一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法及其抗腫瘤應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法及其抗腫瘤應(yīng)用，提取方法包括以下步驟：將羅勒子陰干，粉碎，過40目篩；將過篩后的粉末噴灑原料質(zhì)量0.6倍的溶有生物酶的緩沖溶液，密封，于45~55℃發(fā)酵2~3天；發(fā)酵后的原料進(jìn)行微波?超聲提取1~3h，過濾，濾液濃縮，得濃縮液；所得濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮等步驟，即得羅勒子揮發(fā)油。本發(fā)明方法工藝簡單、耗時少、收率高，提取的成分也較多，防止了揮發(fā)油的氧化、熱解以及提高了揮發(fā)油的品質(zhì)。本發(fā)明方法所得到的揮發(fā)油具有較好的抗腫瘤活性，為開發(fā)應(yīng)用新一代天然來源的抗腫瘤藥物開拓了新的途徑。
【專利說明】-種羅勒子揮發(fā)油的提取方法及其抗腫瘤應(yīng)用
[0001 ]
技術(shù)領(lǐng)域： 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法及其抗腫瘤應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】： 羅勒也被稱為九層塔、金不換、圣約瑟夫和甜羅勒，是一種矮小、幼嫩的唇形科羅勒屬 香草植物。羅勒子為羅勒的干燥成熟果實。據(jù)《本草綱目》記載，羅勒子俗稱芒勒子、羅巧子， 具有生甘性寒、燥濕止瀉、涼血止血、清熱爽屯、等功能，主治濕熱性或血粘質(zhì)性疾病，如濕熱 性頻疾、腹痛、腹瀉、便血、持瘡出血及熱性屯、臟疾病等?，F(xiàn)代藥理研究表明，羅勒子還具有 利尿、抗氧化、防腐、消炎、抑菌等作用。
[0003] 揮發(fā)油是植物中重要的活性成分之一。羅勒屬植物為主要芳香油植物之一。目前， 對羅勒揮發(fā)油的研究主要集中在羅勒的莖和葉上，但對羅勒子中揮發(fā)油的研究較少?，F(xiàn)有 對羅勒子揮發(fā)油提取方法的報道并不多見。
[0004] 常用的揮發(fā)油提取方法主要有水蒸氣蒸饋法、超臨界萃取法等。水蒸氣蒸饋法提 取溫度高，時間長，易使對濕熱不穩(wěn)定的揮發(fā)性成分發(fā)生變化，且高沸點的成分難W檢測； 而超臨界流體萃取法是一種新的提取方法，提取揮發(fā)油能力強(qiáng)，具有防止氧化、熱解及提高 揮發(fā)油品質(zhì)等優(yōu)點，但該工藝需要高壓設(shè)備，技術(shù)要求高，設(shè)備費(fèi)用投資大，應(yīng)用還不普遍。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明的目的在于提供一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法及其抗腫瘤應(yīng)用。
[0006] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案： 將羅勒子陰干，粉碎，過40目篩;將過篩后的粉末噴灑原料質(zhì)量0.6倍的溶有生物酶的 緩沖溶液，密封，于45~55 °C發(fā)酵2~3天;發(fā)酵后的原料置于微波-超聲裝置中，加入原料質(zhì)量 3~5倍的60~70%的乙醇溶液，于超聲功率600W常開、微波功率600~800W的條件下提取1~化， 過濾，濾液濃縮，得濃縮液;所得濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、無水硫酸鋼干燥、減壓濃縮等步 驟，即得羅勒子揮發(fā)油。
[0007] 所述的生物酶為質(zhì)量比3:1的纖維素酶和酸性蛋白酶。
[000引所述的生物酶的添加量為原料質(zhì)量的2%~3%。
[0009] 所述的緩沖溶液為pH 4.5~5.5的醋酸/醋酸鋼緩沖溶液。
[0010] 所述的有機(jī)溶劑為石油酸或乙酸中的任意一種。
[0011] 本發(fā)明制得的羅勒子揮發(fā)油進(jìn)行抗腫瘤活性實驗表明：該化合物具有較強(qiáng)的抗腫 瘤活性，在天然新藥開發(fā)中具有良好的應(yīng)用前景。
[0012] 本發(fā)明制得的羅勒子揮發(fā)油采用MTT法（四甲基偶氮挫鹽微量酶反應(yīng)比色法)進(jìn)行 抗腫瘤活性測試。
[001引試驗用細(xì)胞株： T-98和U251-SP:人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株;HLE:人肝癌細(xì)胞株;MM1-CB和HMV-1:人黑色 素瘤細(xì)胞株。
[0014] 方法：（1 )0.25%膜酶消化對數(shù)生長期細(xì)胞，10%NBS的RPMI 1640調(diào)細(xì)胞濃度50000 個/1111。96孔板lOOul/孔。設(shè)溶劑對照，每組3平行孔。37°C，5%C0 2、95%空氣的培養(yǎng)箱中預(yù) 培養(yǎng)2地，棄上清。
[0015] (2)加藥物5個10倍稀釋的濃度(溶劑為有二甲亞諷和水），為10 -4 mol/L。
[0016] (3)細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)4她，每孔加入10山5mg/ml的MTT溶液無血清培養(yǎng)基配制）， 繼續(xù)培養(yǎng)地。
[0017] (4)吸去上清。加入20化1 DMS0,輕輕振蕩W使甲臘完全溶解。570皿處用酶標(biāo)儀測 定0D值。
[001引巧)計算抑制率(％)=(對照0D-藥物0D)/對照OD*1000/0 實驗結(jié)果:羅勒子揮發(fā)油的抑制率W相對于對照(添加 DMS0)的結(jié)果如下表1表示。 「00191 親1巧勒早搖失細(xì)的腫極細(xì)胞墻估袖制莖％
由表呵看出，羅勒子揮發(fā)油具有良好的抑制腫瘤細(xì)胞生長的活性，其可在制備抗腫瘤 藥物中得到應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明為制備抗腫瘤藥物提供了一種新的選擇。
[0021] 本發(fā)明所述羅勒子揮發(fā)油在制備抗腫瘤藥物時，可按照常規(guī)的制劑方法W羅勒子 揮發(fā)油為藥物活性成分，添加適宜的藥物載體，制成各種藥物劑型，如片劑、膠囊、滴丸、注 射劑、緩控釋劑等等。
[0022] 下面將結(jié)合【具體實施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實施方式。
[0023]
【具體實施方式】： 實施例1: 將羅勒子陰干，粉碎，過40目篩;將過篩后的化g粉末噴灑600g的溶有質(zhì)量比為3:1的纖 維素酶和酸性蛋白酶的抑為4.5的醋酸/醋酸鋼緩沖溶液，密封，于45°C發(fā)酵2天;發(fā)酵后的 原料置于微波-超聲裝置中，加入原料質(zhì)量3倍的60%的乙醇溶液，于超聲功率600W常開、微 波功率600W的條件下提取化，過濾，濾液濃縮，得濃縮液;所得濃縮液經(jīng)石油酸萃取、無水硫 酸鋼干燥、減壓濃縮等步驟，即得羅勒子揮發(fā)油562mL。
[0024] 實施例2: 將羅勒子陰干，粉碎，過40目篩;將過篩后的化g粉末噴灑600g的溶有質(zhì)量比為3:1的纖 維素酶和酸性蛋白酶的抑為5.0的醋酸/醋酸鋼緩沖溶液，密封，于50°C發(fā)酵3天;發(fā)酵后的 原料置于微波-超聲裝置中，加入原料質(zhì)量4倍的65%的乙醇溶液，于超聲功率600W常開、微 波功率700W的條件下提取化，過濾，濾液濃縮，得濃縮液;所得濃縮液經(jīng)乙酸萃取、無水硫酸 鋼干燥、減壓濃縮等步驟，即得羅勒子揮發(fā)油584mL。
[0025] 實施例3: 將羅勒子陰干，粉碎，過40目篩;將過篩后的化g粉末噴灑600g的溶有質(zhì)量比為3:1的纖 維素酶和酸性蛋白酶的抑為55的醋酸/醋酸鋼緩沖溶液，密封，于55°C發(fā)酵3天;發(fā)酵后的原 料置于微波-超聲裝置中，加入原料質(zhì)量5倍的70%的乙醇溶液，于超聲功率600W常開、微波 功率800W的條件下提取化，過濾，濾液濃縮，得濃縮液;所得濃縮液經(jīng)乙酸萃取、無水硫酸鋼 干燥、減壓濃縮等步驟，即得羅勒子揮發(fā)油573mL。
[0026] 實施例4: 本發(fā)明藥物顆粒劑 將羅勒子揮發(fā)油加入乙醇作黏合劑，加入淀粉作填充劑，制成顆粒。
[0027] 實施例5: 本發(fā)明藥物片劑 將羅勒子揮發(fā)油，加入淀粉、糊精、硬脂酸儀等，混合制成濕粒，壓片，每片含羅勒子揮 發(fā)油200mg。
【主權(quán)項】
1. 一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法，其特征在于包括以下步驟:將羅勒子陰干，粉碎，過 40目篩;將過篩后的粉末噴灑原料質(zhì)量0.6倍的溶有生物酶的緩沖溶液，密封，于45~55°C發(fā) 酵2~3天;發(fā)酵后的原料置于微波-超聲裝置中，加入原料質(zhì)量3~5倍的60~70%的乙醇溶液， 于超聲功率600W常開、微波功率600~800W的條件下提取1~3h，過濾，濾液濃縮，得濃縮液;所 得濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮等步驟，即得羅勒子揮發(fā)油。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法，其特征在于，所述的生物酶為 質(zhì)量比3:1的纖維素酶和酸性蛋白酶。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法，其特征在于，所述的生物酶的 添加量為原料質(zhì)量的2%~3%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法，其特征在于，所述的緩沖溶液 為pH 4.5~5.5的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅勒子揮發(fā)油的提取方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑 為石油醚或乙醚中的任意一種。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法制得的羅勒子揮發(fā)油在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K131/00GK106047492SQ201610300003
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月9日
【發(fā)明人】楊成東
【申請人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司