后把(簡(jiǎn)寫(xiě)為cy.7.cl，345.6mg,0.54mmol)溶解在4ml乙腈中，得到第二混合溶液，然后將其用滴液漏斗滴加到上述第一混合溶液中，滴加速度大概為1滴/20s，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下30℃反應(yīng)3小時(shí)。旋去溶劑，用硅膠柱純化，將樣品用二氯甲烷溶解，濕法上樣，洗脫劑用二氯甲烷：甲醇從200:1到20:1進(jìn)行梯度洗脫，旋去溶劑，濃縮后得到靛藍(lán)色粉末狀固體cysscy(180.7mg，0.13mmol)，產(chǎn)率：36％，該粉末狀固體即信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針

反應(yīng)方程式為：

對(duì)實(shí)施例1得到的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針進(jìn)行uplc-tof-ms質(zhì)譜測(cè)試，測(cè)試結(jié)果如圖1所示，圖1為實(shí)施例1制得的探針的高分辨質(zhì)譜圖。從圖1中可以看出，通過(guò)質(zhì)譜測(cè)出的分子離子峰m⁺為551.3339，符合c72h90n6s2²⁺的理論分子量551.3326。

實(shí)施例2：

一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

室溫下，在25ml圓底燒瓶中加入胱胺二鹽酸鹽(81mg,0.36mmol)、1.5ml甲醇、99.84μl三乙胺(0.72mmol)，再加入2ml的dmf，快速攪拌約0.5小時(shí)后，溶液變透明，胱胺二鹽酸鹽全部溶解，得到第一混合溶液；

然后把(簡(jiǎn)寫(xiě)為cy.7.cl，919.44mg,1.44mmol)溶解在4ml的dmf中，得到第二混合溶液，然后將其用滴液漏斗滴加到上述第一混合溶液中，滴加速度大概為1滴/20s，加熱，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下75℃反應(yīng)10小時(shí)。旋去溶劑，用硅膠柱純化，將樣品用二氯甲烷溶解，濕法上樣，洗脫劑用二氯甲烷：甲醇從200:1到20:1進(jìn)行梯度洗脫，旋去溶劑，濃縮后得到靛藍(lán)色粉末狀固體cysscy(111.2mg，0.08mmol)，產(chǎn)率：21％，該粉末狀固體即信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針

實(shí)施例3：

一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

室溫下，在25ml圓底燒瓶中加入胱胺二鹽酸鹽(81mg,0.36mmol)、1.5ml甲醇、74.88μl三乙胺(0.54mmol)，再加入2ml的dmf，快速攪拌約0.5小時(shí)后，溶液變透明，胱胺二鹽酸鹽全部溶解，得到第一混合溶液；

然后把(簡(jiǎn)寫(xiě)為cy.7.cl，919.44mg,1.44mmol)溶解在4ml的dmf中，得到第二混合溶液，然后將其用滴液漏斗滴加到上述第一混合溶液中，滴加速度大概為1滴/20s，加熱，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下40℃反應(yīng)5小時(shí)。旋去溶劑，用硅膠柱純化，將樣品用二氯甲烷溶解，濕法上樣，洗脫劑用二氯甲烷：甲醇從200:1到20:1進(jìn)行梯度洗脫，旋去溶劑，濃縮后得到靛藍(lán)色粉末狀固體cysscy(143.0mg，0.103mmol)，產(chǎn)率：27％，該粉末狀固體即信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針

實(shí)施例4：

一種信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

室溫下，在25ml圓底燒瓶中加入胱胺二鹽酸鹽(81mg,0.36mmol)、1.5ml甲醇、74.88μl三乙胺，再加入2ml的dmf，快速攪拌約0.5小時(shí)后，溶液變透明，胱胺二鹽酸鹽全部溶解，得到第一混合溶液；

然后把(簡(jiǎn)寫(xiě)為cy.7.cl，459.72mg,0.72mmol)溶解在4ml的dmf中，得到第二混合溶液，然后將其用滴液漏斗滴加到上述第一混合溶液中，滴加速度大概為1滴/20s，加熱，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下50℃反應(yīng)6小時(shí)。旋去溶劑，用硅膠柱純化，將樣品用二氯甲烷溶解，濕法上樣，洗脫劑用二氯甲烷：甲醇從200:1到20:1進(jìn)行梯度洗脫，旋去溶劑，濃縮后得到靛藍(lán)色粉末狀固體cysscy(153.6mg，0.111mmol)，產(chǎn)率：29％，該粉末狀固體即信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針

效果實(shí)施例

對(duì)谷胱甘肽(gsh)溶液的熒光測(cè)試

將實(shí)施例1制得的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針(cysscy)配置成探針濃度為20μm的dmso/pbs(ph＝7.4,v/v＝9:l)的測(cè)試溶液100ml，每次取0.5ml加入已配好的不同濃度的谷胱甘肽(gsh)溶液，使探針rbsscy分子的終濃度為10μm，谷胱甘肽終濃度分別為0μm，1μm，2μm，3μm，4μm，5μm，6μm，7μm，8μm，9μm，10μm，11μm，12μm，13μm，14μm，15μm，16μm，17μm，18μm，19μm，20μm，40μm，60μm，80μm，100μm，測(cè)試探針的熒光強(qiáng)度與谷胱甘肽濃度的變化關(guān)系，結(jié)果如圖2-4所示。圖2為該探針在620nm的激發(fā)波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度隨gsh的濃度的變化曲線(xiàn)圖；圖3為在激發(fā)波長(zhǎng)為620nm、發(fā)射波長(zhǎng)為755nm處，該探針與不同濃度的gsh的熒光強(qiáng)度圖；圖4為該探針的熒光強(qiáng)度與不同濃度的gsh的線(xiàn)性關(guān)系圖。

從圖2-圖3可以看出，隨著gsh的加入，探針cysscy的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，并在gsh的濃度為0-20μm時(shí)，cysscy的熒光強(qiáng)度隨gsh濃度有規(guī)律的變化，經(jīng)過(guò)擬合，發(fā)現(xiàn)探針cysscy的濃度為10μm，gsh濃度在4μm-18μm時(shí)，cysscy的熒光強(qiáng)度與gsh的濃度有很好的線(xiàn)性關(guān)系(如圖4)，相關(guān)系數(shù)r為0.99763，經(jīng)計(jì)算得，gsh的檢測(cè)下限是0.51μm。

細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

以hela細(xì)胞為例，將實(shí)施例1制得的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針(cysscy)配置在血清溶液中，分別配成濃度為0.1μm、1μm、5μm、10μm、30μm、60μm、90μm的各組，通過(guò)mtt法進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，其細(xì)胞毒性的結(jié)果如圖5所示，從圖5可以看出，探針cysscy在濃度0.1-10μm時(shí)，細(xì)胞存活率高達(dá)85％以上，這說(shuō)明該探針的毒性很低，可以用于細(xì)胞內(nèi)硫醇的檢測(cè)。

體外腫瘤細(xì)胞內(nèi)的硫醇檢測(cè)

采用實(shí)施例1制得的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針(cysscy)對(duì)hela細(xì)胞內(nèi)的硫醇進(jìn)行檢測(cè)，將該探針配制在牛血清中，控制探針濃度為5μm，采用德國(guó)leicatcssp5共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光成像，收集576±25mn和756±25nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的熒光，結(jié)果如圖6所示。圖6中a為空白試驗(yàn)，e為加入了探針cysscy的hela細(xì)胞，c為加入了硫醇清除劑(n-乙基馬來(lái)酰亞胺1mm)的hela細(xì)胞，g為加入了硫醇清除劑(n-乙基馬來(lái)酰亞胺1mm)培養(yǎng)3小時(shí)后又加入探針cysscy的hela細(xì)胞，b、f、d、h分別為a、e、c、g相應(yīng)的明場(chǎng)成像圖。當(dāng)將所述探針cysscy對(duì)原本含有硫醇的hela細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)(e)，可以很明顯地看到該探針在激光光激發(fā)下發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光，且hela細(xì)胞的背景熒光干擾很小，而當(dāng)將該探針cysscy對(duì)經(jīng)一定量的硫醇清除劑清理后的hela細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)(c)，由于處理后的hela細(xì)胞內(nèi)含的硫醇分子很少，該探針?lè)肿觾?nèi)的二硫鍵幾乎不會(huì)被打斷，該探針?lè)肿觾?nèi)的熒光聚集猝滅效應(yīng)依然存在，故觀(guān)察到的熒光較弱；而在經(jīng)硫醇清除劑清理后3h，hela細(xì)胞又恢復(fù)了產(chǎn)生硫醇分子的能力，又可以與該探針的二硫鍵反應(yīng)，將原探針內(nèi)的兩個(gè)熒光染料基團(tuán)分離，消除熒光聚集猝滅效應(yīng)，從而表現(xiàn)出較強(qiáng)的熒光信號(hào)。以上對(duì)比說(shuō)明，該探針cysscy對(duì)hela細(xì)胞內(nèi)的硫醇分子有很好的檢測(cè)效果，為其應(yīng)用于生物活體內(nèi)硫醇的檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。

動(dòng)物活體內(nèi)硫醇的檢測(cè)

將實(shí)施例1制得的信號(hào)增強(qiáng)型近紅外熒光探針(cysscy)配制成濃度0.04mg/ml的pbs溶液，采用裸鼠作為研究對(duì)象，對(duì)荷瘤老鼠進(jìn)行0.2mg/kg劑量的探針尾椎靜脈注射，將探針cysscy分子注入荷瘤老鼠體內(nèi)，注射0、4h、14h、24h內(nèi)的腫瘤部位的成像效果如圖7所示，采用600nm的紅光激發(fā)，采集700-900nm的熒光信號(hào)。

從如圖7可以看出，在注射探針14小時(shí)后，腫瘤部位發(fā)射出的熒光強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他部位，而且非常清晰，而且一直持續(xù)到24小時(shí)，成功檢測(cè)出小鼠腫瘤部位。結(jié)果表明，該近紅外探針cysscy在腫瘤的檢測(cè)中具有巨大的價(jià)值，另外，小動(dòng)物活體成像具有較高的靈敏度，能夠客觀(guān)地評(píng)價(jià)熒光探針cysscy的靶向顯象過(guò)程以及檢測(cè)效果。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。