消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶。本發(fā)明采用比旋法和高效液相手性拆分法對二氫楊梅素立體構(gòu)型進行了表征。利用固態(tài)分析技術(shù)，包括單晶X射線衍射、粉末X射線衍射技術(shù)(XRD)、差示量熱掃描法(DSC)、熱重分析法(TGA)、卡爾費休滴定法和傅里葉變換衰減全反射紅外光譜法(FT?ATR)對二氫楊梅素晶型進行了表征，本發(fā)明對二氫楊梅素進行了多晶型篩選為原料藥工藝開發(fā)、固體制劑、半固體、懸浮劑等劑型開發(fā)和質(zhì)量控制具有重要意義。
【專利說明】
消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地指一種消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶。其分 案于申請?zhí)枮?014107158285的中國發(fā)明專利"二氫楊梅素五種不同晶型物質(zhì)"。
【背景技術(shù)】
[0002] 二氫楊梅素(0；[117(11'01115^；^61；[11)，又稱蛇葡萄素(厶1]^)61〇口8；[11)，首先由1((^&1^和 Kubota于1940年從蛇葡萄屬植物楝葉玉葡萄(Ampelopsis 11161丨36；1^01丨3)的葉中分離得到， 是一種二氫黃酮醇類黃酮化合物，化學結(jié)構(gòu)為3，5，7，3 '，4 '，5 六羥基-2，3-雙氫黃酮醇。 二氫楊梅素廣泛存在于蛇葡萄科蛇葡萄屬植物中，也存在于楊梅科、杜鵑科、藤黃科、大戟 科、橄欖科、豆科、山欖科及柳科等科植物中。
[0003] 二氫楊梅素為白色或淡黃色針狀結(jié)晶，水溶性較差（0.2mg/ml，25°C)，易溶于熱 水，乙醇、甲醇、丙酮和DMS0中。水溶液加熱狀態(tài)下化學穩(wěn)定性較差，其固體狀態(tài)下具有較好 的化學穩(wěn)定性。
[0004] 二氫楊梅素分子立體構(gòu)型中存在兩個手性中心，Pubchem化合物數(shù)據(jù)庫中收錄了 兩種二氫楊梅素構(gòu)型，分別為(2R，3R)構(gòu)型和(2R，3S)構(gòu)型，其絕對構(gòu)型可分別對應右旋，左 旋和消旋二氫楊梅素。現(xiàn)有多數(shù)文獻報道中默認其為(2R，3R)構(gòu)型，如下式所示，
[0005] (2R，3R)構(gòu)型的二氫楊梅素結(jié)構(gòu)
[0006]
[0007] 化合物立體構(gòu)型特別是手性中心可能影響化合物的有效性、毒性和臨床療效，化 合物的穩(wěn)定性也可能與之有關(guān)。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)水平下，當化合物存在手性中心時，化合物手性中心的絕對構(gòu)型常采用 單晶X射線衍射和圓二色光譜法確定，手性拆分法或比旋法能夠區(qū)分(+ )和（±)二氫楊梅 素。
[0009] 目前已有文獻（①Yoo S M，Mun S,Kim J H.Recovery and pre-purification of (+)-dihydromyricetin from Hovenia dulcis[J].Process biochemistry,2006,41(3): 567-570.②Du Q,Cai ff,Xia M,et al.Purification of( + )-dihydromyricetin from leaves extract of Ampelopsis grossedentata using high-speed countercurrent chromatograph with scale-up triple columns[J].Journal of Chromatography A, 2002,973(1):217-220.③Gao J,Liu B，Ning Z，et al.Characterization and antioxidant activity of flavonoid-rich extracts from leaves of Ampelopsis grossedentata[J] .Journal of food biochemistry,2009,33(6) :808-820.)等報道了二 氫楊梅素水溶液或乙醇水溶液中冷卻結(jié)晶析出為消旋產(chǎn)物。經(jīng)實驗測定市售樣品多呈消旋 構(gòu)型，與以上文獻報道結(jié)果一致。
[0010]根據(jù)中國藥典"多晶型藥品的質(zhì)量控制技術(shù)與方法指導原則"征求意見稿中多晶 型的定義，水合物或溶劑合物均屬于藥物多晶型范疇。藥物多晶型可能引起溶解度，穩(wěn)定性 和機械性質(zhì)等方面的差異，影響藥物臨床療效和制備工藝，因此需要在研究中加以關(guān)注，但 現(xiàn)階段未見有關(guān)二氫楊梅素晶型篩選的報道。經(jīng)測定多種市售樣品中二氫楊梅素為具有消 旋結(jié)構(gòu)二水合物的晶體物質(zhì)。
[0011]結(jié)晶水與晶體表面的吸附水完全不同，表面吸附水易失去，且形成吸附水對于分 子量為400左右的化合物，重量改變<0.5%，基本不影響化合物性質(zhì)，吸附水對粉末的團聚 和流動性具有一定的影響，過高的吸附水含量可能導致化合物潮解。而結(jié)晶水能夠直接改 變化合物晶體結(jié)構(gòu)，對化合物的重量改變多2%，可能導致化合物溶解度或穩(wěn)定性發(fā)生較大 變化，一般而言，水合物的溶解度小于無水物，水合物結(jié)晶在水溶液中穩(wěn)定性一般高于無水 物。
[0012] 在文南犬（Xu，Z ·，Liu，B ·，Ning，Z ·，&Zhang，Y ·· Racemic dihydromyricetin dihydrate.Acta Crystallographica Section E: Structure Reports Online,63.11 (2007) :4384.)中通過冷卻結(jié)晶法制得二氫楊梅素單晶，并采用單晶X射線結(jié)果表明其結(jié)構(gòu) 為消旋的二水合物。
[0013] 在研究二氫楊梅素多晶型的文獻中（林淑英.顯齒蛇葡萄中二氫楊梅素的提取純 化及抗氧化活性研究[D].華南理工大學，2004)，作者考察了60%乙醇和水溶液冷卻結(jié)晶獲 得的晶型，展示的XRD結(jié)果中橫坐標為d值與本發(fā)明中的XRD明顯不同，另外作者認為獲得了 兩種不同的晶型，但采用顯微鏡拍照結(jié)果僅可判斷為晶癖不同，無法得出該文章中"二氫楊 梅素存在多晶型"的結(jié)論。
[0014] 在文獻（Ruan L P，Yu B Y，F(xiàn)u G Μ，et al · Improving the solubi 1 ity of ampelopsin by solid dispersions and inclusion complexes[J]·Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2005,38(3) :457-464.)中提到使用的二氫楊 梅素原料為二水合物，但未就晶體結(jié)構(gòu)和化合物立體構(gòu)型進行說明。
[0015] 在文獻(李瑛琦.瑤族藤茶質(zhì)量標準及主要活性成分藥物動力學研究[D].沈陽藥 科大學，2003.)中雙氫楊梅黃素即為本專利中提到的二氫楊梅素，作者在對二氫楊梅素結(jié) 構(gòu)確證時采用了多項手段，包括圓二色光譜，證實其為(2R，3R)構(gòu)型，但未就其晶體結(jié)構(gòu)給 出具體說明，僅說明其為白色針狀結(jié)晶并提供了紅外光譜圖。但由于二氫楊梅素分子中存 在較多氫鍵，可形成分子內(nèi)和分子間氫鍵，還可能含有結(jié)晶水，僅從化合物在330001^ 1處存 在寬峰，無法表明其晶體結(jié)構(gòu)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題就是提供了一種消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶。
[0017] 本發(fā)明中采用比旋法及手性試劑拆分對二氫楊梅素的化合物構(gòu)型進行鑒別，分別 利用(+ )和（±)二氫楊梅素原料進行多晶型篩選，采用固態(tài)分析技術(shù)如:粉末X射線衍射，差 示量熱掃描，卡爾費休法，熱重分析和傅里葉變換衰減全反射紅外光譜法對所得晶型進行 分析。經(jīng)確證，二氫楊梅素至少存在5種晶型，5種晶型在穩(wěn)定性和溶解度存在差異。
[0018]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的一種右旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶，使用 旋光儀測得其比旋度[a ]D = +32° [ c 0.20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射線衍射(XRD)分析，采 用&11輻射，衍射峰位置2-1116丨&(5-45°)，具有如下特征峰 :6.63°，8.07°，9.51°，11.50°， 13.26°，16.08°，18.72°，27.20°，28.58°，28.88°。
[0019]進一步地，所述右旋二氫楊梅素二水合物在波數(shù)為3000-3500^^1的區(qū)間內(nèi)具有以 下特征峰：3375 333432000^1
[0020] 再進一步地，所述右旋二氫楊梅素二水合物采用卡爾費休法測定其中水分含量為 10.1±0.3%(11 = 3，11為實驗次數(shù)，下同）。
[0021] 本發(fā)明還提供了一種右旋二氫楊梅素無水物結(jié)晶，使用旋光儀測得其比旋度[a]D =+36° [ c 0.20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射線衍射(XRD)分析，采用CuKa輻射，衍射峰位置2-Theta(5-45°)，具有如下特征峰：7.27° ,9.69° ,11.07° ,15.76° ,22.74°，26.97°。
[0022]進一步地，所述右旋的二氫楊梅素無水物結(jié)晶在波數(shù)為3000-3500(3!!^的區(qū)間內(nèi) 具有以下特征峰:3581、3399、32200^1。
[0023] 再進一步地，所述右旋二氫楊梅素無水物水分含量采用卡爾費休法測定小于 0 · 3% (n = 3) 〇
[0024] 本發(fā)明還提供了一種右旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶，使用旋光儀測得其比旋度 [a ]D = +34° [ c 0 · 20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射線衍射(XRD)分析，采用CuKa輻射，衍射峰位 置2-Theta(5-45° )，具有如下特征峰：9.98° ,11.36° ,13.20° ,14.52° ,22.74° ,22.82°， 28.32。。
[0025]進一步地，所述二氫楊梅素一水合物結(jié)晶在波數(shù)為3000-3500(^^1的區(qū)間內(nèi)具有以 下特征峰：3568、3293、3083cm-1。
[0026] 再進一步地，所述右旋二氫楊梅素一水合物采用卡爾費休法測定其中水分含量 5.30±0.2%。
[0027] 本發(fā)明還提供了一種消旋的二氫楊梅素無水物結(jié)晶，使用旋光儀測得其比旋度 [a ]D = 0° [ c 0.20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射線衍射(XRD)分析，采用CuKa輻射，衍射峰位置 2-Theta( 5-45° )，具有如下特征峰：10.02°，13.82°，14.50°，16.08°，21.22° ,23.54°， 25.32°,25.85°,26.72°,26.79°。
[0028]進一步地，所述消旋的二氫楊梅素無水物結(jié)晶在波數(shù)為3000-3500(^^1的區(qū)間內(nèi)具 有以下特征峰：3581、3399、32200^1。
[0029] 再進一步地，所述消旋的二氫楊梅素無水物結(jié)晶采用卡爾費休法測定其中水分含 量小于0.4%。
[0030] 本發(fā)明還提供了
[0031] 再進一步地，所述消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶中水分含量5.31 ±0.5%。
[0032] 一種消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶，它的比旋度[a ]D = 0° [ c 0.20，DMS0，20 °C]，使用粉末X射線衍射(XRD)分析，采用CuKa輻射，衍射峰位置2-Theta(5-45°)，具有如下 特征峰：7.97° ,10.01° ,11.17° ,14.49° ,16.70° ,25.82° ,26.73°。
[0033]進一步地，所述消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶在波數(shù)為3000-3500(^4的區(qū)間內(nèi) 具有以下特征峰:3568、3293、30830^1。
[0034]再進一步地，所述消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶中水分含量5.31 ±0.1%。
[0035] 本發(fā)明中二氫楊梅素五種不同晶型物質(zhì)的制備方法均屬于現(xiàn)有技術(shù)，
[0036] 本發(fā)明制備二氫楊梅素二水合物的方法包括冷卻結(jié)晶法，抗溶劑結(jié)晶法，揮發(fā)結(jié) 晶法，晶種誘導法，溶劑轉(zhuǎn)晶法和固態(tài)轉(zhuǎn)晶法。
[0037] 所述的冷卻結(jié)晶法是利用二氫楊梅素在溶劑中溶解度隨溫度變化較大而設計，利 用高溫溶解，降溫時析出結(jié)晶獲得二氫楊梅素結(jié)晶。這一過程中可通過改變?nèi)軇?，加入晶種 或改變降溫速率對工藝進行控制，溶劑可為水、乙醇，甲醇、乙腈等一種或多種的混合溶 劑。
[0038] 所述的抗溶劑結(jié)晶法是指將二氫楊梅素溶解于具有較高溶解度的A溶劑中（二氫 楊梅素溶解度>lmg/ml)，再加入大量具有較低溶解度且與A溶劑混溶的B溶劑(二氫楊梅素 溶解度<〇. 2mg/ml)，可制得二氫楊梅素結(jié)晶。這一工藝過程可通過改變?nèi)軇〢和B種類或體 積，改變加入B溶劑的速度對工藝進行控制。其中A溶劑可為DMS0、甲醇、乙腈、甲酸、乙醇、 DMF及其上述溶劑兩種或多種任意比例的混合溶劑中，B溶劑可為冷水等。
[0039] 所述的揮發(fā)結(jié)晶法是指將二氫楊梅素溶解于具有揮發(fā)性溶劑中，且二氫楊梅素在 溶劑中溶解度>lmg/ml，緩慢揮發(fā)制得二氫楊梅素結(jié)晶。這一工藝過程可通過改變?nèi)軇┓N 類和體積，揮發(fā)速率進行控制，其中溶劑可為乙醇、甲醇、乙腈等單一溶劑或任一比例混合 溶劑。
[0040] 所述的溶劑轉(zhuǎn)晶法是指取二氫楊梅素原料，可為無水物、一水合物或無定形態(tài)，加 入溶劑中，保持溶液為混懸狀態(tài)，不斷攪拌，通過發(fā)生溶劑介導的晶型轉(zhuǎn)化或溶劑溶解后析 出，進而獲得二氫楊梅素結(jié)晶，該工藝可通過改變?nèi)軇w積，水分活度，溫度和攪拌速度以 控制工藝，溶劑可水與DMS0、甲醇、乙腈、甲酸、乙醇、DMF等單一或混合溶劑。
[0041] 所述的固態(tài)轉(zhuǎn)晶法是指將二氫楊梅素結(jié)晶，可為無水物和一水合物，放置于一定 溫度和濕度環(huán)境下，固態(tài)二氫楊梅素通過吸附外界的水分，水分子與晶態(tài)二氫楊梅素結(jié)合 生成二氫楊梅素二水合物。該工藝過程可通過改變初始原料的晶態(tài)結(jié)構(gòu)，環(huán)境溫度和濕度， 放置時間加以控制。
[0042] 本發(fā)明制備二氫楊梅素無水物的方法包括加熱法和研磨法。
[0043] 所述的加熱法是指將二氫楊梅素原料，可為二水合物和一水合物，將化合物升溫 至較高溫度，失去結(jié)晶水后繼續(xù)加熱，二氫楊梅素無水物晶態(tài)發(fā)生轉(zhuǎn)變，由于二氫楊梅素加 熱失去結(jié)晶水繼續(xù)加熱會發(fā)生轉(zhuǎn)晶，高溫應在180°C左右以獲得二氫楊梅素穩(wěn)定的無水物 結(jié)晶。該工藝可改變溫度和加熱時間進行控制。
[0044] 本發(fā)明制備二氫楊梅素一水合物的方法包括冷卻結(jié)晶法和揮發(fā)結(jié)晶法
[0045] 所述的揮發(fā)結(jié)晶法是指二氫楊梅素，可為二水合物和一水合物，溶解于一種具有 較高溶解度的溶劑中（二氫楊梅素溶解度>lmg/ml)，緩慢揮發(fā)至結(jié)晶析出，獲得結(jié)晶。該工 藝可通過改變原料晶型，溶劑種類和體積，揮發(fā)速率加以控制。其中溶劑可為水和乙醇的混 合溶劑。
[0046] 根據(jù)中國藥典"多晶型藥品的質(zhì)量控制技術(shù)與方法指導原則"征求意見稿，創(chuàng)新 藥物在開發(fā)含有固體的制劑時，若藥物晶型會影響藥品質(zhì)量，必需進行晶型的定性和定量 控制。考慮到二氫楊梅素溶液口服后在體內(nèi)的吸收迅速，固態(tài)二氫楊梅素很可能由于溶解 度偏小造成生物利用度偏低，晶型往往直接影響固態(tài)藥物的穩(wěn)定性和溶解度，本發(fā)明對二 氫楊梅素進行了多晶型篩選為原料藥工藝開發(fā)、固體制劑、半固體、懸浮劑等劑型開發(fā)和質(zhì) 量控制具有重要意義。
【附圖說明】
[0047]圖1為右旋的二氫楊梅素二水合物與市售樣品的液相色譜圖；
[0048]圖2為右旋二氫楊梅素二水合物的XRD衍射圖；
[0049]圖3為右旋二氫楊梅素二水合物的差示量熱掃描圖；
[0050]圖4為右旋二氫楊梅素二水合物的熱重分析圖；
[0051 ]圖5為右旋二氫楊梅素二水合物的紅外光譜圖；
[0052]圖6為右旋二氫楊梅素無水物的液相色譜圖；
[0053]圖7為右旋二氫楊梅素無水物的XRD衍射圖；
[0054]圖8為右旋二氫楊梅素無水物的差示量熱掃描圖；
[0055] 圖9為右旋二氫楊梅素無水物的熱重分析圖；
[0056] 圖10為右旋二氫楊梅素無水物的紅外光譜圖；
[0057] 圖11為右旋二氫楊梅素一水合物的液相色譜圖；
[0058]圖12為右旋二氫楊梅素一水合物的XRD衍射圖；
[0059] 圖13為右旋二氫楊梅素一水合物的差示量熱掃描圖；
[0060] 圖14為右旋二氫楊梅素一水合物的熱重分析圖；
[0061 ]圖15為右旋二氫楊梅素一水合物的紅外光譜圖；
[0062]圖16為消旋的二氫楊梅素無水物的液相色譜圖；
[0063]圖17為消旋的二氫楊梅素無水物的XRD衍射圖；
[0064] 圖18為消旋的二氫楊梅素無水物的差示量熱掃描圖；
[0065] 圖19為消旋的二氫楊梅素無水物的熱重分析圖；
[0066]圖20為消旋的二氫楊梅素無水物的紅外光譜圖；
[0067]圖21為消旋的二氫楊梅素一水合物的液相色譜圖；
[0068]圖22為消旋的二氫楊梅素一水合物的XRD衍射圖；
[0069] 圖23為消旋的二氫楊梅素一水合物的差示量熱掃描圖；
[0070] 圖24為消旋的二氫楊梅素一水合物的熱重分析圖；
[0071 ]圖25為消旋的二氫楊梅素一水合物的紅外光譜圖；
【具體實施方式】
[0072] 為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合具體實施例進一步闡明本發(fā)明的主要內(nèi)容，但 本發(fā)明的內(nèi)容不僅僅局限于以下實施例。
[0073] 實施例1右旋二氫楊梅素二水合物的制備
[0074] 取200mg左右的右旋二氫楊梅素原料，可為無水物或一水合物，溶解于2ml90-100 °C的水溶液中，保溫過濾，除去濾渣后，將溶液自然冷卻至室溫后析出結(jié)晶，制得右旋二氫 楊梅素二水合物。
[0075]實施例2右旋二氫楊梅素無水物的制備
[0076]取200mg左右的右旋二氫楊梅素原料，可為二水合物和一水合物，在溫度為160°C 下放置lh，即可獲得二氫楊梅素無水物。
[0077]實施例3右旋二氫楊梅素一水合物的制備
[0078]取200mg左右的右旋二氫楊梅素原料，可為二水合物和無水物，溶解于高濃度的乙 醇溶液中，緩慢揮發(fā)至結(jié)晶析出，可獲得右旋二氫楊梅素一水合物。
[0079] 實施例4消旋的二氫楊梅素無水物的制備
[0080] 取200mg左右的消旋二氫楊梅素原料，可為二水合物和一水合物，在溫度為160°C 下放置lh，即可獲得二氫楊梅素無水物。
[0081 ]實施例5消旋的二氫楊梅素一水合物的制備
[0082]取200mg左右的消旋二氫楊梅素原料，可為二水合物和無水物，溶解于高濃度的乙 醇溶液中，緩慢揮發(fā)至結(jié)晶析出，可獲得右旋二氫楊梅素一水合物。
[0083]將上述制備的二氫楊梅素五種不同晶型物質(zhì)進行性能檢測 [0084] 1、分析方法：
[0085] 1.1比旋法
[0086] WZZ-1自動指示旋光儀，上海物理光學儀器廠。
[0087]測定階段，取二氫楊梅素晶型物質(zhì)5.00g溶解于25ml DMS0,測定溶液旋光度，可計 算比旋度。
[0088] 1.2高效液相色譜手性拆分法
[0089] 采用Waters e2695高效液相色譜儀，C18硅膠色譜柱，以甲醇:β環(huán)糊精溶液(其中β 環(huán)糊精18g，磷酸10ml，加水至1000ml)，流速為lml/min，柱溫30°C。檢測波長290nm。
[0090] 1.3元素分析法
[0091] CHNS0元素分析儀(Vario EL111)
[0092] 1.4卡爾費休水分測定法
[0093] 儀器:超精科技SKF1(A)卡爾費休水分測定儀
[0094]測定階段，每次取100_200mg二氫楊梅素晶型物質(zhì)粉末，儀器自動滴定至終點，記 錄顯示的水分量，計算粉末中的水分含量。
[0095] 1.5粉末X射線衍射法
[0096] 儀器:荷蘭帕納科公司PANalytical B.V.
[0097] 靶:Cu-Κα 輻射
[0098] 波長：1·5406Α
[0099] 管壓：4〇KV
[0100] 管流:40mA
[0101] 步長:0.02°
[0102] 掃描范圍：5-45。
[0103]掃描速度:8。/min
[0104] 測定階段，校正儀器后，取二氫楊梅素晶型物質(zhì)粉末(D5Q<100ym)放入樣品測定池 中，使用玻璃載玻片壓制粉末至呈平面后，放入儀器中進行測定。
[0105] 1.6差示量熱掃描法
[0106] 儀器：鉬金-埃爾默儀器（上海）有限公司（PerkinElmer Instruments)Diamond DSC
[0107] 范圍 30-27(TC
[0108] 升溫速度 HTC/min
[0109] N2 流速：50ml/min
[0110] 1.7熱重分析法
[0111] 儀器：鉬金-埃爾默儀器（上海）有限公司（PerkinElmer Instruments)型號Pyrisl TGA
[0112] 范圍 30_50(TC
[0113] 升溫速度 10°C/min
[0114] N2 流速：50ml/min
[0115] 1.8紅外光譜法
[0116] 儀器：德國Bruker公司VERTEX 70
[0117] 掃描范圍：45001^-40000^1
[0118] 分辨率 dcnf1
[0119] 2、右旋的二氫楊梅素二水合物
[0120] 2.1比旋法
[0121] 取二氫楊梅素5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，測得自制樣品旋光度為6.491 土 0.013° (n = 5)，比旋度[a]D = +32°。
[0122] 2.2高效液相色譜手性拆分法
[0123] 如圖1所示市售樣品呈雙峰，即表明其為消旋產(chǎn)物，右旋的二氫楊梅素二水合物呈 單峰，且表明其為右旋二氫楊梅素二水合物中右旋二氫楊梅素純度多98 %。
[0124] 2.3元素分析法
[0125] 右旋二氫楊梅素二水合物中C:H:0 = 50.52% :4.50% :44.98%，即分子式應為 Cl5Hl6〇lQ，BPCl5Hl2H8 · 2H20。
[0126] 2.4卡爾費休滴定法
[0127] 經(jīng)滴定測得右旋的二氫楊梅素二水合物中水分含量為10.1 ±0.3% (n = 3)，即對 應2分子的水分。
[0128] 2.5粉末X射線衍射法
[0129] 右旋二氫楊梅素二水合物的XRD衍射圖（如圖2所示)及其對應峰值見下表1
[0130]
[0131] 12345 2.6差示量熱掃描法 2 右旋二氫楊梅素二水合物在109°C (峰值，下同）、152°C和252°C存在吸熱峰，在192 °C存在放熱峰。其中252 °C為晶態(tài)熔化過程，109 °C和152 °C對應階段均為失去結(jié)晶水過程 (圖 3)。 3 2.7熱重分析法 4 二水合物在60 °C即開始失去結(jié)晶水，在150 °C結(jié)晶水完全失去。達到252 °C溶化后， 二氫楊梅素分子隨著溫度進一步升高發(fā)生了分解(圖4)。 5 2.8.紅外光譜法
[0137]由于分子內(nèi)氫鍵和分子間氫鍵能夠反映在波數(shù)為3000-350001^1間，右旋二氫楊梅 素二水合物在此區(qū)間內(nèi)具有以下特征峰:3375、3334、32000^1 (圖5)。
[0138] 3、右旋二氫楊梅素無水物
[0139] 3.1比旋法
[0140]取右旋二氫楊梅素無水物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，測得自制樣品旋光度 為7.221±0.015°(11 = 5)，比旋度[€[]〇 = +36°。
[0141 ] 3.2高效液相色譜手性拆分法
[0142] 采用高效液相手性拆分表明其為右旋二氫楊梅素無水物中右旋的二氫楊梅素純 度彡98%(圖6)。
[0143] 3.3元素分析法
[0144] 右旋二氫楊梅素無水物C:H:0 = 56.26% :3.74% :40.00%，即分子式應為 Cl5Hl2〇8〇
[0145] 4.卡爾費休水分測定法
[0146] 測得右旋二氫楊梅素無水物水分含量小于0.3 % (η = 3)。
[0147] 5.粉末X射線衍射法
[0148] 右旋二氫楊梅素無水物的XRD衍射圖（圖7)及其對應峰值見下表2
[0149] 12345
2 3.6差示量熱掃描法 3 右旋二氫楊梅素無水物恪點為253.9°C (以峰值計），在低于其恪點的加熱的過程 中不存在任何吸熱和放熱峰(圖8)。 4 3.7熱重分析法 5 右旋二氫楊梅素無水物在60_240°C范圍內(nèi)，加熱不會減失任何重量，達到252°C晶 體溶化，繼續(xù)加熱二氫楊梅素分子發(fā)生了分解(圖9)。
[0155] 3.8紅外光譜法
[0156]由于分子內(nèi)氫鍵和分子間氫鍵可反映在波數(shù)為3000-3500(^4間，無水物具有以下 特征峰：3581、3399、3220cm-1 (圖 10)。
[0157] 4、右旋二氫楊梅素一水合物
[0158] 4.1比旋法
[0159] 取右旋二氫楊梅素一水合物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，測得右旋二氫楊梅 素一水合物旋光度為6.835±0.020° (n = 5)，比旋度[a]D = +34°。
[0160] 4.2高效液相色譜手性拆分法
[0161] 采用高效液相手性拆分表明其為右旋二氫楊梅素一水合物中右旋的二氫楊梅素 純度彡98%(圖11)。
[0162] 4.3元素分析法
[0163] 測得右旋二氫楊梅素一水合物C: Η: 0 = 53.25 % : 4.14% : 42.61 %，即分子式應為 Cl5Hl4〇9〇
[0164] 4.4卡爾費休水分測定法
[0165] 測得右旋二氫楊梅素一水合物中水分含量5.30 ±0.2%。
[0166] 4.5粉末X射線衍射法
[0167] 右旋二氫楊梅素一水合物的XRD衍射圖（圖12)及其對應峰值見下表3
[0168]
[0169]
123456789101112 4.6差示量熱掃描法 2 右旋二氫楊梅素一水合物測定中有3個吸熱峰，峰值分別對應116.80 °C、146.78°C 和252.72°C，其中116.80°C對應失去一分子結(jié)晶水，146.78°C對應晶態(tài)的改變，252.72°C對 應二氫楊梅素無水物的熔點（圖13)。 3 4.7熱重分析法 4 右旋二氫楊梅素一水合物在60-240°C范圍內(nèi)，減失重量約為5%，即對應一分子結(jié) 晶水，達到252°C溶化后，二氫楊梅素分子發(fā)生了分解(圖14)。 5 4.8紅外光譜法 6
[0175]由于分子內(nèi)氫鍵和分子間氫鍵可反映在波數(shù)為3000-350001^1間，右旋二氫楊梅素 一水合物具有以下特征峰:3568、3293、3083cm-1 (圖15)。 7 5、消旋的二氫楊梅素無水物 8 5.1比旋法 9 取消旋二氫楊梅素無水物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，測得消旋的二氫楊梅 素無水物旋光度為〇°，比旋度[a]D = 〇°。 10 5.2高效液相色譜手性拆分法 11 采用高效液相手性拆分表明消旋二氫楊梅素無水物存在兩個峰，且兩個峰面積基 12 本相等，可知測得旋光度為〇的原因，在于含有等量的右旋二氫楊梅素和左旋二氫楊梅素 (圖 16)。
[0181] 5.3元素分析法
[0182] 消旋的二氫楊梅素無水物C:H:0 = 56.27% :3.75% :39.98%，即分子式應為 Cl5Hl2〇8〇
[0183] 5.4卡爾費休水分測定法
[0184] 測得消旋的二氫楊梅素無水物中水分含量小于0.4%。
[0185] 5.5.粉末X射線衍射法消旋的二氫楊梅素一水合物的XRD衍射圖（圖17)及其對應 峰值見下表4
[0186]
[0193] 由于分子內(nèi)氫鍵和分子間氫鍵可反映在波數(shù)為3000-3500(^4間，無水物具有以下 特征峰：3581、3399、3220cm- 1 (圖 20)。
[0194] 6.、消旋的二氫楊梅素一水合物
[0195] 6.1比旋法
[0196] 取消旋二氫楊梅素一水合物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，測得自制樣品旋光 度為0°，比旋度[a]D = 0°。
[0197] 6.2高效液相色譜手性拆分法
[0198] 采用高效液相手性拆分表明消旋二氫楊梅素一水合物存在兩個峰，且兩個峰面積 基本相等，可知其旋光度為〇的原因，在于可能含有等量的右旋二氫楊梅素和左旋二氫楊梅 素(圖21)。
[0199] 6.3元素分析法
[0200] 消旋的二氫楊梅素一水合物C:H:0 = 53.23% :4.15% :42.62%，即分子式應為 Cl5Hl4〇9,即 Cl5Hl2〇8 · H20。
[0201] 6.4.卡爾費休水分測定法
[0202]測得消旋的二氫楊梅素一水合物水分含量5.31 ±0.1 %。
[0203] 6.5粉末X射線衍射法
[0204] 右旋二氫楊梅素一水合物的XRD衍射圖（圖22)及其對應峰值見下表5
[0205]
[0206]
[0207] 6.6差不量熱掃描法
[0208]消旋的二氫楊梅素一水合物物失去結(jié)晶水后，熔點為253.9°C (以峰值計）（圖23)。 [0209] 6.7熱重分析法
[0210]消旋的二氫楊梅素一水合物在60-240°C范圍內(nèi)，減失重量約為5%，即對應一分子 結(jié)晶水，達到252°C溶化后，二氫楊梅素分子發(fā)生了分解(圖24)。
[0211] 6.8紅外光譜法
[0212] 由于分子內(nèi)氫鍵和分子間氫鍵可反映在波數(shù)為3000-3500(^1間，一7K合物具有以 下特征峰:3568、3293、3083cm- 1，與右旋的二氫楊梅素基本一致（圖25)。
[0213] 7、二氫楊梅素五種晶型的吸濕性比較
[0214] 采用飽和鹽溶液在密封容器中在25°C制得不同濕度，分別為：11%(氯化鋰），23% (草酸鉀），33%(氯化鎂），43%(碳酸鉀），52%(硝酸鎂），67%(氯化銅），75%(氯化鈉）， 86% (氯化鉀），93%(硝酸鎂）。分別取制得的二氫楊梅素二水合物、無水物和一水合物，每 種晶型取3份，每份樣品為200-300mg，放置于已知重量的扁形量瓶中。將扁形量瓶放入密封 容器內(nèi)，放置3天后稱重，分析數(shù)據(jù)后可獲得不同晶型開始吸水的濕度，五種晶型分別為:右 旋二氫楊梅素二水合物>93%，右旋二氫楊梅素無水物和消旋二氫楊梅素無水物為23%， 右旋二氫楊梅素一水合物和消旋的二氫楊梅素一水合物為33%。
[0215] 其它未詳細說明的部分均為現(xiàn)有技術(shù)。盡管上述實施例對本發(fā)明做出了詳盡的描 述，但它僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部實施例，人們還可以根據(jù)本實施例在不經(jīng) 創(chuàng)造性前提下獲得其他實施例，這些實施例都屬于本發(fā)明保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶，特征在于：它的比旋度[a]D = 〇°[c 0.20， DMS0,20°C]，使用粉末X射線衍射(XRD)分析，采用CuKa輻射，衍射峰位置2-Theta(5-45°)， 具有如下特征峰：7.97° ,10.01° ,11.17° ,14.49° ,16.70° ,25.82° ,26.73°。2. 根據(jù)權(quán)利要求2所述消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶，其特征在于:所述消旋的二氫 楊梅素一水合物結(jié)晶在波數(shù)為3000-3500(31^ 1的區(qū)間內(nèi)具有以下特征峰：3568、3293、 3083cm_1〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述消旋的二氫楊梅素一水合物結(jié)晶，其特征在于:所述消旋的 二氫楊梅素一水合物結(jié)晶中水分含量5.31 ±0.1 %。
【文檔編號】C07D311/32GK106008439SQ201610277767
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2014年12月1日
【發(fā)明人】施春陽, 方建國, 王文清, 熊微, 陳婧, 劉旭, 王晨光, 侯小龍
【申請人】華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院