專利名稱：：生物分子用標(biāo)記色素、標(biāo)記試劑盒以及生物分子的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及由熒光色素形成，用于核酸、蛋白質(zhì)、肽類以及糖類等生物分子的檢測的生物分子用標(biāo)記色素和標(biāo)記試劑盒以及生物分子的檢測方法。
背景技術(shù)：
：最近，人類基因組的所有序列被探明，進(jìn)行著以基因治療、基因診斷等為目的的后基因組的研究。例如，DNA分析是使固定在DNA微陣列板上的探針DNA和用熒光色素等標(biāo)記了的樣品DNA雜交而形成雙鏈后，再進(jìn)行樣品DNA的檢測。這是將用熒光色素標(biāo)記了的核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在基板上進(jìn)行雜交后進(jìn)行測定的方法。最近，采用使用具有更多的氨基的引物的方法、在DNA中引入氨基的方法。標(biāo)記中廣泛地使用熒光色素，要求具有高熒光強(qiáng)度、在干燥狀態(tài)(固體狀態(tài))下也可以發(fā)光、且具有水溶性等特性。作為熒光色素，例如使用Cy3或Cy5(例如，參考非專利文獻(xiàn)l)。非專利文獻(xiàn)l:《科學(xué)》283.1，l月，1999，93-87發(fā)明的揭示但是，以前的標(biāo)記色素存在標(biāo)記率低的問題。例如，相對于具有一個反應(yīng)點的DNA使用200倍摩爾左右的熒光色素，但即使是在所述條件下標(biāo)記率也只能達(dá)到5060%左右。因此，存在如下的問題因需要使用大量的標(biāo)記色素而導(dǎo)致檢測費用的成本增加，或者因需要除去未反應(yīng)的標(biāo)記色素的處理步驟而檢測所需的時間較長。為了解決上述課題，本發(fā)明人認(rèn)真努力后結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過使用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素，可以大幅度地提高對DNA的標(biāo)記率，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明的生物分子用標(biāo)記色素為用于基于熒光測定的生物分子檢測的標(biāo)記色素，其特征在于，具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部。在這里，上述有機(jī)EL色素可以使用由與包含一種以上的雜原子、硒原子或硼原子的五元環(huán)化合物和具有共軛體系的六元環(huán)化合物形成的稠合多環(huán)化合物。另外，上述稠合多環(huán)化合物可以使用由以下的通式(l)、(2)或(3)的任一種表示的吡咯衍生物。在這里，式中，RpR2、R3、R4分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有垸基、鏈烯基、炔基、垸氧基、羥基、氰基、磺酰基、芳族烴基、雜環(huán)基、環(huán)內(nèi)包含雜原子的芳基等取代基的芳族烴基、烴基、雜環(huán)基或環(huán)內(nèi)包含雜原子的芳基；X表示可具有取代基的氮原子、硫原子、氧原子、硒原子或硼原子；R'表示可含芳環(huán)的垸基或鏈烯基等脂肪族烴基或芳族烴基；An-表示C1—、Br—、I—等鹵化物離子，CF3S03—，BF4-，PF6。另外，上述的R2和R3可以使用選自噻吩衍生物、呋喃衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、嗯唑衍生物、噻唑衍生物、吡唑衍生物以及吡啶衍生物的一種。另外，上述的R2和R3可以使用具有磺?；谋交?。另外，上述稠合多環(huán)化合物可以使用由以下通式(4)、(5)、(6)、(7)或(8)表示的咪唑衍生物。R3(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>]在這里，式中，R"R2、R3、R4、R5分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有垸基、鏈烯基、炔基、垸氧基、羥基、氰基、磺?；?、芳族烴基、雜環(huán)基、環(huán)內(nèi)包含雜原子的芳基等取代基的芳族烴基、烴基、雜環(huán)基或環(huán)內(nèi)包含雜原子的芳基，R,、R2、R3、R4、Rs可相同或不同；R'、R"表示可含芳環(huán)的垸基或鏈烯基等脂肪族烴基或芳族烴基；An—表示Cr、Br—、r等鹵化物離子，CF3S03—，BF4-，PF6—。另外，上述的R2和R3可以使用選自噻吩衍生物、呋喃衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、噁唑衍生物、噻唑衍生物、吡唑衍生物以及吡啶衍生物的任意一種。另外，上述的R2和R3可以使用具有磺酰基的苯基。另外，本發(fā)明的標(biāo)記色素的結(jié)合部可以使用選自羧基、異氰酸酯基、異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代垸基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基的任意一種反應(yīng)性基團(tuán)。另外，本發(fā)明的標(biāo)記色素的間隔部可以使用含有至少一種選自-CH2-、-NHCOO-、-CONH-、-C關(guān)H-、-CH2NR-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、-O-、-S-、-NR-(R為烷基)、-(CH2-CH2-0)n-(n為110的整數(shù))、-CH-CH-、-CeC-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的官能團(tuán)。在這里，上述間隔部可以使用由以下的通式(I)表示的基團(tuán)。-(CHR')p-X-(CHR")q-(I)式中，X為直接結(jié)合或選自-NHCOO-、-CONH-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、陽O-、-S陽、-NR-、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的至少一種官能團(tuán)；R'和R"分別獨立地表示氫原子，或可含有芳環(huán)的烷基或鏈烯基等脂肪族烴基，或芳族經(jīng)基中根據(jù)需要取代有選自磺?；⒘u基、季銨基以及羧基的任意一種的帶電基團(tuán)的基團(tuán)；Ar表示芳基；p和q分別獨立地表示020的整數(shù)，p+q>l。另外，間隔部可以使用氨基酸或由220個氨基酸形成的肽連接基。另外，可以間隔部使用氨基酸，該氨基酸使用天然氨基酸或合成氨基酸。另外，氨基酸可以使用選自半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸(2-7$乂-3-只少爾fv^77二少:7。口,y酸)、2-氨基-3-磺?；?2-7$乂-3-只少爾年、>7°口八°:/酸)、酪氨酸、蘇氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸和絲氨酸的至少一種氨基酸。另外，也可以間隔部使用肽連接基，該肽連接基使用具有選自磺?；?、羥基、季銨基以及羧基的至少一種帶電基團(tuán)的基團(tuán)。另外，肽連接基也可以使用包含半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺?；?、酪氨酸、蘇氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸和絲氨酸的至少一種氨基酸的基團(tuán)。另外，本發(fā)明的第1種生物分子用標(biāo)記試劑盒為用于基于熒光測定的生物分子檢測的生物分子用標(biāo)記試劑盒，其特征在于，包含具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素。另外，本發(fā)明的第2種生物分子用標(biāo)記試劑盒為用于基于熒光測定的生物分子檢測的生物分子用標(biāo)記試劑盒，其特征在于，至少包含由有機(jī)EL色素形成的顯色部，結(jié)合在該顯色部且含有至少一種選自-CH2-、-NHCOO-、-CONH-、-CH2NH-、-CH2NR-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、-O隱、-S-、-NR-(R為烷基)、-(CH2-CH2-0)n-(n為1~10的整數(shù))、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的官能團(tuán)的間隔部。還有，第2種生物分子用標(biāo)記試劑盒可以包含反應(yīng)性基團(tuán)引入試劑，該試劑用于向標(biāo)記色素中引入選自羧基、異氰酸酯基、異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代烷基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基的任意一種反應(yīng)性基團(tuán)。另外，本發(fā)明的第l種生物分子的檢測方法的特征在于，使具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素與生物分子試樣反應(yīng)，測定基于該標(biāo)記色素標(biāo)記的生物分子試樣的熒光。在這里，上述生物分子試樣可以使用選自核酸、蛋白質(zhì)、肽類以及糖類的任意一種。還有，蛋白質(zhì)包含抗體。另外，本發(fā)明的第2種生物分子的檢測方法的特征在于，使用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記了的探針與生物分子試樣反應(yīng)，測定所述生物分子試樣的熒光。在這里，可以所述生物分子試樣使用核酸，所述探針使用與所述核酸的堿基序列互補(bǔ)的寡核苷酸或PNA。還有，可以所述寡核苷酸使用引物或終止子，擴(kuò)增所述核酸而測定熒光。另外，可以在擴(kuò)增所述核酸之前用有機(jī)EL色素標(biāo)記引物。此外，所述寡核苷酸或PNA可以使用分子信標(biāo)。另外，本發(fā)明的第3種生物分子的檢測方法為由生物分子形成的被檢測體或被修飾物質(zhì)修飾了的該被檢測體的檢測方法，其特征在于，將與被檢測體特異結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)或與修飾物質(zhì)特異結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)的一方，用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記，測定發(fā)自標(biāo)記了的結(jié)合物質(zhì)的熒光。在這里，上述的被檢測體或修飾物質(zhì)和上述結(jié)合物質(zhì)的組合可以使用抗原-抗體、半抗原-抗半抗原抗體、生物素-抗生物素蛋白、標(biāo)簽(Tag)-抗標(biāo)簽抗體、凝集素-糖蛋白或激素-受體。另外，本發(fā)明的第4生物分子的檢測方法的特征在于，包含將生物分子試樣通過電泳按大小分離的步驟，在該電泳之前或之后將生物分子試樣用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記。在這里，可以上述生物分子試樣使用核酸，根據(jù)電泳圖確定核酸的堿基序列。另外，也可以上述生物分子試樣使用蛋白質(zhì)，根據(jù)電泳圖將取出的蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量分析。另外，本發(fā)明的組織或細(xì)胞的染色方法的特征在于，將組織或細(xì)胞試樣中的生物分子用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記。在這里，上述生物分子可以使用核酸或蛋白質(zhì)。另外，本發(fā)明的染色色素為用于組織或細(xì)胞試樣的染色的染色色素，其特征在于，由具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素形成。本發(fā)明的生物分子用標(biāo)記色素的顯色部使用有機(jī)EL色素，結(jié)合部和顯色部之間設(shè)置間隔部，因此可以提供具有大致接近100%的標(biāo)記率，且在賦予固體狀態(tài)下的高熒光強(qiáng)度的標(biāo)記色素。艮P，認(rèn)為通過設(shè)置間隔部，顯色部和作為標(biāo)記對象的生物分子之間的位阻被抑制，結(jié)合部和生物分子的標(biāo)記部位的結(jié)合變得容易，因而可以獲得高標(biāo)記率。由此，如果利用本發(fā)明的標(biāo)記色素，則可以通過控制間隔部的長度，在不受生物分子的標(biāo)記部位的深度的影響的情況下，獲得高標(biāo)記率。由此，可以大幅度減少使用的標(biāo)記色素的量，因此也能夠大幅度降低耙分子的檢測費用。還有，有機(jī)EL色素在固體狀態(tài)(包含固體以及半固體)下具有高的量子收率，因此在微陣列等的基板上或珠子上的干燥狀態(tài)下也賦予高的熒光強(qiáng)度。另外，有機(jī)EL色素比Cy3或Cy5便宜，因此可以更低成本地進(jìn)行生物分子的檢測。另外，通過改變有機(jī)EL色素的取代基，可以改變激發(fā)波長以及發(fā)光波長，因此熒光波長的選擇的自由度增加，可以使用橙、黃、綠、藍(lán)等多種熒光波長。由此，能夠使用斯托克斯移位大的(激發(fā)波長和熒光波長之差大)的2種以上的熒光色素，也能夠同時檢測出包含在一個試樣中的多種靶核酸。另外，相對于需要冷凍保存的Cy3或Cy5，有機(jī)m色素在化學(xué)上穩(wěn)定，在常溫下可以長期保存，因此處理容易。附圖的簡單說明圖1是表示本發(fā)明的檢測方法中探針使用分子信標(biāo)時的發(fā)光機(jī)理的模式圖。圖2是表示本發(fā)明的檢測方法中IgG抗體的Fab'片段的制備方法之一例的模式圖。圖3是表示本發(fā)明的檢測方法中在IgG抗體的Fab'片段中引入有機(jī)El色素的方法之一例的模式圖。圖4A是本發(fā)明的實施例1中的用EL-OSu標(biāo)記了的17merDNA的HPLC圖譜之一例。圖4B是本發(fā)明的實施例1中的用EL-OSu-Sp標(biāo)記了的17merDNA的HPLC圖譜之一例。圖5A是本發(fā)明的實施例1中的用EL-OSu標(biāo)記了的20merDNA的HPLC圖譜之一例。圖5B是本發(fā)明的實施例1中的用EL-OSu-Sp標(biāo)記了的20merDNA的HPLC圖譜之一例。圖5C是本發(fā)明的實施例1中的用Alexa594標(biāo)記了的20merDNA的HPLC圖譜之一例。圖6A是本發(fā)明的實施例1中的用EL-OSu標(biāo)記了的40merDNA的HPLC圖譜之一例。圖6B是本發(fā)明的實施例1中的用EL-OSu-Sp標(biāo)記了的40merDNA的HPLC圖譜之一例。圖7是表示本發(fā)明的實施例1中的EL-OSu-Sp的添加量和標(biāo)記率的關(guān)系的圖之一例。圖8A是本發(fā)明的實施例2中的用EL-OSu標(biāo)記了的BSA的HPLC圖譜之一例。圖8B是本發(fā)明的實施例2中的用EL-OSu-Sp標(biāo)記了的BSA的HPLC圖譜之一例。圖9A是本發(fā)明的實施例2中的用EL-OSu標(biāo)記后的BSA的TOFMS圖譜之一例。圖9B是本發(fā)明的實施例2中的標(biāo)記前的BSA的TOFMS圖譜之一例。實施發(fā)明的最佳方式以下，對本發(fā)明的實施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明的生物分子用標(biāo)記色素的特征在于，具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素。用于本發(fā)明的標(biāo)記色素的有機(jī)EL色素只要是在一對陽極和陰極之間以固體狀態(tài)被夾持而通過自陽極注入的空穴和自陰極注入的電子再結(jié)合時的能量可發(fā)光的色素，則無特別限制。例如，可以使用四苯基丁二烯或芘等多環(huán)芳族化合物、環(huán)戊二烯衍生物、二苯乙烯基吡嗪衍生物、吖啶酮衍生物、喹吖啶酮衍生物、芪衍生物、吩噻嗪衍生物、吡嗪并吡啶衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、咔唑衍生物以及四苯基噻吩衍生物等。還有，較好是在分子內(nèi)具有羧基或可引入羧基的色素。如下所述，這是因為可容易地進(jìn)行用于與生物分子結(jié)合的反應(yīng)性基團(tuán)的引入。用于本發(fā)明的標(biāo)記色素的結(jié)合部具有與生物分子試樣(以下稱為耙分子)結(jié)合的反應(yīng)性基團(tuán)，該反應(yīng)性基團(tuán)可以使用與生物分子之間形成共價鍵或離子鍵的取代基或者親核試劑或親電子試劑。與生物分子之間形成共價鍵時，反應(yīng)性基團(tuán)較好是可與靶分子的氨基、亞氨基、巰基或羥基反應(yīng)的官能團(tuán)。作為有機(jī)EL色素和耙分子之間的共價鍵，較好是形成酰胺鍵、酰亞胺鍵、氨基甲酸乙酯鍵、酯鍵或胍鍵。該官能團(tuán)可以使用例如異硫氰酸酯基、異氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代磺?；?、酰氯基、鹵代垸基、乙二酸基、醛基、三嗪基、碳二亞胺基或活性酯化的羰基等。理想的是，使用選自異硫氰酸酯基、異氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代烷基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基的任意一種。更為理想的是，使用選自異氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代烷基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基的任意一種。這是因為可以與靶分子的氨基形成酰胺鍵，而且可以直接結(jié)合在靶分子內(nèi)的亞氨基上。特別理想的是，三嗪基、碳二亞胺基或活性酯化的羰基。另外，這些有機(jī)EL色素具有羧基時，在碳二亞胺衍生物、三嗪衍生物的存在下，也可以直接修飾存在于耙分子中的氨基以及亞氨基。還有，包含可具有取代基的三嗪基、可具有取代基的碳二亞胺基的有機(jī)EL色素與DNA堿基中的鳥嘌呤、胸腺嘧啶的亞氨基直接反應(yīng)，因此可以在不需要采用PCR法引入色素的情況下進(jìn)行錯配檢測(未形成雙鏈的堿基的檢測)，能夠作為SNP(單核苷酸多態(tài))分析的試劑使用。另外，與靶分子之間形成離子鍵的反應(yīng)性基團(tuán)可以使用陰離子性基團(tuán)，例如磺?；螋然＿@些陰離子性基團(tuán)與生物分子的例如氨基等陽離子形成離子鍵。另外，作為反應(yīng)性基團(tuán)，也可以同時使用形成共價鍵的反應(yīng)性基團(tuán)和形成離子鍵的反應(yīng)性基團(tuán)。由此，在靶分子之間可以形成更強(qiáng)的鍵。形成共價鍵的反應(yīng)性基團(tuán)和形成離子鍵的反應(yīng)性基團(tuán)的組合無特別限制，可例舉上述的官能團(tuán)和上述的磺?；螋然汝庪x子性基團(tuán)的組合。還有，可以使反應(yīng)性基團(tuán)與靶分子為DNA時的在寡聚DNA末端被修飾的氨基殘基、靶分子為蛋白質(zhì)時的氨基殘基、耙分子為肽類時的例如聚賴氨酸衍生物的氨基殘基等多肽的氨基以及靶分子為糖類時的多糖類衍生物骨架內(nèi)的氨基結(jié)合。用于本發(fā)明的標(biāo)記色素的間隔部為連接顯色部和反應(yīng)性基團(tuán)的構(gòu)成部分，是含有共價鍵或原子鏈的部分，可以使用含有一種以上選自-CH2-、-NHCOO-、-CONH曙、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、-O-、-S-、-NR-(R為烷基)、-(CH2-CH2-0)r(n為1~10的整數(shù))、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR陽的官能團(tuán)的基團(tuán)。艮P，間隔部可以僅由選自上述官能團(tuán)的一種構(gòu)成，也可以是包含2種以上的官能團(tuán)的結(jié)構(gòu)。另外，也可以是包含兩個以上所選擇的一種官能團(tuán)的結(jié)構(gòu)。例如，僅由一種官能團(tuán)構(gòu)成時，較好是-CONH-、-COO-、-CH2-0-R-、-CH2NH-等。另外，由兩種以上官能團(tuán)構(gòu)成時，可以為如下結(jié)構(gòu)。(1)由兩種官能團(tuán)構(gòu)成時較好是-CONH-COO-、-CH2-0-、-CH2-NR-等。(2)由三種以上官能團(tuán)構(gòu)成時(i)較好是使用由下述通式(I)表示的基團(tuán)。-(CHRl)p-X-(CHR2)q-(I)式中，X可以是直接結(jié)合或可以使用選自-NHCOO-、-CONH-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(-NH)-NH-、隱O-、-S陽、-NR陽、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的至少一種官能團(tuán)，較好是可以使用-COO-、-CONH-、-O-、-CH=CH-、-CeC-或-Ar-，更好是可以使用-COO-、-CONH-、-O-或-Ar-。另夕卜，Rl和R2可以分別獨立地使用氫原子，或可含有芳環(huán)的烷基或鏈烯基等脂肪族烴基，或在芳族烴基中根據(jù)需要取代有選自磺?；⒘u基、季銨基以及羧基的任意一種帶電基團(tuán)的基團(tuán)。另外，Ar為芳基，較好是亞苯基或亞萘基，根據(jù)需要可以使用被磺?；〈幕鶊F(tuán)。p和q分別獨立地表示020的整數(shù)，較好是010的整數(shù)，更好是05的整數(shù)，p+q》l。所述間隔部可具體例舉-(012、-(:0]^1-((:112)￡1-、-(cm)p-coo-《CH2)q-、《CH2)p"CH(-Rl-S03HHCH2)q-、—CH2)p-CH(-Rl-N+H3HCH2)q-、鍾(CH2》pCHBil匿COOH)-(CH2)q麗、HCl切p墜CH(-m，OHHCH2)q，、雨《CH2)p戸(0-CH-)rHCH2)q-、—(CH2)p-CONH(-R卜S03HHCH2)q-、-(CH2》p-CONH(—RlS03H)腸(CH2Xj、(CH2)『C0h'H(-Il-M'H3〉-(CH2)q腦、-(CH2)p-CONH(-Rl-0H)-(CH2)q-、-(CH2)p-COMH(-W-COOH)-(CH2)q-、-(CH幻p-COO—Kl(-S03H)-(CH2)q、(CH2)p-COO-Rl(-OH)-(CH2)q-、-(CH2)p-COORl(-N+H3)-(CH2)cj-、—《CH2)p-C00-Rl(-COOH)—(CH2)q-、-(CH2)p—Ar—(CH2)q-、-(CH2)p"(Ar~CO0)—(CH2)q-、—(CH2》p—(Ar-S03HHCH2)q-、-(CH2)p-(Ar-N'+H3HCH2)q-、—(CH2)p(Ar0}1>(CH2)q-、-(CH2)p-(Ar-C0010，(CH2)q-、-(CH2)p-C^C國(CH2)q-、-(CH2)p-C=C-(CH2)q-、-(CH2)p-NR-(CH2)q-、-(CH2)p-0-(CH2)q-、-(CH2)p-S-(CH2)q、-'(CH2>p-HN"C(=NH)-NH-'(CH2)q-、KCH2)p-C;OAr-NR-(CH2)q-等較好是-(CH2)p-CONH-(CH2)q-、-(CH2)p-COO-(CH2)q-。(ii)較好是使用由以下的通式(n)表示的基團(tuán)。-Y-(CHR3)r-Z-(II)在這里，Y以及Z分別獨立地表示選自-NHCOO-、-CONH-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、-CH2NH-、-CH2NR-、-O-、-S-、-NR-、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的至少一種官能團(tuán)，理想的是-CONH-和-COO-、-COO-和-COO-、-COO-和-NR-等組合。另夕卜，R3可以使用氫原子，或可含有芳環(huán)的烷基或鏈烯基等脂肪族烴基，或在芳族烴基中根據(jù)需要取代有選自磺酰基、羥基、季銨基以及羧基的任意一種帶電基團(tuán)的基團(tuán)。另外，Ar為芳基，較好是亞苯基或亞萘基，根據(jù)需要可以使用被磺酰基取代的基團(tuán)。r為020的整數(shù)，較好是010的整數(shù)，更好是05的整數(shù)。該間隔部的具體例子可例舉-CONH-(CH2)rCOO-、-CONH-CH(-R3-OH)-COO-、-CONH-CH(-R3-COOH)-COO-、-CONH-CH(R3-S03H)-COO隱、-COO-(CH2)r-COO,。另外，間隔部也可以使用氨基酸或由220個氨基酸形成的肽連接基。氨基酸可以使用天然或合成的氨基酸。在這里，天然氨基酸包含甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、精氨酸、半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺?；帷㈦装彼?、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、組氨酸、脯氨酸以及4-羥基脯氨酸等。合成氨基酸包含上述天然氨基酸的D體或在分子內(nèi)至少含有氨基和羧基的修飾氨基酸。修飾氨基酸可以由通式H-N(Rl)-(R2-CO)-OH表示。在這里，Rl和R2分別獨立地表示介以或未介以酯、醚、硫酯、硫醚、酰胺、脲或硫脲以選自磺?；⒘u基、季銨基以及羧基的任意一種的帶電基團(tuán)取代的烴基、芳基或雜環(huán)基。還有，烴基、芳基或雜環(huán)基分別可以被鹵素原子、垸基、鏈烯基、炔基或烷氧基的至少一種取代。用于本發(fā)明的間隔部的更理想的氨基酸選自作為具有磺酰基的氨基酸的半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺?；幔约熬哂辛u基的酪氨酸、蘇氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸、絲氨酸的任意一種。其原因是可以提高標(biāo)記色素的水溶性。更好是半胱氨酸或絲氨酸。作為肽連接基，較好是使用分別由-C(-Rl)-CONH-C(-R2)-、-C(-Rl)-CONH-C(-r2)-conh-c(-r3)-、《(-111)-(:0>^-(:(-112)-(:(-113)-(:0>^-(:(-114)-表示的二肽、三肽、四肽。在這里，Rl、R2、R3、R4表示氫原子、碳數(shù)16的烷基、醇基、吲哚基、羥苯基、芐基、胍基、硫醚基、烷硫基、咪唑基或垸基氨基等取代基。這些肽同聚或異聚肽。具體例舉，可以使用Ala-Ser、Glu-Ala、Glu-Ala-Leu、Gly-Pro、Gly-Pro-Asn、Ile-Val、Ile-Val國Met等。另外，肽連接基的一部分可以根據(jù)需要使用具有選自磺?；?、羥基、季銨基以及羧基的至少一種帶電基團(tuán)的基團(tuán)。例如，可以使用包含一種以上的具有其中的任意一種帶電基團(tuán)的氨基酸的肽連接基。由此，可以提高標(biāo)記色素的水溶性。例如，可以使用包含選自具有磺酰基的半胱氨酸，2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺?；幔约熬哂辛u基的酪氨酸、蘇氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸、絲氨酸的任意一種氨基酸的肽連接基。通過改變間隔部的長度以及其結(jié)構(gòu)，可以改變顯色部和生物分子的標(biāo)記部位之間的距離，抑制生物分子和標(biāo)記色素之間的位阻。s卩，可以根據(jù)具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)、肽、DNA等生物分子的立體結(jié)構(gòu)來進(jìn)行標(biāo)記色素的結(jié)構(gòu)設(shè)計，從而抑制位阻，因此可以提高標(biāo)記率。或者，通過在間隔部引入例如-CH《H-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-等賦予剛性的官能團(tuán)，也可以使對于特定的標(biāo)記部位、例如位于深部的標(biāo)記部位的位阻增加。由此，通過僅選擇性標(biāo)記位阻小的標(biāo)記部位、例如淺部，同時用位阻小的另一個標(biāo)記色素標(biāo)記深部的標(biāo)記部位，從而可以識別深部和淺部的標(biāo)記部位。在本發(fā)明的標(biāo)記色素中引入反應(yīng)性基團(tuán)時，例如可以采用示于流程圖1的反應(yīng)。反應(yīng)式(I)表示反應(yīng)性基團(tuán)使用活性酯化的羧基，與反應(yīng)性基團(tuán)結(jié)合的間隔部的官能團(tuán)使用-COO-的例子?；钚怎セ聂然梢允褂肗-羥基琥珀酰亞胺酯或馬來酰亞胺酯。通過使用N-羥基琥珀酰亞胺酯并使用DCC作為縮合劑使用DCC，從而經(jīng)過N-羥基琥珀酰亞胺酯體，有機(jī)EL色素和靶分子通過酰胺鍵結(jié)合。另外，反應(yīng)式(II)表示活性酯化的羧基使用三嗪基衍生物，與反應(yīng)性基團(tuán)結(jié)合的間隔部的官能團(tuán)使用-COO-的例子。另外，反應(yīng)式(III)表示反應(yīng)性基團(tuán)使用碳二亞胺基，與反應(yīng)性基團(tuán)結(jié)合的間隔部的官能團(tuán)使用-COO-的例子。碳二亞胺基可以使用N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或l-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)碳二亞胺等碳二亞胺試劑。可以經(jīng)由碳二亞胺體，通過酰胺鍵使有機(jī)EL色素和靶分子結(jié)合。另外，反應(yīng)式(IV)表示在間隔部先引入碳二亞胺基、三嗪基的例子，即與反應(yīng)性基團(tuán)結(jié)合的間隔部的官能團(tuán)兼作反應(yīng)性基團(tuán)的例子。由此，即使不另外在標(biāo)記色素中引入反應(yīng)性基團(tuán)，也可以使標(biāo)記色素直接與靶分子內(nèi)的氨基、亞氨基結(jié)合。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>流程圖1使用于本發(fā)明的標(biāo)記色素的理想的有機(jī)EL色素為包含具有共軛體系的五元環(huán)化合物的化合物，可例舉該五元環(huán)化合物含有一種以上的雜原子、硒原子或硼原子的化合物。還有，具體可例舉由具有共軛體系的五元環(huán)化合物形成的單環(huán)化合物和該五元環(huán)化合物與具有共軛體系的六元環(huán)化合物形成的稠合多環(huán)化合物。其原因為即使是固態(tài)狀態(tài)，量子收率也大，顯示強(qiáng)熒光。五元環(huán)化合物較好是吡咯衍生物或咪唑衍生物。還有，吡咯衍生物或咪唑衍生物較好是具有1個以上的季銨基。這是因為可以使水溶性提高。以下，對稠合多環(huán)化合物的具體例子進(jìn)行說明。(單吡咯衍生物1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>在這里，R,、R2、R3、R4、R5分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有垸基、鏈烯基、炔基、垸氧基、羥基、氰基、磺?；⒎甲鍩N基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基。R,、R2、R3、R4、Rs可相同或不同。上述垸基較好是碳數(shù)16的直鏈狀或分支狀的垸基。另外，上述鏈烯基較好是乙烯基、烯丙基、巴豆基、甲基巴豆?；虍愇煜┗?。另外，上述炔基較好是乙炔基或炔丙基。另外，上述垸氧基較好是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、戊氧基或苯氧基。另外，上述芳族烴基包含單環(huán)或多環(huán)，較好是苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，更好是苯基。另外，上述雜環(huán)基較好是吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基或喹啉基，更好是呋喃基、咪唑基或噻吩基。另外，上述烴基較好是碳數(shù)16的直鏈狀或分支狀的垸基。另外，R'表示可含有芳環(huán)的烷基或鏈烯基等脂肪族烴基或芳族烴基。在這里，烷基、鏈烯基、芳族烴基可使用與上述相同的基團(tuán)。另外，An—表示Cr、Br—、I—等鹵化物離子，CF3S03-，BF4—，PF6-。還有，在以下的通式中如果無特別說明則相同。(單吡咯衍生物2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>在這里，式中的Rs、R9分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、磺酰基、芳族烴基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基，R8、R9可相同或不同。上述垸基較好是碳數(shù)16的直鏈狀或分支狀的烷基。另外，上述鏈烯基較好是乙烯基、烯丙基、巴豆基、甲基巴豆?；虍愇煜┗Ａ硗?，上述炔基較好是乙炔基或炔丙基。另外，上述垸氧基較好是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、戊氧基或苯氧基。另外，上述芳族烴基包含單環(huán)或多環(huán)，較好是苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，更好是苯基。另外，上述雜環(huán)基較好是吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基或喹啉基，更好是呋喃基、咪唑基或噻吩基。另外，上述烴基較好是碳數(shù)l6的直鏈狀或分支狀的垸基。還有，在以下的通式中，如果無特別說明則也相同。另夕卜，n為1以上的整數(shù)，較好是15，在以下的通式中也相同。(二唑衍生物1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>(二唑衍生物2)在這里，R,、R2、R3、R4分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有垸基、鏈烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、磺?；⒎甲鍩N基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基，R!、R2、R3、R4、R6、R7可相同或不同。R2、R3可以使用可具有取代基的芳族烴基，較好是苯基，其取代基可以使用碳數(shù)14的垸基或垸氧基或者溴原子。還有，烷基較好是使用甲基，烷氧基較好是使用甲氧基。另外，X為可具有取代基的氮原子、硫原子、氧原子、硒原子或硼原子，如果無特別說明，則在以下的通式中也相同。(二唑衍生物4)在這里，N—O表示氮原子配位結(jié)合在氧原子上的狀態(tài)。(二唑衍生物6)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>在這里，式中，R1Q、Ru分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、磺?；⒎甲鍩N基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基，R1()、Ru可相同或不同。上述烷基較好是碳數(shù)16的直鏈狀或分支狀的烷基。另外，上述鏈烯基較好是乙烯基、烯丙基、巴豆基、甲基巴豆?；虍愇煜┗?。另外，上述炔基較好是乙炔基或炔丙基。另外，上述垸氧基較好是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、戊氧基或苯氧基。另外，上述芳族烴基包含單環(huán)或多環(huán)，較好是苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，更好是苯基。另外，上述雜環(huán)基較好是吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基或喹啉基，更好是呋喃基、咪唑基或噻吩基。另外，上述烴基較好是碳數(shù)l6的直鏈狀或分支狀的垸基。另外R,2為可具有取代基的鏈烯基或石蠟基，n為l3的整數(shù)，較好是l。還有，在以下的通式中，如果無特別說明則也相同。(二唑衍生物9)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>(三唑衍生物1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>作為五元環(huán)化合物，也可以使用含有噻吩基的以下的衍生物。(噻吩衍生物1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>(噻吩衍生物3)另外，噻吩衍生物的情況下，也可以使用作為非聚合類化合物的由以下的通式表示的2,3,4,5-四苯基噻吩衍生物。在這里，式中，Rl3、R14、R15分別獨立地表示氫原子或者直鏈、分支或環(huán)狀的碳數(shù)16的烷基，優(yōu)選苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基的取代或未取代的芳基，或者優(yōu)選芐基或苯乙基的取代或未取代的芳烷基；An以及Ar2表示置換或未置換的芳基，較好是表示苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，還有，Ar,以及A&可以與結(jié)合了的氮原子共同形成含氮雜環(huán)。另外，Y,以及Y2表示氫原子，鹵素原子，或直鏈、分支或環(huán)狀的碳數(shù)16的垸基，或者優(yōu)選甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、戊氧基或苯氧基的直鏈、支鏈或環(huán)狀的垸氧基，或者優(yōu)選苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基的置換或未置換的芳基，或者優(yōu)選芐基或苯乙基的置換或未置換的芳香烴基，或者置換或未置換的氨基。(噻吩衍生物4)另外，可以使用由以下的通式表示的2，3，4,5-四苯基噻吩衍生物。在這里，式中，AriAr6分別獨立地表示置換或未置換的芳基，較好是表示苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，還有，Ar,禾QAr2、Ar3和Ar4以及Ar5和Ar6可與結(jié)合了的氮原子共同形成含氮雜環(huán)。另外，五元環(huán)化合物也可以使用咪唑，使用由以下的通式表示的咪唑衍生物。在這里，構(gòu)成咪唑衍生物的的咪唑基較好是具有季銨基。其原因是可以提高水溶性。還有，包含吡啶基時，為了進(jìn)一步提高水溶性，吡啶基也可以具有季銨基。還有，在以下的通式中，R"表示可含有芳環(huán)的垸基或鏈烯基等脂肪族烴或芳族烴基。(咪唑衍生物1)(咪唑衍生物1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>(咪唑衍生物3)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>在這里，咪唑骨架可以在中央的苯環(huán)R8、R9、R1()、Rn的任意位置上結(jié)合多個單元。另外，R,2為可具有取代基的鏈烯基或石蠟基，n為l3的整數(shù)，較好是1。(咔唑衍生物)另外，也可以使用由以下的通式表示的咔唑衍生物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>另外，也可以使用作為具有共軛體系的五元環(huán)化合物的包含1種以上的雜原子、硒原子或硼原子的單環(huán)化合物。無特別限制，例如可以使用由以下的通式表示的吡咯衍生物。在這里，式中，R,、R4、Rs分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、磺酰基、芳族烴基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基，R,、R4、Rs可相同或不同。上述烷基較好是碳數(shù)16的直鏈狀或分支狀的垸基。另外，上述鏈烯基較好是乙烯基、烯丙基、巴豆基、甲基巴豆?；虍愇煜┗?。另外，上述炔基較好是乙炔基或炔丙基。另外，上述垸氧基較好是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、戊氧基或苯氧基。另外，上述芳族烴基包含單環(huán)或多環(huán)，較好是苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，更好是苯基。另外，上述雜環(huán)基較好是吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、嗎唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基或喹啉基，更好是呋喃基、咪唑基或噻吩基。另外，上述烴基較好是碳數(shù)16的直鏈狀或分支狀的烷基。用于本發(fā)明的標(biāo)記色素的有機(jī)EL色素只要是以上說明的稠合多環(huán)化合物以及單環(huán)化合物，就無特別限制，但可以優(yōu)選使用由以下的通式表示的二唑衍生物或咪唑衍生物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>還有，在上述二唑衍生物以及咪唑衍生物中，可以優(yōu)選使用二唑并吡啶衍生物或咪唑并吡啶衍生物。本發(fā)明的特別理想的標(biāo)記色素在顯色部包含上述的二唑并吡啶衍生物或咪唑并吡啶衍生物，可以由以下的通式表示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>-z<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>-(CHR')p-X-(CHR")q表示前述的間隔部。另外，Z表示前述的反應(yīng)性基團(tuán)。在這里，上述的R2和R3較好是使用可具有取代基的芳族烴基或烴基?？梢垣@得對應(yīng)于Cy3的綠色熒光色素。芳族烴基為苯基、甲苯基、二甲苯基或萘基，更好是苯基或甲苯基。還有，取代基較好是锍基。這是因為可以提高水溶性?；蛘?，上述的R2和R3也可以使用選自噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基以及吡啶基的一種，更好是使用噻吩基、咪唑基以及呋喃基，它們可以具有取代基?？梢垣@得對應(yīng)Cy5的紅色熒光色素。標(biāo)記色素可以通過反應(yīng)性基團(tuán)和間隔部的組合以各種方法合成。例如，反應(yīng)性基團(tuán)使用活性酯化的羧基時，預(yù)先合成二唑并吡啶衍生物或咪唑并吡啶衍生物的活性酯化體，使間隔部用化合物(例如甘氨酸、丙氨酸、4-氨基丁酸、半胱氨酸、絲氨酸等氨基酸)與該活性酯化體反應(yīng)而獲得竣酸體，使該羧酸體與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，從而可以獲得引入了間隔部的活性酯化體。例如，間隔部用化合物使用甘氨酸時，可以獲得具有-CONH-和-(CH2)-的間隔部。另夕卜，使用P-丙氨酸時，可以獲得具有-CONH-和-(CH2)2-的間隔部。另夕卜，使用4-氨基丁酸時，可以獲得具有-CONH-和-(CH2)3-的間隔部。另夕卜，使用半胱氨酸時，可以獲得具有-CONH-和-S(V的間隔部。另外，使用絲氨酸時，可以獲得具有-CONH-和-OH的間隔部。通過使用半胱氨酸和絲氨酸，可以在間隔部分別引入锍基和羥基，可以提高標(biāo)記色素的水溶性。只要是測定標(biāo)記了的固體或半固體狀的生物分子的熒光的檢測方法，則本發(fā)明的標(biāo)記色素可以使用所有的生物分子的檢測方法。通過以有機(jī)EL色素代替以前的熒光色素，可以提供高靈敏度、化學(xué)上穩(wěn)定、操作性良好且低成本的檢測方法。在本發(fā)明中，可以如前所述使有機(jī)El色素與生物分子試樣直接反應(yīng)而用有機(jī)EL色素標(biāo)記生物分子試樣，或也可以使用使生物分子試樣和用有機(jī)El色素標(biāo)記了的探針反應(yīng)而用有機(jī)El色素標(biāo)記生物分子試樣的方法。另外，也可以使用利用特異結(jié)合的生物分子的檢測方法。還有，還可以使用將用有機(jī)E1色素標(biāo)記的生物分子試樣通過電泳進(jìn)行大小分離的的方法。例如，將核酸作為檢測對象的DNA微陣列法可以按照以下的步驟進(jìn)行。(DNA微陣列法)本檢測方法中，使有機(jī)El色素與需要檢測的耙核酸反應(yīng)而用有機(jī)EL色素標(biāo)記的同時，準(zhǔn)備具有與耙核酸互補(bǔ)的堿基序列的單鏈的探針核酸，將使其成為單鏈了的耙核酸和探針核酸在基板上進(jìn)行雜交，測定耙核酸的熒光。在該檢測方法中，調(diào)査基因表達(dá)時，在基板上固定的探針核酸可以使用將cDNA等以cDNA文庫、基因組文庫或全部基因組作為模板以PCR法擴(kuò)增而制成的核酸。另外，在調(diào)查基因的突變等時，可以使用以作為基準(zhǔn)的已知的序列為基礎(chǔ)合成對應(yīng)于突變等的各種寡核苷酸而得的核酸。探針核酸的在基板上的固定可以根據(jù)核酸的種類或基板的種類選擇適當(dāng)?shù)姆椒?。例如，也可以使用利用DNA的電荷使其結(jié)合于用多聚賴氨酸等的陽離子進(jìn)行了表面處理的基板上的方法。另一方面，通過將變性為單鏈的靶核酸和有機(jī)El色素混合而使其反應(yīng)，從而制成用有機(jī)EL色素標(biāo)記了的靶核酸。較好是以反應(yīng)溫度為室溫6(TC，反應(yīng)時間為248小時的條件進(jìn)行。然后，將標(biāo)記了的靶核酸滴加到基板上，進(jìn)行雜交。雜交較好是在室溫70'C且24S小時的范圍內(nèi)進(jìn)行。通過雜交，具有與探針核酸互補(bǔ)的堿基序的靶核酸選擇性地與探針核酸結(jié)合。之后，洗凈基板，在室溫干燥。然后，采用熒光激光掃描法測定干燥的基板的表面的熒光強(qiáng)度。通過熒光強(qiáng)度，可以監(jiān)控基因表達(dá)水平。還有，上述雜交針對在基板上固定探針核酸的方法進(jìn)行了說明，但也可以使用預(yù)先將用有機(jī)El色素標(biāo)記的靶核酸固定在基板上，將探針核酸滴加到基板上的方法。另外，同樣將核酸作為檢測對象，采用引物或終止子的PCR法可以按照以下的步驟進(jìn)行。(PCR法)(PCR法)本檢測方法中，將與需要檢測的耙核酸的堿基序列互補(bǔ)的探針用有機(jī)EL色素標(biāo)記，耙核酸擴(kuò)增之前或擴(kuò)增之后，使耙核酸和探針反應(yīng)，測定靶核酸的熒光。具體地，靶核酸的的延伸反應(yīng)通過酶(DNA聚合酶、RNA聚合酶)進(jìn)行，這時酶識別靶核酸和由寡核苷酸形成的引物形成的雙鏈核苷酸序列，從其識別的部位開始進(jìn)行延伸反應(yīng)，僅擴(kuò)增作為目標(biāo)的基因區(qū)域。酶進(jìn)行合成時，以核苷酸(dNTP、NTP)為原料進(jìn)行合成反應(yīng)。這時，如果在通常的核苷酸(dNTP、NTP)中以任意的比例混合例如圖27所示的具有色素的核苷酸，則可以合成引入了該比例的色素的核酸?；蛘?，也可以通過PCR以任意的比例引入具有氨基的核苷酸后，使有機(jī)EL色素結(jié)合，合成引入了有機(jī)EL色素的核酸。酶進(jìn)行合成時以核苷酸作為原料進(jìn)行合成反應(yīng)，但這時使用將核苷酸的3'的OH改為H的核苷酸時，不會再進(jìn)行核酸的延伸反應(yīng)，在該時間點上反應(yīng)終止。該核苷酸，即雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP，dideoxynucleotidetriphospate)被稱為終止子。如果在通常的核苷酸中混合終止子進(jìn)行核酸的合成反應(yīng)，則以一定的概率引入終止子，反應(yīng)終止，因此合成各種長度的核酸。如果通過電泳將這些核酸進(jìn)行大小分離，則DNA按照長度的順序排列。在這里，如果用根據(jù)終止子的各堿基的種類而不同的有機(jī)EL色素標(biāo)記，則在合成反應(yīng)的終點(3'端)觀察到依賴于各堿基的傾向，通過以終止子上標(biāo)記了的有機(jī)EL色素為基點讀取熒光信息，從而可以獲得該靶核酸的堿基序列的信息。另外，也可以利用預(yù)先用有機(jī)EL色素標(biāo)記了的引物替代終止子與靶核酸進(jìn)行雜交。另外，探針也可以使用PNA(肽核酸)。PNA是將作為核酸的基本骨架結(jié)構(gòu)的戊糖磷酸骨架替換為以甘氨酸為單元的聚酰胺骨架而得的化合物，因此具有類似于核酸的立體結(jié)構(gòu)，對于具有互補(bǔ)的堿基序列的核酸，非常特異且牢固地進(jìn)行結(jié)合。因此，不僅是原位雜交方法等已知的DNA分析方法，還可以通過應(yīng)用在端粒PNA探針來作為端粒研究的試劑使用。檢測可以通過以下方法進(jìn)行例如，使雙鏈DNA與具有同DNA的堿基序列的全部或一部分互補(bǔ)的堿基序列且用有機(jī)EL色素標(biāo)記了的PNA接觸而進(jìn)行雜交，加熱該混合物而生成單鏈DNA，將混合物緩慢地冷卻至室溫，制成PNA-DNA復(fù)合物，測定其熒光。在上述的例子中，對于將靶核酸通過PCR法擴(kuò)增而測定生成物的熒光的方法進(jìn)行了說明，但在該方法中，需要通過電泳確認(rèn)生成物的大小，之后測定熒光強(qiáng)度來檢測擴(kuò)增生成物的量。針對這一點，也可以使用利用熒光色素的能量傳遞而實現(xiàn)通過與PCR法的生成物雜交而使其產(chǎn)生熒光的探針，實時地測定生成物的量。該方法中可以使用例如標(biāo)記了供體和受體的DNA。作為具體的檢測方法，可例舉確認(rèn)特定序列的存在的分子信標(biāo)法、TagMan—PCR法或循環(huán)探針法等。例如，對于分子信標(biāo)法的發(fā)光機(jī)理，對在基板上固定分子信標(biāo)并與靶基因進(jìn)行雜交的例子用圖1進(jìn)行說明。在具有特定DNA序列的DNA(探針)的一端上標(biāo)記有機(jī)EL色素F，另一端標(biāo)記猝滅劑Q。猝滅劑Q被固定在基板上，在靶基因引入前，猝滅劑Q和有機(jī)EL色素F接近而熒光色素被消光。如果向其中引入具有與標(biāo)記了的DNA互補(bǔ)的序列的靶基因，則標(biāo)記了的DNA和靶基因進(jìn)行雜交，由此有機(jī)EL色素F和猝滅劑Q的距離變遠(yuǎn)，可以觀察有機(jī)EL色素F的熒光。由此，可以觀察DNA的雜交并測定雜交的量。另外，以蛋白質(zhì)為檢測對象時，電泳后的蛋白質(zhì)的檢測中使用染色色素。通常，采用使例如考馬斯亮藍(lán)(CBB)等染色色素浸透于電泳后的凝膠中而將蛋白質(zhì)染色，照射UV來使其發(fā)光的方法。但是，使用以前的染色色素的方法雖然簡便，但靈敏度低達(dá)100ng左右，不適合微量蛋白質(zhì)的檢測。另外，由于隔著凝膠使染色色素浸透，因此還存在染色所需要的時間長的問題。與此相對，在本發(fā)明中，將蛋白質(zhì)通過電泳進(jìn)行大小分離后，通過使有機(jī)EL色素結(jié)合于分離了的蛋白質(zhì)來標(biāo)記蛋白質(zhì)。本發(fā)明的有機(jī)El色素具有反應(yīng)性基團(tuán)，與蛋白質(zhì)迅速進(jìn)行定量反應(yīng)，靈敏度更高，適用于微量蛋白質(zhì)的檢測。還有，也可以將大小分離的蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量分析來鑒定。在這里，蛋白質(zhì)可以將白蛋白、球蛋白、谷蛋白、組蛋白、精蛋白以及膠原等單純蛋白質(zhì)，核蛋白、糖蛋白、核糖蛋白、磷蛋白、金屬蛋白等復(fù)合蛋白質(zhì)的任意一種作為檢測對象。例如，可以對應(yīng)于磷蛋白、糖蛋白、總蛋白的染色色素而使用三種有機(jī)EL色素，可以在通過平面電泳分離了的蛋白質(zhì)試樣中將磷蛋白、糖蛋白以及總蛋白染色。另夕卜，可以通過進(jìn)行TOP-Mass等質(zhì)量分析來鑒定蛋白質(zhì)，因此可以應(yīng)用于生成特殊的蛋白質(zhì)的癌癥或病毒引起的感染癥等疾病的診斷和治療。另外，膠原為構(gòu)成動物的結(jié)締組織的蛋白質(zhì)，具有獨特的纖維狀結(jié)構(gòu)。即，由3條多肽鏈形成，其肽鏈聚在一起形成三重鏈。膠原通常是免疫原性極低的蛋白質(zhì)，廣泛地使用在食品、化妝品、醫(yī)藥品等領(lǐng)域。但是，即使在膠原的肽鏈上引入熒光色素，以前的熒光色素的穩(wěn)定性能也并不充分，需要更加穩(wěn)定的熒光色素。因此，通過標(biāo)記膠原的熒光色素使用有機(jī)El色素，可以進(jìn)行穩(wěn)定且高靈敏度的檢測。另外，探針也可以使用適體。適體由寡核酸形成，可以呈根據(jù)堿基序列具有各種特征的立體結(jié)構(gòu)，因此可以通過所述立體結(jié)構(gòu)結(jié)合到包含蛋白質(zhì)的所有生物分子上。利用該性質(zhì)，使用有機(jī)E1色素標(biāo)記的適體結(jié)合在特定的蛋白質(zhì)上，根據(jù)基于與被檢測體的結(jié)合的該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)變化所帶來的熒光變化，可以間接地檢測被檢測體。例如，提出了使用用熒光色素標(biāo)記的適體，利用能量傳遞的可卡因檢測用生物傳感器。(J.Am.Chem.Soc.2001，123，4928-4931)。通過使用有機(jī)El色素代替該熒光色素，可以提供高靈敏度且處理容易的生物傳感器。另外，本發(fā)明的標(biāo)記色素也可以適用于利用特異結(jié)合的生物分子的檢測方法中。即，由生物分子形成的被檢測體或被修飾物質(zhì)修飾了的該被檢測體的檢測中，可以將與被檢測體特異結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)或與修飾物質(zhì)特異結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)的一方，用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記，測定發(fā)自標(biāo)記了的結(jié)合物質(zhì)的熒光。在這里，上述的被檢測體或修飾物質(zhì)和上述結(jié)合物質(zhì)的組合可以使用抗原-抗體、半抗原-抗半抗原抗體、生物素-抗生物素蛋白、標(biāo)簽-抗標(biāo)簽抗體、凝集素-糖蛋白或激素-受體。具體地，對存在于基板上、溶液中、珠上、抗體上的抗原或半抗原，使由有機(jī)EL色素標(biāo)記的抗體等結(jié)合物質(zhì)作用，利用該抗體的抗原或半抗原的特異性結(jié)合能力，檢測特定的抗原或半抗原?？乖衫e蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽等，半抗原可例舉FITC或二硝基苯基等低分子量的分子。作為抗原或半抗原與抗體的組合，可例舉GFP和GFP抗體、FITC和抗FITC抗體等。作為具體例子，可以使用以下的方法。(1)使熒光標(biāo)記了的抗體與存在于基板或溶液中的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)結(jié)合，進(jìn)行檢測的方法。(2)使熒光標(biāo)記了的抗半抗原抗體與存在于基板或溶液中的修飾半抗原而得的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)結(jié)合，進(jìn)行檢測的方法。(3)使熒光標(biāo)記了的抗生物素蛋白存在于基板或溶液中的修飾生物素而得的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)結(jié)合，進(jìn)行檢測的方法。(4)使抗體與存在于基板或溶液中的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)結(jié)合，再使與該抗體特異結(jié)合的標(biāo)記了熒光色素的抗體結(jié)合，進(jìn)行檢測的方法。(5)使修飾半抗原而得的抗體與存在于基板或溶液中的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)結(jié)合，再使與該半抗原特異結(jié)合的標(biāo)記了熒光色素的抗體結(jié)合，進(jìn)行檢測的方法。(6)使修飾生物素而得的抗體存在于基板或溶液中的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)結(jié)合，再使與該生物素特異結(jié)合的標(biāo)記了熒光色素的抗生物素蛋白結(jié)合，進(jìn)行檢測的方法。(7)在存在于基板或溶液中的生物分子(抗原蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、肽)上引入標(biāo)簽(組氨酸等)，利用由熒光色素標(biāo)記了的抗標(biāo)簽抗體進(jìn)行檢測的方法。這些標(biāo)記物可以適用于免疫染色、ELISA、蛋白質(zhì)印跡法、流式細(xì)胞術(shù)等各種測定手段。還有，具體例子例如圖2所示，如果將IgG抗體用胃蛋白酶處理，則可獲得稱為F(ab')2的片段。如果將該片段用二硫蘇糖醇還原，則可獲得稱為Fab，的片段。Fab，片段具有一個或兩個巰基(-SH)。使馬來酰亞胺基對該巰基作用，從而可以進(jìn)行特異進(jìn)行反應(yīng)。即，如圖3所示，通過使引入了馬來酰亞胺基的有機(jī)E1色素與片段的巰基反應(yīng)，從而可以用有機(jī)E1色素標(biāo)記抗體。這時，不會失去抗體的生理活性(抗原捕獲能力)。另外，也可以使用本發(fā)明的標(biāo)記色素進(jìn)行金屬離子的檢測。金屬離子參與體內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)等的穩(wěn)定性或高級結(jié)構(gòu)的維持、功能的發(fā)揮以及參與生物體內(nèi)的所有化學(xué)反應(yīng)的酶的活化等在生物體內(nèi)發(fā)生的所有生命現(xiàn)象。因此，可以實時觀察生物體內(nèi)的金屬離子的動向的金屬離子傳感器在以醫(yī)療領(lǐng)域為代表的領(lǐng)域中是非常重要的。以前，已知在生物分子中引入熒光色素的金屬離子傳感器。例如，提出了利用具有在K+離子的存在下攝取K+離子而形成特殊的結(jié)構(gòu)的序列的核酸的金屬離子傳感器(J.AM.CHEM.SOC.2002,124,14286-14287)。將引起能量傳遞的熒光色素引入在核酸的兩端。通常，色素之間存在距離，因此不會發(fā)生能量傳遞。但在K+離子的存在下核酸形成為特殊形態(tài)，因而通過熒光色素接近至引起能量傳遞的距離，可以觀察到熒光。另外，也提出在肽上引入熒光色素的鋅離子傳感器(J.Am.Chem.Soc.1996，118，3053-3054)。通過使用由本發(fā)明的有機(jī)EL色素形成的標(biāo)記色素代替這些以前的熒光色素，可以提供與以前相比高靈敏度且處理容易的金屬離子傳感器。還有，只要是存在于生物體內(nèi)的金屬離子，就可以檢測所有的金屬離子。另外，也可以使用本發(fā)明的標(biāo)記色素進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)的信號的觀察。對于內(nèi)部信號或環(huán)境信息的細(xì)胞應(yīng)答中，有從離子到酶的眾多分子參與。已知在信號傳遞過程中特殊的蛋白激酶活化，引導(dǎo)特殊的細(xì)胞蛋白質(zhì)的磷酸化，從而擔(dān)負(fù)各種細(xì)胞應(yīng)答的初始應(yīng)答。核苷酸的結(jié)合和水解對它們的活性起到重大的作用，通過使用核苷酸衍生物，可以迅速觀察到信號傳遞狀態(tài)。例如，蛋白激酶C(PKC)在細(xì)胞膜的信號傳遞中起到重要的作用。該Ca+依賴性的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶在如甘油二酯或磷脂酰絲氨酸等構(gòu)成膜的脂質(zhì)上被激活，通過將存在于離子通道或細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)的絲氨酸或蘇氨酸磷酸化，從而改變膜表面的電位，進(jìn)行信號傳遞。通過對它們在活細(xì)胞中進(jìn)行動態(tài)觀察，由此可以進(jìn)行細(xì)胞的信號傳遞的觀察。在這里，核苷酸衍生物被供作酶的底物或抑制劑，結(jié)合在孤立性蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和力學(xué)的探査、膜結(jié)合蛋白酶的再建、如線粒體等細(xì)胞器、如除膜肌纖維等組織的核苷酸結(jié)合蛋白質(zhì)部分，進(jìn)行其調(diào)節(jié)。另外，最近也逐步認(rèn)識到如G蛋白的抑制劑或激活體等影響信號傳遞的化合物的存在。通過在該核苷酸衍生物中引入由本發(fā)明的有機(jī)EL色素形成的標(biāo)記色素，可以高靈敏度且處理容易地進(jìn)行它們的細(xì)胞內(nèi)信號傳遞的動態(tài)觀察。另外，本發(fā)明的標(biāo)記色素也可以使用在利用RNA干擾作用(RNAi)的基因表達(dá)狀態(tài)的觀察。RNAi是將RNA導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)后，具有與其相同的序列的基因的表達(dá)被敲減的現(xiàn)象。RNAi通過將雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)，分解靶基因的mRNA，抑制表達(dá)。已知在該過程中，最初長鏈dsRNA(doublestrandRNA)被具有核糖核酸酶活性的切酶剪切為2123mer的短siRNA。生成的siRNA并入在中間復(fù)合物(RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC))中，該復(fù)合物進(jìn)行對具有與并入的siRNA反義鏈互補(bǔ)的序列的mRNA的剪切。在該領(lǐng)域中，為了觀察基因表達(dá)狀況等也使用熒光色素。通過使用有機(jī)EL色素作為標(biāo)記的熒光色素，可以進(jìn)行穩(wěn)定且高靈敏度的檢測。本發(fā)明的標(biāo)記色素也可以用作在組織或細(xì)胞試樣中的靶核酸或靶蛋白質(zhì)的表達(dá)水平的研究中所使用的組織或細(xì)胞的染色色素。組織或細(xì)胞的染色可以如前所述通過介以反應(yīng)性基團(tuán)使有機(jī)E1色素結(jié)合在靶核酸或靶蛋白質(zhì)上。艮P，本發(fā)明的染色色素，例如，如果將有機(jī)EL色素使用在真核細(xì)胞的染色，則在干燥狀態(tài)下也可以發(fā)出熒光，因此在標(biāo)記后的保存等方面表現(xiàn)出比以前的色素更好的性能。另外，不僅是在真核細(xì)胞，也完全可以用作細(xì)胞骨架用色素。除此之外，還可以用于線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、脂質(zhì)雙層膜等的標(biāo)記。這些標(biāo)記了的細(xì)胞等可以在濕潤或干燥的條件下進(jìn)行觀察，因此使用范圍廣。在觀察時，可以使用熒光顯微鏡等。另外，在臨床階段中從人體采取的組織用切片機(jī)等儀器切成薄膜后，進(jìn)行染色。在這里，使用Cy色素以及Alexa色素。但是，目前的色素的穩(wěn)定性非常差，因此復(fù)診時需要重新制作樣品。另外，制成的樣品無法制成標(biāo)本保存。但是，與上述的以前的色素相比，有機(jī)EL色素為非常穩(wěn)定的色素，因此可以將染色了的組織制成標(biāo)本來保存。本發(fā)明的標(biāo)記試劑盒包含具有由有機(jī)El色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素，可以根據(jù)需要包含用于使色素與作為對象的生物分子進(jìn)行反應(yīng)的試劑、酶、溶劑等。作為對象的生物分子為核酸、蛋白質(zhì)、肽類或糖類。另外，本發(fā)明的另一種標(biāo)記試劑盒包含至少具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部和結(jié)合在該顯色部的前述的通式(I)表示的間隔部的標(biāo)記色素前體，根據(jù)需要包含反應(yīng)性基團(tuán)引入試劑，該試劑用于在標(biāo)記色素中引入選自羧基、異氰酸酯基、異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、囟代烷基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基任意一種反應(yīng)性基團(tuán)。實施例以下，利用實施例對本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行詳細(xì)說明，但本發(fā)明的范圍不受限于以下的實施例。合成例1作為有機(jī)E1色素，使用1,2，5-嗯二唑-〔3，4國c〕吡啶衍生物。以下，表示引入了作為間隔部的-COO-的噁二唑并〔3,4—c)吡啶的活性酯體的反應(yīng)例(流程圖2和3)。還有，不具有間隔部的活性酯體略作EL-OSu，引入了間隔部的活性酯體略作EL-OSu-Sp。流程圖2然后，使噁二唑并吡啶活性酯體(6)在DMF中與丙氨酸反應(yīng)，合成引入了間隔部的羧酸體(7)。之后，使羧酸體(7)在二噁垸中與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，合成引入了間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體(8)。反應(yīng)例示于下面。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>流程圖3每個步驟的反應(yīng)都溫和地進(jìn)行，經(jīng)由羧酸體(7)高收率地獲得作為目標(biāo)的活性酯體(8)。(合成步驟)(1)二酮衍生物(2)的合成在500mL的三口燒瓶中，將37.5g(0.25mol)4-甲氧基苯乙酮(1)、0.15g亞硝酸鈉溶解在100mL乙酸中。水浴中，用2小時滴入將100mLHNO3溶解在100mL乙酸中而得的混合物。其后，在室溫攪拌2天。將反應(yīng)混合物緩慢地投入到500mL的水中，使其生成沉淀。沉淀物過濾，溶解在氯仿中。用飽和碳酸氫鈉水溶液洗漆氯仿相，用10。/。NaCl溶液洗滌2次。用MgS04脫水后，在減壓下餾去氯仿，獲得34.5g(收率78。/。)N-氧化嗯二唑(2)。②二酮衍生物。)的合成在500mL的三口燒瓶中，將17.7g(0.05mo1)N-氧化噁二唑(2)溶解在400mL乙腈中。其中再添加12.0gZn、7mLAcOH、20mLAc20。在水浴中以反應(yīng)溫度不超過3(TC的條件下冷卻。攪拌12小時后結(jié)束反應(yīng)。過濾反應(yīng)混合物,，除去不溶成分。在減壓下餾去乙腈，獲得殘渣。將殘渣用氯仿重結(jié)晶，獲得10.2g(收率60y。)N-氧化噁二唑(3)。(3)嗯二唑并吡啶乙酯(4)的合成500mL的三口燒瓶中，將15.6g(0.046mo1)N-氧化嗯二唑(3)溶解在300mL丁醇中，其中添加32.0g(0.23mol)甘氨酸乙酯鹽酸鹽。進(jìn)行24小時的加熱回流。在減壓下餾去丁醇，獲得殘渣。將殘渣溶解在200mL氯仿中，用10y。HCl、飽和NaHC03、10%NaCl洗凈。用MgS04干燥，餾去溶劑。將獲得的殘渣用氯仿重結(jié)晶，獲得13.0g(收率70%)嗯二唑并吡啶乙酯(4)。(4)嗯二唑并吡啶乙酯(4)的水解在500mL三口燒瓶中，將3.0g(0.007mol)嗯二唑并吡啶乙酯(4)溶解在200mL的乙醇中。其中添加0.62g(0.01mol)KOH。進(jìn)行5小時的加熱回流后，將反應(yīng)混合物添加到200mL的水中，該水溶液中滴加濃鹽酸至pH為1后，產(chǎn)生沉淀。過濾沉淀物，溶解在氯仿中。將氯仿相用10y。NaHCO3水溶液、水洗凈。餾去氯仿獲得殘渣。將殘渣用水-乙醇(l:l)重結(jié)晶，獲得2.1g(收率81。/。)噁二唑并吡啶羧酸(5)。(5)活性酯體(6)的合成在50mL三口燒瓶中，將1.0g(0.0026mo1)嗯二唑并吡啶羧酸(5)和0.30g(0.0026mo1)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在20mLDMF中。向其中用30分鐘滴入0.54g(0.0026mol)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌30分鐘。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿)分離提純，獲得0.76g(收率62%)噁二唑并吡啶活性酯體(6)。(6)羧酸體(7)的合成在50mL三口燒瓶中，將100mg(0.21mmol)嗯二唑并吡啶活性酯體(6)和18.8mg(0.21mmol)丙氨酸溶解在20mLDMF中。然后，在室溫攪拌12小時。反應(yīng)結(jié)束后，減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇=7:3)分離提純，獲得83mg(收率88。/。)羧酸體(7)。(7)活性酯體(8)的合成接著，在50mL三口燒瓶中，將70mg(0.16mmol)噁二唑并吡啶羧酸體(7)和18.0mg(0.16mmol)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在20mLDMF中。向其中用30分鐘滴入32.2mg(0.16mmol)的溶解在5mlDMF中的N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌30小時。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿)分離提純，獲得75.8mg(收率89%)活性酯體(8)。作為有機(jī)E1色素，使用咪唑并吡啶乙酯衍生物。以下表示引入了作為間隔部的-COO-的咪唑并吡啶乙酯的活性酯體的反應(yīng)例(流程圖4和5)。流程圖4接著，如合成例1的情況相同地，使咪唑并吡啶活性酯體(3)與丙氨酸反應(yīng)，合成引入了間隔部的羧酸體(4)，使該羧酸體(4)在二噁烷中與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，合成引入了間隔部的咪唑并吡啶活性酯體(5)。反應(yīng)例示于下面。合成例2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>5Y.92%流程圖5(1)咪唑并吡啶乙酯(l)的水解在500mL三口燒瓶中，將0.5g(1.5mmol)酯體溶解在50mL乙醇中。其中添加0.12g(2.1mol)KOH。進(jìn)行5小時的加熱回流后，將反應(yīng)混合物添加到50mL水中。在該水溶液中滴加濃鹽酸至pH為1后，發(fā)生沉淀。過濾沉淀物，溶解在氯仿中。將氯仿相用10。/。NaHC03水溶液、水洗凈。餾去氯仿獲得殘渣。將殘渣用水重結(jié)晶，獲得0.3g(收率63%)的羧酸體(2)。(2)活性酯體(3)的合成在50mL三口燒瓶中，將0.2g(0.6mmol)羧酸衍生物(2)和0.07g(0.6mmol)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在10mLDMF中。向其中用30分鐘滴入0.12g(0.6mmo1)N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌30小時。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿)分離提純，獲得0.14g(收率55%)活性酯體(3)。(3)羧酸體(4)的合成在50mL三口燒瓶中，將80mg(0.19mmo1)咪唑并吡啶活性酯體(3)和17.3mg(0.19mmol)丙氨酸溶解在20mLDMF中。其后在室溫攪拌10小時。反應(yīng)結(jié)束后，減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇=7:3)分離提純，獲得58mg(收率78%)羧酸體(4)。(4)活性酯體(5)的合成接著，在50mL三口燒瓶中，將54mg(0.14mmol)咪唑并吡啶羧酸體(4)和16.1mg(0.14mmol)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在20mLDMF中。向其中用30分鐘滴入28.8mg(0.14mmol)的溶解在5mlDMF中的N，N，-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌30分鐘。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿)分離提純，獲得62.2mg(收率92%)活性酯體(5)。合成例3作為有機(jī)E1色素，使用合成例中使用的噁二唑并吡啶衍生物，間隔部使用半胱氨酸，作為反應(yīng)性基團(tuán)同時引入了活性酯化的羰基和作為陰離子性基團(tuán)的锍基。使噴;二唑并吡啶活性酯體(6)與半胱氨酸反應(yīng)，合成引入了間隔部的羧酸體(9)。之后，使羧酸體(9)在二噁烷中與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，合成引入了間隔部的噁二唑并吡啶活性酯體(IO)。反應(yīng)例示于下面。流程圖6下面，僅表示與合成例1不同部分的合成步驟。(1)羧酸體(9)的合成在50mL三口燒瓶中，將100mg(0.21mmol)嗯二唑并吡啶活性酯體(6)和39mg(0.23mmol)半胱氨酸溶解在20mLDMF中。然后，在室溫攪拌12小時。反應(yīng)結(jié)束后，減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇=7:3)分離提純，獲得98mg(收率88。/。)羧酸體(9)。(2)活性酯體(10)的合成接著，在50mL三口燒瓶中，將80mg(0.15mmol)嗯二唑并吡啶羧酸體(9)和19mg(0.17mmo1)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在20mLDMF中。向其中用30分鐘滴入35mg(0.17mmol)的溶解在5mlDMF中的N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌30分鐘。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿甲醇=10:l)分離提純，獲得73mg(收率78%)活性酯體(10)。作為有機(jī)E1色素，使用合成例1中使用的噁二唑并吡啶衍生物，間隔部使用絲氨酸。使噁二唑并吡啶活性酯體(6)與絲氨酸反應(yīng)，合成引入了間隔部的羧酸體(11)。然后，使羧酸體(ll)在二噁烷中與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，合成引入了間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體(12)。下面，僅表示與合成例l不同的部分的合成步驟。(1)羧酸體(ll)的合成在50mL三口燒瓶中，將100mg(0.21mmol)噁二唑并吡啶活性酯體(6)和26mg(0.25mmol)絲氨酸溶解在20mLDMF中。然后，在室溫攪拌12小時。反應(yīng)結(jié)束后，減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇=7:3)分離提純，獲得79mg(收率81%)羧酸體(12)。(2)活性酯體(12)的合成接著，在50mL三口燒瓶中，將70mg(0.15mmol)嗯二唑并吡啶羧酸體(ll)和19mg(0.17mmol)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在20mLDMF中。向其中用30分鐘滴入35mg(0.17mmol)的溶解在5mlDMF中的N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌30分鐘。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿甲醇=10:合成例4流程圖7l)分離提純，獲得61mg(收率72%)活性酯體(12)。合成例5作為有機(jī)EL色素，使用合成例1中使用的噁二唑并吡啶衍生物，間隔部使用作為肽連接基的丙氨酰絲氨酸(Ala-Ser)。使噁二唑并吡啶活性酯體(6)與丙氨酰絲氨酸反應(yīng)，合成引入了間隔部的羧酸體(13)。然后，使羧酸體(13)在二噁垸中與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，合成引入了間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體(14)。反應(yīng)例示于下面。14流程圖8下面，近表示與合成例1不同的部分的合成步驟。(1)羧酸體(13)的合成在50mL三口燒瓶中，將100mg(0.21mmol)嗎二唑并吡啶活性酯體(6)和45mg(0.25mmol)丙氨酰絲氨酸溶解在20mLDMF中。然后，在室溫攪拌10小時。反應(yīng)結(jié)束后，減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇=6:4)分離提純，獲得72mg(收率64n/o)羧酸體(13)。(2)活性酯體(14)的合成接著，50mL三口燒瓶中，將60mg(0.11mmol)嗯二唑并吡啶羧酸體(13)和14mg(0.12mmol)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在20mLDMF中。向其中用30分鐘滴入25mg(0.12mmol)的溶解在5mlDMF中的N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌15小時。減壓下，鎦去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿甲醇=8:2)分離提純，獲得60mg(收率86%)活性酯體(14)。合成例6作為有機(jī)E1色素，使用合成例1中使用的噁二唑并吡啶衍生物，間隔部使用乙醇酸。反應(yīng)式示于下面。流程圖9(1)酰氯體(15)的合成在50mL三口燒瓶中，將100mg(0.27mmol)嗯二唑并吡啶羧酸體(5)混合在20mLS0C12中，進(jìn)行2小時的加熱回流。冷卻至室溫，餾去S0C12，獲得94mg(Y.90%)酰氯體15。(2)羧酸體(16)的合成在100mL三口燒瓶中，將90mg(0.22mmol)嗯二唑并吡啶酰氯體(15)混合在40mLTHF中。向其中投入20mg(0.22mmol)的溶解在5mLTHF的乙醇酸，攪拌1小時。然后，餾去THF。將殘渣用甲醇重結(jié)晶，獲得61mg(Y.62Q/。)羧酸體16。(3)活性酯體(17)合成接著，在50mL三口燒瓶中，將100mg(0.22mmol)噁二唑并吡啶羧酸體(16)和29mg(0.24mmol)N-羥基琥珀酰亞胺溶解在25mLDMF中。向其中經(jīng)30分鐘滴入50mg(0.24mmol)的溶解在10mLDMF中的N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺。滴入后，在室溫攪拌15小時。減壓下，餾去DMF。將殘渣采用硅膠柱色譜法(氯仿甲醇=7:3)分離提純，獲得107mg(收率89%)活性酯體(17)。合成例7作為有機(jī)E1色素，使用合成例1中使用的噁二唑并吡啶衍生物，間隔部使用氨基乙磺酸，合成合成例3的嗯二唑并吡啶活性酯體(IO)。將0.48g[1.08謹(jǐn)ol]嗯二唑并吡啶活性酯體(6)和0.52gDCC等雜質(zhì)、0.43g[3.44mmol]氨基乙磺酸(M.W.:125.15)放入至100mL的茄形燒瓶中，再添加50mL無水DMF。接著添加715y1[514醒ol]三乙胺(TEA，M.W.:10U9、1L-0.73kg)，攪拌4小時。這時，通過TLC[CHCl3:MeOH-6:4，原料Rf=0.89，目標(biāo)物Rf二0.69]、TLC[CHCl3:MeOH=7:3，原料Rf=0.89，目標(biāo)物Rf二0.49]確認(rèn)，結(jié)果反應(yīng)大致在2小時后結(jié)束。減壓餾去DMF后，采用硅膠柱色譜法(CHCl3:MeOH二3:l)提純并分取目標(biāo)物后，分離的溶液中產(chǎn)生了結(jié)晶，因此加以過濾。將獲得的結(jié)晶采用HPLC(圖3)、TLC法確認(rèn)，結(jié)果為目標(biāo)物。收量為283mg(收率58。/。)。實施例1<寡聚DNA的色素標(biāo)記以及檢測(l)〉(寡聚DNA)使用的寡聚DNA如下。17merDNAH2N-(C6)-5'-ACTCCAGTGGTAATCTA-3'20merDNAH2N-(C6)-5'-ACTCCAGTGGTAATCTACTG-3'40merDNAH2N-(C6)-5'-ACTCCAGTGGTAATCTACTGGGACGGAACAGCTTTGAGGT-3'(標(biāo)記步驟)標(biāo)記色素使用合成例1中合成的嗯二唑并吡啶活性酯體8(EL-OSu-Sp)。對于寡聚DNA使用20merDNA的例子進(jìn)行說明。在20n1的含有H2N-(C6)-5'-ACTCCAGTGGTAATCTACTG-3'(10讓ol)硼酸緩沖液(pH8.5)中，加入80ul的含有12nmol(5.7Pg)(1.2當(dāng)量)活性酯體(EL-OSu-Sp)的DMSO溶液，在室溫振蕩6小時。振蕩后，加入0.1MTEAA(三乙胺乙酸鹽，triethylamineacetate)緩沖液(pH7.0)，使得總量達(dá)到lmL，用NAP-10柱(GE醫(yī)療集團(tuán)(GEhealthcare)SephadexG-25)分取來源于寡聚核苷酸的成分。這時，NAP-10柱預(yù)先用15mL的0.1MTEAA緩沖液平衡后使用。將攪勻的試樣填充在柱子中，使得總量達(dá)到lmL,洗脫lmL溶液后，填充1.5mL0.1MTEAA緩沖液。分取緊接著的1.5mL洗脫液。將獲得的100ul溶液采用反相HPLC法進(jìn)行分析。還有，為了進(jìn)行比較，用不含間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體(EL-OSu)進(jìn)行寡聚DNA標(biāo)記。另夕卜，也將分子探針公司(MolecularProbe社)制的Alexa594的活性酯體用于部分比較。(HPLC測定條件)HPLC裝置使用日本分光株式會社(日本分光(株))制的LC-2000plus系列。柱GL科技公司(GLScience)InertsilODS-3柱5um，4.6醒X250mmDNA梯度條件洗脫溶劑A:0.1MTEAA水溶液(pH7.0)洗脫溶劑B:90%CH3CN/0.1MTEAA水溶液(pH7.0)梯度(B。/。)0分鐘(10%)—30分鐘(45%)—40分鐘(100%)—50分鐘(100%)—60分鐘(10%)流速lmL/分鐘溫度40°C(結(jié)果)將用EL-OSu或EL-OSu-Sp標(biāo)記的寡聚DNA的HPLC的結(jié)果，對應(yīng)于17merDNA、20merDNA、40merDNA，示于圖4A4B、圖5A5C、圖6A6B。另夕卜，將標(biāo)記率的值示于表13。[表l]17mer活性酯體摩爾比EL-OSu1:1.2EL-OSu-Sp1:1.2標(biāo)記率(％)6.199.1[表2]20mer活性酯體EL-OSuEL陽OSuEL-OSu-SpAlexa594-NHSAlexa594-NHS摩爾比1:1.21:101:1.21:1.21:10標(biāo)記率(％)11.854.099.6痕量5,8[表3]40mer活性酯體EL-OSuEL-OSuEL-OSu-Sp摩爾比1:1.21:101:1.2標(biāo)記率(％)痕量10.078.0接著，用17merDNA，考察使與EL-OSu-Sp的比例在以下范圍內(nèi)變化時的標(biāo)記率的變化。結(jié)果示于圖7。通過使用引入了間隔部的標(biāo)記色素EL-OSu-Sp，與不含間隔部的EL-OSu-Sp或Alexa594相比，可以提高標(biāo)記率。特別是，如果是20mer左右長度的寡聚DNA，則以1.2倍添加量，相對于EL-OSu的約12%、Alexa的痕量(1%以下)，可以獲得幾乎達(dá)到100%的標(biāo)記率。另外，17mer或40merDNA難以用Alexa進(jìn)行標(biāo)記，但也可以對這些寡聚DNA大大提高標(biāo)記率。即使是摩爾比為1.2左右，也可以獲得幾乎100%的標(biāo)記率，因此引入了間隔部的標(biāo)記色素EL—OSu-Sp可以對寡聚DNA進(jìn)行定量標(biāo)記。使用Alexa等以前的標(biāo)記色素時，即使添加200倍摩爾左右也只能達(dá)到50%左右的標(biāo)記率，若考慮到這一點，如果是20mer左右長度的寡聚DNA，則引入了間隔部的標(biāo)記色素EL-OSu-Sp具有以大約1/200的添加量可以獲得100%的標(biāo)記率的顯著效果。實施例2<寡聚DNA的色素標(biāo)記以及檢測(2)>除了有機(jī)EL色素使用具有間隔部的咪唑并吡啶的活性酯體5(im-EL-0Su-Sp)以外，采用與實施例1相同的方法對20merDNA進(jìn)行色素標(biāo)記。(結(jié)果)與使用嗯二唑并吡啶活性酯體(EL-OSu-Sp)的情況相同，摩爾比為1.2左右也可以獲得幾乎100%的標(biāo)記率。實施例3<寡聚DNA的色素標(biāo)記以及檢測(3)>除了有機(jī)EL色素使用合成例3中合成的具有間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體10，使用10ul的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例1相同的方法，進(jìn)行對20merDMA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)與使用噁二唑并吡啶活性酯體8的情況相同，以摩爾比1.2左右也可以獲得幾乎100%的標(biāo)記率。還有，在實施例1中，為了溶解有機(jī)E1色素，使DMSO占總試樣溶液的80體積％，但在本實施例中10體積n/。也可以溶解有機(jī)El色素，表現(xiàn)出良好的水溶性。實施例4<寡聚DNA的色素標(biāo)記以及檢測(4)>除了有機(jī)EL色素使用合成例4中合成的具有間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體12，使用10wl的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例1相同的方法，進(jìn)行對20merDMA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)與使用嗯二唑并吡啶活性酯體8的情況相同，以摩爾比1.2左右也可以獲得幾乎100%的標(biāo)記率。另外，與實施例3的情況相同，表現(xiàn)出良好的水溶性。實施例5<寡聚DNA的色素標(biāo)記以及檢測(5)>除了有機(jī)EL色素使用合成例5中合成的具有間隔部的嗎二唑并吡啶活性酯體14，使用lOtU的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例1相同的方法，進(jìn)行對20merDMA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)與使用嗯二唑并吡啶活性酯體8的情況相同，以摩爾比1.2左右也可以獲得幾乎100%的標(biāo)記率。還有，在實施例1中，為了溶解有機(jī)E1色素，使DMSO占總試樣溶液的80體積％，但在本實施例中10體積％也可以溶解有機(jī)El色素，表現(xiàn)出良好的水溶性。實施例6<蛋白質(zhì)的色素標(biāo)記以及檢測(1)〉(標(biāo)記順序)使BSA(牛血清白蛋白，BovineSeriumAlbumin)的絲氨酸殘基的氨基和含有間隔部的嚼二唑并吡啶活性酯體8(EL-OSu-Sp)反應(yīng)形成酰胺鍵，進(jìn)行對BSA的色素標(biāo)記。具體地，在100u1的含有1.0mg(15.05nmol)的BSA的碳酸緩沖液(pH9.0)中，添加400lU的含有35.82yg(75.25nmol)活性酯體的DMSO溶液，在室溫振蕩24小時。之后添加0.1MTEAA緩沖液(pH7.0)使得總量為lmL，用NAP-10柱(GE醫(yī)療集團(tuán)(GEhealthcare)SephadexG-25)分取1.5mL來源于BSA的成分。將100ul獲得的溶液采用反相HPLC法進(jìn)行分析。還有，通過MALDITOFMS，進(jìn)行用EL-OSu標(biāo)記的BSA的鑒定。標(biāo)記了的BSA(圖9A)與原料(圖9B灘比，分子量增加2200左右，得知結(jié)合了約5分子有機(jī)El色素。(HPLC測定條件)HPLC裝置使用日本分光株式會社(日本分光(株))制的LC-2000plus系列。柱GL科技公司(GLScience)InertsilODS—3柱5um，4.6mmX250腿DNA梯度條件洗脫溶劑A:0.1MTEAA水溶液(pH7.0)洗脫溶劑B:90%CH3CN/0.1MTEAA水溶液(pH7.0)梯度(B。/q)0分鐘(5%)—20分鐘(50%)—60分鐘(70%)—70分鐘(100%)—80分鐘(100%)—90分鐘(5%)流速0分鐘一20分鐘、60分鐘一90分鐘lmL/分鐘、20分鐘一60分鐘0.5mL/分鐘溫度40°C(結(jié)果)將用不具有間隔部的EL-OSu和具有間隔部的EL-OSu-Sp標(biāo)記的BSA的HPLC的結(jié)果分別示于圖8A和圖8B。標(biāo)記率示于表4。[表4]<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>以BSA為對象時，通過使用具有間隔部的EL-OSu-Sp，與使用不具有間隔部的EL-OSu的情況相比，可以大大提高標(biāo)記率。認(rèn)為通過在作為反應(yīng)性基團(tuán)的活性酯和色素分子之間引入間隔部，BSA的標(biāo)記部位和色素分子之間的位阻進(jìn)一步被消除，因此標(biāo)記率提高。另外，由TOF-MASS的測定結(jié)果確認(rèn)，用EL-OSu-Sp標(biāo)記的BSA上引入了5分子的有機(jī)EL色素。EL-OSu-Sp的情況下，為了引入5分子而使用5倍摩爾時，大體上可以進(jìn)行定量標(biāo)記。實施例7<蛋白質(zhì)的色素標(biāo)記以及檢測(2)>除了有機(jī)El色素使用合成例3中合成的具有間隔部的嚼二唑并吡啶活性酯體10，使用10lU的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例5相同的方法，進(jìn)行對BSA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)獲得與實施例5相同的標(biāo)記率。還有，在實施例5中，為了溶解有機(jī)E1色素，使DMSO占總試樣溶液的80體積％，但在本實施例中即使是10體積y。也可以溶解有機(jī)E1色素，表現(xiàn)出良好的水溶性。實施例8<蛋白質(zhì)的色素標(biāo)記以及檢測(4)>除了有機(jī)El色素使用合成例4中合成的具有間隔部的嚼二唑并吡啶活性酯體12，使用10y1的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例5相同的方法，進(jìn)行對BSA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)獲得與實施例5相同的標(biāo)記率。還有，在實施例5的情況相同，表現(xiàn)出良好的水溶性。實施例9<蛋白質(zhì)的色素標(biāo)記以及檢測(5)>除了有機(jī)E1色素使用合成例5中合成的具有間隔部的噁二唑并吡啶活性酯體14，使用10iil的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例5相同的方法，進(jìn)行對BSA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)獲得與實施例5相同的標(biāo)記率。還有，在實施例5中，為了溶解有機(jī)E1色素，使DMSO占總試樣溶液的80體積％，但在本實施例中即使是10體積％也可以溶解有機(jī)E1色素，表現(xiàn)出良好的水溶性。實施例10<蛋白質(zhì)的色素標(biāo)記以及檢測(6)>除了有機(jī)E1色素使用合成例6中合成的具有間隔部的嗯二唑并吡啶活性酯體17，使用10iU的DMSO而使其占總試樣溶液的10體積％以外，采用與實施例5相同的方法，進(jìn)行對BSA的色素標(biāo)記。(結(jié)果)獲得與實施例5相同的標(biāo)記率。還有，本實施例5中也表現(xiàn)出良好的水溶性。如上所述，如果利用本發(fā)明的標(biāo)記色素，則不僅在固體狀態(tài)下也具有高熒光強(qiáng)度，還可以大幅度減少對靶分子使用的色素量。例如，使用以前的標(biāo)記色素時，200倍摩爾左右為常識，但可以將其降低至1/200左右。由此，可以大幅度減少使用的標(biāo)記色素的量，因此也可以大幅度降低靶分子的檢測費用。另外，標(biāo)記反應(yīng)后，也可以不需要除去未反應(yīng)的大量的色素的步驟，可以用更短的時間實施檢測方法。權(quán)利要求1.生物分子用標(biāo)記色素，它是用于基于熒光測定的生物分子檢測的標(biāo)記色素，其特征在于，具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部。2.如權(quán)利要求1所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述有機(jī)EL色素為由包含一種以上的雜原子、硒原子或硼原子的五元環(huán)化合物與具有共軛體系的六元環(huán)化合物形成的稠合多環(huán)化合物。3.如權(quán)利要求2所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述稠合多環(huán)化合物為由下述通式(l)、(2)或(3)的任意一種表示的吡咯衍生物；(3)式中，R,、R2、R3、R4分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有垸基、鏈烯基、炔基、垸氧基、羥基、氰基、磺?；⒎甲鍩N基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基；X表示可具有取代基的氮原子、硫原子、氧原子、硒原子或硼原子；R'表示可含芳環(huán)的垸基或鏈烯基等脂肪族烴基或芳族烴基；An—表示C1—、Br.、1—等鹵化物離子，CF3S03—，BF4—，PF6—。4.如權(quán)利要求3所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述的R2和R3分別獨立地為選自噻吩衍生物、呋喃衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、嗯唑衍生物、噻唑衍生物、吡唑衍生物以及吡啶衍生物的一種。5.如權(quán)利要求3所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述的R2和R3為具有磺?；姆蓟?。6.如權(quán)利要求2所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述稠合多環(huán)化合物為由以下的通式(4)、(5)、(6)、(7)或(8)表示的咪唑衍生物；(7)(8)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式中，R,、R2、R3、R4、Rs分別獨立地表示氫原子，鹵素原子，可具有烷基、鏈烯基、炔基、垸氧基、羥基、氰基、磺?；⒎甲鍩N基、雜環(huán)基等取代基的芳族烴基、烴基或雜環(huán)基；R,、R2、R3、R4、Rs可相同或不同；R'、R"表示可含有芳環(huán)的垸基或鏈烯基等脂肪族烴或芳族烴;An—表示Cl—、Br—、r等鹵化物離子，CF3S(V，BF4-，PF6。7.如權(quán)利要求6所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述的R2和R3分別獨立地為選自噻吩衍生物、呋喃衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、噁唑衍生物、噻唑衍生物、吡唑衍生物以及吡啶衍生物的一種。8.如權(quán)利要求6所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述的R2和R3為具有磺?；姆蓟?.如權(quán)利要求18中任一項所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述結(jié)合部具有選自羧基、異氰酸酯基、異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代烷基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基的任意一種反應(yīng)性基團(tuán)。10.如權(quán)利要求19中任一項所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述間隔部含有至少一種選自-CHr、-NHCOO-、-CONH-、-CH2NH-、-CH2NR-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、-O-、-S-、陽NR陽、-(CH2-CH2-0)n-、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的官能團(tuán);R為烷基，n為l10的整數(shù)。11.如權(quán)利要求IO所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述間隔部為由以下的通式(I)表示的化合物，-(CHR')p-X-(CHR")q-(I)式中，X表示直接結(jié)合或選自-NHCOO-、-CONH-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、--、誦S-、-NR-、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar-NR-的至少一種官能團(tuán)；R'和R"分別獨立地表示氫原子，或者可含有芳環(huán)的烷基或鏈烯基等脂肪族烴基，或芳族烴基中根據(jù)需要取代有選自磺?；?、羥基、季銨基以及羧基的任意一種帶電基團(tuán)的基團(tuán)；Ar表示芳基；p和q分別獨立地表示020的整數(shù)；p12.如權(quán)利要求IO所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述間隔部為氨基酸或由220個氨基酸形成的肽連接基。13.如權(quán)利要求12所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述間隔部為氨基酸，所述氨基酸為天然氨基酸或合成氨基酸。14.如權(quán)利要求13所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述氨基酸為選自半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺酰基丙酸、酪氨酸、蘇氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸、絲氨酸的一種。15.如權(quán)利要求12所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述間隔部為肽連接基，所述肽連接基具有選自磺?；?、羥基、季銨基以及羧基的至少一種帶電基團(tuán)。16.如權(quán)利要求15所述的生物分子用標(biāo)記色素，其特征在于，所述肽連接基包含選自半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺酰基丙酸、酪氨酸、蘇氨酸、4-氨基-2-羥基丁酸、高絲氨酸、絲氨酸的至少一種氨基酸。17.生物分子用標(biāo)記試劑盒，它是用于基于熒光測定的生物分子的檢測的生物分子用標(biāo)記試劑盒，其特征在于，包含具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素。18.生物分子用標(biāo)記試劑盒，它是用于基于熒光測定的生物分子的檢測的生物分子用標(biāo)記試劑盒，其特征在于，包含至少具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合在所述顯色部的間隔部的標(biāo)記色素前體，所述間隔部包含至少一種選自-CH2-、-NHCOO-、-CONH-、-CH2NH-、-CH2NR-、-COO-、-S02NH-、-HN-C(=NH)-NH-、-O-、-S-、-NR-、-(CH2-CH2-0)n-、-CH=CH-、-C三C-、-Ar-以及-CO-Ar陽NR-的官能團(tuán)；R為烷基，n為l10的整數(shù)。19.如權(quán)利要求17或18所述的生物分子用標(biāo)記試劑盒，其特征在于，還包含反應(yīng)性基團(tuán)引入試劑，所述試劑用于將選自羧基、異氰酸酯基、異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、鹵代垸基、三嗪基、碳二亞胺基以及活性酯化的羰基的任意一種反應(yīng)性基團(tuán)引入至標(biāo)記色素中。20.生物分子的檢測方法，其特征在于，使具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素與生物分子試樣反應(yīng)，測定通過所述標(biāo)記色素標(biāo)記了的生物分子試樣的熒光。21.如權(quán)利要求20所述的檢測方法，其特征在于，所述生物分子試樣使用選自核酸、蛋白質(zhì)、肽類以及糖類的任意一種。22.檢測方法，其特征在于，使用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記了的探針與生物分子試樣反應(yīng)，測定所述生物分子試樣的熒光。23.如權(quán)利要求22所述的檢測方法，其特征在于，所述生物分子試樣為核酸，所述探針使用與所述核酸的堿基序列互補(bǔ)的寡核苷酸或PNA。24.如權(quán)利要求23所述的檢測方法，其特征在于，所述寡核苷酸為引物或終止子，擴(kuò)增所述核酸，測定熒光。25.如權(quán)利要求24所述的檢測方法，其特征在于，所述核酸擴(kuò)增之前用有機(jī)EL色素標(biāo)記引物。26.如權(quán)利要求23所述的檢測方法，其特征在于，所述寡核苷酸或PNA為分子信標(biāo)。27.生物分子的檢測方法，它是由生物分子形成的被檢測體或被修飾物質(zhì)修飾了的所述被檢測體的檢測方法，其特征在于，將與被檢測體特異結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)或與修飾物質(zhì)特異結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)的一方，用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記，測定發(fā)自標(biāo)記了的結(jié)合物質(zhì)的熒光。28.如權(quán)利要求27所述的檢測方法，其特征在于，所述的被檢測體或修飾物質(zhì)和所述結(jié)合物質(zhì)的組合為抗原-抗體、半抗原-抗半抗原抗體、生物素-抗生物素蛋白、標(biāo)簽-抗標(biāo)簽抗體、凝集素-糖蛋白或激素-受體。29.生物分子的檢測方法，其特征在于，包含將生物分子試樣通過電泳大小分離的步驟，在該電泳之前或之后將生物分子用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記。30.如權(quán)利要求29所述的檢測方法，其特征在于，所述生物分子試樣為核酸，根據(jù)電泳圖確定所述核酸的堿基序列。31.如權(quán)利要求29所述的檢測方法，其特征在于，所述生物分子試樣為蛋白質(zhì)，根據(jù)電泳圖對取出的蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量分析。32.組織或細(xì)胞的染色方法，其特征在于，將組織或細(xì)胞試樣中的生物分子用具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素標(biāo)記。33.如權(quán)利要求32所述的染色方法，其特征在于，所述生物分子為核酸或蛋白質(zhì)。34.染色色素，它是用于組織或細(xì)胞試樣的染色色素，其特征在于，由具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合組織或細(xì)胞中的生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部的標(biāo)記色素形成。全文摘要本發(fā)明的生物分子用標(biāo)記色素具有由有機(jī)EL色素形成的顯色部、結(jié)合生物分子的結(jié)合部以及連接顯色部和結(jié)合部的間隔部?？梢垣@得對生物分子的高標(biāo)記率和固體狀態(tài)下的高熒光強(qiáng)度。文檔編號C09K11/07GK101273096SQ200680035218公開日2008年9月24日申請日期2006年7月28日優(yōu)先權(quán)日2005年7月28日發(fā)明者礒部信一郎申請人:礒部信一郎