一種基于白蛋白假酯酶水解反應(yīng)的特異性熒光探針及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種基于白蛋白假酯酶水解反應(yīng)的特異性熒光探針分子及應(yīng)用，是基于人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）特有的假酯酶活性，即在生理pH值條件下HSA能催化具有酯鍵結(jié)構(gòu)的熒光探針分子（λex=342nm，λem=416nm）發(fā)生類水解反應(yīng)，其自身的氨基酸與探針分子結(jié)構(gòu)中的羧酸基團形成共價結(jié)合，同時釋放出含有游離酚羥基的水解產(chǎn)物，該產(chǎn)物是熒光發(fā)射譜顯著不同于底物分子的熒光母體分子（λex=452nm，λem=564nm），根據(jù)檢測到熒光母體分子的濃度可以檢測體系中對應(yīng)的HSA的含量。該探針分子可用于測定生物樣品中白蛋白的絕對含量。該探針分子的優(yōu)點在于準(zhǔn)確度高，檢測靈敏，受環(huán)境干擾小，可與各種內(nèi)源性物質(zhì)、外源性藥物及表面活性劑等兼容。
【專利說明】-種基于白蛋白假醒酶水解反應(yīng)的特異性巧光探針及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種基于白蛋白假醋酶水解反應(yīng)的特異性英 光探針及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[000引 人血清白蛋白化uman serum a化umin, HSA)是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì)，約占 到血漿中蛋白總量的 50-60%【Biochem Wiarmacol. 2005Nov25;70(ll) :1673-84.】。在體 液中人血清白蛋白可W運輸脂肪酸、膽色素、氨基酸、類固醇激素、金屬離子和許多治療分 子等，同時能維持血液正常的滲透壓。人血清中白蛋白的正常值范圍為34-54g/L【Nlm. nih. gov. Retrieved2010-05-12.】。但多種疾病，比如肝病(尤其是肝硬化)、腎病綜合癥、腫 瘤、蛋白丟失性腸病、燒傷W及營養(yǎng)不良等會導(dǎo)致血清白蛋白的水平下降，而高蛋白飲食W 及慢性脫水則會造成白蛋白水平升高。因此人血中白蛋白含量的定量測定已被臨床用于疾 病相關(guān)診斷，如果人體白蛋白的含量較正常范圍值低很多時就需要給患者注射人血清白蛋 白。大量臨床實踐已證實，監(jiān)測血清白蛋白水平對于肝病或腎病患者的早期診斷W及疾病 的愈后都有十分重要的診斷參考價值。更為重要的是，尿液中出現(xiàn)微量白蛋白一般可作為 腎臟疾病(像是糖尿病、高血壓、鏈球菌感染后的腎小球腎炎)、血管內(nèi)皮功能障礙、也臟疾 病W及靜脈血栓栓塞的標(biāo)志物及診斷指標(biāo)。下表1給出了人體微量蛋白尿診斷值的正常范 圍。
[0003] 表1微量蛋白尿診斷值

【權(quán)利要求】
1. 一種基于白蛋白假酯酶水解反應(yīng)的特異性熒光探針，其特征在于：該特異性熒光探 針的酯鍵可被人血清白蛋白特異性水解為與分子熒光發(fā)射波譜顯著不同的熒光產(chǎn)物，借助 體系中產(chǎn)物的含量來確定白蛋白的含量及功能； 該特異性熒光探針為N-正丁基-4-羥基-1，8-萘酰亞胺母體C-4位羥基被取代的聯(lián) 苯甲酰酯類衍生物，其結(jié)構(gòu)通式如式（1)所示，其中R1為-H、-CH3、-〇CH3、-〇C 2H5中的任意一 種，R2為C2-C8烷基，鹵代烷基或其衍生物中的任意一種，
式（1)。
2. -種權(quán)利要求1所述特異性熒光探針在定量測定不同樣本中人血清白蛋白含量的 應(yīng)用，其特征在于：采用上述式（1)化合物作為白蛋白特異性的水解代謝底物，進行水解反 應(yīng)，通過定量檢測單位時間內(nèi)底物的消除量以及水解產(chǎn)物的生成量來測定不同樣本中白蛋 白的含量。
3. 按照權(quán)利要求2所述特異性熒光探針在定量測定不同樣本中人血清白蛋白含量的 應(yīng)用，其特征在于：所述樣本為重組表達的白蛋白單酶、人組織制備液或各類組織細胞。
4. 按照權(quán)利要求2所述特異性熒光探針在定量測定不同樣本中人血清白蛋白含量 的應(yīng)用，其特征在于：所述水解反應(yīng)條件為：體系為磷酸緩沖液；探針底物的濃度介于 l/l〇_l〇Km之間；孵育體系pH值介于5. 5-10. 5之間；反應(yīng)溫度介于20-60°C之間。
5. 按照權(quán)利要求2所述特異性熒光探針在定量測定不同樣本中人血清白蛋白含量的 應(yīng)用，其特征在于：探針底物及其水解產(chǎn)物均具有熒光屬性，采用熒光檢測器實現(xiàn)底物及產(chǎn) 物的快速靈敏檢測；熒光檢測條件為：激發(fā)波長300-500nm，發(fā)射波長410-600nm。
【文檔編號】C09K11/06GK104341346SQ201310338267
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年8月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月6日
【發(fā)明者】楊凌, 崔京南, 葛廣波, 劉兆明, 馮磊 申請人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所