一種以銀耳子實(shí)體制備植物基透明質(zhì)酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以銀耳子實(shí)體制備植物基透明質(zhì)酸的方法，屬于透明質(zhì)酸制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明取銀耳子實(shí)體洗滌后，用去離子水浸泡，碾磨、微波加熱得預(yù)處理漿料，再取葡萄皮粉碎后，放入馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，用去離子水淋洗，得混合微生物淋洗液，與預(yù)處理漿料、蔗糖混合發(fā)酵后，加入纖維素酶、磷酸二氫鉀溶液等混合，加熱反應(yīng)過濾得濾液，濃縮得濃縮液，與無水乙醇混合，經(jīng)冷藏、離心得沉淀物，將其真空冷凍干燥碾磨制得植物基透明質(zhì)酸。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明制備步驟簡單，提取率高于其他方法31.2%以上，制備周期短；產(chǎn)品易存放、透光率好，相對分子量提高了25～31%。
【專利說明】
一種以銀耳子實(shí)體制備植物基透明質(zhì)酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種以銀耳子實(shí)體制備植物基透明質(zhì)酸的方法，屬于透明質(zhì)酸制備技術(shù)領(lǐng)域?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]透明質(zhì)酸是一種酸性粘多糖，首先從牛眼玻璃體中分離出該物質(zhì)。透明質(zhì)酸以其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水電解質(zhì)擴(kuò)散及運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等。尤為重要的是，透明質(zhì)酸具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質(zhì)，被稱為理想的天然保濕因子。動物組織提取主要原料是雞冠和牛眼玻璃體等，用丙酮或乙醇將原料脫脂、脫水，用蒸餾水浸泡、過濾，然后以氯化鈉水溶液和氯仿溶液處理，之后加入胰蛋白酶保溫后得到混合液，最后用離子交換劑進(jìn)行處理、純化得到精制的透明質(zhì)酸。這種方法提取率極低，僅1% 左右，分離過程復(fù)雜，致使透明質(zhì)酸價(jià)格昂貴。微生物發(fā)酵提取以葡萄糖作為碳源發(fā)酵液， 在培養(yǎng)基中發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后，過濾除去菌絲體和雜質(zhì)，然后用醇沉淀法等簡單操作即得到高純度的產(chǎn)物。采用發(fā)酵法制造的透明質(zhì)酸，優(yōu)點(diǎn)是能按商品設(shè)計(jì)來設(shè)定分子量大小。發(fā)酵法的關(guān)鍵在于菌種的選擇，多選用鏈球菌、乳酸球菌類等。雖純度高，但發(fā)酵周期長、產(chǎn)物相對分子量低、產(chǎn)物透光率差、蛋白質(zhì)含量高、葡萄糖醛酸含量低?；瘜W(xué)合成提取采用天然酶聚合反應(yīng)，首先使用多糖類聚合物合成“透明質(zhì)酸氧氮雜環(huán)戊烯衍生物”，然后添加水分解酶，制造出衍生物和酶的復(fù)合體，最后在90度攝氏反應(yīng)液中清除其中的酶，就合成了透明質(zhì)酸。采用人工合成法可大大降低透明質(zhì)酸的制造成本，但結(jié)構(gòu)純度低。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題:針對以動物組織提取透明質(zhì)酸，原料存放時(shí)間較短， 提取率低，導(dǎo)致透明質(zhì)酸成本高，而微生物發(fā)酵法提取發(fā)酵周期長，產(chǎn)物相對分子量低，導(dǎo)致其透光率差的弊端，提供了一種取銀耳子實(shí)體洗滌后，用去離子水浸泡，碾磨、微波加熱得預(yù)處理漿料，再取葡萄皮粉碎后，放入馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，用去離子水淋洗，得混合微生物淋洗液，與預(yù)處理漿料、蔗糖混合發(fā)酵后，加入纖維素酶、磷酸二氫鉀溶液等混合，加熱反應(yīng)過濾得濾液，濃縮得濃縮液，與無水乙醇混合，經(jīng)冷藏、離心得沉淀物，將其真空冷凍干燥碾磨制得植物基透明質(zhì)酸的方法。本發(fā)明制備步驟簡單，提取率高，制備周期短，相對分子量高，有效解決了產(chǎn)品原料不易存放、提取率低，所得產(chǎn)品透光率差問題。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是:(1)稱取80?100g銀耳子實(shí)體，用去離子水洗滌3?5次后，放入盛有500?600mL去離子水的燒杯中，浸泡1?2h后，置于石磨磨盤上研磨，研磨過程中混入120?180mL去離子水，得銀耳漿料，再將其轉(zhuǎn)入微波加熱器中，以500?600W功率，微波加熱15?25min，移出，靜置， 使其自然冷卻至室溫，得預(yù)處理漿料；(2)稱取10?20g葡萄皮，放入組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的葡萄皮置于馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中，再移入35?45°0〖旦溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2?3天，用60?80mL去離子水淋洗培養(yǎng)基表面，得混合微生物淋洗液，隨后量取10?20mL所得混合微生物淋洗液，將其轉(zhuǎn)入盛有100? 150mL上述所得預(yù)處理楽;料的發(fā)酵罐中，再加入6?8g鹿糖，用滅菌木棍攪拌10?15min后， 發(fā)酵處理6?8h，得發(fā)酵漿料；(3)向反應(yīng)釜中依次加入20?30mL上述所得發(fā)酵漿料，100?200mL質(zhì)量濃度為8?10% 磷酸二氫鉀溶液，2?4g纖維素酶，1?3g果膠酶和1?3g中性蛋白酶，啟動攪拌器，設(shè)定轉(zhuǎn)速為400?600r/min，加熱升溫至45?50°C，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)60?80min，隨后以80?85°C加熱處理5?lOmin，靜置，自然冷卻至室溫后，過濾除去濾渣，得濾液；(4)將上述所得濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在70?80°C條件下旋蒸濃縮至原體積的1/3， 再將濃縮液轉(zhuǎn)入盛有200?300mL無水乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪拌3?5min，攪拌后再將其轉(zhuǎn)入2?4°C冰箱中冷藏10?15h，離心除去上清液，將所得沉淀物轉(zhuǎn)入-35?-25°C真空冷凍干燥機(jī)中，干燥2?4h后，用研缽研磨成粉，即得植物基透明質(zhì)酸。
[0005]本發(fā)明的應(yīng)用方法:稱取20?30g本發(fā)明制備的植物基透明質(zhì)酸放入玻璃器皿中， 同時(shí)向其中加入25?28mL檸檬汁、8?10mL蜂蜜和160?200mL純凈水，攪拌使其充分混合均勻后，裝瓶即可制得化妝水。該植物基透明質(zhì)酸可改善皮膚營養(yǎng)代謝，使皮膚光滑濕潤，所得化妝水可以緊致肌膚，長久保濕，并可阻隔外來細(xì)菌、灰塵、紫外線的侵入，保護(hù)皮膚免受侵害，防止衰老，且在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收向，值得推廣與使用。
[0006]本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是:(1)本發(fā)明制備步驟簡單，提取率高于其他方法31.2%以上，制備周期短；(2 )產(chǎn)品易存放、透光率好，相對分子量提高了 25?31%。【具體實(shí)施方式】
[0007] 首先稱取80?100g銀耳子實(shí)體，用去離子水洗滌3?5次后，放入盛有500?600mL 去離子水的燒杯中，浸泡1?2h后，置于石磨磨盤上研磨，研磨過程中混入120?180mL去離子水，得銀耳漿料，再將其轉(zhuǎn)入微波加熱器中，以500?600W功率，微波加熱15?25min，移出，靜置，使其自然冷卻至室溫，得預(yù)處理漿料;然后稱取10?20g葡萄皮，放入組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的葡萄皮置于馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中，再移入35?45°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 2?3天，用60?80mL去離子水淋洗培養(yǎng)基表面，得混合微生物淋洗液，隨后量取10?20mL所得混合微生物淋洗液，將其轉(zhuǎn)入盛有100?150mL上述所得預(yù)處理漿料的發(fā)酵罐中，再加入6 ?8g蔗糖，用滅菌木棍攪拌10?15min后，發(fā)酵處理6?8h，得發(fā)酵漿料;再向反應(yīng)釜中依次加入20?30mL上述所得發(fā)酵漿料，100?200mL質(zhì)量濃度為8?10%磷酸二氫鉀溶液，2?4g纖維素酶，1?3g果膠酶和1?3g中性蛋白酶，啟動攪拌器，設(shè)定轉(zhuǎn)速為400?600r/min，加熱升溫至45?50°C，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)60?80min，隨后以80?85°C加熱處理5?lOmin，靜置，自然冷卻至室溫后，過濾除去濾渣，得濾液;最后將上述所得濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在70?80°C 條件下旋蒸濃縮至原體積的1/3，再將濃縮液轉(zhuǎn)入盛有200?300mL無水乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪拌3?5min，攪拌后再將其轉(zhuǎn)入2?4°C冰箱中冷藏10?15h，離心除去上清液，將所得沉淀物轉(zhuǎn)入-35?-25°C真空冷凍干燥機(jī)中，干燥2?4h后，用研缽研磨成粉，即得植物基透明質(zhì)酸。
[0008]實(shí)例 1首先稱取80g銀耳子實(shí)體，用去離子水洗滌3次后，放入盛有500mL去離子水的燒杯中， 浸泡lh后，置于石磨磨盤上研磨，研磨過程中混入120mL去離子水，得銀耳漿料，再將其轉(zhuǎn)入微波加熱器中，以500W功率，微波加熱15min，移出，靜置，使其自然冷卻至室溫，得預(yù)處理漿料;然后稱取l〇g葡萄皮，放入組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的葡萄皮置于馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中，再移入35°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2天，用60mL去離子水淋洗培養(yǎng)基表面，得混合微生物淋洗液，隨后量取10mL所得混合微生物淋洗液，將其轉(zhuǎn)入盛有100mL上述所得預(yù)處理漿料的發(fā)酵罐中，再加入6g蔗糖，用滅菌木棍攪拌l〇min后，發(fā)酵處理6h，得發(fā)酵漿料;再向反應(yīng)釜中依次加入20mL上述所得發(fā)酵漿料，100mL質(zhì)量濃度為8%磷酸二氫鉀溶液，2g纖維素酶，lg 果膠酶和lg中性蛋白酶，啟動攪拌器，設(shè)定轉(zhuǎn)速為400r/min，加熱升溫至45°C，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)60min，隨后以80°C加熱處理5min，靜置，自然冷卻至室溫后，過濾除去濾渣，得濾液;最后將上述所得濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在70°C條件下旋蒸濃縮至原體積的1/3,再將濃縮液轉(zhuǎn)入盛有200mL無水乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪拌3min，攪拌后再將其轉(zhuǎn)入2°C冰箱中冷藏 10h，離心除去上清液，將所得沉淀物轉(zhuǎn)入-35°C真空冷凍干燥機(jī)中，干燥2h后，用研缽研磨成粉，即得植物基透明質(zhì)酸。
[0009]稱取20g本發(fā)明制備的植物基透明質(zhì)酸放入玻璃器皿中，同時(shí)向其中加入25mL檸檬汁、8mL蜂蜜和160mL純凈水，攪拌使其充分混合均勻后，裝瓶即可制得化妝水。該植物基透明質(zhì)酸可改善皮膚營養(yǎng)代謝，使皮膚光滑濕潤，所得化妝水可以緊致肌膚，長久保濕，并可阻隔外來細(xì)菌、灰塵、紫外線的侵入，保護(hù)皮膚免受侵害，防止衰老，且在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收向，值得推廣與使用。
[0010]實(shí)例2首先稱取90g銀耳子實(shí)體，用去離子水洗滌4次后，放入盛有550mL去離子水的燒杯中， 浸泡2h后，置于石磨磨盤上研磨，研磨過程中混入150mL去離子水，得銀耳漿料，再將其轉(zhuǎn)入微波加熱器中，以550W功率，微波加熱20min，移出，靜置，使其自然冷卻至室溫，得預(yù)處理漿料;然后稱取15g葡萄皮，放入組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的葡萄皮置于馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中，再移入40°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3天，用70mL去離子水淋洗培養(yǎng)基表面，得混合微生物淋洗液，隨后量取15mL所得混合微生物淋洗液，將其轉(zhuǎn)入盛有125mL上述所得預(yù)處理漿料的發(fā)酵罐中，再加入7g蔗糖，用滅菌木棍攪拌13min后，發(fā)酵處理7h，得發(fā)酵漿料;再向反應(yīng)釜中依次加入25mL上述所得發(fā)酵漿料，150mL質(zhì)量濃度為9%磷酸二氫鉀溶液，3g纖維素酶，2g 果膠酶和2g中性蛋白酶，啟動攪拌器，設(shè)定轉(zhuǎn)速為500r/min，加熱升溫至48°C，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)70min，隨后以83°C加熱處理8min，靜置，自然冷卻至室溫后，過濾除去濾渣，得濾液;最后將上述所得濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在75°C條件下旋蒸濃縮至原體積的1/3,再將濃縮液轉(zhuǎn)入盛有250mL無水乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪拌4min，攪拌后再將其轉(zhuǎn)入3°C冰箱中冷藏 13h，離心除去上清液，將所得沉淀物轉(zhuǎn)入-30°C真空冷凍干燥機(jī)中，干燥3h后，用研缽研磨成粉，即得植物基透明質(zhì)酸。
[0011]稱取25g本發(fā)明制備的植物基透明質(zhì)酸放入玻璃器皿中，同時(shí)向其中加入26mL檸檬汁、9mL蜂蜜和180mL純凈水，攪拌使其充分混合均勻后，裝瓶即可制得化妝水。該植物基透明質(zhì)酸可改善皮膚營養(yǎng)代謝，使皮膚光滑濕潤，所得化妝水可以緊致肌膚，長久保濕，并可阻隔外來細(xì)菌、灰塵、紫外線的侵入，保護(hù)皮膚免受侵害，防止衰老，且在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收向，值得推廣與使用。
[0012]實(shí)例3首先稱取l〇〇g銀耳子實(shí)體，用去離子水洗滌5次后，放入盛有600mL去離子水的燒杯中， 浸泡2h后，置于石磨磨盤上研磨，研磨過程中混入180mL去離子水，得銀耳漿料，再將其轉(zhuǎn)入微波加熱器中，以600W功率，微波加熱25min，移出，靜置，使其自然冷卻至室溫，得預(yù)處理漿料;然后稱取20g葡萄皮，放入組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的葡萄皮置于馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基中，再移入45°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3天，用80mL去離子水淋洗培養(yǎng)基表面，得混合微生物淋洗液，隨后量取20mL所得混合微生物淋洗液，將其轉(zhuǎn)入盛有150mL上述所得預(yù)處理漿料的發(fā)酵罐中，再加入8g蔗糖，用滅菌木棍攪拌15min后，發(fā)酵處理8h，得發(fā)酵漿料;再向反應(yīng)釜中依次加入30mL上述所得發(fā)酵漿料，200mL質(zhì)量濃度為10%磷酸二氫鉀溶液，4g纖維素酶，3g 果膠酶和3g中性蛋白酶，啟動攪拌器，設(shè)定轉(zhuǎn)速為600r/min，加熱升溫至50°C，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)80min，隨后以85°C加熱處理lOmin，靜置，自然冷卻至室溫后，過濾除去濾渣，得濾液;最后將上述所得濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在80°C條件下旋蒸濃縮至原體積的1/3,再將濃縮液轉(zhuǎn)入盛有300mL無水乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪拌5min，攪拌后再將其轉(zhuǎn)入4 °C冰箱中冷藏 15h，離心除去上清液，將所得沉淀物轉(zhuǎn)入-25°C真空冷凍干燥機(jī)中，干燥4h后，用研缽研磨成粉，即得植物基透明質(zhì)酸。[〇〇13]稱取30g本發(fā)明制備的植物基透明質(zhì)酸放入玻璃器皿中，同時(shí)向其中加入28mL檸檬汁、10mL蜂蜜和200mL純凈水，攪拌使其充分混合均勻后，裝瓶即可制得化妝水。該植物基透明質(zhì)酸可改善皮膚營養(yǎng)代謝，使皮膚光滑濕潤，所得化妝水可以緊致肌膚，長久保濕，并可阻隔外來細(xì)菌、灰塵、紫外線的侵入，保護(hù)皮膚免受侵害，防止衰老，且在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收向，值得推廣與使用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種以銀耳子實(shí)體制備植物基透明質(zhì)酸的方法，其特征在于具體制備步驟為:(1)稱取80?100g銀耳子實(shí)體，用去離子水洗滌3?5次后，放入盛有500?600mL去離子 水的燒杯中，浸泡1?2h后，置于石磨磨盤上研磨，研磨過程中混入120?180mL去離子水，得 銀耳漿料，再將其轉(zhuǎn)入微波加熱器中，以500?600W功率，微波加熱15?25min，移出，靜置， 使其自然冷卻至室溫，得預(yù)處理漿料；(2)稱取10?20g葡萄皮，放入組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的葡萄皮置于馬鈴薯蔗糖 培養(yǎng)基中，再移入35?45°0〖旦溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2?3天，用60?80mL去離子水淋洗培養(yǎng)基表 面，得混合微生物淋洗液，隨后量取10?20mL所得混合微生物淋洗液，將其轉(zhuǎn)入盛有100? 150mL上述所得預(yù)處理楽;料的發(fā)酵罐中，再加入6?8g鹿糖，用滅菌木棍攪拌10?15min后， 發(fā)酵處理6?8h，得發(fā)酵漿料；(3)向反應(yīng)釜中依次加入20?30mL上述所得發(fā)酵漿料，100?200mL質(zhì)量濃度為8?10% 磷酸二氫鉀溶液，2?4g纖維素酶，1?3g果膠酶和1?3g中性蛋白酶，啟動攪拌器，設(shè)定轉(zhuǎn)速 為400?600r/min，加熱升溫至45?50°C，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)60?80min，隨后以80?85°C加熱處 理5?lOmin，靜置，自然冷卻至室溫后，過濾除去濾渣，得濾液；(4)將上述所得濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在70?80°C條件下旋蒸濃縮至原體積的1/3， 再將濃縮液轉(zhuǎn)入盛有200?300mL無水乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪拌3?5min，攪拌后再將其 轉(zhuǎn)入2?4°C冰箱中冷藏10?15h，離心除去上清液，將所得沉淀物轉(zhuǎn)入-35?-25°C真空冷凍 干燥機(jī)中，干燥2?4h后，用研缽研磨成粉，即得植物基透明質(zhì)酸。
【文檔編號】C12P19/26GK105950688SQ201610469302
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月25日
【發(fā)明人】仇穎超, 盛海豐, 許博偉
【申請人】仇穎超