地塞米松磷酸鈉的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了地塞米松磷酸鈉的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的地塞米松磷酸鈉的藥物組合物中含有地塞米松磷酸鈉和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，地塞米松磷酸鈉、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對男性不育癥具有治療作用；地塞米松磷酸鈉和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，治療效果進(jìn)一步提高，可開發(fā)成治療男性不育癥的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
地塞米松磷酸鈉的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及地塞米松磷酸鈉的新用途，具體涉及地塞米松磷 酸鈉的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 地塞米松磷酸鈉為腎上腺皮質(zhì)激素類藥，具有抗炎、抗過敏、抗風(fēng)濕、免疫抑制作 用。常用于過敏及自身免疫性疾病。
[0003] 迄今為止，尚未見地塞米松磷酸鈉及其藥物組合物與男性不育癥的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種地塞米松磷酸鈉的藥物組合物，該藥物組合物中含有 地塞米松磷酸鈉和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，地塞米松磷酸鈉和該天然產(chǎn)物可協(xié)同治療男 性不育癥。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0007]
[0008] -種地塞米松磷酸鈉的藥物組合物，包括地塞米松磷酸鈉、如權(quán)利要求1所述的化 合物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將湖北貝母粉碎，用60~70% 乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇 萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取 物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集 70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相 硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分； (d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用 體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到化合物(I)。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備治療男性不育癥的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 上述地塞米松磷酸鈉的藥物組合物在制備治療男性不育癥的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明提供的地塞米松磷酸鈉的藥物組合物中含有地塞米松磷酸鈉和一種結(jié)構(gòu) 新穎的天然產(chǎn)物，地塞米松磷酸鈉和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，具有治療男性不育癥作用;二 者聯(lián)合作用時(shí)，治療男性不育癥效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療男性不育癥的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019]分離方法：（a)將湖北貝母(2kg)粉碎，用65%乙醇熱回流提取(20LX3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫 15個(gè)柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè) 柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4 用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1(8個(gè)柱體積）、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證：白色無定型粉末，冊431-1^顯示[1+!1]+為111/2 327.1518，結(jié)合核磁特 征可得分子式為〇2〇1122〇4，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)511(。。111，〇〇(]13,5〇〇]\〇2):!1-10 (4.79，dd，J = 5.8，11.8Hz)，H-2a(1.81，m)，H-20(1.57，m)，H-3a(2.22，dd，J = 7.O,9.2Hz)， H-30(1.65，m)，H-6(5.93，s)，H-9a(2.34，d，J = 4.2Hz)，H-ll(6.53，dd，J = 4.6，12.8Hz)，H-12(6.37，dd，J = 7.5，12.8Hz)，H-130(2.12，m)，H-14a(2.58，d，J=11.8Hz)，H-140(3.13， dd，J=4.4，11.8Hz)，H-17a(6.18，br，s)，H-170(5.54，br，s)，H-18(O.98，s)，H-19(1.12， s)，H-2〇a(4.25，dd，J = 9.6，1.7Hz)，H-2〇K3.66，dd，J = 9.6，1.7Hz);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) δ。 (ppm，CDCl3，125MHz):78.6(CH，卜C)，23.4(CH2,2-C)，37.9(CH 2,3-C)，31.4(C，4-C)，117.1 (C，5-C)，143.2(CH，6-C)，173.4(C，7-C)，56.5(C，8-C)，45.7(CH，9-C)，49.1(C，l〇-C)， 129.7(CH，11-C)，126.9(CH，12-C)，35.2(CH，13-C)，33.1(CH 2，14-C)，200.9(C，15-C)， 148.7(C，16-C)，119.5(CH2，17-C)，31.4(CH 3，18-C)，23.3(CH3，19-C)，73.1(CH2,20-C)。在 氫譜中可以觀察到兩個(gè)單峰甲基信號(hào)[知1.12(3!1，8肩6-19)，0.98(3!1，8，16-18)]，一個(gè)連 氧亞甲基質(zhì)子信號(hào)[δΗ 4.25(1!1，(1(1，1 = 9.6丄7!^，!1-20€0與3.66(1!1，(1(1，1 = 9.6丄7!^， 化200)]，一個(gè)端烯烴質(zhì)子信號(hào)[6(16.18(1!1，1^，8，!1-17€0與5.54(1!1，1^，8，!1-170)]，三個(gè) 烯屬次甲基質(zhì)子信號(hào)[δ Η 5.93(1!1，8，!1-6)，6.53(1!1，(1(1，了 = 4.6，12.8抱，!1-11)與6.37(1!1， dd，J = 7.5，12.8Hz，H-12)]，以及一個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)[SH4.79(lH，dd，J = 5.8， 11.8Ηζ，Η-1β)];在碳譜中顯示該化合物有20個(gè)碳信號(hào)，其中有一組末端雙鍵碳信號(hào)，兩組 雙鍵碳信號(hào)，一個(gè)酯羰基碳信號(hào)，一個(gè)酮羰基碳信號(hào)以及兩個(gè)連氧碳信號(hào)。結(jié)合以上信息可 以得出該化合物可能是一個(gè)二萜類化合物，通過文獻(xiàn)查閱可以發(fā)現(xiàn)該化合物和已知化合物 ent-lla-Acetoxy-6，7-sec〇-kaur-16-en-15-〇ne_la，7-olide 具有及其相似的結(jié)構(gòu)。將新 化合物的核磁數(shù)據(jù)和6111：-11&-4〇61：(?7-6,7-86(3〇-1^111-16-611-15-〇116-1&，7-〇1丨(16進(jìn)行比 較，發(fā)現(xiàn)該化合物仍然是ent-kaurano id型的化合物。通過對新化合物的氫譜以及碳譜進(jìn)行 解析發(fā)現(xiàn)，該化合物與已知化合物的主要區(qū)別在C-6位和C-11位附近。在HMBC譜圖中，在已 知化合物中的C-6位連氧碳上的質(zhì)子信號(hào)在新化合物中是一個(gè)烯質(zhì)子信號(hào)，同時(shí)多出來一 組環(huán)內(nèi)雙鍵信號(hào)，結(jié)合9個(gè)不飽和度以及高分辨質(zhì)譜，故而推測該新化合物和已知化合物的 區(qū)別在新化合物中的C-5/C-6以及C-11 /C-12之間存在兩個(gè)雙鍵。進(jìn)一步的對新化合物的 HMBC 譜的解析中，H-18/C-5，H-19/C-5，H-20/C-6，H-9/C-l 1，H-9/C-12，H-13/C-11 等之間的 相關(guān)性證實(shí)了新化合物中存在的C-5/C-6以及C-ll/C-12之間的雙鍵。ROESY譜中，H-l與H-3 β和Η-14β之間的相關(guān)信號(hào)可以證實(shí)該化合物中的Η-1為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和 R0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一 步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0021]
〇
[0022] 實(shí)施例2:藥理作用
[0023]本實(shí)施例使用雷公藤多苷建立生殖系統(tǒng)損害大鼠模型，觀察藥物對不育大鼠模型 內(nèi)分泌及生殖器官作用的影響。
[0024] 1、材料與方法
[0025] 1.1動(dòng)物
[0026] Wistar雄性成年大鼠（山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），2.5個(gè)月，體質(zhì)量190-220g， 自由攝食全價(jià)飼料、飲水，馴養(yǎng)1周后使用。
[0027] 1.2試劑與樣品
[0028]地塞米松磷酸鈉購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施 例1。黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睪酮(T)激素放免測定試劑盒（中美天津九鼎醫(yī)學(xué) 生物工程有限公司）；皮質(zhì)醇放免測定試劑盒(北京北方放免試劑研究所）；雷公藤多苷(黃 石飛云制藥有限公司）；細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM，上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司）。
[0029] 1.3儀器
[0030]低溫冰箱(MDF-U332SANY0,日本）；圖像分析系統(tǒng)（TD3000,北京天地科技有限公 司）；組織切片機(jī)(RM-2016,徠卡，德國）；機(jī)械分析天平(TG328A，上海天平儀器廠）；放射免 疫γ_θ計(jì)數(shù)器(GC1200,中國科技大學(xué)中加光電儀器公司）；PEMS3.1統(tǒng)計(jì)軟件包。
[0031] 1.4大鼠分組及模型制備
[0032] 68只Wistar大鼠留取20只分為2組健康組，分別供模型評價(jià)及藥物研究健康對照 使用，48只隨機(jī)平均分為4組供造模使用。6組大鼠體質(zhì)量分布無顯著性差異(P>0.05)。采用 雷公藤多苷（以下簡稱GTW)灌胃造模，劑量25mg · kg"1 · cf1，共30cLGTW臨用前混懸于0.5% 羧甲基纖維素(CMC)中。大鼠每周統(tǒng)計(jì)體質(zhì)量調(diào)整給藥量。末次給藥GTW24h后，4組造模大鼠 中每組隨機(jī)抽取2只，與健康組對比評價(jià)造模效果，組織學(xué)觀察見明顯不同為造模成功納入 實(shí)驗(yàn)。4組模型大鼠分為模型對照組、地塞米松磷酸鈉組(80mg · kg<)、化合物（I)組(80mg · kg^1)、地塞米松磷酸鈉與化合物（I)組合物組【40mg · kg^1地塞米松磷酸鈉+40mg · kg"1化合 物（I)】。分別將藥物混懸于2.5ml濃度0.5%CMC中，1次/d，灌胃飼服，連續(xù)用藥30d。每周統(tǒng) 計(jì)體質(zhì)量1次，調(diào)整給藥劑量。模型對照組及健康組，1次/d，給予2.5ml濃度0.5 %CMC混懸液 灌胃，連續(xù)3〇d。
[0033] 1.5實(shí)驗(yàn)材料的制備
[0034] 末次給藥24h后大鼠稱質(zhì)量，頸椎脫白法處死，迅速分離睪丸、附睪、精囊腺、前列 腺，摘除脂肪組織，分析天平稱質(zhì)量。剪開股動(dòng)脈取血，移入肝素抗凝試管30min內(nèi)離心 (3000r/min，10min)，分離血清，檢查血清激素。
[0035] 1.6大鼠血清激素測定
[0036] 取大鼠血清，按試劑盒說明書操作，放免法測定大鼠血清黃體生成素(LH)、卵泡刺 激素(FSH)、睪酮(T)、皮質(zhì)醇（cortisol，Co) 〇
[0037] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0038] 計(jì)量資料均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料率比較采用X2檢驗(yàn)，等級計(jì)數(shù)資料采用 Ridit分析。采用PEMS 3.1醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包統(tǒng)計(jì)處理。
[0039] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0040] 2.1對大鼠血清激素的影響
[0041 ]與健康對照組比，模型對照組大鼠血清FSH、LH、T及Co含量都顯著降低(P〈0.01)說 明造模成功;與模型對照組比，地塞米松磷酸鈉與化合物（I)組合物組大鼠血清FSH、LH、T及 Co含量都顯著升高(P〈〇. 01);與模型對照組比，地塞米松磷酸鈉組和化合物（I)組大鼠血清 FSH、LH、T及Co含量都升高(P〈0.05)。結(jié)果見表1。
[0042] 表1對大鼠血清FSH、LH、T及Co含量的影響(η = 10，f±s:)
[0043]
[0044] 睪丸曲細(xì)精管是精子發(fā)生基礎(chǔ)，約占睪丸總體積98%，睪丸質(zhì)量反映睪丸曲細(xì)精 管質(zhì)量。附睪分泌的唾液酸、肉毒堿、甘油磷酸膽堿與精子成熟、獲能密切相關(guān)，測量大鼠附 睪腺壁管厚度可提示附睪上皮修復(fù)及損傷情況，了解附睪分泌功能。前列腺特異性抗原 (PSA)、ACP由前列腺腺管上皮細(xì)胞分泌進(jìn)入精液，主要生理作用是裂解精液凝固物質(zhì)中的 SemenogelinI、Π ，精衆(zhòng)PSA水平與精子活率呈顯著正相關(guān)。精囊腺分泌果糖(fructose)是 精子能量主要來源。血清生殖激素反映丘腦-垂體-性腺軸功能。FSH主要作用睪丸曲細(xì)精 管;LH作用睪丸間質(zhì)細(xì)胞，對精子生成有影響;T促進(jìn)生殖器官發(fā)育與生精細(xì)胞分化，刺激精 子生成與成熟。模型對照組LH、FSH、T均較健康組、藥物組降低。血中T濃度降低，說明睪丸間 質(zhì)細(xì)胞功能受到影響。一般認(rèn)為血中T濃度降低可通過下丘腦-垂體-性腺軸反饋調(diào)節(jié)作用 引起LH和FSH增高，但本研究所測模型對照組LH和FSH均明顯降低，給藥組LH、FSH、T均明顯 升高，與健康組比較無明顯差異。
[0045] 上述結(jié)果表明，地塞米松磷酸鈉、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對男性不育癥具有治療 作用;地塞米松磷酸鈉和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，治療效果進(jìn)一步提高，可開發(fā)成治療男性 不育癥的藥物。
[0046] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)， -02. -種地塞米松憐酸鋼的藥物組合物，其特征在于:包括地塞米松憐酸鋼、如權(quán)利要求 1所述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的地塞米松憐酸鋼的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受 的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸 附載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的地塞米松憐酸鋼的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將湖 北貝母粉碎，用60~70%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸 乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物； (b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70%乙 醇洗脫15個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70% 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇 梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟k)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、 5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個(gè)柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療男性不育癥的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2~4任一所述的地塞米松憐酸鋼的藥物組合物在制備治療男性不育癥的 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/366GK106083880SQ201610382829
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月31日 公開號(hào)201610382829.1, CN 106083880 A, CN 106083880A, CN 201610382829, CN-A-106083880, CN106083880 A, CN106083880A, CN201610382829, CN201610382829.1
【發(fā)明人】王昌榮
【申請人】王昌榮