細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種細(xì)胞增殖調(diào)控檢測(cè)裝置，尤其涉及一種細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞在生長過程中達(dá)到相互接觸時(shí)有停止分裂的現(xiàn)象。由于培養(yǎng)基中的生長因子耗盡時(shí)也會(huì)產(chǎn)生生長抑制，所以正常細(xì)胞因相互接觸而抑制分裂的現(xiàn)象也稱為密度依賴性的生長抑制(density-dependent inhibit1n of growth)。在相同條件下培養(yǎng)的惡性細(xì)胞(malignant cells)對(duì)密度依賴性生長抑制失去敏感性，因而不會(huì)在形成單層時(shí)停止生長，而是相互堆積形成多層生長的聚集體，這種現(xiàn)象也說明惡性細(xì)胞的生長和分裂已經(jīng)失去了控制，調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長和分裂的信號(hào)對(duì)于惡性細(xì)胞不再起作用。因此，利用專一的檢測(cè)裝置對(duì)細(xì)胞生長的性質(zhì)和類型以動(dòng)態(tài)形式進(jìn)行鑒定，對(duì)正確認(rèn)識(shí)和鑒別正常細(xì)胞和惡性細(xì)胞(癌細(xì)胞)，進(jìn)一步了解細(xì)胞的癌變過程，即癌癥的發(fā)生機(jī)理，進(jìn)而深入研宄探索治療癌癥的方法具有十分重要的意義。
[0003]目前，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中指導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識(shí)癌細(xì)胞還只是停留在切片和靜態(tài)的細(xì)胞形態(tài)觀察上，老師給學(xué)生灌輸較為先進(jìn)的理論只能口頭或以模式圖或圖片進(jìn)行，無法以動(dòng)態(tài)形式展現(xiàn)出來，對(duì)于利用檢測(cè)裝置，尤其是利用專一的器皿對(duì)細(xì)胞密度依賴性生長抑制或關(guān)于正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞的區(qū)別進(jìn)行直觀地展示的裝置還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型要解決的問題是提供一種細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置。
[0005]本實(shí)用新型所述細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，由培養(yǎng)皿和透明塑料材質(zhì)的積木塊組成；其特征在于:所述積木塊形狀似扇形體，由6?10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，培養(yǎng)皿中似圓柱體所占面積以外的區(qū)域?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)；其中，所述似圓柱體的底面面積為培養(yǎng)皿底面面積的1/2?2/3，高度為培養(yǎng)皿高度的2/3?4/5，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養(yǎng)皿底面有0.5?1.5mm的距離，且斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角為15?42度。
[0006]上述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置中:所述組成似圓柱體的積木塊優(yōu)選有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列。(如圖1所示)。
[0007]上述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置中:所述積木塊優(yōu)選由8塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，；其中，有4塊為能解除固定的扇形體，有4塊設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。(如圖2所示)。
[0008]本實(shí)用新型所述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置在以動(dòng)態(tài)形式直接觀察待檢實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是否存在生長接觸抑制現(xiàn)象中應(yīng)用。
[0009]本實(shí)用新型所述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置在鑒別正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞中應(yīng)用。
[0010]取貼壁生長的對(duì)數(shù)生長期實(shí)驗(yàn)細(xì)胞(血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞或胚肺成纖維細(xì)胞)，消化后制成單細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度為17?10 8個(gè)/ml，以恰好覆蓋底面量將其加入檢測(cè)裝置中的細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)，將上述檢測(cè)裝置蓋好，置于5% C02，37°C，100%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后再向培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液量為檢測(cè)裝置中似圓柱體高度的2/3，繼續(xù)培養(yǎng)并定時(shí)觀察細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)內(nèi)的細(xì)胞生長，以檢測(cè)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是否有接觸抑制的情況。
[0011]觀察時(shí)，若實(shí)驗(yàn)細(xì)胞生長達(dá)到匯合狀態(tài)且與皿或圓柱體壁密切接觸后停止生長，即可初步判定為接觸抑制，再繼續(xù)培養(yǎng)并經(jīng)過2?5個(gè)細(xì)胞周期，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞仍停止分裂，即確定為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制；反之，在繼續(xù)培養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞仍能進(jìn)行分裂，且呈現(xiàn)堆積生長，并能出現(xiàn)跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣并沿斜面生長現(xiàn)象，則為非接觸抑制。
[0012]是否出現(xiàn)非接觸抑制可以間接用于鑒別正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞。本實(shí)用新型的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置中設(shè)置夾角分別為15度、25度、32度、42度的斜面還可進(jìn)一步用于判定惡性腫瘤細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖強(qiáng)弱。
[0013]上述實(shí)驗(yàn)中對(duì)于證實(shí)已出現(xiàn)接觸抑制的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，還可以通過依次分別拆除固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域的無斜面的扇形體積木塊，增加其培養(yǎng)觀察區(qū)的面積，進(jìn)一步進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)細(xì)胞接觸抑制釋放現(xiàn)象的觀察。
[0014]本實(shí)用新型在現(xiàn)有實(shí)理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，利用機(jī)械原理與細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)相結(jié)合的方法，研制了“細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置”，應(yīng)用本專利所述細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，可使學(xué)生在進(jìn)行離體細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，極為方便地以動(dòng)態(tài)形式直接觀察到待檢的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞生長接觸抑制的存在與否、細(xì)胞接觸抑制釋放現(xiàn)象、以及鑒別腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的生長增殖狀態(tài)，達(dá)到區(qū)分正常細(xì)胞與轉(zhuǎn)化或癌變細(xì)胞的目的。本裝置特別適合于動(dòng)態(tài)觀察各種因素、藥物對(duì)離體細(xì)胞的影響，能極大地提升學(xué)生的動(dòng)手和觀察能力，為實(shí)驗(yàn)教學(xué)提供了一種直觀、方便、靈活、準(zhǔn)確檢測(cè)細(xì)胞接觸抑制的工具。
【附圖說明】
[0015]圖1:本實(shí)用新型所述細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置立體效果圖
[0016]其中:A、B、C、D分別為4塊有斜面的積木塊，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。
[0017]圖2:為圖1中在1-1和2-2方向的縱切剖面圖，圖中分別顯示了 A、B、C、D 4塊有斜面的積木塊斜面夾角。
【具體實(shí)施方式】
[0018]實(shí)施例1
[0019]取直徑為80mm塑料培養(yǎng)皿一只，備用。
[0020]取與塑料培養(yǎng)皿材質(zhì)相同的透明塑料，制作成底面面積為培養(yǎng)皿底面面積的2/3，高度為培養(yǎng)皿高度2/3的圓柱體，然后沿柱體圓心將圓柱體等分為8塊扇形體積木塊，然后將其中的4塊自上表面外緣到底面制作成斜面，并使斜面的上表面外緣與培養(yǎng)皿底面具有0.8mm的距離，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度(如圖2所示)。將8塊扇形體積木塊按斜面有無區(qū)分為兩種，重新將兩種積木塊間隔排列組合，組合后的形狀似圓柱體，用明膠將其固定于備用的培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，培養(yǎng)皿中似圓柱體所占面積以外的區(qū)域?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)；其中，無斜面的扇形體積木塊設(shè)計(jì)為能解除固定，自由拆除功能。此裝置即為本實(shí)用新型所述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置(如圖1所示)。
[0021]實(shí)施例2
[0022]取實(shí)施例1制備的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，用75%的醫(yī)用酒精浸泡消毒2小時(shí)以上，三蒸水沖洗三遍，晾干，置超凈工作臺(tái)中用紫外線照射30分鐘后備用。
[0023]取貼壁生長的對(duì)數(shù)生長期實(shí)驗(yàn)細(xì)胞(血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞或胚肺成纖維細(xì)胞)，消化后制成單細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度為17?10 8個(gè)/ml，以恰好覆蓋底面量將其加入檢測(cè)裝置中的細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)，將上述檢測(cè)裝置蓋好，置于5% C02，37°C，100%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后再向培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液量為檢測(cè)裝置中似圓柱體高度的2/3，繼續(xù)培養(yǎng)并定時(shí)觀察細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)內(nèi)的細(xì)胞生長，以檢測(cè)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是否有接觸抑制的情況。
[0024]觀察時(shí)，若實(shí)驗(yàn)細(xì)胞生長達(dá)到匯合狀態(tài)且與皿或圓柱體壁密切接觸后停止生長，即可初步判定為接觸抑制，再繼續(xù)培養(yǎng)并經(jīng)過2、5個(gè)細(xì)胞周期，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞仍停止分裂，即確定為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制；反之，在繼續(xù)培養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞仍能進(jìn)行分裂，且呈現(xiàn)堆積生長，并能出現(xiàn)跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣并沿斜面生長現(xiàn)象，則為非接觸抑制。
[0025]是否出現(xiàn)非接觸抑制可以間接用于鑒別正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞。通常情況下建系的腫瘤細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞，當(dāng)其生長達(dá)到單層匯合狀態(tài)密度并與細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)的容積壁緊密接觸以后，在不改變培養(yǎng)條件的情況下，細(xì)胞仍會(huì)出現(xiàn)繼續(xù)增殖，并呈堆積性生長狀態(tài)；增殖的細(xì)胞能跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣，并貼附于斜面表面向外周擴(kuò)散性生長，表現(xiàn)為非接觸抑制。本實(shí)用新型的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置中設(shè)置夾角分別為15度、25度、32度、42度的斜面還可進(jìn)一步用于判定惡性腫瘤細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖強(qiáng)弱。
[0026]上述實(shí)驗(yàn)中對(duì)于證實(shí)已出現(xiàn)接觸抑制的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，還可以通過依次分別拆除固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域的無斜面的扇形體積木塊，增加其培養(yǎng)觀察區(qū)的面積，進(jìn)一步進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)細(xì)胞接觸抑制釋放現(xiàn)象的觀察。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，由培養(yǎng)皿和透明塑料材質(zhì)的積木塊組成；其特征在于:所述積木塊形狀似扇形體，由6?10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，培養(yǎng)皿中似圓柱體所占面積以外的區(qū)域?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)；其中，所述似圓柱體的底面面積為培養(yǎng)皿底面面積的1/2?2/3，高度為培養(yǎng)皿高度的2/3?4/5，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養(yǎng)皿底面有0.5?1.5mm的距離，且斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角為15?42度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，其特征在于:所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，其特征在于:所述積木塊由8塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，；其中，有4塊為能解除固定的扇形體，有4塊設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種細(xì)胞密度依賴性生長抑制檢測(cè)裝置，是由培養(yǎng)皿和透明塑料材質(zhì)的積木塊組成；所述積木塊形狀似扇形體，由6～10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，培養(yǎng)皿中似圓柱體所占面積以外的區(qū)域?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)；其中，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養(yǎng)皿底面有0.5～1.5mm的距離，且斜面的底夾角為15～42度。本實(shí)用新型的裝置為實(shí)驗(yàn)教學(xué)提供了一種直觀、方便、靈活、準(zhǔn)確檢測(cè)細(xì)胞接觸抑制的工具。
【IPC分類】C12M1-34
【公開號(hào)】CN204325367
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201420814882
【發(fā)明人】張尚立, 趙靜, 馬劍鋒, 彭正華, 屈坤
【申請(qǐng)人】山東大學(xué)
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2014年12月18日