專利名稱：一種利用個人遺傳信息進行防偽的印泥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物防偽技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種利用個人遺傳信息進行防偽的印 泥。
背景技術(shù)：
隨著防偽技術(shù)的不斷發(fā)展，生物技術(shù)在防偽領(lǐng)域有了新的發(fā)展，目前利用的生物 防偽技術(shù)有指紋、眼睛虹膜等個人身份防偽識別技術(shù)、抗原抗體商品防偽技術(shù)和DNA商品 防偽技術(shù)。指紋身份識別是比較古老成熟的防偽技術(shù)，現(xiàn)在通過和計算機的聯(lián)合應(yīng)用，成為 重要的身份識別手段，被廣泛的應(yīng)用。眼睛虹膜身份防偽是通過虹膜的紋理的不同，因為其 重復(fù)的可能性更低，相對指紋隱蔽性更好，防偽效果較指紋更勝一籌。但是他們一般主要用 于各種證件和信用卡的防偽中，無法用于商品的防偽。抗原抗體商品防技術(shù)是利用抗原抗 體見的高度選擇性進行顯色從而防偽，但是卻存著其他物質(zhì)顯示類似顯色反應(yīng)的現(xiàn)象。DNA防偽是利用不同個體的遺傳物質(zhì)DNA具有各不相同的編碼結(jié)構(gòu)的原理，在標(biāo) 識中加入某個特定個體的遺傳信息。PCR的成熟使得DNA防偽變得簡單易行，它是一種體外 快速擴增DNA的方法，用于放大特定的DNA片段，數(shù)小時內(nèi)使基因片段擴增到百萬個拷貝。 PCR技術(shù)自1983年Kary Mullis發(fā)明以來，歷經(jīng)三十多年，已成為生物科學(xué)領(lǐng)域不可或缺、 運用廣泛的實驗技術(shù)，主要在生物科研和臨床應(yīng)用中廣泛應(yīng)用。具有特異性強，靈敏度高， 簡便快速和對樣品純度要求不高的特點，使得DNA防偽在技術(shù)操作上變得完全可行。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于將生物學(xué)手段應(yīng)用于防偽技術(shù)領(lǐng)域，從而提供一種很難被破解 和仿制、結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥。按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，一種利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，包括普通 印泥，所述印泥還包括基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物和DNA酶抑制劑溶液，所述基因片段 PCR擴增產(chǎn)物混合物在印泥中的重量百分含量為0. 1 10%，所述DNA酶抑制劑溶液在印 泥中的重量百分含量為0. 001 0. 1%。所述基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物通過如下方法獲得(1)、樣品DNA的提取選取帶有個人遺傳信息的人體組織如口腔拭子、血液、頭發(fā) 毛囊，利用天根生化科技有限公司產(chǎn)品獲取基因組DNA ；(2)引物的設(shè)計選擇基因組DNA上的不同基因片段，利用primer premier5. 0、 BLAST primer和GeneBank軟件，查詢設(shè)計出與不同基因片段相對應(yīng)的上游引物和下游引 物的序列；(3)熒光定量PCR擴增在熒光PCR儀上進行DNA聚合酶鏈反應(yīng)，獲得不同基因片 段PCR擴增產(chǎn)物；(4)基因片段PCR擴增產(chǎn)物的混合將上述獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合，即得到基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物。作為本發(fā)明的進一步改進，所述基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物中的DNA濃度為 0.l-10000ng/ul。作為本發(fā)明的進一步改進，所述基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物中的DNA濃度為 10-100ng/ul。作為本發(fā)明的進一步改進，所述DNA酶抑制劑采用金屬離子螯合劑。所述熒光定量PCR擴增方法詳細如下1)、擴增反應(yīng)體系(25ul)模板(基因組DNA)，2ul ；IOmM上游引物和下游引 ；2XTaq PCR MasterMix(0. IU Taq Polymerase/ul,500uM dNTP,20mM Tris-HCl
ρΗ8· 3，IOOmM KCl,3mM MgCl2)，12. 5ul ；ddH20 :8· 5ul ；2)、循環(huán)反應(yīng)根據(jù)步驟(1)中的擴增反應(yīng)體系加樣，將加好樣的PCR試劑管放入 熒光PCR儀中，設(shè)置相應(yīng)的熒光采集條件后進行擴增，反應(yīng)循環(huán)程序為(a)、94°C預(yù)變性， 1個循環(huán)；(b)、94°C變性，52-60°C退火，72°C延伸，30個循環(huán)后反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)產(chǎn)物；所 述預(yù)變性、變性、退火和延伸階段的反應(yīng)時間根據(jù)引物的不同和目的條帶的大小不同而有 所差異，最后一個循環(huán)后，反應(yīng)在72°C維持5-15分鐘，使引物延伸完全，并使單鏈產(chǎn)物退火 成雙鏈。作為本發(fā)明的進一步改進，所述金屬離子螯合劑為EDTA，EDTA溶液的濃度為 0. 001% -5%。作為本發(fā)明的進一步改進，所述EDTA溶液的濃度為0. 01-0. 02%。作為本發(fā)明的進一步改進，所述基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物包括任意兩種基因 片段PCR擴增產(chǎn)物，兩種基因片段PCR擴增產(chǎn)物的比例為1 1 10 1。，優(yōu)選地，所述任 意兩種基因片段PCR擴增產(chǎn)物的比例為1 1。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，優(yōu)點在于利用DNA的堿基對的編排，產(chǎn)生加密度非常高 的防偽措施，很難被破解洞時，DNA也比較穩(wěn)定，存續(xù)時間長，甚至可以達上萬年。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1 (1)、選取口腔拭子為樣品，利用天根生化科技有限公司產(chǎn)品(快速DNA提取擴增 套裝)獲取基因組DNA;(2)、選擇該基因組 DNA 中的 EPO、VEGF, TP53、VEGFR、C0X-2、TNF_a、IL-6、GAPDH、 Aromatase 基因片段，利用 primer premier 5. 0、BLAST primer 和 GeneBank 軟件，查詢設(shè) 計出與上述選取的基因片段相對應(yīng)的上游引物和下游引物的序列，(如下所示)，引物的設(shè) 計方向為5’ -3’ ；EPO 244bp上游引物(Forwardprimer) GACAGCCGCCCTCTCCTCCA下游引物(Reverseprimer) GCCGGTCCTTGAACCCAGCCVEGF 280bp上游引物(Forwardprimer) CGTGTACGTTGGTGCCCGCT
下游引物(Reverse primer)TP53 805bp上游引物(Forward primer)下游引物(Reverse primer)VEGFR/FLT1 752bp上游引物(Forward primer)下游引物(Reverse primer)C0X2 177bp上游引物(Forward primer)下游引物(Reverse primer)TNF-a 152bp上游引物(Forward primer)下游引物(Reverse primer) IL-6
369bp上游引物(Forward primer)下游引物(Reverse primer)GAPDH 189bp上游引物(Forward primer)下游引物(Reverse primer)Aromatase 478bp上游引物(Forward下游引物(Reverse
AATCGGTGCCCAGCCAAGCC
GACGACAGGGCTGGTTGCCC TGCCGCCCATGCAGGAACTG
CCTCGAGGAGTGGCTGGCCT AACGCCCAGCGAAGGCTGAC
CAGCTCCACAGCCAGACGCC AAACTCTGCCCGGGTGCGTG
TGGCCAATGGCGTGGAGCTG GTAGGAGACGGCGATGCGGC
GCTGTCAGCTCACCCCTGCG CGGCCCCGTTGGCCTCAAAT
CCGAGAGGGTGTGGTGGCTG CAGCCTGGCCTTTGGGGTCG
primer) primer)
TGCCACAGAACTGGCCCCCT GCTGCTTGGGCACAGCCACT (3)熒光定量PCR擴增在熒光PCR儀上進行DNA聚合酶鏈反應(yīng)，獲得不同基因 片段PCR擴增產(chǎn)物。詳細步驟如下1)、擴增反應(yīng)體系(25ul)模板(基因組DNA)，2ul ； IOmM 上游引物和下游引物，2ul ;2XTaq PCR MasterMix (0. IU Taq Polymerase/ul, 500uM dNTP,20mM Tris-HCl pH8. 3，IOOmM KCl,3mM MgCl2)，12. 5ul ；ddH20 :8. 5ul。2)、循環(huán)反應(yīng) 根據(jù)步驟(1)中的擴增反應(yīng)體系加樣，將加好樣的PCR試劑管放入熒光PCR儀中，設(shè)置相應(yīng) 的熒光采集條件后進行擴增，反應(yīng)循環(huán)程序為(a)、94°C預(yù)變性，1個循環(huán)；(b)、94°C變性， 52-60°C退火，72°C延伸，30個循環(huán)后反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)產(chǎn)物。所述預(yù)變性、變性、退火和延 伸階段的反應(yīng)時間根據(jù)引物的不同和目的條帶的大小不同而有所差異，最后一個循環(huán)后， 反應(yīng)在72°C維持5-15分鐘，使引物延伸完全，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。(4)基因片段PCR擴增產(chǎn)物的混合將上述獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合，即 得到基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物。最后按照發(fā)明內(nèi)容部分的比例將獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物和EDTA溶 液加入到普通印泥中，即制得本發(fā)明產(chǎn)品。實施例2 (1)、選取血液為樣品，利用天根生化科技有限公司產(chǎn)品(快速DNA提取擴增套裝) 獲取基因組DNA ；(2)、選擇該基因組 DNA 中的 BDNF、FGF-2、SDF-U INFG, TNF-a, IL-6, GAPDH、Aromatase 基因片段，利用 primer premier 5· O、BLAST primer 和 GeneBank 軟件，查詢設(shè) 計出與上述選取的基因片段相對應(yīng)的上游引物和下游引物的序列，(如下所示)，引物的設(shè) 計方向為5’ -3’ ；(4)基因片段PCR擴增產(chǎn)物的混合將上述獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合，即 得到基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物。最后按照發(fā)明內(nèi)容部分的比例將獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物和EDTA溶液加入到普通印泥中，即制得本發(fā)明產(chǎn)品。實施例3 (1)、選取頭發(fā)毛囊為樣品，利用天根生化科技有限公司產(chǎn)品(快速DNA提取擴增 套裝)獲取基因組DNA;(2)、選擇該基因組 DNA 中的 EPO、VEGF, TP53、VEGFR、BNDF, FGF-2 和 C0X2 基因片 段，利用primer premier 5. 0、BLAST primer和GeneBank軟件，查詢設(shè)計出與上述選取的 基因片段相對應(yīng)的上游引物和下游引物的序列，(如下所示)，引物的設(shè)計方向為5’-3’ ；EPO 244bp上游引物(Forward下游引物(ReverseVEGF 280bp上游引物(Forward下游引物(ReverseTP53 805bp上游引物(Forward下游引物(ReverseVEGFR/FLT 1752bp上游引物(Forward下游引物(ReverseBNDF 618bp上游引物(Forward下游引物(Reverse FGF-2
118bp
上游弓丨物(Forward 下游弓丨物(Reverse C0X2 177bp 上游弓丨物(Forward 下游弓丨物(Reverse
primer)GACAGCCGCCCTCTCCTCCA
primer)GCCGGTCCTTGAACCCAGCC
primer)CGTGTACGTTGGTGCCCGCT
primer)AATCGGTGCCCAGCCAAGCC
primer)GACGACAGGGCTGGTTGCCC
primer)TGCCGCCCATGCAGGAACTG
primer)CCTCGAGGAGTGGCTGGCCT
primer)AACGCCCAGCGAAGGCTGAC
primer)GGGAAGGGGAGCTGCCGAGA
primer)CACCGGGCTTGGCTCTGTGG
primer)TTTCGTGGGTTCTCGCCCGC
primer)GAACCCGAAACCGCCGAGGG
primer) CAGCTCCACAGCCAGACGCC primer) AAACTCTGCCCGGGTGCGTG (3)熒光定量PCR擴增在熒光PCR儀上進行DNA聚合酶鏈反應(yīng)，獲得不同基因片 段PCR擴增產(chǎn)物。詳細步驟如下1)、擴增反應(yīng)體系(25ul)模板(基因組DNA)，2ul ；IOmM 上游引物和下游引物，2ul ;2XTaq PCRMasterMix (0. IU Taq Polymerase/ul, 500uM dNTP, 20mM Tris-HCl pH8. 3，IOOmM KCl,3mM MgCl2)，12. 5ul ；ddH20 :8. 5ul。2)、循環(huán)反應(yīng)根據(jù) 步驟(1)中的擴增反應(yīng)體系加樣，將加好樣的PCR試劑管放入熒光PCR儀中，設(shè)置相應(yīng)的 熒光采集條件后進行擴增，反應(yīng)循環(huán)程序為(a)、94°C預(yù)變性，1個循環(huán)；(b)、94°C變性， 52-60°C退火，72°C延伸，30個循環(huán)后反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)產(chǎn)物。所述預(yù)變性、變性、退火和延 伸階段的反應(yīng)時間根據(jù)引物的不同和目的條帶的大小不同而有所差異，最后一個循環(huán)后， 反應(yīng)在72°C維持5-15分鐘，使引物延伸完全，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。
(4)基因片段PCR擴增產(chǎn)物的混合將上述獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合，即 得到基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物。
最后按照發(fā)明內(nèi)容部分的比例將獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物和EDTA溶 液加入到普通印泥中，即制得本發(fā)明產(chǎn)品。
權(quán)利要求
一種利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，包括普通印泥，其特征在于所述印泥還包括基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物和DNA酶抑制劑溶液，所述基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物在印泥中的重量百分含量為0.1～10％，所述DNA酶抑制劑溶液在印泥中的重量百分含量為0.001～0.1％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述基因 片段PCR擴增產(chǎn)物混合物通過如下方法獲得(1)、樣品DNA的提取選取帶有個人遺傳信息的人體組織，獲取基因組DNA；(2)引物的設(shè)計選擇基因組DNA上的不同基因片段，利用primerpremier5. 0、BLAST primer和GeneBank軟件，查詢設(shè)計出與不同基因片段相對應(yīng)的上游引物和下游引物的序 列；(3)熒光定量PCR擴增在熒光PCR儀上進行DNA聚合酶鏈反應(yīng)，獲得不同基因片段PCR 擴增產(chǎn)物；(4)基因片段PCR擴增產(chǎn)物的混合將上述獲得的基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合，即得到 基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述基因 片段PCR擴增產(chǎn)物混合物中的DNA濃度為0. 1-lOOOOng/ul。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述基因 片段PCR擴增產(chǎn)物混合物中的DNA濃度為lO-lOOng/ul。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述DNA 酶抑制劑采用金屬離子螯合劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述熒光 定量PCR擴增方法詳細如下1)、擴增反應(yīng)體系(25ul)模板(基因組DNA)，2ul； 10mM上游引物和下游引物，2ul ； 2XTaq PCR MasterMix(0. 1U Taq Polymerase/ul, 500uM dNTP,20mM Tris-HCl pH8. 3, lOOmM KCl,3mM MgCl2)，12. 5ul ；ddH20 :8. 5ul ；2)、循環(huán)反應(yīng)根據(jù)步驟⑴中的擴增反應(yīng)體系加樣，將加好樣的PCR試劑管放入熒光 PCR儀中，設(shè)置相應(yīng)的熒光采集條件后進行擴增，反應(yīng)循環(huán)程序為(a)、94°C預(yù)變性，1個循 環(huán)；(b)、94°C變性，52-6CTC退火，72°C延伸，30個循環(huán)后反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)產(chǎn)物；所述預(yù)變 性、變性、退火和延伸階段的反應(yīng)時間根據(jù)引物的不同和目的條帶的大小不同而有所差異，最 后一個循環(huán)后，反應(yīng)在72°C維持5-15分鐘，使引物延伸完全，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述金屬 離子螯合劑為EDTA，EDTA溶液的濃度為0. 001% _5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述EDTA 溶液的濃度為0.01-0. 02%。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述基因 片段PCR擴增產(chǎn)物混合物包括任意兩種基因片段PCR擴增產(chǎn)物，兩種基因片段PCR擴增產(chǎn) 物的比例為1 1 10 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，其特征在于所述任意 兩種基因片段PCR擴增產(chǎn)物的比例為1 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用個人遺傳信息進行防偽的印泥，包括普通印泥，所述印泥還包括基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物和DNA酶抑制劑溶液，所述基因片段PCR擴增產(chǎn)物混合物在印泥中的重量百分含量為0.1～10％，所述DNA酶抑制劑溶液在印泥中的重量百分含量為0.001～0.1％。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，優(yōu)點在于，利用DNA的堿基對的編排，產(chǎn)生加密度非常高的防偽措施，很難被破解；同時，DNA也比較穩(wěn)定，存續(xù)時間長，甚至可以達上萬年。
文檔編號C09D11/10GK101885927SQ20101020666
公開日2010年11月17日 申請日期2010年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月23日
發(fā)明者葉欣 申請人:葉欣