萊菔素抗癌衍生化合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及萊菔素抗癌衍生化合物，用于治療或預(yù)防人類或哺乳動物的多種癌癥與腫瘤的應(yīng)用。萊菔素是中藥萊菔子中提取的一種天然活性成分，與萊菔硫烷結(jié)構(gòu)相近，也因此與萊菔硫烷的抗癌效果相近。但是由于其結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，無法長期儲存，嚴(yán)重限制了其應(yīng)用。本發(fā)明將其容易降解的基團(tuán)保護(hù)起來，并保留了其抗癌活性，形成了全新的抗癌化合物。化學(xué)式如下：。
【專利說明】
萊菔素抗癌衍生化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種抗癌化合物，用于治療或預(yù)防人類或哺乳動物的多種癌癥與腫瘤 的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是機(jī)體在各種致癌因素作用下，局部組織的細(xì)胞在基因水平上失去對其生長 的正常調(diào)控導(dǎo)致異常增生與分化而形成的新生物。新生物一旦形成，便不再停止生長，他的 生長不受正常機(jī)體生理調(diào)節(jié)，而是破壞正常組織與器官，這一點(diǎn)在惡性腫瘤尤其明顯。與良 性腫瘤相比，惡性腫瘤生長速度快，呈浸潤性生長，易發(fā)生出血、壞死、潰瘍等，并常有遠(yuǎn)處 轉(zhuǎn)移，造成人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴(yán)重的臟器功能受損等，最終造成患 者死亡。
[0003] 腫瘤的治療方法有手術(shù)治療、放射治療和藥物治療（即化療)等，其中化學(xué)治療為 目前主要的治療手段?；瘜W(xué)治療能治愈一部分腫瘤患者或延長患者的生命，在腫瘤治療中 占有越來越重要地位。但是，傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物對癌癥細(xì)胞的殺滅率較低或需要較高的濃 度，因此產(chǎn)生了許多嚴(yán)重的毒副反應(yīng)。隨著生活水平的提高，人們對于癌癥的治療預(yù)期顯著 提高，希望在治愈癌癥的時(shí)候身體健康不受到很大的影響，因此，發(fā)現(xiàn)新的、高效抗腫瘤化 合物顯得尤為迫切。
[0004] 萊菔素是中藥萊菔子中提取的一種天然活性成分，與萊菔硫烷結(jié)構(gòu)相近，也因此 與萊菔硫烷的抗癌效果相近。但是由于其結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，無法長期儲存，嚴(yán)重限制了其應(yīng)用。 因此本發(fā)明將其容易降解的基團(tuán)保護(hù)起來，并保留了其抗癌活性，形成了全新的抗癌化合 物。
[0005] 本發(fā)明的具體方法和步驟如下：
[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種抗癌化合物，其化學(xué)式為：
[0007]
[0008]
[0009]
[0010] 所述化合物是2-氨基-3-( 4-甲基亞磺酰基-丁基-3-烯基巰基氨甲?；酋；?-丙酸。
[0011] 2-Amin〇-3-(4-methanesu1finyl-but-3-eny1thiocarbamoylsuIfany1)-propionic acid。
[0012] 結(jié)構(gòu)式11、111、1￥、￥均是結(jié)構(gòu)式1的其中一種結(jié)構(gòu)：
[0013]
[0014]
[0015] 所還的1七甘籾仕市I」食用t汩汀人的AT熘的約籾中的應(yīng)用。
[0016] 所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防癌癥的藥物中的用途。
[0017] 藥物組合物，包含所述的化合物以及藥用載體。
[0018] 所述的藥物組合物，是片劑、膠囊劑、液劑或混懸劑形式。
[0019] 所述的化合物的方法，其特征在于，包括如下步驟：
[0020] (1)將萊菔素純品溶于1至1000倍體積的去離子水中溶解；
[0021] (2)在萊菔素溶液中加入含巰基化合物，含巰基化合物與萊菔素的摩爾比例為 100:1至1:100;
[0022] (3)控制溫度在0°C至80°C，反應(yīng)1至144小時(shí)；
[0023] (4)若反應(yīng)體系固含量大于5%，則通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮反應(yīng)液，至反應(yīng)液固含量 為1-5% ;若反應(yīng)體系固含量小于1 %，貝lj加入去離子水，將反應(yīng)液固含量稀釋至1-5% ; [0024] (5)通過制備色譜純化產(chǎn)品。
[0025] 制備色譜柱選用C18反向色譜柱，流動相為色譜甲醇、色譜乙腈與超純水。
[0026] 除非另有說明，否則本文所描述的結(jié)構(gòu)還意在包括該結(jié)構(gòu)的所有立體化學(xué)形式， 即每個(gè)不對稱中心的R和S構(gòu)型。因此，本化合物的外消旋體和外消旋混合物、單一對映體、 非對映體混合物和單一非對映異構(gòu)體明確地包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。盡管可以用具體立體化 學(xué)構(gòu)型來描述本文舉例說明的具體化合物，但在任何給定手性中心具有任一種相對立體化 學(xué)的化合物或其混合物都是可以預(yù)見的。
[0027] 除非另有說明，否則，本文所描述的結(jié)構(gòu)還意味著包括僅僅在存在一個(gè)或多個(gè)同 位素富集的原子方面有差別的化合物。例如，具有本結(jié)構(gòu)的化合物，只是用氘或氚替代氫、 或用13C-或14C-富集的碳替代碳，也在本發(fā)明范圍內(nèi)。
[0028]對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，某些本發(fā)明的化合物可以存在交替互變異構(gòu)形 式。本化合物的所有這種互變異構(gòu)形式都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。除非另有陳述，否則任何一 種互變異構(gòu)體的表述意味著包括另一個(gè)互變異構(gòu)體。
[0029] 本文使用的術(shù)語"治療"是指減輕患者具體病癥的癥狀，或改善與具體病癥有關(guān)的 可確定的測定結(jié)果，并且可以包括在無癥狀的患者中抑制癥狀的重現(xiàn)，例如，潛伏著病毒感 染的患者。治療包括預(yù)防，其是指在患者中預(yù)防疾病或病癥，或預(yù)防這種疾病或病癥的癥狀 在患者中出現(xiàn)。本文使用的術(shù)語"患者"是指哺乳動物，包括人。
[0030] 本文使用的術(shù)語"目標(biāo)"是指患者、動物或生物樣品。本文使用的術(shù)語"生物樣品" 包括但不限于:細(xì)胞培養(yǎng)物或其提取物;適合于體外試驗(yàn)的酶制劑;從哺乳動物或其提取物 中獲得的活檢物質(zhì);和血液、唾液、尿、排泄物、精液、淚水或其它體液或其提取物。
【附圖說明】
[0031] 圖1為結(jié)構(gòu)式II的質(zhì)譜圖譜。
[0032] 圖2為結(jié)構(gòu)式II的紅外圖譜。
[0033] 圖3為結(jié)構(gòu)式II的1H-NMR圖譜。
[0034] 圖4為結(jié)構(gòu)式II的13C_NMR圖譜。
[0035]圖5為結(jié)構(gòu)式II的制備色譜圖譜。
[0036]圖6為結(jié)構(gòu)式III的質(zhì)譜圖譜 [0037]圖7為結(jié)構(gòu)式IV的質(zhì)譜圖譜 [0038]圖8為結(jié)構(gòu)式V的質(zhì)譜圖譜
【具體實(shí)施方式】
[0039] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，但這些實(shí)施例的目的并不在于限 制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0040] 實(shí)施例1
[0041] 將l〇〇mg萊菔素溶于20ml去離子水中，向其中加入100mg半胱氨酸粉末，室溫反應(yīng) 30小時(shí)。
[0042] 使用制備色譜純化所得到的產(chǎn)物。選用反向C18色譜柱，選擇流動相為5%體積濃 度的甲醇水溶液。收集色譜圖中目標(biāo)產(chǎn)物峰。
[0043]使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，溫度設(shè)置為45°C，壓力為50mbar。旋干后即可得到產(chǎn) 品。
[0044] 實(shí)施例2
[0045] 將100mg萊菔素溶于5ml去離子水中，向其中加入100mg半胱氨酸粉末，室溫反應(yīng)30 小時(shí)。
[0046] 將整個(gè)反應(yīng)體系用去離子水稀釋至20ml。
[0047] 使用制備色譜純化所得到的產(chǎn)物。選用反向C18色譜柱，選擇流動相為5%體積濃 度的甲醇水溶液。收集色譜圖中目標(biāo)產(chǎn)物峰。
[0048]使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，溫度設(shè)置為45°C，壓力為50mbar。旋干后即可得到產(chǎn) 品。
[0049] 實(shí)施例3
[0050]將lOOmg萊菔素溶于5ml去離子水中，向其中加入lOOmg N-乙酰半胱氨酸粉末，室 溫反應(yīng)48小時(shí)。
[0051 ]將整個(gè)反應(yīng)體系用去離子水稀釋至20ml。
[0052]使用制備色譜純化所得到的產(chǎn)物。選用反向C18色譜柱，選擇流動相為5%體積濃 度的甲醇水溶液。收集色譜圖中目標(biāo)產(chǎn)物峰。
[0053]使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，溫度設(shè)置為45°C，壓力為50mbar。旋干后即可得到產(chǎn) 品。
[0054] 實(shí)施例4
[0055]將lOOmg萊菔素溶于50ml去離子水中，向其中加入lOOmg谷氨酸-半胱氨酸二肽粉 末，室溫反應(yīng)48小時(shí)。
[0056]使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮反應(yīng)體系，溫度設(shè)置為45°C，壓力為50mbar，濃縮至20ml后使 用制備色譜純化。
[0057]使用制備色譜純化所得到的產(chǎn)物。選用反向C18色譜柱，選擇流動相為5%體積濃 度的乙腈水溶液。收集色譜圖中目標(biāo)產(chǎn)物峰。
[0058]使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，溫度設(shè)置為45°C，壓力為50mbar。旋干后即可得到產(chǎn) 品。
[0059] 實(shí)施例5
[0060]將lg萊菔素溶于l〇〇ml去離子水中，向其中加入3g甘氨酸-半胱氨酸二肽粉末，室 溫反應(yīng)48小時(shí)。
[0061 ]將整個(gè)反應(yīng)體系用去離子水稀釋至400mL。
[0062]使用制備色譜純化所得到的產(chǎn)物。選用反向C18色譜柱，選擇流動相為5%體積濃 度的乙腈水溶液。收集色譜圖中目標(biāo)產(chǎn)物峰。
[0063]使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，溫度設(shè)置為45°C，壓力為50mbar。旋干后即可得到產(chǎn) 品。
[0064] 實(shí)施例6
[0065] -、材料和方法
[0066] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑：人肺鱗癌細(xì)胞系H460購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培 養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA 常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0067] 2.化合物II對H460血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的H460細(xì)胞消化成單個(gè) 細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5%C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物II 用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終濃 度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在!1460細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化合物 II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì) 胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后， 洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸光 度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0068] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0069]表1顯示，化合物II對H460人肺鱗癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48 小時(shí)后，化合物II對的H460細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC5Q)為9.116μΜ。
[0070] 實(shí)施例7
[0071] -、材料和方法
[0072] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人宮頸癌細(xì)胞系Hela購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培 養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA 常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0073] 2.化合物II對Hela血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的Hela細(xì)胞消化成單個(gè) 細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5%C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物II 用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終濃 度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在他13細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化合物 II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì) 胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后， 洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸光 度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0074] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0075]表1顯示，化合物II對Hela人宮頸癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48 小時(shí)后，化合物II對的Hela細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC5Q)為14.92μΜ。
[0076] 實(shí)施例8
[0077] 一、材料和方法
[0078] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑：人肺癌細(xì)胞系Η446購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng) 在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA常 規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0079] 2.化合物II對H446血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的H446細(xì)胞消化成單個(gè) 細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5%C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物II 用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終濃 度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在!1446細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化合物 II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì) 胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL MTT，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后， 洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸光 度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0080] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0081 ]表1顯示，化合物II對H446人肺癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48小 時(shí)后，化合物II對的H446細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC5Q)為6.098μΜ。
[0082] 實(shí)施例9 [0083] 一、材料和方法
[0084] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人皮膚黑色素瘤細(xì)胞系Α375購買自美國ATCC細(xì)胞 庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的1^11-1640(取(：1〇1^)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及 0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0085] 2.化合物II對A375血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的A375細(xì)胞消化成單個(gè) 細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5%C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物II 用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終濃 度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在4375細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化合物 II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì) 胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后， 洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸光 度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0086] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0087]表1顯示，化合物II對A375人皮膚黑色素瘤細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。 處理48小時(shí)后，化合物II對的A375細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC5Q)為17.515μΜ。
[0088] 實(shí)施例10
[0089] -、材料和方法
[0090] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培 養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA 常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0091 ] 2.化合物II對MCF-7血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞消化成單 個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物 II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終 濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在]\0 7-7細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化 合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng) 細(xì)胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%⑶2的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h 后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸 光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0092] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0093] 表1顯示，化合物II對MCF-7人乳腺癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理 48小時(shí)后，化合物II對的MCF-7細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為9.599μΜ。
[0094] 實(shí)施例11
[0095] -、材料和方法
[0096] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系Α549購買自美國ATCC細(xì)胞 庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的1^11-1640(取(：1〇1^)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及 0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0097] 2.化合物II對A549血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的A549細(xì)胞消化成單個(gè) 細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5%C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物II 用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終濃 度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在4549細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化合物 II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì) 胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后， 洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸光 度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0098] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0099]表1顯示，化合物II對A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。 處理48小時(shí)后，化合物II對的A549細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC5Q)為9.154μΜ。
[0100] 實(shí)施例12
[0101] -、材料和方法
[0102] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系Η1299購買自美國ATCC細(xì) 胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的1^11-1640(取(：1 〇1^)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及 0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0103] 2.化合物II對H1299血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的H1299細(xì)胞消化成單 個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物 II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終 濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在!11299細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化 合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng) 細(xì)胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%⑶2的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h 后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸 光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0104] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0105] 表1顯示，化合物II對H1299人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效 果。處理48小時(shí)后，化合物II對的H1299細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為8.333μΜ。
[0106] 實(shí)施例13 [0107] 一、材料和方法
[0108] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人肝癌細(xì)胞系HepG2購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng) 在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA常 規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0109] 2.化合物II對HepG2血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞消化成單 個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物 II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終 濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在他？62細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化 合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng) 細(xì)胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%⑶2的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h 后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸 光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0110] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0111] 表1顯示，化合物II對HepG2人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48 小時(shí)后，化合物II對的IfepG2細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為8.776μΜ。
[0112] 實(shí)施例14
[0113] 一、材料和方法
[0114] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人TNBC亞型的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-453購買自美 國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白 酶以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0115] 2.化合物II對MDA-MB-453血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的MDA-MB-453細(xì) 胞消化成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 %C02的37°C培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)。將化合物II用無菌去離子水溶解后，過〇.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié) 合物Π 的最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在]\?^-]\?-453細(xì)胞接種培養(yǎng)24 小時(shí)后，換成含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積 的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C 培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每 孔490nm波長下的吸光度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù) 抑制濃度(IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0116] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0117] 表1顯示，化合物II對MDA-MB-453人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處 理72小時(shí)后，化合物II對的MDA-MB-453細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為3.08μΜ。
[0118] 實(shí)施例15
[0119] -、材料和方法
[0120] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人TNBC亞型的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231購買自美 國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白 酶以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0121 ] 2.化合物II對MDA-MB-231血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的MDA-MB-231細(xì) 胞消化成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 %C02的37°C培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)。將化合物II用無菌去離子水溶解后，過〇.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié) 合物π的最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在]\?^-]\?-231細(xì)胞接種培養(yǎng)24 小時(shí)后，換成含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積 的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C 培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每 孔490nm波長下的吸光度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù) 抑制濃度(IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0122] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0123] 表1顯示，化合物II對MDA-MB-231人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處 理72小時(shí)后，化合物II對的MDA-MB-231細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為8.71μΜ。
[0124] 實(shí)施例16
[0125] 一、材料和方法
[0126] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人TNBC亞型的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-436購買自美 國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白 酶以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0127] 2.化合物II對MDA-MB-436血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的MDA-MB-436細(xì) 胞消化成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 %C02的37°C培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)。將化合物II用無菌去離子水溶解后，過〇.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié) 合物Π 的最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在]\?^-]\?-436細(xì)胞接種培養(yǎng)24 小時(shí)后，換成含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積 的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C 培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每 孔490nm波長下的吸光度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù) 抑制濃度(IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0128] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0129] 表1顯示，化合物II對MDA-MB-436人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處 理72小時(shí)后，化合物II對的MDA-MB-436細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為3.45μΜ。
[0130] 實(shí)施例17
[0131] -、材料和方法
[0132] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人TNBC亞型的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-468購買自美 國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白 酶以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0133] 2.化合物II對MDA-MB-468血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的MDA-MB-468細(xì) 胞消化成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 %C02的37°C培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)。將化合物II用無菌去離子水溶解后，過〇.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié) 合物Π 的最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在]\?^-]\?-468細(xì)胞接種培養(yǎng)24 小時(shí)后，換成含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積 的無菌去離子水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C 培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每 孔490nm波長下的吸光度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù) 抑制濃度(IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0134] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0135] 表1顯示，化合物II對MDA-MB-468人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處 理72小時(shí)后，化合物II對的MDA-MB-468細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為3.59μΜ。
[0136] 實(shí)施例18
[0137] 一、材料和方法
[0138] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人ER+亞型的乳腺癌細(xì)胞系MCF-7購買自美國ATCC 細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及 0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0139] 2.化合物II對MCF-7血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞消化成單 個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物 II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的最終 濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在]\0 7-7細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化 合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng) 細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%⑶2的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h 后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸 光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC50 )，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0140] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0141] 表1顯示，化合物II對MCF-7人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理72 小時(shí)后，化合物II對的MCF-7細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為3.48μΜ。
[0142] 實(shí)施例19
[0143] 一、材料和方法
[0144] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑：人ER+亞型的乳腺癌細(xì)胞系ZR-75-1購買自美國 ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶 以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0145] 2.化合物II對ZR-75-1血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的ZR-75-1細(xì)胞消化 成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化 合物II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的 最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在21?-75-1細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成 含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子 水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵 育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO,搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下 的吸光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度 (IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0146] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0147] 表1顯示，化合物II對ZR-75-1人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理 72小時(shí)后，化合物II對的ZR-75-1細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為2.82μΜ。
[0148] 實(shí)施例20
[0149] 一、材料和方法
[0150] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑：人ER+亞型的乳腺癌細(xì)胞系ZR-75-1購買自美國 ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶 以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0151] 2.化合物II對ZR-75-1血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的ZR-75-1細(xì)胞消化 成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化 合物II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的 最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在21?-75-1細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成 含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子 水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵 育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0,搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下 的吸光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度 (IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0152] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0153] 表1顯示，化合物II對ZR-75-1人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理 72小時(shí)后，化合物II對的ZR-75-1細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為2.82μΜ。
[0154] 實(shí)施例21
[0155] 一、材料和方法
[0156] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人HER2+亞型的乳腺癌細(xì)胞系Sk-br-3購買自美國 ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶 以及0.02%EDTA常規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0157] 2 ·化合物II對Sk-br-3血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的Sk-br-3細(xì)胞消化 成單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化 合物II用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物II的 最終濃度為1以]?、2以]\1、3以]\1、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1和5(^]\1，在31^-1^-3細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成 含有化合物II相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子 水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵 育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO,搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下 的吸光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度 (IC50)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。
[0158] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0159] 表1顯示，化合物II對Sk-br-3人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理 72小時(shí)后，化合物II對的Sk-br-3細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為2.82μΜ。
[0160] 實(shí)施例22
[0161] -、材料和方法
[0162] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人肝癌細(xì)胞系HepG2購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng) 在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA常 規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0163] 2.化合物III對HepG2血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn)：取對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞消化成 單個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合 物III用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物III的 最終濃度為3以]?、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1、5(^]\1、7(^]\1和10(^]\1，在他?62細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成 含有化合物III相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離 子水培養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù) 孵育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMSO，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長 下的吸光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度 (IC50)〇
[0164] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0165] 化合物III對HepG2人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48小時(shí)后， 化合物III對的！fepG2細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為48·222μΜ。
[0166] 實(shí)施例23
[0167] 一、材料和方法
[0168] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人肝癌細(xì)胞系HepG2購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng) 在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA常 規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0169] 2.化合物IV對HepG2血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn):取對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞消化成單 個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物 IV用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物IV的最終 濃度為3μΜ、5μΜ、ΙΟμΜ、20μΜ、50μΜ、70μΜ和100μΜ，在Η印G2細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有 化合物IV相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培 養(yǎng)細(xì)胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%C02的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h 后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸 光度。以〇小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC50)。 [0170]二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0171] 化合物IV對HepG2人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48小時(shí)后，化 合物IV對的Η印G2細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為58.123μΜ。
[0172] 實(shí)施例24
[0173] 一、材料和方法
[0174] 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和相關(guān)化學(xué)試劑:人肝癌細(xì)胞系HepG2購買自美國ATCC細(xì)胞庫，培養(yǎng) 在含10%胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養(yǎng)基中，用0.25%胰蛋白酶以及0.02%EDTA常 規(guī)消化后傳代。本實(shí)驗(yàn)相關(guān)化學(xué)試劑皆購自Sigma公司。
[0175] 2.化合物V對HepG2血細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn)：取對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞消化成單 個(gè)細(xì)胞后，接種于96孔板中，每孔3000個(gè)細(xì)胞，在含5 % C02的37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將化合物V 用無菌去離子水溶解后，過0.22μπι濾膜除菌，用含血清培養(yǎng)液稀釋，使得結(jié)合物V的最終濃 度為3以]?、5以]\1、1(^]\1、2(^]\1、5(^]\1、7(^]\1和10(^]\1，在他?62細(xì)胞接種培養(yǎng)24小時(shí)后，換成含有化 合物V相應(yīng)濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，陰性對照組培養(yǎng)基中加入等體積的無菌去離子水培養(yǎng) 細(xì)胞。再分別培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入20yL ΜΤΤ，在含有5%⑶2的37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h 后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150yL的DMS0，搖床震蕩lOmin，測定每孔490nm波長下的吸 光度。以0小時(shí)的陰性對照組存活細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，計(jì)算細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC50)。
[0176] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0177] 化合物V對HepG2人肝癌細(xì)胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48小時(shí)后，化 合物V對的！fepG2細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度（IC 5Q)為78.104μΜ。
[0178] 表1為結(jié)構(gòu)式II在多種腫瘤細(xì)胞中的48小時(shí)的I (：50值
[0179] 表2為結(jié)構(gòu)式II在不同亞型乳腺癌中72小時(shí)的1(：50值
[0180] 表1
[0181]
[0182] 表2
[0183]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 萊廉素抗癌衍生化合物，其化學(xué)式如下：2. 權(quán)利要求1所述的化合物在制備用于治療人的腫瘤的藥物中的應(yīng)用。3. 權(quán)利要求1所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防癌癥的藥物中的用途。4. 藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述的化合物W及藥用載體。5. 按照權(quán)利要求4所述的藥物組合物，是片劑、膠囊劑、液劑或混懸劑形式。6. 制備如權(quán)利要求1所述的化合物的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 將萊廉素純品溶于1至1000倍體積的去離子水中溶解； (2) 在萊廉素溶液中加入含琉基化合物，含琉基化合物與萊廉素的摩爾比例為100:1至 1:100; (3) 控制溫度在0°C至80°C，反應(yīng)1至144小時(shí)； (4) 若反應(yīng)體系固含量大于5%，則通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮反應(yīng)液，至反應(yīng)液固含量為1- 5%;若反應(yīng)體系固含量小于1%，貝陽日入去離子水，將反應(yīng)液固含量稀釋至1-5%。
【文檔編號】C07C333/20GK105906539SQ201610320225
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月15日
【發(fā)明人】袁其朋, 程立, 王忠鵬, 劉玉婷, 田桂芳, 滕雯迪, 任萌, 鄧炳華, 況鵬群
【申請人】北京化工大學(xué)